Зміни антиоксидантної активності під час ферменту ферменту

Розділ 4 Зміни активності антиоксидантів під час ферментації ферменту

Фрукти багаті поживними речовинами і мають багато різновидів. Виробництво речовин під час бродіння є складним і різноманітним, і існує багато досліджень щодо їхантиоксидантна активність. Люди завжди досліджують та відкривають, шукають корисні продуктиздоров'я людини, так ферменти стали гарячою темою в останні роки. Традиційний процес виробництва ферментів полягає у отриманні ферментів шляхом природного бродіння фруктів та овочів. На основі попередніх досліджень ця стаття додає 4 корисних бактерій бродіння. Сама бактерії існує також у ферменті. Після додаткового додавання бактерій число та тип мікроорганізмів у процесі бродіння змінюються. Який ефект матиме ця зміна на його антиоксидантну активність? У попередньому розділі ми взяли яблука як приклад детального пояснення. Порівняння антиоксидантної активності експериментальної групи та контрольної групи при різних концентраціях ферменту показало, що антиоксидантна активність ферменту в експериментальній групі була більшою, ніж у контрольної групи. Інтенсивність антиоксидантної активності також певним чином відображає надійність ферменту.

Нові трави Cistanche з сильною антиоксидантною силою

 

Служба підтримуючої служби Wecistanche-найбільший експортер Cistanche в Китаї:
Електронна пошта: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Тел: +86 15292862950

 

У цій главі до початкового експерименту додають загальні плоди груші та цитрусантиоксидантна активністьпід час бродіння. На основі зменшення витрат за допомогою експериментів ми сподіваємось більш всебічно відображати біологічну активність ферментів після додавання бактерій та забезпечити певну теоретичну основу та підтримку даних для виробництва мікробних ферментів By штучна прищеплення штамів.

 

 

 

4.1 Матеріали та методи

4.1.1 Матеріали

(1) Експериментальні матеріали

Вимийте свіжі яблука, груші та цитрусові фрукти стерильною водою в стерильних умовах, сушіть їх природним шляхом на стерильному операційному столі, очистіть їх, очистіть їх і наріжте для подальшого використання. Додайте білий цукор і фрукти до стерилізованої скляної банки при масовому співвідношенні 1: 1. Активуйте бактерії, необхідні для експерименту, і прищеплюйте їх у фермент відповідно до оптимальної схеми (цей крок операції опущена для контрольної групи), закладіть її та покладіть у прохолодне і сухе місце. Візьміть зразки в різні періоди ферментації при кімнатній температурі, щоб отримати всю ферментну рідину, що містить плідну м’якоть, і фільтрувати її. Візьміть супернатант як експериментальний зразок, і використовуйте його для вимірювання відповідних даних після центрифугування їх при 10, 000 обертів у високошвидкісній центрифузі протягом 15 хвилин. Варто зазначити, що в процесі створення ферментів, щоб уникнути непотрібного забруднення, всі наші операції проводяться в стерильних умовах.

(2) Основні інструменти

Інструменти, необхідні для експерименту, такі ж, як і 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Методи

(1) Зміни загального вмісту фенолу під час бродіння

450 мкл розчину зразка додавали з дистильованою водою, щоб зробити об'єм 46 мл, а потім додавали 1 мл реагенту фоліно-фенолу. Добре перемішайте і реагуйте протягом 3 хв. Потім додавали 3 мл 20% NACO3. Суміш похитнули на постійній температурній водяній бані на 25 градусів протягом 2 год. Дистильована вода використовувалася як порожній контроль. Поглинання А вимірювали при 760 нм за допомогою спектрофотометра. Для кожного лікування було проведено три репліки. Загальний вміст фенолу обчислювали відповідно до рівняння стандартної кривої.

(2) Зміни зменшення потужності під час бродіння

Додати 45 0 мкл зразка до 2,5 мл фосфатного буфера з концентрацією 0. 2Mol/L та рН 6,6, потім додайте 2,5 мл ферсианіду калію (мас. (мас./Об.) З масовою концентрацією 10%, центрифуга при 3000 об/хв протягом 10 хвилин, вийміть і негайно витягніть 2,5 мл супернатанту в об'ємну колбу, додайте 2,5 мл дистильованої води та 0,5 мл хлориду заліза (мас./Об.) З масовою концентрацією 0,1%. Використовуйте дистильовану воду як порожній контроль і вимірюйте поглинання А на довжині хвилі 700 нм із спектрофотометром. Виконайте 3 повторення для кожного лікування. Міцність зменшення потужності визначається на основі значення поглинання.

 

(3) Зміни в здатності до радикального відбиття супероксиду під час бродіння
Розмістіть 4,5 мл 0. {{1 0}} 5 моль/л рН 8,2 буфера трис-HCl у постійній температурній водяній бані та відрегулюйте температуру до 25 градусів. Через 20 хв додайте 1 мл розчину зразка ферменту та 0,4 мл розчину пірогаллолу з молярною концентрацією 25 ммоль/л. Добре перемішайте і помістіть на 25 -градусну водяну бані протягом 5 хв. Додайте 1,0 мл 8 моль/л HCl для припинення реакції. Використовуйте буфер Tris-HCl як еталон і використовуйте спектрофотометр для вимірювання поглинання A при 299 нм для обчислення швидкості очищення. Порожня група контролю використовує 1 мл розчинника замість зразка. Швидкість очищення аніонів суперроксиду обчислюється відповідно до формули 4.1: швидкість відрядження аніонів суперроксиду аніона (%)=(A 1- A2)/A1 × 100 (4.1), де: A1 - поглинання порожньої групи контролю; A2 - поглинання розчину зразка ферменту експериментальної групи.

 

(4) Зміни здатності до очищення гідроксильних радикалів під час бродіння

 

Додати воду до 45 0 мкл зразка розчину до 2 мл, потім додайте його до 1,4 мл перекису водню з молярною масою концентрації 6 ммоль/л, потім додайте 0,6 мл саліцилату натрію з концентрацією молярної маси 20 ммоль/л і 2 мл кольорової сульфату в молярній масі концентрації 1,5 ммол/л. 1 год. Нуль з дистильованою водою і виміряйте поглинання А на довжині хвилі 562 нм за допомогою спектрофотометра. Для кожного лікування було проведено три репліки. Швидкість від очищення гідроксильних радикалів обчислювали відповідно до Формули 4.2: Швидкість очищення гідроксильних радикалів (%)=[(A 1- A2)/A1] × 100 (4.2), де: A1 - середня абсорбція порожню; A2 - середня абсорбція розчину зразка.

 

(5) Зміни здатності до очищення вільних радикалів DPPH під час бродіння
Точно перенести 2 мл розчину зразка ферменту в об'ємну колбу 1 0 мл, потім додайте 2 мл 80% водного розчину етанолу DPPH до об'ємної колби з молярною масою концентрації 2 × {5}} моль/л. Добре перемішайте і дайте стояти при кімнатній температурі протягом 30 хв. Візьміть 80% розчину етанолу як еталону та вимірюйте поглинання зразка на довжині хвилі 517 нм, що реєструється як А1. Змішайте 2 мл розчину DPPH і 2 мл 80% розчину етанолу та вимірюйте їх поглинання на одній довжині хвилі, яка реєструється як A0. Змішайте 2 мл розчину ферменту та 2 мл 80% розчину етанолу та вимірюйте їх поглинання на одній довжині хвилі, яка реєструється як A2. Для кожного лікування було проведено три репліки. Обчисліть швидкість очищення вільних радикалів DPPH відповідно до формули 4.3:
Швидкість відмови від вільних радикалів (%) {{0}} [1- (a 1- a2)/a 0] × 100 (4.3), де: A1 - середнє поглинання 2 мл DPPH 80% етанольного розчину та 2 ML -розчину; A2 - поглинання 2 мл розчину ферменту та 2 мл 80% змішаного розчину етанолу; A0 - поглинання 2 мл розчину DPPH і 2 мл 80% змішаного розчину етанолу.

(6) Зміни здатності до очищення вільних радикалів ABTS під час бродіння
8 мкл розчину зразка доповнювали до 10 мкл фосфатним буфером (5 ммоль/л рН 7,4) і потім змішували рівномірно з 10 мл сульфату калію та змішаний розчин ABT для реагування при температурі реакції 30 градусів і час реакції 5 хв. Нульовий розчин дистильованою водою і виміряйте поглинання А на довжині хвилі 734 нм за допомогою спектрофотометра. Для кожного лікування було проведено три репліки. Швидкість від очищення вільних радикалів ABTS розраховували за формулою 4.4:
Швидкість від очищення вільних радикалів (%)=[(A 1- A2)/A1] × 100 (4.4) де: A1 - поглинання порожньої контрольної групи; A2 - поглинання експериментальної групи вибірки.