Шкіра відіграє важливу роль у зміні температури тіла, сприйнятті болю та тиску

Будь ласка зв'яжітьсяoscar.xiao@wecistanche.comдля отримання додаткової інформації

АНОТАЦІЯ

фон:Зелені зерна кави арабіка L. Родина: Rubiaceae є багатим джерелом поліфенолів, які запобігають окислювальному пошкодженню шкіри. У цьому дослідженні ліпосоми були розроблені як носії ліків для підвищення проникності шкіри поліфенолів для місцевого застосування. Матеріали та методи. Екстракти зелених кавових зерен готували шляхом зміни співвідношення метанолу та води. Фітохімічний аналіз і оцінка антиоксидантів in vitro були проведені для всіх екстрактів, щоб вибрати найкращий екстракт для подальших досліджень. Потенціал цитотоксичності (аналіз МТТ) і антиеластазну активність вибраного екстракту оцінювали на клітинних лініях L929 за допомогою проточного цитометра. Ліпосоми екстракту були отримані методом гідратації тонкої плівки та оптимізовані шляхом зміни співвідношення фосфатидилхоліну до холестерину та поступового збільшення кількості екстракту. Ліпосомну композицію перетворювали на гель, використовуючи карбопол"974P як гелеутворювач. Приготовану ліпосомну суспензію та ліпосомальний гель оцінювали на різні параметри композиції. Результати: результати фітохімічного аналізу, аналізів антиоксидантів in vitro та оцінки in vitro на Клітинні лінії L929 дійшли висновку, що 25-відсотковий метанольний екстракт був нетоксичним із найвищим вмістом фенолу та демонстрував хорошу антиеластазну активність. Ефективність інкапсуляції хлорогенової кислоти в оптимізованому ліпосомальному складі становила 75 відсотків. Ліпосомальний гель демонстрував уповільнене вивільнення препарату протягом 12 год порівняно з 6-7 год звичайної формули Висновок: розроблений гель на основі ліпосом, наповнений екстрактом зелених кавових зерен, може служити потенційним носієм ефектів проти старіння.

Ключові слова:Зелені кавові зерна (GCB), хлорогенова кислота, екстракт, ліпосоми, антиоксидант, антистаріння.

ВСТУП

Шкіра відіграє важливу роль у зміні температури тіла, сприйнятті болю та тиску, а також діє як важливий бар’єр проти забруднення навколишнього середовища, що робить старіння шкіри дуже очевидним.1 Тривалий вплив на шкіру ультрафіолетового випромінювання виробляє вільні радикали, які викликають окислювальний стрес на шкіру. шкіри, що призводить до розвитку фотостаріння, сонячних опіків, меланогенезу, імуносупресії та фотоканцерогенезу.² Вільні радикали — це надзвичайно реактивні молекули кисню, які беруть участь у формуванні перехресних зв’язків із молекулами колагену, що призводить до втрати еластичності шкіри.3 Старіння проявляється в’ялістю, витончення, сухість і плями на шкірі. Таким чином, при бажанні виглядати молодо, антивікові засоби користуються великим попитом. Антиоксиданти рослинного походження набули значення в косметичній промисловості. Антиоксиданти допомагають у відновленні та запобіганні окисного пошкодження, викликаного вільними радикалами. Антиоксидантна активність трав здебільшого зумовлена ​​окислювально-відновними властивостями фенольних сполук. Таким чином, антиоксиданти вважаються перспективними для уповільнення ознак старіння, таких як зморшки, пігментні плями та тонкі лінії.

Зерна зеленої кави (Coffea arabica L, Rubiaceae) є багатим джерелом поліфенолів, таких як хлорогенова кислота та її споріднених сполук, таких як кавова кислота, кумарова кислота та ферулова кислота, які запобігають окислювальному пошкодженню шкіри. Дослідження показали, що екстракти C. arabica мають антибактеріальну,5 противірусну,6 протизапальну дію,7 загоюють рани на шкірі та зменшують окисне пошкодження макромолекул? і супресивна активність експресії металопротеїнази.10

Хлорогенова кислота, основна поліфенольна сполука зелених кавових зерен, має антиоксидантні та депігментаційні властивості, а також перешкоджає пошкодженню шкіри, викликаному УФ-випромінюванням. I2 Згідно з науковими дослідженнями, зелені кавові зерна містять більшу кількість хлорогенової кислоти, ніж смажені кавові зерна та інші рослини. "3

Натисніть тут, щоб дізнатися більше

Доставка поліфенолів через шкіру неефективна через їх обмежене проникнення. Таким чином, необхідна основа рецептури або підсилювачі проникнення, які підвищують її проникнення". Тому ліпосоми були обрані як носії ліків, оскільки вони є амфіфільними за своєю природою, а гідрофільні молекули можуть легко вбудовуватися в концентричні подвійні шари. Ліпосоми, фізіологічно подібні до клітинної мембрани, не є Наявність фосфоліпідів у ліпосомах покращує місцеве всмоктування препарату з епідермісу в нижні шари за рахунок посилення адгезії фосфоліпідного комплексу препарату на шкірі.»5 Метою цього дослідження є розробка гель, що містить ліпосоми, наповнені екстрактом зелених кавових зерен, який буде використовуватися як антиоксидантна косметична композиція для запобігання старінню.

МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ Матеріали

Зерна зеленої кави арабіка L були отримані на місцевому ринку Мумбаї в серпні 2019 року та підтверджені доктором Харшадом М. Пандітом. Колишній керівник і доцент кафедри ботаніки коледжу Гуру Нанака Халса, Мумбаї, Індія. Фосфатидилхолін був придбаний у HiMedia Laboratories Pvt Ltd, холестерин 99 відсотків був придбаний у Loba Chemie Pvt Ltd, 2,2-дифеніл-1-пікрилгідразил (DPPH), а хлорогенова кислота була придбана в Otto Chemie Pvt Ltd, Мумбаї . Галлова кислота та аскорбінова кислота були закуплені у SD Fine Chemicals Ltd, Мумбаї. Усі хімічні речовини, використані в цьому дослідженні, були класу AR. Ліпосоми виготовляли за допомогою ротаційного випарника Rotaeva, Equitron, а для оцінки ліпосом використовували УФ-видимий спектрофотометр Shimadzu 1800.

Cistanche може омолоджувати старіння

методи

Методологія вилучення

Порошкоподібні зелені кавові зерна знежирювали за допомогою петролейного ефіру 40-60 ступеня (1:6% мас./об.) протягом 3 годин в апараті Сокслета. Знежирений порошок зеленої кави екстрагували різними розчинниками, такими як вода, 25% метанол, 50% метанол, 75% метанол і 100% метанол протягом 2 годин за допомогою системи Сокслета. Отримані екстракти концентрували в порцеляновому посуді на електричній водяній бані при 80 градусах для видалення розчинника. Приготовані екстракти використовували для якісного та кількісного аналізу.

Загальний вміст фенолів

Загальний вміст фенолів визначали методом реактиву Фоліна-Чокальтеу за стандартною методикою. Галову кислоту використовували як стандарт, а загальний вміст поліфенолів виражали в мг/г еквівалента галової кислоти (GAE) за калібрувальною кривою галової кислоти.16

Спектральне накладання

Для визначення наявності хлорогенової кислоти в екстракті використовували УФ-спектрометричний метод. Для приготування стандартних розчинів 1 мг/мл стандартної хлорогенової кислоти розчиняли у фосфатному буфері та готували подальше розведення для отримання 10 мкг/мл стандартного розчину. Для розчину зразка 25 відсотків 1 мг/мл метанольного екстракту розчиняли у фосфатному буфері та готували подальше розведення для отримання 10 мкг/мл стандартного розчину. Спектр накладення обох розчинів був отриманий за допомогою спектрофотометрії UV-Vis.

Кількісне визначення хлорогенової кислоти в кожному екстракті Приготування стандартного розчину

Стандартну хлорогенову кислоту розчиняли в таких розчинниках, як вода, 25% метанол, 50% метанол, 75% метанол і 100% метанол. Щоб зменшити похибку в процедурі приготування, розчин хлорогенової кислоти 10 ppm готували в кожному вищезазначеному розчиннику, а потім готували відповідне розведення в діапазоні концентрацій від 2 до 10 ppm. Графік лінійності був зроблений шляхом запису абсорбції при 324 нм за допомогою спектрофотометра UV-Vis.

Приготування розчину зразка

Для приготування розчину зразка екстракти розчиняли у відповідних розчинниках і готували розчин 10 ppm. Оптичну густину розчину зразка реєстрували при 324 нм за допомогою спектрофотометра UV-Vis. Отриману абсорбцію екстраполювали на графік лінійності, щоб знайти концентрацію хлорогенової кислоти в кожному екстракті.

Визначення антиоксидантної активності

PDF (2,2-дифеніл -1-пікрилгідразил) антиоксидантний аналіз. Активність екстрактів, що поглинають радикали DPPH, досліджували наступним стандартним методом. В якості стандарту використовували аскорбінову кислоту. Експеримент проводили в трьох повторах. Відсоток активності поглинання радикалів DPPH наносили на графік залежно від концентрації кожного екстракту та визначали IC.

Активність поглинання радикалів оксиду азоту досліджували за допомогою реакції Грісса Іллосвой.втрачена імперія cistanchel8 Аскорбінову кислоту використовували як стандарт. Експеримент проводили в трьох повторах. Відсоток активності поглинання радикалів оксиду азоту був нанесений на графік залежно від концентрації кожного екстракту, а відсоток інгібування IC для обох досліджень антиоксидантів розраховувався за наведеною нижче формулою. Активність поглинання виражалася як відсоток інгібування, розрахований за такою формулою:

Визначення життєздатності клітин методом MTT. Екстракт зелених кавових зерен, тобто 25-відсотковий метанольний екстракт, перевіряли на цитотоксичність клітинних ліній L929. 200 мкл клітинної суспензії висівали в 96-планшет з лунками з щільність клітин (20,000 клітин на лунку), без досліджуваного агента. Клітини залишали рости протягом приблизно 24 годин. Додавали відповідну концентрацію досліджуваного агента (25 відсотків метанольного екстракту), планшет інкубували протягом 24 годин при 37 градусах в атмосфері 5 відсотків CO, і відпрацьоване середовище видаляли. Реагент МТТ додавали до кінцевої концентрації (0,5 мг/мл) від загального об’єму та планшети інкубували 2-3 год у темних умовах. Після видалення реагенту MIT додавали 100 мкл ДМСО та обережно струшували. Поглинання вимірювали при 570 нм і 630 нм за допомогою спектрофотометра на рідері ELISA. Значення IC.o визначали за допомогою рівняння лінійної регресії. Формули, використані для дослідження:

Визначення антиеластазної активності

Клітини культивували при щільності 3×105 клітин/2 мл та інкубували в CO, інкубаторі протягом 24 годин при 37 градусах. 1 Для дослідження антиеластази клітини, оброблені 250мкМ епігалокатехінгалату (EGCG), використовували як позитивний контроль, клітини, оброблені 200мкг/мл 25 відсотків метанольного екстракту використовували як тестовий зразок (Таблиця 6), а клітини лише з культуральним середовищем використовували як негативний контроль і інкубували в 2 мл культурального середовища протягом 24 годин. Пробірки центрифугували протягом п'яти хвилин при 300xg при 25 градусах і клітини промивали PBS. 0,5 мл розчину BD Cytofix/Cytoperm було додано після видалення PBS, і пробірки залишали в стані спокою протягом 10 хв. SEd 20 мкл мишачої анти-нейтрофільної еластази/ELA2 Alexa Fluor® 647-кон’югованого моноклонального антитіла додавали, змішували та інкубували протягом 30 хвилин при кімнатній температурі в темряві. Клітини обробляли 0,1% азидом натрію і 0,5 мл PBS і аналізували за допомогою проточної цитометрії зі збудженням і випромінюванням 650 нм і 668 нм відповідно. У цьому дослідженні досліджувані сполуки, а саме екстракт зелених кавових зерен (25 відсотків метанольного екстракту) і стандартний епігалокатехінгалат (EGCG), використовувалися для оцінки їх впливу на експресію ELA-2 (кон’югованого мишачого антитіла проти еластази людини) у клітині L929 лінії.

Приготування екстракту зелених кавових зерен, завантажених ліпосомами

Метод гідратації тонкої плівки, як описано Bangham et al.1, використовувався для складання ліпосом. Суміш ліпідів готували шляхом розчинення фосфатидилхоліну та холестерину в хлороформі та метанолі (2:1) у круглодонній колбі (RBF) і додавали скляні кульки для утворення однорідної плівки. RBF був приєднаний до роторного випарника з миттєвим випаровуванням (Roteva, рівняння) і дозволений обертатися зі швидкістю 80 об/хв у термостатованій водяній бані при 40 градусах. Органічні розчинники видаляли шляхом повільного застосування вакууму, що призвело до утворення 100% однорідної ліпідної плівки на стінках колби. Плівці давали висохнути для LH для повного видалення органічних розчинників. Висушену ліпідну плівку гідратували фосфатним буфером (pH: 5,4), що містить розчинений екстракт (25 відсотків метанольного екстракту), а потім RBF обертали зі швидкістю 150 об/хв у термостатованій водяній бані, підтримуваної при 46 градусах, що вище температури переходу ліпідів. Обертання продовжували протягом 60 хв до отримання однорідної суспензії. Ліпосоми, отримані за допомогою цього методу, великі та неоднорідні за розміром, тому для зменшення розміру ліпосом використовувався метод ультразвукової обробки протягом 30 хвилин. Ліпосомну суспензію на основі екстракту зелених кавових зерен залишали на 2 години при кімнатній температурі для забезпечення повної гідратації. Суспензію ліпосом зберігали в скляній пляшці бурштинового кольору в холодильнику до подальшого використання.

Характеристика ліпосом

Нижче наведені параметри, за якими характеризували отримані ліпосоми

Визначення ефективності інкапсуляції Спектрофотометр UV-Vis використовувався для оцінки ефективності інкапсуляції хлорогенової кислоти в ліпосомах, завантажених екстрактом зелених кавових зерен. Поглинання хлорогенової кислоти, що залишилася в супернатанті після центрифугування, вимірювали при 324 нм за допомогою спектрофотометра UV-Vis.мікронізована очищена флавоноїдна фракція 1000 мг використовуєПотім концентрацію розраховували за калібрувальним графіком, отриманим для стандартної хлорогенової кислоти.

Загальна кількість препарату додається до оптичної мікроскопії

Краплю ліпосомної суспензії поміщали на чисте предметне скло і спостерігали під оптичним мікроскопом (мікроскоп Motic) 45X і 100X. Визначення розміру везикул, індексу полідисперсності (PDI) і дзета-потенціалу

Розмір везикул та індекс полідисперсності аналізували за допомогою приладу динамічного розсіювання світла з комп’ютеризованою системою контролю (аналізатор розміру частинок Malvern). Свіжоприготовані партії ліпосом розбавляли деіонізованою водою у співвідношенні 1:100. Усі вимірювання проводили в трьох повторах при 25±0,5 градуса. Ліпосомну суспензію розбавляли деіонізованою водою та визначали дзета-потенціал за допомогою Malvern Zetasizer.

Просвічуюча електронна мікроскопія (TEM) Просвічуюча електронна мікроскопія (TEM) проводилася для оптимізованої суспензії з лікарським засобом за допомогою просвічуючої електронної мікроскопії (Tecnai T20, 200Kev, FEI). Краплю суспензії поміщали за допомогою мікропіпетки на сітку. Сітку добре просушили. Висушену сітку, що містить зразок, бомбардували електронами, прискореними при 200 ВК. Потім розмір везикул і морфологію ліпосом візуалізували за допомогою ТЕМ у вакуумі (рис. 1). Приготування ліпосомального гелю

Ліпосомальний гель, наповнений екстрактом зелених кавових зерен, готували з використанням основи гелю carbopol@974P. З точністю до 0.5 відсотків carbopol@974P було зважено та витримано протягом ночі для гідратації у двічі дистильованій воді, що містить консерванти. Ліпосомальні гранули, отримані після центрифугування, диспергували в дистильованій воді за допомогою обробки ультразвуком і додавали до гідратованого розчину карбополу при перемішуванні. Гелеутворення індукували нейтралізацією з використанням триетаноламіну (TEA). Гель оцінювали за кольором, текстурою (гладкість і жирність), рН, в’язкістю, вмістом лікарського засобу, здатністю до розподілу, а також проводили дослідження щодо вивільнення препарату.

Дослідження вивільнення ліків in vitro

Для оцінки in vitro діалізної мембрани, що вивільняє ліки, використовувався апарат дифузії клітин Франца, що має ємність рецепторного відділення 22 мл і площу поверхні 3,91 см2 (відсікання молекулярної маси 12, 000-14, 000), яка попередньо гідратовані замочуванням у буфері протягом ночі встановлювали на клітини. Фосфатний буфер рН 5,4 (37° ±0.5°) використовували як рецепторну рідину. Резервуарний розчин перемішували зі швидкістю 100 об/хв за допомогою магнітної кульки. У донорський відсік на мембрані поміщали 0,5 г гелю. Аліквоти збирали з інтервалами 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12 та 24 години та аналізували спектрофотометром UV-Vis при 324 нм.20

РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ Методика вилучення

Відсоток виходу екстрактів зерен зеленої кави арабіки L. представлено в таблиці 3. Фізичний вигляд усіх екстрактів був темно-жовтим і темно-коричневим. 25% метанольного екстракту продемонстрували найвищий відсоток виходу 26,54±0.13 порівняно з усіма іншими екстрактами.

Загальний вміст фенолів

Для оцінки загального фенольного вмісту всіх екстрактів використовували метод Фоліна-Чокальтеу. TPC усіх екстрактів виражається в еквіваленті галової кислоти (рівняння стандартної кривої: y= 0.0031 плюс 0,3477,r2=0.9953), зазначено в таблиці 1. Серед усіх екстрактів основний фенольний вміст оцінюється в 25 відсотках метанольного екстракту. Кількісне визначення хлорогенової кислоти в кожному екстракті за допомогою спектрального накладення Кількість вмісту хлорогенової кислоти в кожному екстракті зазначено в таблиці 3 і на малюнку 2.отефлавоноїдЗгідно з результатами, найбільша кількість хлорогенової кислоти виявилася в 25 відсотках метанольного екстракту.

На основі результатів, отриманих за загальним вмістом фенолу, кількісного визначення хлорогенової кислоти та аналізу антиоксидантів, було встановлено, що 25-відсотковий метанольний екстракт містить найвищий вміст фенолу, більшу кількість хлорогенової кислоти та максимальну активність поглинання радикалів порівняно з іншими екстрактами.

Визначення життєздатності клітин методом МТТ. Тест на життєздатність – це аналіз, який визначає здатність тканин, клітин або органів підтримувати або відновлювати стан виживання. Дослідження цитотоксичності досліджуваної сполуки, екстракту зелених кавових зерен проти клітинних ліній L929 у статистичних даних дослідження клітинної цитотоксичності за допомогою ELISA-рідера, показало, що екстракт зелених кавових зерен демонструє помірні потенційні цитотоксичні властивості з інгібіторною концентрацією （IC） 306,38 мкг/мл порівняно зі стандартом препарат Камптотецин з 23 мкг/мл Таблиця 5. Спостереження переконливо свідчить про те, що екстракт зелених кавових зерен не має значного потенціалу цитотоксичності з концентрацією в діапазоні від 12.5-200 мкг/мл відповідно з інкубаційним періодом 24 години при 37 градусах (Графік 1).

Визначення антиеластазної активності

Фермент еластаза здатний розщеплювати еластин, нерозчинний еластичний волокнистий білок, який разом із колагеном сприяє механічній міцності сполучної тканини. Кілька досліджень показали, що як старіння шкіри, так і ефект проти зморшок значною мірою відповідають зниженій активності еластази. Таким чином, були проведені дослідження антиеластази, щоб підтвердити корисність екстракту зелених кавових зерен як засобу проти старіння. У цьому дослідженні досліджувану сполуку, а саме екстракт зелених кавових зерен і стандартний EGCG, використовували для оцінки їх впливу на експресію ELA-2 (кон’югованого мишачого антитіла проти еластази людини) у клітинній лінії L929. Концентрації сполук, використаних в експерименті, були такими:

Дана досліджувана сполука GC екстракт квасолі пригнічувала експресію ELA-2 у клітинній лінії L929. Відносні середні значення інтенсивності флуоресценції ELA-2 були майже однаково знижені в std, епігалокатехінгалаті та екстракті зелених кавових зерен тестової сполуки. (Таблиця 7; Рисунок 3 та Гістограма 1). Отже, GC bean можна вважати хорошим антиеластазним засобом. Приготування екстракту зелених кавових зерен, завантажених ліпосомами

У цьому дослідженні метод гідратації тонкої плівки використовувався для складання ліпосом.пуританський вітамін сПричина вибору цього

цей метод є найпростішим способом отримання багатошарових везикул і здатний завантажувати більшу масу гідрофільних молекул, таких як хлорогенова кислота, порівняно з одношаровими везикулами. Було виявлено, що метод гідратації тонкою плівкою дає 75 відсотків ефективності інкапсуляції для хлорогенової кислоти, присутньої в екстракті Таблиця 2. Таким чином, цей метод використовувався для приготування ліпосом.

Характеристика ліпосом. Оптична мікроскопія

Чітко спостерігалася багатошарова везикула (рис. 4). Мікроскопічні спостереження використовували для оцінки форми та розміру везикул, відзначених для всіх підготовлених партій.

Визначення індексу полідисперсності (PDI), дзета-потенціалу та розміру везикул

PDI в основному відображається для розподілу розмірів везикул у даному зразку.систанчеЧислове значення PDI починається від {{0}}.0 (ідеально рівномірний розмір частинок) до 1,1 (високо полідисперсний розмір частинок). У разі систем носіїв на основі ліпідів, таких як ліпосоми та наноліпосоми розміром 0,3 і менше є прийнятними, оскільки це вказує на однорідну популяцію фосфоліпідних везикул.21 Дзета-потенціал є важливою технікою характеристики, яка використовується для розуміння фізичної стабільності частинок. Зазвичай вважається, що значення від -30 мВ до плюс 30 мВ має достатню силу відштовхування для досягнення кращої фізичної колоїдної стабільності.

Метод тонкоплівкової гідратації дає великі гетерогенні багатошарові везикули. Аналіз розміру отриманих ліпосом виявив середній z-розмір (d.nm) 864.2 нм, PDI 0.375 і дзета-потенціал -12.4 з хорошим ефективність захоплення.

Трансмісійна електронна мікроскопія (TEM) Морфологічний аналіз цих ліпосом за допомогою TEM показав ліпосоми сферичної форми. Приготування ліпосомального гелю

Ліпосомну дисперсію просто змішували з полімером для отримання відповідних гелів. Композиція ліпосомального гелю є перевагою, оскільки злиття везикул можна ефективно уникнути або звести до мінімуму, оскільки полімер служить спейсером між ліпосомами. Таким чином, розмір везикул не впливає, оскільки це контрольований процес взаємодії полімеру/ліпосоми. Композицію крему на основі ліпосом не було обрано, оскільки в продуктах на основі емульсій спостерігаються проблеми зі стабільністю через метод, оскільки це найпростіший метод приготування багатошарових везикул і здатний завантажувати більшу масу гідрофільних молекул, таких як хлорогенова кислота, порівняно з одношарові везикули. Було виявлено, що метод гідратації тонкою плівкою дає 75 відсотків ефективності інкапсуляції для хлорогенової кислоти, присутньої в екстракті Таблиця 2. Таким чином, цей метод використовувався для приготування ліпосом.

Характеристика ліпосом. Оптична мікроскопія

Чітко спостерігалася багатошарова везикула (рис. 4). Мікроскопічні спостереження використовували для оцінки форми та розміру везикул, відзначених для всіх підготовлених партій.

Визначення індексу полідисперсності (PDI), дзета-потенціалу та розміру везикул

PDI в основному відображається для розподілу розмірів везикул у даному зразку. Числове значення PDI починається від {{0}}.0 (ідеально рівномірний розмір частинок) до 1,1 (високо полідисперсний розмір частинок). У разі систем носіїв на основі ліпідів, таких як ліпосоми та наноліпосоми розміром 0,3 і менше є прийнятним, оскільки це вказує на однорідну популяцію фосфоліпідних везикул.21 Дзета-потенціал є важливою технікою характеристики, яка використовується для розуміння фізичної стабільності частинок. Зазвичай вважається, що значення від -30 мВ до плюс 30 мВ має достатню силу відштовхування для досягнення кращої фізичної колоїдної стабільності. 2

Метод тонкоплівкової гідратації дає великі гетерогенні багатошарові везикули. Аналіз розміру отриманих ліпосом виявив середній z-розмір (d.nm) 864.2 нм, PDI 0.375 і дзета-потенціал -12.4 з хорошим ефективність захоплення.

Трансмісійна електронна мікроскопія (TEM) Морфологічний аналіз цих ліпосом за допомогою TEM показав ліпосоми сферичної форми.

Приготування ліпосомального гелю

Ліпосомну дисперсію просто змішували з полімером для отримання відповідних гелів. Композиція ліпосомального гелю є перевагою, оскільки злиття везикул можна ефективно уникнути або звести до мінімуму, оскільки полімер служить спейсером між ліпосомами. Таким чином, розмір везикул не впливає, оскільки це контрольований процес взаємодії полімеру/ліпосоми. Композицію крему на основі ліпосом не було обрано, оскільки повідомлялося про проблеми зі стабільністю продуктів на основі емульсії через

наявність поверхнево-активної речовини та надлишку олії, яка може взаємодіяти з везикулами. Різні властивості, такі як в'язкість, можна легко контролювати, змінюючи концентрацію полімеру або змінюючи тип полімеру. Таким чином, були виготовлені ліпосомальні гелі, оскільки вони обходять проблему стабільності, забезпечують контрольоване вивільнення, прості у приготуванні та мають естетичну привабливість як косметика для догляду за шкірою.23 Готові ліпогелі були блідо-жовтого кольору та непрозорі. 0.5 масових відсотків carbopol@974P має хорошу консистенцію та гладкий вигляд без будь-яких агрегацій. Було встановлено, що вміст лікарського засобу для ліпосомального гелю становить 94,16±1,3 з в’язкістю гелю в діапазоні від 13 500 сП до 16 500 сП і здатністю до розтікання близько 7-8 г.см/с.

Профіль вивільнення препарату in vitro

Зовнішній шар шкіри - це роговий шар, який в основному складається з білка кератину та ліпідів. Міжклітинні ліпіди відіграють важливу роль у контролі черезшкірного всмоктування. Міжклітинні ліпіди можуть взаємодіяти з фосфоліпідами, присутніми в ліпосомах, і таким чином викликати набухання ліпідів, не змінюючи багатошарову структуру рогового шару. Ці набряклі ліпіди спричиняють накопичення препарату та утворення внутрішньошкірного депо. Хоча механізм місцевого застосування ліпосом не повністю зрозумілий, ліпідний склад, поверхневий заряд і ламелярність ліпосом перш за все відіграють важливу роль у розподілі ліків. Дослідження також показали, що на місцеву доставку також впливає розмір ліпосом.24 Вивільнення ліків in vitro здійснювалося за допомогою діалізної мембрани. Дослідження in vitro =вивільнення ліпосомального гелю показало ефект тривалого вивільнення до 12 годин порівняно з 7-8 годинами звичайного гелю (Графік 2).

ВИСНОВОК

Екстракти зерен зеленої кави арабіки перевіряли на загальний вміст фенолів, кількісне визначення хлорогенової кислоти та антиоксидантний аналіз. На основі результатів, отриманих у цих дослідженнях, для включення в ліпосоми було обрано 25 відсотків метанольного екстракту, оскільки він показав найвищий вміст фенолу, більшу кількість хлорогенової кислоти та кращу антиоксидантну активність. Перед введенням екстракту в ліпосоми його перевірили на МТТ і антиеластазний аналіз. Згідно з аналізом МТ, екстракт не мав потенціалу цитотоксичності для клітин, а згідно з аналізом на антиеластазу, екстракт мав антиеластазну активність. Таким чином, екстракт можна використовувати для створення ліпосом проти старіння. Багатошарові везикули готували методом гідратації тонких плівок. Приготовані ліпосоми мали хорошу ефективність інкапсуляції та кращу фізичну стабільність. Ліпосомальна суспензія на основі екстракту була складена в ліпосомальний гель. Відповідно до дослідження вивільнення ліків in vitro, ліпосомальний гель продемонстрував ефект пролонгованого вивільнення до 12 годин порівняно зі звичайним гелем. Таким чином, ліпосоми, наповнені екстрактом зелених кавових зерен, можна вважати ефективним носієм для місцевого застосування з потенціалом проти старіння.

ПОДЯКА

Автори вдячні Stellixir Biotechechnology, Бенгалуру та Карнатаці за їхню допомогу в проведенні аналізу МТТ і аналізу антиеластази, ми також дякуємо Sprint testing solutions, Мумбаї за ТЕМ-зображення та Фармацевтичний коледж доктора Бханубена Нанаваті нашого коледжу SVKM за надання найкращих умов для проведення цього дослідження.

КОНФЛІКТ ІНТЕРЕСІВ

Автори заявляють про відсутність конфлікту інтересів.

СКОРОЧЕННЯ:

TPC: Загальний вміст фенолів; DPPH:2,2-дифеніл -1-пікрилгідразил; GAE: еквівалент галової кислоти; GC: Зелена кава; GCB: Зелені кавові зерна; ELA-2 (кон’юговане мишаче антитіло проти еластази людини):нейтрофільна еластаза; EGCG: епігалокатехінгалат; PC: фосфатидилхолін; CH: холестерин; RBF: круглодонна колба; ТЕМ: трансмісійна електронна мікроскопія; MTT: 3-(4,5-діемтилтіазол-2-іл)-2,5-дифенілтетразолію бромід; PDI: індекс полідисперсності; IC": напівмаксимальна інгібуюча концентрація.

Ця стаття взята з Desai and Mallya.: Розробка ліпосомального гелю проти старіння, завантаженого екстрактом зелених кавових зерен