Метаболоміка сечі виявила аномальне відновлення після максимального навантаження у пацієнтів із МЕ/СХУ. Частина 3

Чому ми будемо втомлюватися? Як ми можемо вирішити проблеми втоми?

【Контакт】Електронна адреса: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501

3. Обговорення

Це перший випадок, коли метаболом сечі пацієнтів з ME/CFS був охарактеризований до та після фізичного навантаження, коли пацієнти з ME/CFS відчували PEM. Багато з цих метаболітів ніколи раніше не вимірювалися у пацієнтів з ME/CFS, оскільки попередні дослідження метаболомії сечі при ME/CFS були обмежені менш ніж 50 метаболітами, а в поточному дослідженні було виміряно 1403. Крім того, використання сидячих здорових контрольних осіб для врахування Рівень фізичної активності, який може впливати на початковий рівень і рівень метаболітів після тренування, є ключовою перевагою поточного дизайну дослідження, яка не використовувалася в попередніх дослідженнях. Наші результати показали поширене підвищення рівня метаболітів у сечі контрольної групи через 24 години після тренування, яке не спостерігалося у пацієнтів з ME/CFS, причому 110 із цих сполук мали значну взаємодію між статусом захворювання (ME/CFS або контроль ) і час (вихідний рівень порівняно з періодом після тренування) (додатковий малюнок S2). На додаток до численних аналізів рівнів метаболітів у сечі, кореляція рівнів метаболітів у сечі та плазмі дала додаткові докази метаболічної дисрегуляції у пацієнтів з ME/CFS після фізичних навантажень. Цей аналіз надав додаткові докази патофізіологічних змін у багатьох субшляхах, а також докази відмінностей у додаткових субшляхах, які не мали суттєвих відмінностей між пацієнтами з ME/CFS та контрольною групою, якщо розглядати рівні метаболітів у сечі окремо.

Цистанхе може діяти як засіб від втоми та підсилення витривалості, а експериментальні дослідження показали, що відвар цистанхе трубчастої може ефективно захищати гепатоцити печінки та ендотеліальні клітини, пошкоджені у плаваючих мишей, що тримають вагу, підвищувати експресію NOS3 та сприяти виробленню глікогену в печінці. синтезу, таким чином проявляючи ефективність проти втоми. Багатий на фенілетаноїд глікозид екстракт Cistanche tubulosa може значно знизити рівні креатинкінази, лактатдегідрогенази та лактату в сироватці крові, а також підвищити рівень гемоглобіну (HB) і глюкози у мишей ICR, і це може відігравати роль проти втоми, зменшуючи пошкодження м’язів. і затримка збагачення молочною кислотою для зберігання енергії у мишей. Таблетки Compound Cistanche Tubulosa значно подовжували час плавання з навантаженнями, збільшували запас глікогену в печінці та знижували рівень сечовини в сироватці після фізичних вправ у мишей, демонструючи свою дію проти втоми. Відвар цистанхісу може підвищити витривалість і прискорити усунення втоми у мишей, що займаються фізичними вправами, а також може зменшити підвищення рівня креатинкінази в сироватці крові після фізичних навантажень і підтримувати ультраструктуру скелетних м’язів мишей у нормі після фізичних вправ, що вказує на його вплив підвищення фізичної сили та зняття втоми. Цистанхіс також значно подовжив час виживання отруєних нітритами мишей і підвищив стійкість до гіпоксії та втоми.

Натисніть на відчуття постійної втоми

3.1. Порівняння з попередніми дослідженнями метаболомії сечі у пацієнтів з ME/CFS

Загалом наші результати не узгоджуються з декількома попередніми дослідженнями вимірювання метаболітів у сечі у пацієнтів з МЕ/СХУ порівняно з контрольною групою пацієнтів без МЕ/СХУ. Щоб краще порівняти наші результати з попередніми дослідженнями, у яких вимірювалася менша кількість метаболітів, ми порівняли вихідні результати для p < 0.05 у LMM з попередніми дослідженнями. Єдиною сполукою, яка виявилася значущою в іншому дослідженні та нашому, був аланін, хоча в попередньому дослідженні виявилося, що аланін був нижчим у пацієнтів жіночої статі, ніж у контрольній групі (рівень p-коригування BH < 0.05) і в У нашому дослідженні середня нормалізована концентрація була вищою у пацієнтів з ME/CFS, ніж у контрольній групі [20]. Проте кілька досліджень виявили вихідні відмінності в сполуках, які, як ми виявили, по-різному змінювалися у пацієнтів із МЕ/СХВ та у контрольній групі під час відновлення фізичних навантажень, включаючи фенілаланін (нижче у пацієнтів із МЕ/СХУ [23,24]) і валін (нижче у пацієнтів пацієнти з ME/CFS [20]). У нинішньому дослідженні рівень фенілаланіну та валіну також значно підвищився в контрольній групі, яка веде сидячий спосіб життя, після фізичних навантажень, тому цілком можливо, що контрольна група в інших дослідженнях була більш активною та вже мала вищий рівень фенілаланіну в сечі. Жодне інше дослідження спеціально не набирало суб’єктів, які не ведуть малорухливий спосіб життя, але не ведуть сидячий спосіб життя, хоча в одному дослідженні намагалися знайти відповідність «загальному способу життя» [23]. Армстронг та ін. досліджували кореляції Пірсона між метаболітами в сечі та плазмі у пацієнтів з МЕ/СХУ та контрольної групи на початковому рівні та виявили відмінності в ацетаті, лактаті та фенілаланіні з пороговим значенням |R| > 0,4 ​​в кожній групі [20]. Ацетат занадто малий, щоб його можна було виявити в нашому аналізі, і ми не виявили відмінностей у кореляції лактату або фенілаланіну в плазмі та сечі.

McGregor та його колеги також досліджували зміни в метаболомах сечі та плазми у пацієнтів з ME/CFS, які перенесли PEM [19]. Вони використали опитування, щоб відокремити пацієнтів з ME/CFS, які зараз відчувають PEM за останні сім днів, і виявили, що вісім із тридцяти виміряних метаболітів у сечі мали значно нижчі концентрації в групі ME/CFS порівняно з контрольною групою. З них тільки серин мав значні відмінності в наших аналізах; він збільшився після фізичних вправ у контрольній групі (файл додаткових даних S2 — результати LMM). Рівні двох метаболітів у сечі, ацетату та метилгістидину, також суттєво відрізнялися в групі PEM та без PEM [19]. Рівні метилгістидинів, досліджувані в цьому дослідженні, істотно не відрізнялися в аналізі LMM, але ми виявили відмінності в кореляції 1-метилгістидину та N-ацетил-3-метилгістидину в плазмі та сечі (рис. 9). Макгрегор та ін. також виявили асоціації семиденних показників PEM з кількома метаболітами в плазмі та сечі [19].

3.2. Збільшення рівня метаболітів у сечі після фізичних навантажень у сидячих контрольних груп узгоджується з попередніми дослідженнями

Метаболом сечі у жінок через 24 години після тренування не був добре охарактеризований. Наскільки нам відомо, жодне дослідження не вимірювало метаболом сечі на початковому рівні порівняно з 24 годинами після тренування у жінок. В одному дослідженні виміряли 32 метаболіти в сечі до тренування та через 24 години після тренування у чоловіків, порівнюючи дев’ять велосипедистів, що змагаються, з вісьмома здоровими, але нетренованими чоловіками того ж віку (50–60 років) [48]. Хоча їхнє дослідження було зосереджено на порівнянні спортсменів із нетренованими суб’єктами, вони побачили значне збільшення рівня лактату, ацетату та гіпоксантину після тренування (більше, ніж у два рази) у контрольних суб’єктів. Ацетат не вимірювався в нашому дослідженні, і ні лактат, ні гіпоксантин не відрізнялися від базового рівня та після тренування в нашій жіночій контрольній групі. Мукерджі та ін. виявили значні відмінності між спортсменами та контрольною групою у восьми виміряних метаболітів, пов’язаних з різними біохімічними шляхами [48]. Таким чином, сильною стороною поточного дослідження є відбір сидячих здорових осіб на відміну від більш активних людей, які можуть мати змінений метаболом сечі через регулярні фізичні вправи.

Незважаючи на брак опублікованої літератури про метаболом сечі через 24 години після фізичних навантажень, є кілька досліджень, які вимірюють метаболіти сечі як у чоловіків, так і у жінок на ранніх термінах після фізичних вправ (переглянуто в [49]). Один із висновків, який узгоджувався між дослідженнями, полягає в тому, що концентрація більшості ліпідів збільшується в біорідинах після тренування, в тому числі в сечі. Зокрема, було показано підвищення концентрації ацилкарнітину в крові та сечі у відповідь на фізичне навантаження. Це узгоджується з результатами нашого дослідження, в якому кількість кількох ацилкарнітинових сполук була значно збільшена після тренування в сечі контрольної групи (рис. 7A).

Найбільше дослідження, яке включало жінок (загалом 255 суб’єктів, 107 жінок), також виявило значні метаболічні зміни в сечі після фізичних вправ, причому 37 із 47 виміряних метаболітів суттєво змінилися після корекції FDR, а у 33 з них спостерігалося збільшення після фізичних вправ [50] . Це узгоджується з нашими висновками про масштабні метаболічні зміни після фізичних вправ у сечі контрольних суб’єктів, причому більшість сполук, які були змінені, мали підвищені концентрації. Це дослідження також завершило порівняльний аналіз за статтю, але було виявлено лише два метаболіти зі суттєво різними співвідношеннями після тренування/початкового рівня у жінок і чоловіків.

У Schranner et al. Результати для амінокислот не такі послідовні, як для ліпідів, які зазвичай підвищуються після фізичних вправ [49]. Однак деякі результати в сечі були узгодженими в принаймні двох дослідженнях (хоча всі моменти часу після тренування об’єднані), зокрема те, що наступні сполуки збільшилися в сечі після тренування: аланін, O-ацетил-гомосерин, 5- гідроксиіндолпіруват, ксантуренат, L-метанефрин, N-ацетилванілаланін і N-(карбоксиетил)аргінін. У принаймні двох дослідженнях було виявлено зниження рівня наступних сполук у сечі після фізичних вправ: гліцину, гістидину, триметиламіну n–оксиду. Порівнюючи ці результати з нашим дослідженням, більшість метаболітів або не суттєво відрізнялися до та після тренування, або не вимірювалися в нашому дослідженні. Однак ми також виявили значне підвищення рівня аланіну в контрольній групі, що узгоджується з розглянутими дослідженнями. У нашому дослідженні рівень гліцину також був підвищений після тренування в контрольній групі на відміну від зниження. Однак Kistner et al. Дослідження, яке включало багато жінок, також виявило, що рівень гліцину значно підвищується після фізичних вправ [50].

3.3. Відмінності між контрольною групою, що веде сидячий спосіб життя, і пацієнтами з ME/CFS у супершляху ліпідів

Багато ліпідних субшляхів значно відрізнялися в сечі пацієнтів і контрольної групи в цьому дослідженні, включаючи метаболізм жирних кислот ацилкарнітину. Метаболіти ацилкарнітину збільшувалися в сечі після фізичних навантажень у здорових осіб контрольної групи, а зміни, викликані фізичними вправами, значно відрізнялися між контрольною групою та пацієнтами з ME/CFS (рис. 3, 7 та S4). Крім того, незважаючи на те, що дезоксикарнітин не є ацилкарнітином, дезоксикарнітин у ліпідному підшляху метаболізму карнітину по-різному корелює між плазмою та сечею у пацієнтів із ME/CFS порівняно з контрольною групою (рис. 9). Ацилкарнітини дуже важливі в енергетичному метаболізмі, оскільки вони необхідні для транспортування жирних кислот у мітохондрії для окислення. Окислення довголанцюгових жирних кислот є основним способом енергетичного метаболізму під час аеробних вправ. Порушений метаболізм ацилкарнітину під час фізичних вправ може сприяти розвитку непереносимості фізичних навантажень і ПЕМ у пацієнтів з МЕ/СХУ. В іншому дослідженні, в якому розглядалися лише суб’єкти на початковому рівні та не включалися спеціально сидячі контрольні групи, було виявлено, що субшлях ацилкарнітину суттєво відрізняється у пацієнтів із МЕ/СХУ та в контрольній групі, причому п’ять із восьми сполук мали нижчу концентрацію у пацієнтів. [11]. Коли аналізували лише суб’єктів на початковому рівні, специфічні вимірювання ацилкарнітину в сироватці крові показали, що в одному звіті [51] кількість ацилкарнітину в крові пацієнтів була нижчою, ніж у контрольній групі [51], але в іншому дослідженні не було виявлено відмінностей у рівнях у сечі чи плазмі [52]. У плазмі більшої когорти, підгрупою якої є суб’єкти поточного дослідження, хімічний кластер карнітину також значно змінювався у контрольних жінок, які вели сидячий спосіб життя під час відновлення (визначається як різниця між 24 годинами після тренування та 15 хвилинами після тренування ), причому більшість сполук збільшується після фізичних вправ [25]. Було виявлено, що хімічний кластер карнітину суттєво не змінюється під час відновлення фізичних навантажень у пацієнтів із МЕ/СХУ. Незважаючи на те, що цей кластер включає більше, ніж просто ацилкарнітини, ацилкарнітини також є його членами та сприяють його значущості в аналізі збагачення хімічної схожості в поточному дослідженні (додатковий малюнок S4). Було також показано ex vivo, що пальмітоілкарнітин, який тимчасово збільшується в м’язах після тренування, може діяти як сигнал навантаження від м’язів до підмножини нейронів [53].

Метаболіти жирної кислоти ацилгліцину є єдиними сполуками, які були виявлені в сечі у суттєво відмінних концентраціях у ME/CFS порівняно з контрольною групою в один момент часу (24 години після тренування) та іншій сполукі ацилгліцину, 3-гідроксибутироілгліцину , мала значну негативну кореляцію у пацієнтів з ME/CFS при кореляції U3/U1 з P3/P1 (рис. 5 і 9). Крім того, цис-3,4-метиленгептаноілгліцин змінювався по-різному під час відновлення фізичних навантажень у пацієнтів із ME/CFS порівняно з контрольною групою (LMM, додатковий малюнок S2). Хоча метаболізм ацилгліцину не є одним із підшляхів, які значно посилювалися після фізичних навантажень тільки в контрольній групі, він значно відрізнявся у пацієнтів із ME/CFS порівняно з контрольною як через 24 години після тренування, так і при аналізі різниці у співвідношеннях після тренування/базового рівня (рис. 3). Екскреція з сечею певних ацилгліцинів також змінюється розладами, пов’язаними з окисленням жирних кислот у мітохондріях, включаючи дефіцит середньоланцюгової ацилкоензим А (КоА) дегідрогенази (MCAD) [54]. Наша група спостерігала, що окислення жирних кислот в імунних клітинах пацієнтів з ME/CFS відрізняється від контрольної групи [55].

3.4. Відмінності між сидячими контрольними пацієнтами та пацієнтами з ME/CFS у супершляху амінокислот

Ми також виявили багато відмінностей у сечі в амінокислотах у пацієнтів із ME/CFS та контрольної групи після тренування. Два з цих шляхів виділялися, оскільки вони мали значні зміни у пацієнтів із ME/CFS порівняно з контрольною групою в усіх наших аналізах, включаючи аналіз шляху KEGG, і обговорюються далі.

Цикл сечовини в печінці є важливою частиною метаболізму фізичних вправ, оскільки він необхідний для видалення високих рівнів аміаку, які виробляються під час фізичних вправ [56,57]. Germain та його колеги також виявили, що цикл сечовини та шляхи рециркуляції аміаку SMPDB були значно змінені в плазмі між пацієнтками ME/CFS та контрольною групою в аналізі шляху, коли порівнювали різницю між рівнями метаболітів через 24 години після CPET (P3) та 15 хвилин після CPET (P2) [25]. Накопичення аміаку раніше пов’язували з нейротоксичністю та втомою, спричиненою фізичними навантаженнями [56,57]. Порушення регуляції циклу сечовини в сечі та метаболомах плазми після фізичного навантаження у пацієнтів з МЕ/СХУ може спричиняти накопичення аміаку, але 1403 сполуки, виміряні Metabolon® у сечі, не включали аміак, оскільки він є летючою сполукою, а також менше, ніж межа виявлення платформи Metabolon®.

Цистеїн, метіонін, SAM і таурин є важливими амінокислотами, оскільки вони єдині, що містять сірку, а цистеїн унікальний своєю здатністю утворювати дисульфідні зв’язки. Цистеїн також може перетворюватися на глутатіон і таурин. Цистеїн і метіонін відіграють численні ролі в клітинному метаболізмі, але вони також є ключовими будівельними блоками білків [37]. Завдяки своїй тіоловій групі цистеїн бере участь у каталізі багатьох ферментативних реакцій і підтримці окисно-відновного гомеостазу. Зміни метаболізму цистеїну відбуваються при багатьох нейродегенеративних розладах, включаючи хворобу Альцгеймера, Хантінгтона та Паркінсона [58]. У той час як метаболізм цистеїну, метіоніну, SAM і таурину показав багато відмінностей між пацієнтами та контрольною групою в наших аналізах метаболомів сечі, кореляції сечі та плазми виявили додаткові сполуки зі значними відмінностями між пацієнтами ME/CFS та контрольною групою, в тому числі щодо цистеїну, який є утворюється, коли два цистеїни окислюються з утворенням дисульфідного зв’язку, і цистатіонін, який є проміжним продуктом у виробництві цистеїну в циклі метіоніну [37].

3.5. Обмеження

Наше дослідження має кілька важливих обмежень. По-перше, дієта піддослідних не контролювалася, і споживання метаболітів з їжею може впливати на їх виведення з сечею. По-друге, ми визнаємо, що відсутність відповідності ІМТ не є ідеальним і є обмеженням цього дослідження. Наша більша когорта пацієнтів із МЕ/СХУ та здорових осіб, які ведуть сидячий спосіб життя, відповідає ІМТ, і тому, якщо це пілотне дослідження буде розширено, це не буде проблемою в майбутньому. По-третє, наші результати обмежені пацієнтками з ME/CFS. Хоча дуже важливо вивчати обидві статі при ME/CFS і виявляється все більше статевих відмінностей у патофізіології [25,59,60], ми вирішили зосередити наше пілотне дослідження на жінках через більший тягар захворювання ME. /CFS у жінок (60–65% жінок) [2]. Крім того, оскільки ми фіксували метаболом сечі лише в два моменти часу, на початковому рівні та через 24 години після тренування, ми не можемо сказати, чи змінилися у пацієнтів з ME/CFS рівні виведення деяких із цих метаболітів раніше чи пізніше. точки, ніж елементи керування. Ці збільшення продуктів виділення можуть відбуватися у пацієнтів, але з більшою затримкою, подібно до того, як пацієнти з ME/CFS демонструють затримку загального відновлення до фізичних вправ. Однак також можливо, що ця відсутність зміненого метаболічного виведення є частиною загальної відсутності здорової метаболічної реакції на фізичні вправи.

4. Матеріали та методи

4.1. Навчальні предмети

У це дослідження було включено вісім здорових сидячих осіб контрольної групи та десять пацієнтів з ME/CFS. Пацієнтам із МЕ/СХУ діагностували за канадськими критеріями консенсусу [3]. 18 суб’єктів, включених у це дослідження, були частиною більшої когорти із 173 учасників (ідентифікатор ClinicalTrials.gov: NCT04026425) [61]. У цьому пілотному дослідженні всі учасники були жінки. Суб'єкти були набрані за такими критеріями. Усі учасники мають бути віком від 18 до 70 років. Суб’єкти були виключені з будь-якої групи, якщо вони були курцями, вагітними або годували грудьми, хворіли на діабет, вживали надмірну кількість алкоголю або мали ортопедичні обмеження, які заважали їм виконувати CPET. Діагнози шизофренії, великого депресивного розладу, біполярного розладу або тривожного розладу також були критеріями виключення в обох групах. Крім того, контрольна група, яка веде здоровий сидячий спосіб життя, була виключена, якщо у них були діагностовані будь-які аутоімунні захворювання. Функція нирок була нормальною в усіх суб’єктів цього дослідження, як було оцінено за такими стандартними лабораторними аналізами крові Quest Diagnostics: креатинін сироватки, азот сечовини крові та оцінена швидкість клубочкової фільтрації (eGFR).

Сімнадцять суб'єктів виконували тестування з фізичними навантаженнями в коледжі Ітака в Ітаці, штат Нью-Йорк, а один суб'єкт виконував тестування з фізичними вправами в ID Med в Торрансі, Каліфорнія. Усіх учасників попросили припинити прийом харчових добавок, включаючи пробіотики, за два тижні до тестування на фізичне навантаження. Учасників попросили припинити прийом болезаспокійливих і стимулюючих препаратів за два дні до тестування з фізичним навантаженням. Усі пацієнти надали письмову інформовану згоду, і всі протоколи були схвалені IRB коледжу Ітаки №1017-12Dx2. Усі учасники заповнили шкалу інвалідності Белла [26], коротку форму-36 опитування про стан здоров’я [62] та спеціальні анкети. Пацієнти з ME/CFS додатково заповнили багатовимірну інвентаризацію втоми [63].

4.2. Серцево-легеневе тестування з фізичним навантаженням і збір зразків сечі

CPET проводили на стаціонарному велоергометрі за наступним протоколом: 3 хвилини відпочинку з подальшою безперервною їздою на велосипеді, у якій поступове навантаження збільшується на 15 Вт за хвилину вправи до вольового виснаження (приблизно 8–10 хвилин). Коефіцієнт дихального обміну (RER), який є швидкістю утворення вуглекислого газу, поділеною на швидкість споживання кисню, був виміряний, щоб переконатися, що учасники виконували тест із достатнім зусиллям (RER > 1,1 вказує на максимальне зусилля).

Усі зразки сечі збирали вранці: (1) за 15–20 хвилин до CPET і (2) через 24 години. Сечу збирали посередині потоку в стерильні збірники сечі, аликвотували, центрифугували при 10,000×g протягом 10 хвилин для видалення залишків клітин і зберігали при -80 ◦C. Зразки сечі пройшли один цикл заморожування/розморожування для подальшого аліквотування, і аліквоти відправляли на ніч у Metabolon® на сухому льоду.

4.3. Метаболомічний аналіз

Метаболіти вимірювали за допомогою глобальної метаболомічної платформи Precision Metabolomics™ рідинної хроматографії та тандемної мас-спектрометрії (LC-MS/MS) на Metabolon®. Детальні методи були описані раніше [64]. Коротко, зразки екстрагували метанолом (5:1 метанол: зразок) і потім випарювали. Метаболіти були виявлені в кожному зразку за допомогою чотирьох різних платформ LC-MS/MS, які були оптимізовані для гідрофільних і гідрофобних сполук і використовували як позитивну, так і негативну іонізацію. У всій хроматографії використовувався ультрависокоефективний (UP)LC Waters Acquity та об’єм ін’єкції 5 мкл (зі зразками, відновленими у відповідних розчинниках для кожної платформи). Усю мас-спектрометрію проводили за допомогою високої роздільної здатності/точних мас-спектрометрів ThermoScientific Q-Exactive з джерелами електророзпилюваної іонізації з підігрівом (HESI-II) та мас-аналізаторів Orbitrap, що працювали з роздільною здатністю 35,000 мас з діапазоном сканування 70–1000 м/м. з. Власне програмне забезпечення Metabolon® використовувалося для зіставлення експериментальних зразків із довідковою бібліотекою стандартів ідентифікації рівня 1, як визначено Ініціативою стандартів метаболоміки, а площа під кривою використовувалася для кількісного визначення піку. Значення нормалізовано з точки зору підрахунку необробленої площі, і всі зразки проводилися в одній партії, тому корекція партії не потрібна. Невідомі сполуки не мають стандарту, а частково охарактеризовані молекули — це ті молекули, які не були офіційно підтверджені на основі стандарту або для яких стандарт недоступний, але Metabolon® достатньо впевнений у їх ідентичності.

4.4. Обробка даних

Необроблені дані були нормалізовані за осмоляльністю для кожного зразка, а дані для кожного метаболіту були відцентровані по медіані до 1 (необроблені дані, включаючи осмоляльність, доступні в додатковому файлі S1). Відсутні значення були приписані мінімальним значенням, за винятком препаратів, які були приписані як 0. Дані були перетворені в log10 за допомогою трансформації стабілізації дисперсії (MetaboanalystR) [65,66]. Спочатку було виміряно 1403 метаболіти. Метаболіти фільтрували відповідно до модифікованого правила 80 %: сполуку включали, якщо її було виявлено принаймні в 80 % зразків у групі ME/CFS або контрольній групі [27]. Загалом 1154 метаболіти відповідали критеріям і були включені в наступні аналізи. Єдиний аналіз, проведений без фільтрації, стосувався кореляції з метаболітами плазми. Співвідношення після тренування/базового рівня для кожного метаболіту розраховували в логарифміці з основою 10 як значення після тренування мінус базове значення для кожного суб’єкта. Для побудови графіка вулкана середні логарифмічні зміни (пацієнти з ME/CFS порівняно з контрольною групою) були перетворені в логарифм за основою 2 за допомогою формули зміни бази.

4.5. Аналіз даних і статистика

Однофакторний статистичний аналіз для кожного метаболіту проводили з використанням лінійної змішаної моделі з фіксованими ефектами статусу захворювання, моменту часу, віку та ІМТ і випадковим ефектом суб’єкта (найрозумніший [67] і середній [68] пакет R). Метод Бенджаміні-Хохберга (BH) використовувався для корекції частоти помилкових відкриттів, при цьому q < 0.1 використовувався як поріг значущості. Пакет EnhancedVolcano R використовувався для графіків вулканів [69].

ChemRICH в R використовувався для проведення аналізу шляхів, що не перекриваються, із підшляхами, визначеними Metabolon®, і порядком шляхів [29]. Веб-інструмент ChemRICH використовувався для виконання аналізу кластеризації хімічної подібності [30]. Для цього аналізу можна було включити лише сполуки, які мали відомий код SMILES, загалом 516 сполук. Для обох аналізів ChemRICH статистику збагачення проводили за допомогою тесту Колмогорова–Смирнова, який не використовує порогову значущість значення p, а швидше порівнює розподіл ймовірностей із розподілом ймовірностей нульової гіпотези [70]. Для підшляхів Metabolon® q < 0.05 було обрано як порогове значення значущості, а q < 0,15 було вибрано для хімічних кластерів (корекція BH FDR). Для обох, усі кластери нижче обраних порогів q також мали p < 0,05.

Збагачення шляху та аналіз топології проводили за допомогою веб-інструменту Metaboanalyst 5.0 [65] для еталонних метаболомів людини KEGG і SMPDB із вибраними такими параметрами: глобальний тест для статистичного тесту та відносна центральність між як міра важливості вузла. Сполуки були включені в цей аналіз, якщо ідентифікатор HMDB, наданий Metabolon®, збігався з ідентифікатором HMDB у Metaboanalyst. Для дублікатів сполук для одного ідентифікатора HMDB було включено лише перший. Це призвело до 453 включених сполук.

Кластеризацію суб’єктів із використанням чотирьох сполук, які значно відрізнялися між пацієнтами та контрольною групою після тренування, проводили за допомогою ієрархічної кластеризації з евклідовою відстанню як метрикою відстані та методом «Ward.D2» (пакет Heatmap R [71] ]).

Кореляції Пірсона між сечею та плазмою для 727 метаболітів, виміряних в обох біорідинах, проводили в R (пакет hmisc). p-значення були розраховані для кожної кореляції за допомогою t-критерію з нульовою гіпотезою про те, що коефіцієнт кореляції дорівнює 0, з подальшою корекцією BH FDR з q < 0.15 як порогом значущості. Для Фігури 8 сполуки перевіряли, щоб видалити ті, які мали крайні викиди, використовуючи модифікований метод z-показника, який обчислює z-показник, використовуючи медіану та середнє абсолютне відхилення (пакет викидів R, порогове значення z=6).

Якщо не зазначено інше, усі візуалізації даних було виконано за допомогою пакета ggplot2 R. Поправку BH FDR було обрано для всіх аналізів замість більш суворої поправки Бенджаміні та Єкутіелі FDR, оскільки виявилося, що надзвичайно мала кількість сполук є колінеарними (0). 75% цілей мали абсолютне значення коефіцієнт кореляції Пірсона > { {3}}.7).

5. Висновки

Загалом спостерігалися суттєві відмінності в метаболомі сечі у здорових сидячих контрольних пацієнтів та пацієнтів із ME/CFS у відповідь на виклик CPET у широкому діапазоні метаболічних супер- та субшляхів, що охоплюють амінокислоти, ліпіди, вуглеводи, нуклеотиди, ксенобіотики та невідомі. Ці шляхи беруть участь у багатьох фізіологічних функціях, включаючи, але не обмежуючись, енергетичний обмін. Це вказує на те, що пацієнти з ME/CFS мають загальну метаболічну дисрегуляцію, яка є частиною їх непереносимості фізичних вправ і PEM, у яких змінена метаболічна екскреція є фактором, що сприяє. Наші дані свідчать про те, що метаболізм осіб, які ведуть сидячий спосіб життя і не мають МЕ/СХУ, зазнає серйозних змін, які дозволяють їм відновитися після фізичного навантаження, у той час як пацієнти з МЕ/СХУ не можуть виробляти подібних адаптаційних реакцій. Майбутня робота включатиме розширення цього дослідження на набагато більшу когорту, яка включає обидві статі, щоб підтвердити ці результати, вивчити статеві відмінності в метаболомі сечі та дослідити, чи існують більш тонкі відмінності в сечових метаболітах у пацієнтів із МЕ/СХУ на початковому рівні, які потенційно можуть сприяти діагностиці захворювання в майбутньому.

Авторські внески:Концептуалізація, AG, KAG і MRH; методологія, AG, KAG, YVH та MRH; формальний аналіз, KAG, AG та YVH; розслідування, KAG, AG та YVH; написання — підготовка оригіналу, KAG, AG та MRH; написання—рецензування та редагування, усі автори; візуалізація, КАГ і АГ; адміністрування проекту, МРЗ; придбання фінансування, MRH Усі автори прочитали та погодилися з опублікованою версією рукопису.

Фінансування:Це дослідження було підтримано Національним інститутом неврологічних розладів та інсульту (NINDS), NIH (U54NS105541) і Фондом Амара. Національний центр розвитку трансляційних наук NIH надав фінансування Клінічному та трансляційному науковому центру Weill Cornell Medicine (CTSC) для підтримки бази даних REDCap через UL1 TR 002384.

Заява інституційної наглядової ради:Дослідження проводилося відповідно до вказівок Гельсінської декларації та схвалено Інституційною ревізійною радою коледжу Ітаки, Ітака, штат Нью-Йорк, США (протокол 1017-12Dx2), і інституційною ревізійною радою медичного коледжу Вейля Корнелла ( протокол 1708018518).

Заява про інформовану згоду:Інформована згода була отримана від усіх учасників дослідження.

Заява про доступність даних:Усі дані про метаболіти для кожного суб’єкта доступні в наданих файлах додаткових даних.

Подяки:Карл Франконі керував базою даних і біобанком Корнельського університету. Зразки крові були фракціоновані Девідом Вангом з EVMED Research за підтримки Workwell Foundation та Іваном Фальштином, Карлом Франконі, Людовіком Гілото, Медлін МакКенн, Джінітом Пателем, Адамом О'Нілом, Олександрою Мандарано, Джесікою Майєю, Шенноном Аппелквіст з Корнельського університету. Ми дякуємо наступним особам, які брали участь у скринінгу учасників, виконували тести з фізичними навантаженнями та/або збирали кров і сечу: Бетсі Келлер, Джон Чіа, Джаред Стівенс, Тіффані Онг і Марія Рассел.

Конфлікт інтересів:Автори заявляють про відсутність конфлікту інтересів. Спонсори не брали участі в розробці дослідження; у зборі, аналізі чи інтерпретації даних; у написанні рукопису; або в рішенні про публікацію результатів.

Список літератури

1. Джейсон, Луїзіана; Мірін, А. А. Оновлення показників поширеності ME/CFS Національної медичної академії та економічного впливу з урахуванням зростання населення та інфляції. Втома Біомед. Поведінка здоров'я. 2021, 9, 9–13. [CrossRef]

2. Вальдес, Арканзас; Хенкок, Е.Е.; Адебайо, С.; Кірніцкі, DJ; Проскауер, Д.; Attewell, JR; Бейтмен, Л.; ДеМарія, А., молодший; Лапп, CW; Роу, ПК; та ін. Оцінка поширеності, демографічних показників і вартості МЕ/СХУ з використанням даних великомасштабних медичних заяв і машинного навчання. Фронт. педіатр. 2018, 6, 412. [CrossRef] [PubMed]

3. Каррутерс, Б.М.; Джайн, Аляска; De Meirleir, KL; Петерсон, DL; Клімас Н.Г.; Лернер, А.М.; Бестед, AC; Флор-Генрі, П.; Джоші, П.; Powles, AP; та ін. Міалгічний енцефаломієліт/синдром хронічної втоми: клінічне визначення випадку, протоколи діагностики та лікування. J. Синдром хронічної втоми. 2003, 11, 7–115. [CrossRef]

4. Чу, Л.; Валенсія, IJ; Гарверт, Д.В.; Монтойя, Дж. Г. Деконструкція нездужання після фізичного навантаження при міалгічному енцефаломієліті/синдромі хронічної втоми: перехресне опитування, орієнтоване на пацієнта. PLoS ONE 2018, 13, e0197811. [CrossRef]

5. Штуссман, Б.; Вільямс, А.; Сніг, Дж.; Гевін, А.; Скотт, Р.; Нат, А.; Walitt, B. Характеристика нездужання після фізичного навантаження у пацієнтів із міалгічним енцефаломієлітом/синдромом хронічної втоми. Фронт. Нейрол. 2020, 11, 1025. [CrossRef]

6. Стівенс, С.; Снелл К.; Стівенс, Дж.; Келлер, Б.; ВанНесс, Дж. М. Серцево-легенева методика тесту на фізичне навантаження для оцінки непереносимості фізичного навантаження при міалгічному енцефаломієліті/синдромі хронічної втоми. Фронт. педіатр. 2018, 6, 242. [CrossRef]

7. Ваннесс, Дж.М.; Снелл, CR; Stevens, SR Зменшення серцево-легеневої ємності під час нездужання після навантаження. J. Синдром хронічної втоми. 2007, 14, 77–85. [CrossRef]

8. Келлер, Б.А.; Прайор, JL; Giloteaux, L. Нездатність пацієнтів з міалгічним енцефаломієлітом/синдромом хронічної втоми відтворити пік VO(2) свідчить про функціональне порушення. J. Перекл. Мед. 2014, 12, 104. [CrossRef]

9. Міссаілідіс, Д.; Annesley, SJ; Fisher, PR Патологічні механізми, що лежать в основі міалгічного енцефаломієліту/синдрому хронічної втоми. Діагностика 2019, 9, 80. [CrossRef]

10. Хут, Т.К.; Eaton-Fitch, N.; Стейнс, Д.; Маршалл-Градісник, С. Систематичний огляд метаболомічної дисрегуляції при синдромі хронічної втоми/міалгічному енцефаломієліті/захворюванні непереносимістю системного навантаження (CFS/ME/SEID). J. Перекл. Мед. 2020, 18, 198. [CrossRef]

11. Жермен А.; Барупал, Д.К.; Левін, С.М.; Hanson, MR Комплексна циркуляційна метаболоміка при ME/CFS виявляє порушення метаболізму ацилліпідів і стероїдів. Метаболіти 2020, 10, 34. [CrossRef]

12. Жермен А.; Рупперт, Д.; Левін, С.М.; Хансон, М. Р. Метаболічний профіль групи виявлення міалгічного енцефаломієліту/синдрому хронічної втоми виявляє порушення метаболізму жирних кислот і ліпідів. мол. Біосист. 2017, 13, 371–379. [CrossRef]

13. Жермен, А.; Рупперт, Д.; Левін, С.М.; Хансон, М. Р. Проспективні біомаркери метаболоміки плазми міалгічного енцефаломієліту/синдрому хронічної втоми вказують на окисно-відновний дисбаланс у симптоматиці захворювання. Метаболіти 2018, 8, 90. [CrossRef]

14. Ямано, Е.; Сугімото, М.; Хіраяма, А.; Куме, С.; Ямато, М.; Джин, Г.; Тадзіма, С.; Года, Н.; Івай, К.; Фукуда, С.; та ін. Індексні маркери синдрому хронічної втоми з дисфункцією ТЦА та циклів сечовини. Sci. Rep. 2016, 6, 34990. [CrossRef]

15. Армстронг, CW; МакГрегор, Н.Р.; Шіді, Дж. Р.; Баттфілд, І.; Приклад, HL; Gooley, PR ЯМР метаболічний профіль сироватки ідентифікує амінокислотні порушення при синдромі хронічної втоми. Clin. Чим. Acta 2012, 413, 1525–1531. [CrossRef]

16. Армстронг, CW; МакГрегор, Н.Р.; Льюїс, ДП; Приклад, HL; Gooley, PR Асоціація фекальної мікробіоти та метаболітів калу, сироватки крові та сечі при міалгічному енцефаломієліті/синдромі хронічної втоми. Metabolomics 2016, 13, 8. [CrossRef]

17. Хоел, Ф.; Хоел, А.; Петтерсен І.К.; Рекеланд, І.Г.; Риса, К.; Альме, К.; Сорланд, К.; Фосса, А.; Лієн, К.; Гердер, І.; та ін. Карта метаболічних фенотипів у пацієнтів із міалгічним енцефаломієлітом/синдромом хронічної втоми. JCI Insight 2021, 6, e149217. [CrossRef]

18. Надь-Сакаль, Д.; Барупал, Д.К.; Лі, Б.; Че, X.; Вільямс, Б. Л.; Кан, EJR; Ukaigwe, JE; Бейтмен, Л.; Клімас Н.Г.; Комарофф, А.Л.; та ін. Уявлення про фенотип міалгічного енцефаломієліту/синдрому хронічної втоми через комплексну метаболіку. Sci. Rep. 2018, 8, 10056. [CrossRef]

19. МакГрегор, Н.Р.; Армстронг, CW; Льюїс, ДП; Gooley, PR Постексерційне нездужання пов’язане з гіперметаболізмом, гіпоацетиляцією та дерегуляцією метаболізму пуринів у випадках ME/CFS. Діагностика 2019, 9, 70. [CrossRef]

20. Армстронг, CW; МакГрегор, Н.Р.; Льюїс, ДП; Приклад, HL; Gooley, PR Метаболічний профіль виявляє аномальний енергетичний метаболізм і шляхи окисного стресу у пацієнтів із синдромом хронічної втоми. Метаболоміка 2015, 11, 1626–1639. [CrossRef]

21. Флюдж, О.; Мелла, О.; Бруланд, О.; Риса, К.; Dyrstad, SE; Альме, К.; Рекеланд, І.Г.; Сапкота, Д.; Росланд Г.В.; Фосса, А.; та ін. Метаболічний профіль вказує на порушення функції піруватдегідрогенази при міалгічній енцефалопатії/синдромі хронічної втоми. JCI Insight 2016, 1, e89376. [CrossRef] [PubMed]

22. Навіо, РК; Naviaux, JC; Лі, К.; Яскравий, А.Т.; Аленік, штат Вашингтон; Ван, Л.; Бакстер, А.; Натан, Н.; Андерсон, В.; Гордон, Е. Метаболічні особливості синдрому хронічної втоми. Proc. Natl. акад. Sci. США 2016, 113, E5472–E5480. [CrossRef] [PubMed]

23. Джонс, М.Г.; Купер, Е.; Амджад, С.; Гудвін, CS; Баррон, JL; Chalmers, RA Органічні кислоти та амінокислоти в сечі та плазмі крові при синдромі хронічної втоми. Clin. Чим. Acta 2005, 361, 150–158. [CrossRef] [PubMed]

24. Ніблетт, Ш.; Кінг, К.Е.; Дунстан, RH; Кліфтон-Блай, П.; Хоскін, Л.А.; Робертс, TK; Фулчер, Греція; МакГрегор, Н.Р.; Дансмор, Дж. К.; Приклад, HL; та ін. Гематологічні та сечовидільні аномалії у пацієнтів із синдромом хронічної втоми. Exp. Biol. Мед. 2007, 232, 1041–1049. [CrossRef] [PubMed]

25. Жермен, А.; Giloteaux, L.; Мур, GE; Левін, С.М.; Чіа, JK; Келлер, Б.А.; Стівенс, Дж.; Франконі, CJ; Мао, X.; Shungu, DC; та ін. Метаболоміка плазми показує порушення реакції та відновлення після максимального фізичного навантаження при міалгічному енцефаломієліті/синдромі хронічної втоми. JCI Insight 2022, 7, e157621. [CrossRef]

26. Белл, Д. С. Посібник для лікаря щодо синдрому хронічної втоми. Розуміння, лікування та життя з CFIDS; Addison-Wesley Publishing Company: Редінг, Массачусетс, США, 1994.

27. Ян, Дж.; Чжао, X.; Лу, X.; Лін, X.; Сюй, Г. Стратегія попередньої обробки даних для метаболоміки для зменшення ефекту маскування в аналізі даних. Фронт. мол. Biosci. 2015, 2, 4. [CrossRef]

28. Бенджаміні, Ю.; Hochberg, Y. Контроль рівня помилкових відкриттів: практичний і потужний підхід до багаторазового тестування. JR Stat. Соц. Сер. B 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

29. Барупал Д.К.; Фан, С.; Фіен, О. Інтеграція підходів біоінформатики для комплексної інтерпретації наборів метаболомічних даних. Curr. Опін. Біотехнологія. 2018, 54, 1–9. [CrossRef]

30. Барупал Д.К.; Fiehn, O. Chemical Similarity Enrichment Analysis (ChemRICH) як альтернатива картографуванню біохімічних шляхів для метаболомічних наборів даних. Sci. Rep. 2017, 7, 14567. [CrossRef]

31. Goeman, JJ; ван де Гір, SA; де Корт, Ф.; van Houwelingen, HC Глобальний тест для груп генів: асоціація тестування з клінічним результатом. Біоінформатика 2004, 20, 93–99. [CrossRef]

32. Розато, А.; Тенорі, Л.; Касканте, М.; Де Атаурі Карулла, PR; Мартінс Дос Сантуш, VAP; Сакченті, Е. Від кореляції до причинно-наслідкового зв'язку: Аналіз даних метаболомії з використанням системної біології. Metabolomics 2018, 14, 37. [CrossRef]

33. Cardounel, AJ; Кюї, Х.; Самоуйлов А.; Джонсон, В.; Кернс, П.; Цай, А.Л.; Берка, В.; Zweier, JL Докази патофізіологічної ролі ендогенних метиларгінінів у регуляції вироблення ендотеліального NO та функції судин. J. Biol. Chem. 2007, 282, 879–887. [CrossRef]

34. Чандрасехаран, У.М.; Ван, З.; Ву, Ю.; Вілсон Танг, WH; Хейзен, С.Л.; Ван, С.; Elaine Husni, M. Підвищені рівні симетричного диметиларгініну в плазмі та підвищена активність аргінази як потенційні показники серцево-судинної патології при ревматоїдному артриті. Артрит Res. Тер. 2018, 20, 123. [CrossRef]

35. Сіроєн М.П.; Тірлінк, Т.; Nijveldt, RJ; Прінс, Г.А.; Річір, М.Ц.; van Leeuwen, PA Клінічне значення асиметричного диметиларгініну. Annu. Нутр. 2006, 26, 203–228. [CrossRef]

36. Бертінат, Р.; Вільялобос-Лабра, Р.; Хофман, Л.; Блауенштайнер, Дж.; Сепульведа, Н.; Westermeier, F. Зменшення виробництва NO в ендотеліальних клітинах, які зазнали впливу плазми пацієнтів з ME/CFS. Vasc. Pharmacol. 2022, 143, 106953. [CrossRef]

37. Броснан, Дж. Т.; Brosnan, ME Сірковмісні амінокислоти: огляд. J. Nutr. 2006, 136, 1636S–1640S. [CrossRef]

38. Фернандес-Гарсія, Дж. К.; Мартінес-Санчес, Массачусетс; Берналь-Лопес, MR; Муньос-Гарач, А.; Мартінес-Гонсалес, MA; Фіто, М.; Салас-Сальвадо, Дж.; Тінахонес, Ф. Дж.; Рамос-Моліна, Б. Вплив програми зміни способу життя з середземноморською дієтою з обмеженим споживанням енергії та фізичними вправами на метаболом поліаміну в сироватці крові в осіб з високим ризиком серцево-судинних захворювань: рандомізоване клінічне дослідження. Am. Дж. Клін. Nutr. 2020, 111, 975–982. [CrossRef]

39. Ван, В.; Чжан, Х.; Сюе, Г.; Чжан, Л.; Чжан, В.; Ван, Л.; Лу, Ф.; Лі, Х.; Бай, С.; Лін, Ю.; та ін. Тренування фізичними вправами зберігає ішемічне прекондиціонування в серцях старих щурів шляхом відновлення поліамінового пулу міокарда. Оксид. Мед. Стільниковий. Лонгєв. 2014, 2014, 457429. [CrossRef]

40. Бломстранд, Е.; Еліассон, Дж.; Карлссон, HK; Kohnke, R. Амінокислоти з розгалуженим ланцюгом активують ключові ферменти в синтезі білка після фізичних вправ. J. Nutr. 2006, 136, 269S–273S. [CrossRef]

41. Ньюсхолм, П.; Стенсон, Л.; Сульвуччі, М.; Сумаяо, Р.; Краузе, М. 1.02-Метаболізм амінокислот. У комплексній біотехнології, 2-е вид.; Moo-Young, M., Ed.; Academic Press: Burlington, ON, Canada, 2011; С. 3–14. [CrossRef]

42. Лі, С.; Гао, Д.; Jiang, Y. Функція, виявлення та зміна метаболізму ацилкарнітину при гепатоцелюлярній карциномі. Метаболіти 2019, 9, 36. [CrossRef]

43. Браун, Т. П.; Маркс Д. Л. Регуляція м'язової маси ендогенними глюкокортикоїдами. Фронт. фізіол. 2015, 6, 12. [CrossRef] [PubMed]

44. Фурман Б. Л. Мінералокортикоїди. У xPharm: The Comprehensive Pharmacology Reference; Enna, SJ, Bylund, DB, Eds.; Elsevier: Нью-Йорк, Нью-Йорк, США, 2007; стор. 1. [CrossRef]

45. Кав'яні, Б.; Lidbury, BA; Шльофель, Р.; Фішер, PR; Міссаілідіс, Д.; Annesley, SJ; Дехагі, М.; Хенг, Б.; Гіллемін, Дж. Дж. Чи може кінуреніновий шлях бути ключовою відсутньою частиною складної головоломки міалгічного енцефаломієліту/синдрому хронічної втоми (ME/CFS)? Стільниковий. мол. Life Sci. 2022, 79, 412. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Коссман Д. А.; Вільямс, Н.І.; Домчек С.М.; Курцер М.С.; Стопфер, JE; Schmitz, KH Фізичні вправи знижують рівень естрогену та прогестерону у жінок у пременопаузі з високим ризиком раку молочної залози. J. Appl. фізіол. 2011, 111, 1687–1693. [CrossRef] [PubMed]

47. Де Соуза, MJ; Ван Хіст, Дж.; Демерс, Л.М.; Lasley, BL Дефіцит лютеїнової фази у рекреаційних бігунів: докази гіпометаболічного стану. Дж. Клін. ендокринол. Метаб. 2003, 88, 337–346. [CrossRef]

48. Мукерджі, К.; Еджетт, Б.А.; Берроуз, HW; Кастро, К.; Гріффін, JL; Швертані, А.Г.; Gurd, BJ; Фанк, CD. Транскриптоміка цільної крові та метаболоміка сечі для визначення адаптивних біохімічних шляхів високоінтенсивних вправ у 50–60--річних спортсменів-майстрів. PLoS ONE 2014, 9, e92031. [CrossRef]

49. Шраннер, Д.; Кастенмюллер, Г.; Шонфельдер, М.; Роміш-Маргл, В.; Wackerhage, H. Зміни концентрації метаболітів у людей після фізичних вправ: систематичний огляд досліджень метаболомії фізичних вправ. Спорт Мед. Відкрито 2020, 6, 11. [CrossRef]

50. Кістнер, С.; Рист, М.Й.; Дорінг, М.; Дорр, К.; Нойман, Р.; Хартел, С.; Буб, А. Підхід на основі ЯМР для ідентифікації метаболітів сечі, пов’язаних із сильними фізичними вправами та кардіореспіраторною придатністю у здорових людей – результати дослідження KarMeN. Метаболіти 2020, 10, 212. [CrossRef]

51. Курацуне Х.; Ямагуті, К.; Такахаші, М.; Місакі, Х.; Тагава, С.; Кітані, Т. Дефіцит ацилкарнітину при синдромі хронічної втоми. Clin. Інфікувати. дис. 1994, 18 (Додаток 1), S62–S67. [CrossRef]

52. Джонс, М.Г.; Гудвін, CS; Амджад, С.; Chalmers, RA Плазмовий і сечовий карнітин і ацилкарнітини при синдромі хронічної втоми. Clin. Чим. Acta 2005, 360, 173–177. [CrossRef]

53. Чжан, Дж.; Світло, АР; Hoppel, CL; Кемпбелл, К.; Чандлер, CJ; Бернетт, ді-джей; Соуза, ЄС; Касазза, Джорджія; Hughen, RW; Кейм, Нідерланди; та ін. Ацилкарнітини як маркери пов’язаного з фізичними вправами розподілу палива, ксенометаболізму та потенційних сигналів до аферентних нейронів м’язів. Exp. фізіол. 2017, 102, 48–69. [CrossRef]

54. Коста, CG; Guerand, WS; Струйс Е.А.; Гольверда, У.; десять Brink, HJ; Таварес де Алмейда, І.; Дюран, М.; Jakobs, C. Кількісний аналіз ацилгліцинів сечі для діагностики дефектів бета-окислення за допомогою GC-NCI-MS. J. Pharm. Біомед. анальний 2000, 21, 1215–1224. [CrossRef]

55. Майя, Дж.; Ледді, С.М.; Gottschalk, CG; Петерсон, DL; Хансон, М.Р. Змінене окислення жирних кислот у популяціях лімфоцитів при міалгічному енцефаломієліті/синдромі хронічної втоми. Міжн. J. Mol. Sci. 2023, 24, 2010. [CrossRef]

56. Вілкінсон, DJ; Смітон, Нью-Джерсі; Watt, PW Метаболізм аміаку, мозок і втома; повторний перегляд посилання. Прог. нейробіол. 2010, 91, 200–219. [CrossRef]

57. Чень, С.; Мінегіші, Ю.; Хасумура, Т.; Shimotoyodome, A.; Ota, N. Участь метаболізму аміаку в покращенні продуктивності витривалості катехінами чаю у мишей. Sci. Rep. 2020, 10, 6065. [CrossRef]

58. Павло Б. Д.; Сбодьо, JI; Снайдер, Ш. Метаболізм цистеїну в окисно-відновному гомеостазі нейронів. Trends Pharmacol. Sci. 2018, 39, 513–524. [CrossRef]

59. Нкіліза, А.; Парки, М.; Cseresznye, A.; Оберлін, С.; Еванс, JE; Дарсі, Т.; Енлл, К.; Нієдоспіал, Д.; Муллан, М.; Кроуфорд, Ф.; та ін. Статево-специфічні ліпідні профілі плазми пацієнтів із ME/CFS та їх зв’язок із болем, втомою та когнітивними симптомами. J. Перекл. Мед. 2021, 19, 370. [CrossRef]

60. О'Ніл, AJ; Скло, К.А.; Еміг, CJ; Вітуг А.А.; Генрі, SJ; Shungu, DC; Мао, X.; Левін, С.М.; Хансон, М. Р. Дослідження рівнів антипатогенних антитіл при міалгічному енцефаломієліті/синдромі хронічної втоми. Протеоми 2022, 10, 21. [CrossRef]

61. Аналіз нездужання після фізичного навантаження за допомогою дводенного CPET у людей з ME/CFS.

62. Варе, Дж. Е., молодший; Sherbourne, CD The MOS 36-коротка форма огляду здоров’я (SF-36). I. Концептуальна основа та вибір предмета. Мед. Догляд 1992, 30, 473–483. [CrossRef]

63. Смець Є.М.; Гарссен, Б.; Бонке, Б.; De Haes, JC Психометричні якості багатовимірного інвентарю втоми (MFI) інструменту для оцінки втоми. Ж. Психосома. рез. 1995, 39, 315–325. [CrossRef]

64. Форд, Л.; Кеннеді, AD; Гудмен К.Д.; Pappan, KL; Еванс, AM; Міллер Л.А.Д.; Вульф, JE; Віггс, BR; Леннон, Дж. Дж.; Елсі, С.; та ін. Точність платформи клінічного метаболомічного профілювання для використання в ідентифікації вроджених помилок метаболізму. J. Appl. Лабораторія. Мед. 2020, 5, 342–356. [CrossRef]

65. Панг, З.; Чонг, Дж.; Чжоу, Г.; de Lima Morais, DA; Чанг, Л.; Баретт, М.; Готьє К.; Жак, PE; Лі, С.; Ся, Дж. MetaboAnalyst 5.0: Звуження розриву між необробленими спектрами та функціональними уявленнями. Nucleic Acids Res. 2021, 49, W388–W396. [CrossRef] [PubMed]

66. Дурбін, Б.П.; Хардін, Дж.С.; Хокінс, Д.М.; Рок, Д. М. Трансформація стабілізації дисперсії для даних мікрочіпів експресії генів. Біоінформатика 2002, 18 (Додаток 1), S105–S110. [CrossRef] [PubMed]

67. Кузнецова А.; Brockhoff, PB; Крістенсен, RHB Пакет lmerTest: Тести в лінійних моделях зі змішаними ефектами. J. Stat. програмне забезпечення 2017, 82, 1–26. [CrossRef]

68. Лент, Р. Еммеанс: Оцінене граничне середнє, воно ж середнє найменших квадратів, 1.8.2; Пакет R. 2022 рік.

69. Блай, К.; Рана, С.; Льюїс, М. Розширений вулкан: готові до публікації графіки вулканів із покращеним забарвленням і маркуванням, версія 1.16.0; Пакет R. 2022 рік.

70. Смирнов Н.В. Про оцінку розбіжності емпіричних кривих розподілу для двох незалежних вибірок. Бик. математика ун-т. М. 1939, 2, 3–14.

71. Kolde, R. Pheatmap: Pretty Heatmaps, 1.0.12; Пакет R. 2019 рік.

Відмова від відповідальності/Примітка видавця:Твердження, думки та дані, що містяться в усіх публікаціях, належать виключно окремим авторам (авторам) і авторам (учасникам), а не MDPI та/або редакторам (редакторам). MDPI та/або редактор(и) відмовляються від відповідальності за будь-яку шкоду людям або майну, спричинену будь-якими ідеями, методами, інструкціями чи продуктами, згаданими у вмісті.

【Контакт】Електронна адреса: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501