Спонтанний гранулоцитарний лейкоз у миші з нульовим IL-2R NOD/Shi-scid

Анотація:Тут ми повідомляємо про випадок спонтанної гранулоцитарної лейкемії у 51-тижневого чоловічого роду NOD/Shi-scidІЛ-2Р нульова (NOG) миша. Мишка показалапрогресуюча анеміяігрубі дихальні рухи. Макроскопічно селезінка змінена і збільшена. Гістологічно кістковий мозок вгрудинаі стегнова кістка була висококлітинною і майже виключно заповненанеопластичні клітини. Ядра неопластичних клітин були великими, від овальної до злегка неправильної форми, і невелика кількість клітин маланирка- або кільцеподібні ядра.Неопластичні клітинишироко інфільтрував органи, причому селезінка та печінка були помітно залучені. Імуногістохімічно велика популяція неопластичних клітин у червоній пульпі селезінки та синусоїді печінки була позитивною длямієлопероксидаза. На підставі гістологічних даних поставлено діагноз:гранулоцитарний лейкоз. Ця інформація про романспонтанні пухлиниможе бути корисним для належного використання цього штаму миші в подальших дослідженнях. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Ключові слова: гранулоцитарний лейкоз, миша NOG, спонтанна пухлина

НАТИСНІТЬ ТУТ, ЩОБ ОТРИМАТИ НАТУРАЛЬНИЙ ОРГАНІЧНИЙ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНШИ З 25% ЕХІНАКОЗИДУ ТА 9% АКТЕОЗИДУ ДЛЯ ФУНКЦІЇ НИРОК

Служба підтримки Wecistanche - найбільшого експортера cistanche в Китаї:

Електронна адреса:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Тел.:+86 15292862950

Зверніться в магазин, щоб дізнатися більше про технічні характеристики:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Спонтанний гранулоцитарний лейкозрідко повідомляється у кількох ліній мишей, хоча хімічні агенти та іонізуюче випромінювання можуть підвищити захворюваність у деяких ліній мишей1, 2. Миші NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) є серйознимиімунодефіцитних тварин, і наявні дефекти в Т-, В- та природних клітинах-кілерах, а також погано функціонуючі макрофаги та дендритні клітини через нокаут ланцюга рецептора IL-2 (IL2R c) у штам NOD-scid3. Цей штам мишей використовується для доклінічних тестів, таких як тест на пухлиногенність, для оцінки якості та безпеки біологічних продуктів для регенеративної медицини з використанням людських клітин/тканин через помітно краще приживлення ксеногенних клітин4–6. Хоча імунодефіцитний стан і його наслідки для ксенотрансплантатів добре вивчені, доступно мало інформації про спонтанні пухлини, що виникають у цієї лінії мишей, такі як лімфома тимуса,соскоподібнийзалоза аденома/аденокарцинома, бронхіолоальвеолярна карцинома, рабдоміосаркомаі тератома7. Тут ми повідомляємо про випадок гранулоцитарного лейкозу у 51-тижневого самця миші NOG.

Тварина була отримана від In-Vivo Science Inc. (Канагава, Японія) у віці 6 тижнів і утримувалася без лікування. Тварину поміщали окремо в пластикову клітку з індивідуальною вентиляційною системою клітин (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Токіо, Японія) в кімнаті з бар’єрною системою з контрольованим навколишнім середовищем, яка підтримувалася при температурі 22 ± 2 градуси з вологість 50 ± 20% і 12--годинний цикл світло/темрява. Мишу годували автоклавованою гранульованою дієтою (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Токіо, Японія) з автоклавованою водопровідною водою та либітумом. Тварину обробляли відповідно до протоколу, затвердженого Інституційним комітетом з догляду та використання тварин CMIC Pharma Science Co., Ltd., який акредитований AAALAC International.

Ця миша демонструвала клінічні ознаки ослаблення, такі як анемія, грубі дихальні рухи та зниження маси тіла у віці від 49 до 51 тижня. Тварина була піддана евтаназії у віці 51 тижня. При розтині селезінка змінена і збільшена. В інших органах не спостерігалося жодних явних аномальних грубих знахідок. Тимус і лімфатичний вузол були атрофічними, подібними до нормальних мишей NOG.

Зразки всіх органів і тканин регулярно відбирали, фіксували в 10% нейтральному буферному формаліні, заливали в парафін і розрізали приблизно 3 мкм. Для патологоанатомічного дослідження зрізи фарбували гематоксиліном та еозином (ГЕ). Зрізи селезінки та печінки забарвлювали імуногістохімічно на поліклональне антитіло кролика проти людської мієлопероксидази (MPO) (Dako Japan, Токіо, Японія) як маркер мієлоїдних клітин, моноклональне антитіло кролика проти людського CD3 (Nichirei Biosciences Inc., Токіо, Японія). ) як Т-клітинний маркер, і моноклональне антитіло кролика проти Pax-5 людини (Abcam Inc., Кембридж, Великобританія) як В-клітинний маркер8. Зрізи інкубували з антитілами при кімнатній температурі протягом 1 години та проводили імунодетекцію з використанням набору Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) з 3,3'-діамінобензидином/H2O2 як хромогеном. Імунофарбовані зрізи були тодізабарвлені гематоксиліном.

Гістопатологічно виявлено, що кістковий мозок грудини та стегнової кістки був висококлітинним і майже виключно заповненим неопластичними клітинами (рис. 1A). Жирова тканина повністю зміщена. У кістковому мозку іноді спостерігалися клітинні вогнища, що складалися з еритроїдних і мегакаріоцитарних елементів, які вважалися залишкаминормальне кровотворення. Більшість неопластичних клітин мали бластний вигляд, що характеризувався великими ядрами від овальної до злегка неправильної форми та ретикулярним хроматином, що містить одне або більше помітних ядерець. Була невелика кількість клітин з ниркоподібними або кільцеподібними ядрами, а також були присутні кілька клітин з часточковими ядрами (рис. 1B). Гранули в цитоплазмі неопластичних клітин не були помітні на зрізах, пофарбованих ВІ. Численні мітотичні фігури були виявлені в кістковому мозку, а також випадкові апоптотичні тіла. Неопластичні клітини помітно проникли в окістя та навколишні скелетні м’язи. Спостерігалася обширна інфільтрація неопластичних клітин в інші органи та тканини, причому значною мірою були залучені селезінка та печінка. У селезінці неопластичні клітини спостерігалися по всій червоній пульпі (рис. 2). Капсульна інфільтрація неопластичних клітин була очевидною. Було виявлено кілька еритроїдних рядів і мегакаріоцитів, що розвиваються. Іноді спостерігалися мегакаріоцити, що містять одну або кілька мієлоїдних клітин у цитоплазмі, що свідчить про емпериполез. У печінці неопластичні клітини дифузно інфільтрували гліссонову капсулу та печінкові синусоїди (рис. 3). Неопластичні клітини з ядрами у формі нирки або кільця також були очевидні в деяких кровоносних судинах. Деякі гепатоцити в перипортальній зоні з помітною неопластичною клітинною інфільтрацією показали дегенерацію або некроз, тоді як нормальна структура печінкової часточки залишалася незмінною. Неопластична клітинна інфільтрація також була виявлена ​​в інших органах, включаючи альвеолярну стінку та периваскулярну область легені, інтерстадіум у нирці, синусоїд у надниркових залозах, а також слизову та підслизову оболонку шлункового тракту (шлунок і кишечник). Імуногістохімічно велика популяція неопластичних клітин у червоній пульпі селезінки (рис. 4) і синусоїді печінки була позитивною на MPO. CD3 та Pax-5 позитивні клітини не виявлені. Результати імунного фарбування CD3 та Pax-5 були подібні до результатів селезінки нормальних мишей NOG, які були гістологічно гіпопластичними та не показали позитивних клітин CD3 або Pax-5.

Імуногістохімічне дослідження показало, що неопластичні клітини походять з ліній мієлоїдних клітин. У деяких із залучених ділянок, особливо в селезінці та печінці, невелика кількість клітин мала форму нирки, кільця або часточки, що вказує на диференціювання мієлоїдних рядів. Ці знахідки свідчать про те, що неопластичні клітини походять із незрілих гранулоцитів. Випадок важкого мієлопоезу може бути очевидним за наявністю всіх типів мієлоїдних рядів, що розвиваються, на відміну від домінування незрілих клітин при лейкозі. Крім того, прогресуюча анемія є типовою клінічною ознакою гранулоцитарного лейкозу, а збільшення кількості еритроїдних і мегакаріоцитарних клітин незначне1. Незначна популяція гранулоцитів з часточковими ядрами в ураженій ділянці без явного запалення вказує на те, що в даному випадку є неопластичний, а не реактивний мієлопоез.

При гранулоцитарному лейкозі кістковий мозок може бути заміщений незрілими та зрілими мієлоїдними клітинами. У попередньому звіті про інші види мишей ці неопластичні клітини повністю проникли в печінку, селезінку, лімфатичні вузли тощо2, і ці клітини в селезінці та печінці в основному були розташовані в червоній пульпі та навколо капсули Гліссона1. Таким чином, розподіл лейкозних клітин у даному випадку був ідентичним такому в попередньому випадку. На основі морфології клітин гранулоцитарний лейкоз у мишей класифікується на два типи: ювенільний тип, який можна порівняти з гострим мієлолейкозом людини, і зрілий тип із хронічним мієлолейкозом людини1. У юнацькому випадку неопластичні клітини в кістковому мозку, селезінці та печінці переважали низько диференційовані клітини, тоді як можна побачити мієлоїдні елементи, що представляють різні ступені дозрівання, а відсоток мієлобластів був низьким у деяких зрілих випадках2, 9. У даному випадку в лейкозних клітинах переважала незріла форма з великими ядрами овальної або злегка неправильної форми. Крім того, враховуючи клінічні дані, що загальне погіршення самопочуття, включаючи прогресуючу анемію та грубе дихання, розвинулося гостро; отже, припускається, що ця справа відноситься до неповнолітніх.

Рис. 1. Гістологічні зображення кісткового мозку стегнової кістки. A: Неопластичні клітини дифузно розмножуються, заміщаючи таким чином кістковий мозок. B: Ядра великі, від овальної до злегка неправильної форми. Невелика кількість клітин має ядра у формі нирки (жовта стрілка), кільцеподібної (зелена стрілка) або частки (біла стрілка). Мітотична фігура вказана білою стрілкою. ВІН плями. Чорна смуга =50 мкм (A), 10 мкм (B).

У попередній публікації про мишей NOG неопластичні ураження були, як правило, рідкісними; проте лімфома тимуса була зареєстрована у 0.82% у віковій групі від 16 до 40 тижнів7, 10. Наскільки нам відомо, раніше не повідомлялося про спонтанну гранулоцитарну лейкемію у мишей NOG. У кількох ліній мишей, включаючи B6C3F1 і BALB/c, гранулоцитарний лейкоз зустрічався рідко2, 11, і не повідомлялося у випадку цих мишей у віці 12 місяців або молодше. У цьому випадку гранулоцитарний лейкоз розвинувся у віці 51 тиждень, що було відносно молодим віком. Ця нова інформація про спонтанні пухлини може бути корисною для належного використання цього штаму мишей у подальших дослідженнях.