Різниця між хімічними компонентами та біологічною активністю скибочок сирих продуктів і продукту, обробленого парою з вина Cistanche Deserticola

1. Введення

Cistanche deserticolaє загальноприйнятою традиційною китайською медициною і зазвичай використовується як тонізуючий засіб у Китаї та Японії протягом багатьох років, широко відомий як «женьшень пустелі».Cistanche deserticolaвперше був зареєстрований як вищий сорт у «Трав’яній класиці Шеннонга з Materia Medica (Shen Nong Ben Cao Jing)» приблизно в 100 році до нашої ери та використовувався для лікування різних захворювань, включаючи ниркову недостатність, імпотенцію, жіноче безпліддя, хворобливу лейкорею, профузну метрорагію (білі) відчуття холоду в попереку та колінах, а також хронічні запори у людей похилого віку [1]. На даний момент виділено кілька основних компонентів, таких як полісахариди [2, 3], фенілетаноїдні глікозиди (PhG) [1, 4], іридоїди [1] і ліганди [1, 5]. Серед нихPhG і полісахаридиє основними біологічно активними компонентами вCistanche deserticola[6–9]. Сучасні фармакологічні експерименти це довелиЦистанхеdeserticolaможе підвищувати вироблення тестостерону та захищати сперматозоїди, стимулювати проліферацію клітин та підвищувати виживання клітин, проявляючи помітну активність для сексуальної потенції, покращуючи пам’ять, запобігаючи старінню, поглинаючи вільні радикали та нейрозахист [10–13].

НАТУРАЛЬНА ЦИСТАНКА ТУБУЛОЗА ТРАДИЦІЙНІ КИТАЙСЬКІ ТРАВИ PHGS75% ECH 30% ДІЯ 12%

Для зменшення токсичності та/або посилення ефекту більшість традиційних китайських трав слід обробляти перед призначенням. традиційні стадії процесу включають очищення, водну обробку (подрібнення у воді, пропарювання та смаження) і вільний процес (нагрівання при перемішуванні з вином, оцтом, сіллю або медом) [14]. Під час процесу хімічні компоненти можуть змінюватися: може змінюватися відносний вміст певних компонентів або утворюватися нові компоненти [15]. Процес виробництва Cistanche deserticola має довгу історію, і Cistanche deserticola слід обробляти шляхом замочування в рисовому вині та пропарювання, як описано в Китайській фармакопеї (видання 2015 р.) [16]. Відповідно до теорії традиційної китайської медицини (ТКМ) було доведено вплив SPW на меридіани нирок [17]. WSCD вперше задокументовано в «Трактаті Lei Gongs про приготування та кип’ятіння Materia Medica (Lei Gong Pao Zhi Lun)» у Північній та Південній династіях Китаю. WSCD краще використовувати для лікування ниркової недостатності та захисту сперми, як зазначено в «Taiping Shenghui Fang» китайської династії Сун. Однак порівняльних досліджень щодо хімічних компонентів між RCD і WSCD досі не проводилося.

Сучасні фармакологічні дослідження показали, що WSCD може тонізувати нирки для забезпечення есенції, стимулюючи вісь гіпоталамус-гіпофіз-гонади різним ступенем, і використовується для лікування дефіциту нирок, такого як дефіцит ниркового ян [18]. Однак до цього часу відмінності в біологічній активності між RCD і WSCD не були досліджені. Нещодавно, щоб полегшити експериментальні дослідження, модель тварин з дефіцитом нирок-ян була дубльована шляхом введення щурам високої дози гідрокортизону, у яких щури демонструватимуть симптоми, дуже схожі на описані при дефіциті нирок-ян ТКМ [19, 20] . Щури з дефіцитом нирок-ян завжди мають деякі симптоми, такі як втрата ваги, зменшення споживання їжі, слабкість, збільшення споживання води та зниження активності. На основі цієї тваринної моделі було виявлено відмінності в живильному впливі на нирки між RCD і WSCD і навіть виявлено наукову суть традиційного китайського процесу.

2. Матеріали та методи

2.1. Матеріали та хімікати

Стандартні речовини, такі якактеозид, ізоактеозид, ехінакозид, цистанозид А та 2- ацетилактеозидбули придбані у Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (Шанхай, Китай). Цистанозид F, цистанозид C, османтузид B і тубулозид B були придбані у Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (Ченду, Китай). Чистота всіх стандартів була не менше 98%. Метанол та ацетонітрил класу ВЕРХ були придбані у Aladdin Chemistry Inc. (Шанхай, Китай). Деіонізовану воду отримували за допомогою MilliQ50 SP Reagent Water System (Бедфорд, Массачусетс, США) для приготування зразків і мобільних розчинів. Усі інші органічні розчинники, використані в цьому дослідженні, були аналітичного класу та придбані у Shanghai Chemical Co. Ltd (Шанхай, Китай).

2.2. Колекція зразків

Весь сирий Cistanche deserticola (7 партій зразків) був зібраний медичним університетом Внутрішньої Монголії з провінцій Внутрішня Монголія та Нінся. Сяоцін Ван, професор кафедри фармакогнозії медичного університету Внутрішньої Монголії, ідентифікував усіх як cistanche deserticola YC Ma. Зразок ваучера було збережено у Школі фармації Медичного університету Внутрішньої Монголії. після збору суцвіття Cistanche deserticola видаляли, стебла нарізали та сушили при кімнатній температурі на повітрі, а потім зрізи випадковим чином ділили на дві групи в кожній партії: одна була RCD, а інша використовувалася для приготування WSCD. .

WSCD готували в лабораторії відповідно до китайської фармакопеї (видання 2015 р.) [16], що означає, що нарізані RCD замочували в рисовому вині в закритій ємності протягом 6 годин до м’якості, пропарювали на водяній бані ще 12 годин до готовності. поверхня стає чорною, і сушать при кімнатній температурі повітрям.

2.3. Аналіз основних компонентів (PCA)

Аналіз головних компонент (PCA) — це складна техніка, яка широко використовується для зменшення розмірів багатовимірних задач. Це зменшує розмірність вихідного набору даних, пояснюючи кореляцію між великою кількістю змінних з точки зору меншої кількості базових факторів без значної втрати інформації. У цьому дослідженні відмінності між RCD і WSCD проводили за допомогою неконтрольованого PCA з використанням програмного забезпечення SIMCA 13.0 на основі відносних площ піків у ВЕРХ-хроматографії. За допомогою PCA було виявлено вплив основних хімічних речовин на класифікацію різних зразків.

2.4. Підготовка зразка

2.4.1. Препарат екстракту для тварин

RCD і WSCD були відібрані із зібраних і підготовлених зразків, як описано в Розділі 2.2.

Висушені на повітрі та нарізані RCD подрібнювали в пульверизатор (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), точно зважували 1.0 кг і замочували в 50% етанолі протягом 30 хвилин, а співвідношення рослин /етанол використовували 1/10 (маса/маса). Потім його екстрагували зі зворотним холодильником двічі по 1 год кожен раз. два екстракти об'єднували та фільтрували, а етанол відновлювали при зниженому тиску при 60∘C. Загальний неочищений екстракт PhGs сушили у вакуумі при 60∘C і очищали за допомогою макропористої смоли. Нарешті, PhG екстракт RCD був отриманий і точно зважений.

Екстракт PhG WSCD був отриманий за тією ж процедурою, що описана вище.

осади від екстрагування PhGs висушували на повітрі та двічі по 1,5 години відварювали водою у 20 разів. Два екстракти об'єднували і центрифугували при 4000 об/хв протягом 10 хв, а супернатант концентрували і осаджували 95% етанолом. після центрифугування осад висушували у вакуумі при 60∘С.екстракт полісахаридівRCD було отримано та точно зважено.

Полісахаридний екстракт WSCD був отриманий за тією ж процедурою, що описана вище.

PhGs і полісахаридні екстракти RCD і WSCD були змішаними суспензіями у воді, відповідно, коли щурів лікували перорально.

2.4.2. Пробопідготовка для визначення PhG

Екстракти PhGs у розділі 2.4.1 були точно зважені на рівні 0.15 г і екстраговані ультразвуком 50 мл 50% водного розчину метанолу протягом 40 хв. Після охолодження втрату маси поповнювали 50% метанолом. Усі зразки та розчинники фільтрували через мембрану 0,45 мкм перед аналізом. Вміст чотирьох PhG в RCD та WSCD визначали за допомогою ВЕРХ, а загальний PhG – за допомогою УФ-спектрофотометрії.

2.4.3. Пробопідготовка для визначення полісахариду

Екстракти полісахаридів у Розділі 2.4.1 були точно зважені як 0.10 г і екстраговані ультразвуковою обробкою 50 мл гарячої води протягом 40 хвилин; після охолодження втрату ваги поповнювали водою. Усі зразки та розчинники фільтрували через мембрану 0,45 мкм перед аналізом.

2.5. Хроматографічні умови ВЕРХ і визначення чотирьох PhG

Хроматографічне розділення проводили в системі ВЕРХ UltiMate 3000 (Thermo Fisher Scientific, США), обладнаній подвійним градієнтним насосом, колонковим відділенням і DAD-детектором. . Дані були зібрані та оброблені за допомогою ChromeLeon Chromatography Data System. Зразки розділяли на Agilent Zorbax SB-C18 (250 мм × 4,6 мм, 5 мкм) із запобіжною колонкою C18 (4,6 мм × 12,5 мм, 5 мкм). Рухома фаза складалася з ацетонітрилу (А) і 0.1% розчину фосфорної кислоти (Б) зі швидкістю потоку 1 мл/хв. Градієнт елюції такий: початковий 0–13 хв, лінійна зміна від АВ (5:95, об./об.) до АВ (15:85, об./об.); 13–25 хв, лінійна зміна на АВ (20:80, об/об); 25–43 хв, лінійна зміна на АВ (25:75, об/об). Довжину хвилі детектора контролювали при 330 нм. Температуру колонки встановлювали на рівні 30 ∘ C, а об’єм введеного зразка становив 10 мкл [21]. Базовий розчин, що містить чотири еталонні стандарти, готували шляхом розчинення еталонних стандартів у 50% метанолі до кінцевої концентрації 0,20 мг/мл для 2-ацетилактеозиду, 0,20 мг/мл для актеозиду, 0,05 мг/мл для османтузиду B, і 0,10 мг/мл для ізоактеозиду. Потім розчин розбавляли до п’яти різних концентрацій у трьох повторах для створення калібрувальних кривих. Вміст зразка виражали в г/кг сирої маси.

2.6. Визначення загального PhG

Загальні PhG визначали за допомогою методу УФ-спектрофотометрії при довжині хвилі 330нм на спектрофотометрі UV1000 (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). Основний розчин готували шляхом розчинення стандартів ехінакозиду в 50% метанолі. до кінцевої концентрації 0,10 мг/мл, а потім розбавили до п’яти різних концентрацій у трьох повторах для створення калібрувальних кривих.

НАТУРАЛЬНА ЦИСТАНКЕ ТУБУЛОЗА ДЛЯ ПОКРАЩЕННЯ СТАТЕВОЇ ФУНКЦІЇ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.7. Визначення полісахаридів

Визначенняполісахаридипроводили фенолсульфатним методом. У пробірку на 20 мл зі скляною пробкою помістили 1 мл розчину зразка, додали 1 мл 6% розчину фенолу та 5 мл концентрованої сірчаної кислоти та струшували протягом 5 хв. Суміш переносили на киплячу водяну баню на 10 хв і охолоджували до кімнатної температури для ультрафіолетового детектування. Ультрафіолетове поглинання контролювали при 480 нм на спектрофотометрі UV1000. Еталонний стандарт безводної D-глюкози точно зважували та розчиняли в дистильованій воді до кінцевої концентрації 0,10 мг/мл. Потім розчин розбавляли до п’яти різних концентрацій у трьох повторах для створення калібрувальних кривих.

2.8. Експерименти на тваринах

2.8.1. Тварини та житло

Самці щурів SD статевої зрілості (180-200 г) були придбані в Xinglong (Beijing) Experimental Animal Farm (вік: 6 тижнів), а ліцензія на лабораторних тварин була SCXK (Jing):2016-0003. Усі процедури з тваринами були схвалені Комітетом з досліджень тварин Медичного університету Внутрішньої Монголії та проведені відповідно до рекомендацій Національного інституту охорони здоров’я щодо принципів догляду за тваринами (2004). Усіх тварин утримували в бар’єрній системі з регульованою температурою 21–23∘ C і відносною вологістю 40–65% і в 12-годинному циклі темрява/світло. Щурам досхочу давали їжу та воду та акліматизувалися до вищевказаного середовища протягом тижня.

2.8.2. Дозування та відбір проб

Щурів перевели в окремі метаболічні клітини та випадковим чином розділили на 6 груп (?=10 у кожній групі). Їм робили внутрішньом’язову ін’єкцію 15 мг/кг гідрокортизону натрію сукцинату (придбаного у Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Тяньцзінь, Китай) протягом 2 тижнів, за винятком групи 1, якій вводили рівний об’єм фізіологічного розчину. На 14-й день вага тіла, споживання їжі, споживання води, об’єм сечі та спонтанна активність протягом 5 хвилин були зібрані, щоб переконатися, що модель ниркового дефіциту Ян була успішно створена. З 15-го дня 6 груп лікували наступним чином: група 1 і група 2 (модельна група, M) отримували рівний об’єм дистильованої води, група 3 (екстракт PhGs групи RCD, PR) отримували {{12 }}.42 г/кг PhGs екстракту RCD, що дорівнювало приблизно 1,8 г/кг сирого Cistanche deserticola, а інші групи були такими ж, група 4 (PhGs екстракт групи WSCD, PW) отримували дозу { {17}}.49 г/кг PhG екстракту WSCD, група 5 (екстракт полісахаридів групи RCD, SR) обробляли {{20}}.18 г/кг екстракту полісахаридів RCD, і групу 6 (полісахаридний екстракт групи WSCD, SW) обробляли дозою 0,22 г/кг полісахаридного екстракту WSCD. Усім щурам проводили перфузію шлунка на добу. Після місячного лікування щурам відмовляли в їжі протягом 12 годин перед забором крові. На наступний день усіх щурів анестезували та забивали. Під час тестування щурів зважували раз на тиждень, щоб відкоригувати дозування, і зважували знову перед умертвінням. Зразки крові збирали в пробірку Епендорфа з 10% розчином EDTA-2Na. Сироватку відокремлювали центрифугуванням при 2000 об/хв протягом 15 хв і зберігали при -80° для подальшого використання. Крім того, нирки, яєчка, придаток яєчка, передміхурову залозу та насіннєвий пухирець видаляли та швидко зважували. Після зважування яєчка заморожували в рідкому азоті для визначення СОД і МДА.

2.9. Аналіз гормонального та антиоксидантного ефекту

Рівні тестостерону (T) і естрадіолу (E2) визначали в Центрі контролю якості Qingdao Kechuang радіоімунним і колориметричним методом. Заморожені яєчка зважували та змішували з 20-кратним холодним фізіологічним розчином (W/W). Гомогенат яєчок, отриманий гомогенатом тканини на крижаній бані, центрифугували для отримання супернатанту. Вміст СОД і МДА яєчка визначали наборами СОД і МДА згідно з інструкцією.

2.10. Статистичний аналіз

Значущість відмінностей між групами порівнювали за допомогою одностороннього тесту ANOVA з наступним тестом Шефе з межею значущості 0.05 за допомогою програмного забезпечення SPSS 25.0. Усі дані виражали як середнє ± стандартне відхилення (SD) (n=3).

3. Результати

3.1. Аналіз змін ФГ після СКС за допомогою PCA

Для порівняння змін PhG після SPW було вибрано 9 хроматографічних піків як характерні піки та ідентифіковано. Їхні структури показані на малюнку 1, відносні площі піків яких були розраховані для кількісного вираження. ВЕРХ-хроматограма показана на рисунку 2, що вказує на те, що відносний вміст основних PhG змінювався під час SPW. Для розрізнення різних зразків був отриманий PCA аналіз відносної площі піків 9 компонентів. RCD і WSCD були далеко один від одного на графіку балів (рис. 3(a)), що вказувало на те, що зразки були класифіковані на два кластери. Тому вважається, що вміст хімічних компонентів був різним. Для подальшого пошуку потенційних хімічних маркерів для дискримінації було проведено розширений статистичний аналіз для створення графіка Bi навантаження (рис. 3(b)). Піки 2, 3, 4, 6 і 7 зменшаться після SPW, а піки 5, 8 і 9 зростуть, і всі вони були найважливішими компонентами для розрізнення RCD і WSCD. відносний вміст піку 1 не сильно змінюється після SPW.

НАТУРАЛЬНА ЦИСТАНКЕ ТУБУЛОЗА ДЛЯ ПОКРАЩЕННЯ СТАТЕВОЇ ФУНКЦІЇ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.2. Зміни вмісту загальних полісахаридів і ФГ після СПВ

Як показано на малюнку 3(b), 8 компонентів (5, 8 і 9 збільшені та 2, 3, 4, 6 і 7 зменшені) суттєво змінилися та мали великий вплив на кластеризацію вибірки. Серед них найбільше зросли ізоактеозид і османтузид B, тоді як 2? -найбільше зменшилися ацетилактеозиди та актеозиди. Отже, вміст ізоактеозиду, османтузиду В, 2? -ацетилактеозид і актеозид визначали методом ВЕРХ. Як показано на малюнку 1, пік 4 був актеозидом, пік 5 був ізоактеозидом, пік 7 був 2? -ацетилактеозид, а пік 8 був османтузидом B. Загальні PhG в RCD і WSCD визначали за допомогою УФ-методу, а загальні полісахариди проводили за допомогою фенол-сульфатної кислоти, результати наведені в таблиці 1, ізоактеозид, османтузид B ,загальні полісахариди та ФГу WSCD значно збільшився порівняно з RCD. 2? -ацетилактеозиду та актеозиду значно знизилися.

3.3. Була створена модель ниркового дефіциту Янг, викликаного гідрокортизоном

Порівняно з нормальною групою після 2-тижневої внутрішньом’язової ін’єкції 15 мг/кг гідрокортизону натрію сукцинату маса тіла, споживання їжі та спонтанна активність значно зменшилися (P<0.05) and the water intake and urine volume were increased; the results were shown in Table 2. The T and E2 levels in the serum of the model group were lower than normal group as shown in Figure 4. From the above, the kidney-yang deficiency model was successfully made.

3.4. Вплив екстрактів на середню вагу та індекс внутрішніх органів.

Усіх щурів та їхні нутрощі зважували, а потім розраховували середній індекс нутрощів. Порівняно з групою N, група M значно зменшила вагу внутрішніх органів нирки, насіннєвого пухирця, придатка яєчка та яєчка, що також вказувало на те, що індукована гідрокортизоном модель дефіциту нирок-ян була успішно створена. Порівняно з групою M, у групах PW та SR зросла вага всіх внутрішніх органів, група PR збільшила вагу яєчка, придатка яєчка, сім’яного пухирця та передміхурової залози, а у групі SW збільшилася вага нирки, яєчка, придатка яєчка. , і насіннєвий пухирець. Порівняно з групами PR, група PW була кращою для нирок, насінних бульбашок і передміхурової залози. Не було істотної різниці між групами SR і SW у вазі яєчка, придатка яєчка, насінного пухирця та передміхурової залози. Результати наведені в таблиці 3.

Порівняно з групою N, у групі M були знижені вісцеральні індекси нирки, яєчка, придатка яєчка та сім’яного пухирця. Порівняно з групою М у групі PW та SR збільшився індекс нирки, яєчка, передміхурової залози та насіннєвого пухирця, у групах PR збільшився індекс яєчка, передміхурової залози та насінного пухирця, у групі SW збільшився індекс нирки, яєчка та насінного пухирця. Порівняно з групами PR, група PW була кращою для нирок, насінних бульбашок і передміхурової залози. Групи SW і SR мали подібний індекс нирки, яєчка, насінного пухирця та придатка яєчка. Результати наведені в таблиці 4.

3.5. Вплив екстракту на рівень гормону (Т і Е2)

Як показано на малюнку 4, порівняно з групою M, рівні T і E2 у всіх групах лікування (PW, PR, SW та SR група) значно підвищилися (P<0.05). However, the PW group was better than the PR group in the level T and E2. The SR and SW groups had no significant difference.

3.6. Вплив екстрактів на антиоксидантну дію

СОД є важливим антиоксидантним ферментом. MDA є продуктом перекисного окислення ліпідів, який є індикатором, що відображає ступінь пошкодження окисником. Вміст СОД і МДА впливає на ступінь окисної та антиоксидантної здатності. Як показано на малюнку 5, порівняно з групою M антиоксидантний ефект у всіх групах лікування (PW, PR, SW та SR) був посилений. Група SW мала найбільший антиоксидантний ефект.

4. Обговорення

Перед клінічним застосуванням необроблені матеріали повинні бути піддані традиційним китайським методам обробки. Обробка парою є одним із традиційних підходів до обробки деяких китайських лікарських трав, який дає чорний колір у результаті реакції Майяра [22], збільшуючи кількість деяких біоактивних компонентів [23] і фармакологічну активність. WSCD як один із продуктів процесу є кращим з точки зору живлення нирок порівняно з RCD, як зазначено у виданні Китайської фармакопеї 2015 року. У цьому дослідженні результати PCA показали, що SPW змінив хімічний профіль RCD. Більше того, 8 компонентів у PhG зазнали істотних змін. Найбільше зросли загальні PhG, загальні полісахариди, ізоактеозид і османтузид B, тоді як 2? -ацетилактеозиду та актеозиду зменшилися після СПВ. Результати показали, що SPW може змінити хімічні складові RCD. Вміст ФГ з 1,3,4- тризаміщеними глюкопіранозильними фрагментами (такими як актеозид, 2?-ацетилактеозид і цистанозид С) у WSCD зменшився, однак концентрації їх ізомерів з 1,3,{{13 }} тризаміщений глюкопіранозильний фрагмент (такий як ізоактеозид і таблід B) збільшився, що вказує на те, що трансформація хімічних складових може відбуватися під час SPW, і реакція гідролізу буде однією з причин. Пропоновані шляхи трансформації показані на малюнку 6. Збільшення полісахаридів після SPW також повідомлялося в женьшені [24].

Задокументовано, що Cistanche deserticola активізує роботу нирок і повертає назад зниження рівня тестостерону, має антиоксидантну та протизапальну дію [25], а PhG і полісахариди були двома основними біологічно активними компонентами Cistanche deserticola. Як PhG, ізоактеозид і османтузид B мали антиоксидантну та протизапальну дію [26, 27]. Так, було вивчено порівняння фармакологічних ефектів за рівнем тестостерону та антиоксидантної дії РЦД та ВСЦД. У моделі індукованого гідрокортизоном дефіциту ниркової янь ендокринна система була порушена, а рівень статевих гормонів значно знизився в крові. У цьому дослідженні результати аналізу статевих гормонів показали, що як RCD, так і WSCD можуть значно підвищити рівень T і E2, і обидваPhG і полісахаридипоказали поліпшення статевих гормонів. WSCD був кращим, ніж RCD, особливо в групах екстракту PhG. Результати індексів нутрощів показали, що як PhG, так і полісахариди можуть покращити вагу нутрощів та їх вагові індекси. У групах екстракту PhG WSCD є кращим, ніж RCD, у збільшенні ваги та індексів нирок і насінних пухирців. Крім того, Cistanche deserticola має значний антиоксидантний ефект, особливо в групах екстракту полісахаридів з WSCD. Як обговорювалося вище, як RCD, так і WSCD можуть покращити синдром дефіциту нирок-ян; однак WSCD є кращим, ніж RCD, щодо підвищення рівня T, E2, ваги та індексів придатка яєчка та яєчка. Результати дослідження фармакологічних ефектів показали, що SPW змінив хімічні компоненти ФГ і збільшив вміст полісахаридів, що, в свою чергу, підвищило рівень статевих гормонів і посилило антиоксидантну дію.

5. Висновок

Дослідження мало виявити зміну PhG, загальних полісахаридів і фармакологічний ефект RCD і WSCD на щурів з дефіцитом нирок Ян, особливо на рівень гормонів і антиоксидантний ефект. це дослідження продемонструвало, що процес обробки традиційних китайських трав може змінити їхні хімічні складові та вплинути на їх біоактивність. Також підтверджується те, що сирі та оброблені продукти були призначені різнимиntlyв клініці.

НАТУРАЛЬНА ЦИСТАНКЕ ТУБУЛОЗА ДЛЯ ПОКРАЩЕННЯ СТАТЕВОЇ ФУНКЦІЇ PHGS75% ECH 30% ACT 12%