Целомоцити олігохети дощового черв’яка Lumbricus Terrestris (Linnaeus, 1758) як еволюційний ключ захисту: морфологічне дослідження

Анотація

Багатоклітинні мають кілька механізмів внутрішнього захисту для свого виживання. Внутрішня система захисту розвивалася разом з організмами. Annelidae має циркулюючі целомоцити, які виконують функції, подібні до фагоцитуючих імунних клітин хребетних. Кілька досліджень показали, що ці клітини беруть участь у процесах фагоцитозу, опсонізації та розпізнавання патогенів. Подібно до макрофагів хребетних, ці циркулюючі клітини, що пронизують органи з целомічної порожнини, захоплюють або інкапсулюють патогени, активні форми кисню (АФК) і оксид азоту (NO). Крім того, вони виробляють низку біоактивних білків, які беруть участь в імунній відповіді та виконують функції детоксикації через свою лізосомальну систему.

Целомоцити також можуть брати участь у реакціях каменю проти клітин-мішеней і вивільненні антимікробних пептидів. Наше дослідження імуногістохімічно ідентифікує целомоцити Lumbricus terrestris, розкидані в епідермі та сполучному шарі нижче, як у поздовжньому, так і в шарі гладкої мускулатури, вперше імунореактивні щодо TLR2, CD14 та -тубуліну. TLR2 і CD14 не повністю колокалізовані один з одним, що свідчить про те, що ці целомоцити можуть належати до двох різних родин. Експресія цих імунних молекул на целомоцитах Annelidae підтверджує їх вирішальну роль у системі внутрішнього захисту цих протостомів Oligochaeta, що свідчить про філогенетичне збереження цих рецепторів. Ці дані можуть дати подальше розуміння внутрішньої захисної системи Annelida та складних механізмів імунної системи хребетних.

Целомоцити тісно пов'язані з імунітетом. Целомоцити - клітини, пов'язані з імунною системою. Вони можуть виділяти різноманітні імунні фактори, такі як цитокіни, інтерлейкіни, антигени та антитіла, щоб регулювати та посилювати імунну здатність організму.

Целомоцити виконують різноманітні імунні функції, включаючи регуляцію клітинної імунної відповіді як антигенпрезентуючих клітин, безпосереднє знищення патогенів і аномальних клітин, а також участь у регуляції запалення та імунних реакцій. Крім того, деякі дослідження показали, що целомоцити також можуть покращувати імунітет до потенційних патогенів, накопичуючи клітини імунної пам’яті, тим самим покращуючи імунітет організму.

Тому підтримка нормальної функції та кількості целомоцитів має вирішальне значення для імунітету організму. У той же час, регулюючи та посилюючи імунну функцію целомоцитів, можна також покращити імунітет організму, щоб краще запобігати та лікувати різні захворювання. З цього ми бачимо важливість імунітету. Цистанхея здатна підвищити імунітет. Цистанхе багатий різноманітними антиоксидантними речовинами, такими як вітамін С, вітамін С, каротиноїди тощо. Ці інгредієнти можуть поглинати вільні радикали, зменшувати окислювальний стрес та покращувати імунітет. опір системи.

Переваги Click cistanche tubulosa

Ключові слова

Кільчасті черви, целомоцити, дощовий черв’як, еволюція, імунітет.

вступ

Внутрішні захисні механізми дозволяють хазяїну вижити в метазої. Ці механізми стають все більш складними в міру еволюції організмів. На відміну від дворотих хребетних, протостоми не мають адаптивного імунітету, будуючи свій захист на основі вродженого імунітету [56]. Початковою лінією захисту від бактерій і мікроорганізмів у хребетних є швидка активація вроджених імунних клітин і молекул. Нещодавно безхребетні стали кандидатами для аналізу вродженого імунітету, щоб виявити стратегії та складності адаптивної імунної відповіді хребетних. Безхребетні розвинули різноманітні активні імунні механізми, включаючи виробництво антимікробних пептидів, коагуляцію, фагоцитоз та реакції інкапсуляції [20, 24]. Ці механізми залежать від «рецепторів розпізнавання образів» (PRR), вроджених імунних молекул, які можуть розрізняти «власні» компоненти мембрани від «не-власних».

Розпізнавання «патоген-асоційованих молекулярних паттернів» (PAMP) регулює початок основних сигнальних шляхів, аж до активації генів, що кодують медіатори запалення, антимікробні пептиди та регулятори фагоцитозу [32]. Олігохети кільчасті (дощові черв’яки) стали моделлю для порівняльної імунології і, як і п’явки, використовуються для біомоніторингу наземного та водного середовища (Б.-Т. [48, 52, 53, 72]. Дощові черв’яки забезпечені вродженою, високорозвиненою. , та ефективні механізми захисту від небезпечних мікроорганізмів навколишнього середовища.Першою механіко-біологічною лінією захисту, яка відокремлює тіло кільчастих червів від зовнішнього середовища, є тегумент, що складається з епідермісу та м’язових шарів.Вона має кутикулу з тонким шаром мукополісахариди та протеїни, які діють як антимікробний бар’єр [20].

У дощових черв’яків клітинна та гуморальна імунні системи вперше в еволюції метазоа працюють разом. Вважається, що рідина в целомічній порожнині відповідає за гуморальну імунологічну діяльність. Целомічна порожнина дощових черв’яків заповнена рідинами, що містять вільні й блукаючі целомоцити та їх пігментовані агрегати, які називаються коричневими тільцями, продуктом інкапсуляції бактерій, що вторглися, і залишків частинок. Ціломічна рідина дощових черв’яків здійснює низку біологічних процесів, зокрема гемолітичні, протеолітичні, цитотоксичні та антибактеріальні [19, 24, 29]. Целом безпосередньо сполучається із зовнішнім середовищем через дорсальні пори та з’єднані нефридіальні канальці, які виводять метаболіти. Ці пори також беруть участь у видаленні бактерій і виснажених целомоцитів. В умовах стресу целомічна рідина та суспендовані клітини можуть швидко виводитися за рахунок підвищення внутрішньокишкового тиску [24].

Целомоцити дощових черв’яків є важливим елементом клітинного вродженого імунітету. Ці клітини нагадують лейкоцити хребетних як за морфологією, так і за функціями [33]. Целомоцити виконують широкий спектр завдань, включаючи клітинну цитотоксичність, інкапсуляцію та фагоцитоз. Їх можна розділити на дві основні субпопуляції: меланоцити та амебоцити (гіалінові та зернисті) [33]. Гіалінові та зернисті амебоцити беруть участь у фагоцитозі та інкапсуляції, експресуючи різні PRR [23, 60]. Ці циркулюючі клітини, які мігрують у тканини з целомічної порожнини, дуже схожі на макрофаги хребетних, поглинаючи або інкапсулюючи патогени, активні форми кисню (АФК) і оксид азоту (NO) [39]. Елеоцити виробляють широкий спектр біоактивних білків, які беруть участь у гуморальній імунній відповіді, а також детоксикують організм через свою лізосомальну систему [24]. Целомоцити можуть брати участь у реакціях клітин проти клітин-мішеней і вивільненні антимікробних пептидів. Серед імунних механізмів експерименти з трансплантації продемонстрували існування саморозпізнавання у дощових черв’яків [28].

Целомоцити кільчастих клітин швидко формують імунні механізми проти бактерій, паразитів і дріжджів через клітинні реакції [59]. Ця швидка відповідь опосередковується розчинними антибактеріальними молекулами, такими як лізоцим, лізенін і лубрицин [22, 42, 68]. Висококонсервативні імунологічні молекули, такі як індикатори клітинної поверхні, були виявлені на целомоцитах за допомогою цитометричного аналізу. Зокрема, целомоцити реагували зі специфічними антитілами ссавців, демонструючи поверхневу позитивність до антитіл анти-CD11a, CD45RA, CD45RO, CDw49b, CD54, b2-M і Ty-1 [30, 34].

Наше дослідження має на меті вперше імуногістохімічно оцінити присутність TLR2, CD14 і -тубуліну в целомоцитах Lumbricus terrestris (Linnaeus, 1758), широкого, багатосегментованого, циліндричного дощового черв’яка, що належить до родини Lumbricidae (Annelida, Oligochaeta) , гермафродит, 8-10 см завдовжки [55]. Покращення знань про внутрішню систему захисту безхребетних може допомогти в розумінні більш складного імунітету хребетних і, як наслідок, еволюції імунної відповіді [63].

Матеріали та методи

Зразки та підготовка тканин

Зразки Lombricus terrestris надходять з нашої лабораторії гістотеки. Раніше їх вивозили у незабрудненому відкритому полі та акліматизували протягом двох тижнів у свіжому ґрунті, як повідомили Licata et al. [51], а потім готували стандартними методами світлової мікроскопії. Зразки занурювали в імунну систему (параформальдегід 4 відсотки) (05-W01030705, BioOptica Milano SpA, Мілан, Італія) на дві години. Потім обробляли дегидратирующей етанольною шкалою (від 30 до 100 відсотків етанолу), а потім готували для включення в парафін з використанням ксилолу.

Після включення два тонких зрізи 3–5 мкм, вирізані ротаційним мікротомом, поміщали на кожне предметне скло.

гістологія

Для обробки препаратів використовували морфологічне та гістохімічне фарбування [4, 6]. Потім зрізи регідратували за допомогою прогресивних спиртових розчинів (від 100 до 30 відсотків етанолу) до дистильованої води після депарафінізації в ксилолі [17], G. [75], згодом їх фарбували трихромом Маллорі та AB/PAS [3] . Після фарбування слайди монтували за допомогою Eukitt (BioOptica Milano SpA, Мілан, Італія, Європа). Дані про штами, використані в цьому дослідженні, включені в таблицю 1.

Імунофлюоресценція

Депарафіновані зрізи обробляли 5-відсотковим розчином борогідриду натрію для усунення аутофлуоресценції, потім використовували 2,5-відсотковий розчин бичачого сироваткового альбуміну (BSA), а потім зрізи інкубували протягом ночі з первинними антитілами проти TLR2, CD14 і -тубуліну [40]. ]. Після цього проводили інкубацію вторинних антитіл. Щоб уникнути відбілювання, зрізи монтували за допомогою водного монтажного середовища Fluoromount™ (Sigma-Aldrich, Taufkirchen Німеччина, Європа). Експерименти проводили без первинних антитіл як негативного контролю (дані не показані). Щоб підтвердити, що первинні антитіла були імунопозитивними, тканини шкіри щурів використовували як позитивний контроль (дані не показані) [5, 47, 74].

Зрізи аналізували під конфокальним лазерним скануючим мікроскопом Zeiss LSM DUO з модулем META (Carl Zeiss MicroImaging GmbH, Єна, Німеччина, Європа) з гелій-неоновим (543 нм) та аргоновим (458 нм) лазерами різних довжин хвиль [7] . Для покращення зображення використовувався Zen 2011 (програмне забезпечення LSM 700 Zeiss, Oberkochen, Німеччина, Європа). За допомогою Adobe Photoshop CC версії 2019 (Adobe Systems, Сан-Хосе, Каліфорнія, США) цифрові зображення були об’єднані в складену фігуру. Криві інтенсивності флуоресценції потім оцінювали за допомогою функції Zen 2011 «Display profile» [58]. Детальна інформація про антитіла наведена в таблиці 2.

Кількісний аналіз

Дані були зібрані для кількісного аналізу шляхом дослідження десяти зрізів і двадцяти полів на зразок. Позитивність клітин і їх кількість оцінювали за допомогою програмного забезпечення ImageJ 1.53e. Кількість целомоцитів, позитивних на TLR2, CD14 і -тубулін, підраховували за допомогою SigmaPlot версії 14.0 (Systat Software, Сан-Хосе, Каліфорнія, США). Нормально розподілені дані аналізували за допомогою одностороннього дисперсійного аналізу та t-критерію Стьюдента. Наведено середні значення та стандартні відхилення (SD) кількості імунореактивних целомоцитів: ** p Менше або дорівнює 0.01, * p Менше або дорівнює 0,05.

Результати

Дощовий черв’як Lumbricus terrestris має одношаровий епітелій і покривну волокнисту кутикулу, які утворюють епідерміс. Сполучна і м'язова тканини, які складають більшу частину стінки тіла, лежать під епідермісом. Епідермальний епітелій утримує колагенову кутикулу окремою від решти організму і відповідає за виробництво кутикулярного колагену. Кутикулу, епідерміс, поздовжні м’язи та кругові м’язи можна побачити при гістологічному дослідженні поперечного зрізу стінки тіла дощових черв’яків. Епідерміс морфологічно виражений; це або один шар епітелію, або псевдошаровий; складається з опорних, базальних, залозистих і чутливих клітин (рис. 1). Імунофлуоресцентний аналіз під час спостереження за допомогою конфокального мікроскопа показує позитивні целомоцити для TLR2 (рис. 2, 3), CD14 (рис. 2) і -тубуліну (рис. 3), розсіяні в епідермі та сполучному шарі нижче, обидва в поздовжній і в гладком'язовому шарі. TLR2 і CD14 не повністю колокалізовані один з одним, що свідчить про те, що ці целомоцити можуть належати до двох різних родин (рис. 2). Крім того, слизові залозисті клітини були тубулін-позитивними в епідермісі (рис. 3). Аналізуючи функцію «відображення профілю» конфокального мікроскопа, ми підтвердили піки флуоресценції спільної локалізації між тестованими антитілами.

Кількісний аналіз виявив подібну кількість позитивних целомоцитів для окремих протестованих антитіл, як показано в таблиці 3.

Обговорення

Відповіді хазяїна на вторгнення патогенів є фізіологічними механізмами, властивими всім живим організмам. З моменту появи перших еукаріотичних клітин розвинулося кілька захисних процесів, які гарантували цілісність клітини, гомеостаз і виживання господаря [25]. Безхребетні розвинули ряд захисних реакцій, які ефективно розпізнають і видаляють сторонні матеріали, мікроби або паразитів. У той час як хордові тварини мають адаптивний імунітет, лофотрохозоїди як дощові черв’яки покладаються в основному на клітини вродженого імунітету, такі як фагоцити (амебоцити, целомоцити), які включають філогенетично консервативні PRR для опосередкування імунної відповіді [41]. Рецептори сміттяра, TLR та Nod-подібні рецептори (NLR) є яскравими представниками у безхребетних. Після зв’язування рецептора з лігандом трансдукція сигналу ініціює складний каскад клітинних реакцій, що призводить до виробництва однієї або кількох ефекторних молекул, залучених до імунної відповіді [61]. Целомічний цитолітичний білок (CCF), білок, що зв’язує ліпополісахариди (EaLBI/BPI) і Toll-подібний рецептор EaTLR, є трьома типами PRR, які були ідентифіковані у дощових черв’яків [65, 66]. CCF був ідентифікований і охарактеризований як імунна молекула целомічної рідини та целомоцитів Eisenia foetida (Savigny, 1826). CCF, зв’язуючись із мікробними антигенами, може запускати профенолоксидазний каскад, важливий імунний механізм безхребетних, який також має опсонізуючі властивості, таким чином сприяючи фагоцитозу [18, 35].

TLR є еволюційно консервативними мембранними рецепторами розпізнавання [9, 15], які розпізнають чужорідні антигени за допомогою PAMP [2] і сприяють модуляції імунної відповіді [8, 9, 11, 36]. Бодо та ін. [24] продемонстрували наявність TLR на целомоцитах кільчастої олігохети Eisenia andrei (Bouché, 1972) [24]. Сканта та ін. (2013) виділив TLR дощового черв’яка (EaTLR) з E. andrei. Висока внутрішньовидова різноманітність цього рецептора вказує на наявність кількох генів TLR в геномі E. andrei. Згідно з філогенетичними дослідженнями, TLR кільчастої поліхети Capitella teleta (Blake, Grassle та Eckelbarger, 2009), EaTLR і TLR молюсків і голкошкірих мають багато спільного [66]. Прочазкова та ін. виділений EaTLR і множинний цистеїновий кластер (MCC) EaTLR, що експресується в тканинах тіла дощових черв’яків. Перший особливо поширений у травній системі, тоді як другий може діяти в ембріональному розвитку та відповіді проти паразитів [61]. Крім того, його присутність у целомоцитах може бути надмірно експресована через накопичення бактерій [66]. Целомоцити Lumbricus terrestris були здатні розпізнавати моноцити in vitro як невласні, підтверджуючи їхню здатність до імунного розпізнавання [62]. Дослідження транскриптомії підтверджують наявність 18 TLR у багатощетинкових кільчастих черв’яків Arenicola marina (Linnaeus, 1758) [67].

Раніше ми продемонстрували наявність TLR2 у кількох хребетних [4, 11, 12, 16, 46, 54] і урохордових [14, 45].

Після цих даних наше дослідження вперше охарактеризувало імуногістохімічно TLR2 у целомоцитах Lumbricus terrestris. Ми спільно локалізували TLR2/CD14 і TLR2/-тубулін, підтверджуючи два типи клітин целомоцитів, як повідомляє Engelmann [33]. Не всі целомоцити були спільно локалізовані для перевірених антитіл, що свідчить про ймовірну функціональну та структурну диверсифікацію цих клітин. Незважаючи на відсутність експериментальних доказів, наявність TLR2/CD14 колокалізованих целомоцитів може свідчити про те, що ці клітини можуть бути амебоцитами, які беруть участь у фагоцитозі, тоді як целомоцити, які експресують лише TLR, можуть бути клітинами меланоцитів, які беруть участь в імунній відповіді, але не виконують фагоцитарних функцій [1, 37]. , 38], SJ [49, 50], с., [57, 71]. Незважаючи на те, що Бодо та ін. вказуючи на відсутність TLR у меланоцитах E. andrei за допомогою qPCR [23], TLR2-позитивні меланоцити виявлені в L. terrestris, що вказує на різницю між видами дощових черв’яків, як уже припущено на базі ядерного генома [64].

Дослідження Eguielor et al. [31] у п’явки Glossiphonia complanata (Linnaeus, 1758) морфологічно та гістохімічно ідентифікували три основні типи клітин (макрофагоподібні клітини, NK-подібні клітини, гранулоцити типу I та II), використовуючи різні анти-людські маркери у миші, специфічні для макрофагів CD14 та CD61 [44] і NK-клітини CD56 і CD57 [43]. Ця перехресна реактивність до антитіл, створених проти антигенів CD ссавців, узгоджується з літературними даними про філогенетичні кореляції між кільчастими червами та хребетними [21, 30] і може бути прикладом еволюційного збереження цих імунних молекул.

Мишачі антитіла проти людських анти-CD24, проти фактора некрозу пухлини (TNF), анти-CD45RA та анти-CD45RO були локалізовані на поверхні целомоцитів дощового черв’яка Eisenia foetida [30, 34], що свідчить про те, що ці молекули є високо консервативний протягом філогенезу. Ці дослідження узгоджуються з попередніми дослідженнями, які демонструють, що поверхневі антигени целомоцитів мають перехресну реакцію з антитілами проти CD14, CD11b та ​​CD11c, що виробляються у ссавців Temiste petricola (Amor, 1964), що характеризує фагоцити, позитивні до антитіл до CD14, CD11b та ​​CD11c [21]. ]. За цими даними наші результати показали, що фагоцитарні клітини імунореактивні до CD14 у Lumbricus terrestris.

Крім того, ми продемонстрували імунопозитивність целомоцитів до -тубуліну, локалізованого з TLR2, демонструючи зв'язок між цитоскелетом, мікротрубочками та вродженою імунною відповіддю, опосередкованою TLR2. Колокалізація TLR2 і -Тубуліну підтверджує участь тубуліну в транспортуванні TLR на поверхні мембрани. Дослідження Heli Uronen-Hansson та ін. [70] показали велику тубуловезикулярну експресію TLR2 і TLR4 на внутрішніх і зовнішніх моноцитах, а також у дендритних клітинах. Оскільки ці рецептори локалізовані разом з -Тубуліном і пов'язані безпосередньо з комплексом Гольджі, мікротрубочки можуть служити каналом для передачі везикул TLR [70]. Тубулін також присутній в епідермісі, допомагаючи підтримувати його цілісність [27] і втручатися в загоєння ран [73], таким чином допомагаючи вродженій імунній системі, як також повідомляється в дослідженнях на Nematoda Caenorhabditis elegans (Maupass, 1900) [27, 69].

Колокалізація, підтверджена функцією «відображення профілю» конфокального мікроскопа, підтверджує отримані результати, підкреслюючи пік флуоресценції, що відповідає зв’язуванню антитіл з відповідними антигенами.

На завершення, наше дослідження ідентифікує за допомогою конфокальної мікроскопії целомоцити, імунореактивні до TLR2, CD14 і -тубуліну, вперше в Oligochaeta annelid Lumbricus terrestris. Ці дані не тільки підтверджують важливе еволюційне збереження цих молекул, але й поглиблюють наші знання про внутрішню систему захисту безхребетних, зокрема кільчастих червів, і можуть надати корисні вказівки для майбутніх досліджень, покращуючи вивчення складних вроджених імунних механізмів верхніх хребетних.

Заява інституційної ревізійної ради

Для цього дослідження було скасовано етичний огляд і схвалення, оскільки до зразків не застосовувалися експериментальні процедури.

Внески авторів

Концептуалізація, Алессіо Алескі; формальний аналіз, Алессіо Алескі та Анджело Фуміа; розслідування, Алессіо Алескі, Джоеле Капілло, Анджело Фумія, Марко Альбано, Еммануеле Мессіна, Нунціакарла Спано, Сімона Перголіцці та Євгенія Ріта Лауріано; куратор даних, Алессіо Алескі, Джоеле Капілло, Анджело Фуміа, Марко Альбано, Еммануеле Мессіна, Нунціакарла Спано, Сімона Перголіцці та Євгенія Ріта Лауріано.; написання — підготовка оригінальної чернетки, Алессіо Алескі; написання — рецензування та редагування, Алессіо Алесі, Джоеле Капілло, Нунціакарла Спано, Сімона Перголіцці та Євгенія Ріта Лауріано; візуалізація, Алессіо Алескі та Анджело Фуміа; супервізія, Євгенія Ріта Лаутіано. Усі автори прочитали та погодилися з опублікованою версією рукопису.

Фінансування

Це дослідження не отримало зовнішнього фінансування.

Наявність даних і матеріалів

Дані, представлені в цьому дослідженні, доступні в статті.

Декларації

Етичне схвалення та згода на участь

Не застосовується.

Конкуруючі інтереси

Автори заявляють про відсутність конфлікту інтересів.

Список літератури

1. Адерем А, Андерхілл Д.М. Механізми фагоцитозу в макрофагах. Annu Rev Immunol. 1999;17(1):593–623. https://doi.org/10.1146/annur ev.immunol.17.1.593.

2. Акіра С, Уемацу С, Такеучі О. Розпізнавання патогенів і вроджений імунітет. Стільниковий. 2006;124(4):783–801. https://doi.org/10.1016/j.cell.2006.02.015.

3. Алескі А, Альбано М, Савока С, Мохтар Д. М., Фумія А, Арагона М, Ло Кашіо П, Хусейн М. М., Капілло Г, Перголіцці С, Спано Н, Лауріано ЕР. Конфокальна ідентифікація імунних молекул у клітинах Skin Club Zebrafsh (Danio rerio, Hamilton 1882) та їхня можлива роль в імунітеті. Біологія. 2022;11(11):1653. https://doi.org/10.3390/biology11111653.

4. Алескі А, Капілло Г, Фуміа А, Мессіна Е, Альбано М, Арагона М, Ло Кашіо П, Спано Н, Перголіцці С, Лауріано ЕР. Конфокальна характеристика кишкових дендритних клітин від міксин до костистих. Біологія. 2022;11(7):1045.https://doi.org/10.3390/biology11071045.

5. Алескі А, Капілло Г, Мохтар Д. М., Фумія А, Д'Анджело Р, Ло Кашіо П, Альбано М, Геррера М. С., Сайєд Р. К. А., Спано Н., Перголіцці С., Лауріано Е. Р. Експресія антимікробного пептиду Piscidin1 в тучних клітинах зябер гігантського мулистого стрибуна Periophthalmodon schlosseri (Pallas, 1770). Int J Mol Sci. 2022;23(22):13707. https://doi.org/10.3390/ijms232213707.

6. Алескі А, Ціцерон Н, Фумія А, Петрарка С, Мангіфеста Р, Нава В, Ло Кашіо П, Гангемі С, Ді Джоаккіно М, Лауріано Е.Р. Гістологічний і хімічний аналіз важких металів у нирках і зябрах Бупса Бупса: центри меланомакрофагів і клітини-стрижні як екологічні біомаркери. Токсики. 2022;10(5):218. https://doi.org/10.3390/toxics10050218.

7. Алескі, А., Фумія, А., Міллер, А., Калабро, К., Сантіні, А., Ціцерон, Н., і Ло Кашіо, П. (2022). Спіруліна сприяє агрегації макрофагів у печінці рибки даніо (Danio rerio). Nat Prod Res, 1–7. https://doi.org/10.1080/14786419. 2022.2089883.

8. Алескі А., Гітто М., Котанська М., Ло Кашіо П., Міллер А., Нікосія Н., Фуміа А. та Перголіцці С. (2022). Імуногенність, ефективність, безпека та психологічний вплив мРНК-вакцин від COVID-19. Human Immunol, S0198885922001586. https://doi.org/10.1016/j.humimm.2022.08.004.

9. Алескі, А., Лауріано, Е.Р., Арагона, М., Капілло, Г., і Перголіцці, С. (2020). Маркування клітин Лангерганса хребетних, від риб до ссавців. Acta Histochemica, 122(7): 151622. https://doi.org/10.1016/j.acthis.2020.151622.

10. Alesci A, Lauriano ER, Fumia A, Irrera N, Mastrantonio E, Vaccaro M, Gangemi S, Santini A, Cicero N, Pergolizzi S. Relationship between Immune Cells, Depression, Stress, and Psoriasis: Could the Use of Natural Products Бути корисним? Молекули. 2022;27(6):1953.

11. Алескі, А., Перголіцці, С., Капілло, Г., Ло Кашіо, П., і Лауріано, ER (2022). Стрижкові клітини в нирках золотої рибки (Carassius auratus, Linnaeus 1758): світлова конфокальна мікроскопія. Acta Histochemica, 124(3):151876.

12. Алескі, А., Перголіцці, С., Фуміа, А., Калабро, К., Ло Кашіо, П., і Лауріано, ER (2022). Тучні клітини кишківника золотої рибки (Carassius auratus): імуногістохімічна характеристика. Acta Zoologica.

13. Alesci A, Pergolizzi S, Fumia A, Miller A, Cernigliaro C, Zaccone M, Salamone V, Mastrantonio E, Gangemi S, Pioggia G, Cicero N. Immune System and Psychological State of Pregnant Women during COVID-19 Пандемія: чи здатні мікроелементи підтримувати вагітність? Поживні речовини. 2022;14(12):2534. https://doi.org/10.3390/nu14122534. 14. Алескі, А., Перголіцці, С., Ло Кашіо, П., Капілло, Г., і Лауріано, ER (2022). Локалізація вазоактивного інтестинального пептиду та імунореактивних клітин Toll-подібного рецептора 2 в ендостилі урохордових Styela plicata (Lesueur, 1823). Microsc Res Tech, https://doi.org/10.1002/jemt.24119.

15. Алескі А, Перголіцці С, Ло Кашіо П, Фумія А, Лауріано ЕР. Регенерація нейронів: порівняльний огляд хребетних і нові перспективи нейродегенеративних захворювань. Acta Zoologica. 2021. https://doi.org/10. 1111/азо.12397.

16. Алескі А, Перголіцці С, Савока С, Фумія А, Мангано А, Альбано М, Мессіна Е, Арагона М, Ло Кашіо П, Капілло Г, Лауріано ЕР. Виявлення кишкових келихоподібних клітин Broadgilled Hagfsh Eptatretus Cirrhatus (Forster, 1801): конфокальна мікроскопія. Біологія. 2022;11(9):1366.https://doi.org/10.3390/biology11091366.

17. Alturkistani HA, Tashkandi FM, Mohammedsaleh ZM. Гістологічні плями: огляд літератури та приклад. Global J Health Sci. 2015; 8 (3): 72. https://doi.org/10.5539/gjhs.v8n3p72.

18. Beschin A, Bilej M, Brys L, Torreele E, Lucas R, Magez S, De Baetselier P. Конвергентна еволюція цитокінів. природа 1999;400(6745):627–8.https://doi.org/10.1038/23164.

19. Bilej M, De Baetselier P, Beschin A. Антимікробний захист дощового черв’яка. Folia Microbiol. 2000;45(4):283–300. https://doi.org/10.1007/BF028 17549.

20. Bilej M, Procházková P, Šilerová M, Josková R (2010) Імунітет дощових черв’яків. У: Söderhäll K, edotiro. Імунітет безхребетних, том. 708. Бостон: Springer; стор. 66–79). https://doi.org/10.1007/978-1-4419-8059-5_4.

21. Blanco GAC, Escalade AM, Alvarez E, Hajos S. LPS-індукована стимуляція фагоцитозу у хробака sipunculan Themiste petricola: можливе залучення людських CD14, CD11B та CD11C перехресно реактивних молекул. Dev Comp Immunol. 1997; 21 (4): 349–62. https://doi.org/10.1016/ S0145-305X(97)00007-4.

22. Bodó K, Boros Á, Rumpler É, Molnár L, Böröcz K, Németh P, Engelmann P. Ідентифікація нових гомологів лубрицину у дощових черв’яків Eisenia andrei. Dev Comp Immunol. 2019;90:41–6.

23. Бодо К., Ерншт Д., Немет П. та Енгельманн П. (2018). Виразні молекулярні відбитки пальців, пов’язані з імунною системою та захистом, у окремих підгрупах целомоцитів дощових черв’яків Eisenia andrei. Виживання безхребетних J, 338–345.

24. Бодо К., Келлермайер З., Ласло З., Борос А., Коханюк Б., Немет П., Енгельманн П. Вроджена імунна відповідь, спричинена травмою під час регенерації сегментів дощового черв’яка, Eisenia andrei. Int J Mol Sci. 2021; 22 (5): 2363.

25. Бухман, К. (2014). Еволюція вродженого імунітету: підказки від безхребетних через риб до ссавців. Кордони в імунології.

For more information:1950477648nn@gmail.com