Профілактичний ефект фенілетаноїдних глікозидів Cistanche Salsa на щурів з висотним набряком головного мозку

Контакт: Одрі Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com

Анотація

Мета: спостерігати за дією та механізмом фенілетаноїдних глікозидів з Cistamnche Salsa на щурах із набряком головного мозку на великій висоті. Методи. Фенілетаноїдні глікозиди вводили з профілактичною метою для створення моделі висотного набряку мозку у щурів за допомогою гіпобаричної камери в симульованому середовищі на висоті 5000 м. Вимірювали патологічні зміни легеневої тканини щурів, вміст води, IL-6, TNF-a, MDA, ферментативну активність SOD і GSH-Px в гомогенаті легень. Результати У порівнянні з контрольною групою щури з висотним набряком мозку показали дивовижний характер набряку мозку та високий вміст води в легенях. Вміст IL-6, TNF-a та MDA у гомогенаті легень підвищувався, а ферментативна активність SOD та GSH-Px значно знижувалася. Фенілетаноїдні глікозиди можуть покращувати патологічні зміни в легеневій тканині, зменшувати вміст води, IL-6, TNF-a та MDA, підвищуючи при цьому ферментативну активність SOD та GSH-Px у легеневому гомогенаті, Concision Фенілетаноїдні глікозиди можуть запобігти висотному набряку мозку. механізм якого може бути пов’язаний із протизапальним та антиокислювальним стресом у легеневій тканині.

Ключові слова: Cistanche Salsa; фенілетаноїдний глікозид; висотний набряк головного мозку

Цистанхе фенілетаноїдні глікозиди

Висотний набряк головного мозку (HACE) зазвичай виникає, коли висота вперше перевищує 3000 м. Це серйозне захворювання, яке загрожує життю, спричинене непристосованістю організму до середовища з низьким тиском і низьким вмістом кисню. Це пов’язано з висотною хворобою. , Висотний набряк легенів є трьома проявами гострої висотної хвороби. Хоча існує менше досліджень HACE порівняно з висотним набряком легенів, відповідні дослідження показали, що окислювальний стрес і запалення відіграють важливу роль у патогенезі HACE (P-3).

Цистанхе фенілетаноїдні глікозиди(фенілетаноїдні глікозиди з Cistanche Salsa, PhGCs) екстрагуються з Xinjiang Cistanche cistanche, і відповідні дослідження успішно виділили різноманітні фенілетаноїдні глікозиди, в основному включаючи ехінакозид і вербаскозид 1. Дослідження фармакологічних ефектів PhGC протягом багатьох років показали, що вони мають подібні фармакологічні ефекти салідрозиду, активного інгредієнта проти гірської хвороби. Він має антигіпоксічну, антирадіаційну дію, поглинає вільні радикали тощо. P-7]. У цьому експерименті модельна мережа HACE щурів 91 була створена в експериментальній камері зі штучним середовищем у спеціальному середовищі в північно-західному регіоні, і PhGC вводилися превентивно, щоб спостерігати його профілактичний вплив на HACE і його можливий механізм дії.

трава цистанхи:Цистанхе фенілетаноїдні глікозиди

1 матеріал

1.1 Тварини

Експериментальна тварина щур Wistar, клас SPF, наполовину самець і наполовину самець, вага 180-220 г [Центр експериментальних тварин Медичного університету Синьцзяна, номер ліцензії на виробництво тварин SCXK (нова) 2011-0004, номер ліцензії на використання тварин SYXK ( новий) 2011- 0004].

1.2 Апаратура

Північно-західна кабіна для штучних експериментів зі спеціальним середовищем (Guizhou Fenglei Aviation Ordnance Co., Ltd., DY{{0}}); оптичний мікроскоп (японська компанія Nikon, E 200); тканинний слайсер (німецька компанія Mecang, HM340E); електронні ваги (Mettler-Toledo Instrument Co., Ltd., AL204, точність; 0,1 мг); зчитувач мікропланшетів (Bio-RAD, XMark 7M, США): УФ спектрофотометр (Shanghai Lens Optical Technology Co., Ltd., SpectrumLab 22); сушильна піч з електричним нагріванням при постійній температурі (Huangshi, Hubei) City Medical Equipment Co., Ltd., SKHG-01).

1.3 Досліджуваний препарат

PhGC (професор Ту Пенфей з Пекінського університету, вміст: 90,70 відсотка, приготовлений з дистильованою водою для отримання розчину відповідної концентрації); Rhodiola Rosea Oral Liquid (Tibet Tibetan Medicine Group Co., Ltd., номер партії: 120503, специфікація: 10 мл); Фактор некрозу пухлини (фактор некрозу пухлини, TNF-) набір (номер партії: ZJAGBZAB01), інтерлейкін-6 (інтерлейкін-6, IL-6) набір (номер партії: ZIBIBZAB 02) (компанія Shanghai Yikesai Biological Products Co., Ltd.); Пентобарбітал натрію (American Amresco Company, номер партії: 20110612); Параформальдегід (Chengdu Kelon Chemical Reagent Factory, номер партії: 20110901); Набір супероксиддисмутази (SOD) (номер партії: 20130812), набір малонового діальдегіду (MDA) (номер партії: 20130812), набір глутатіонпероксидази (GSH-Px) (номер партії: 20130814) (Nanjing Jiancheng Institute of Bioengineering); Порошок фосфатного буфера PBS (Fuzhou Maixin Biotechnology Development Co., Ltd., номер партії: 13061716).

трава кустарника

2 спосіб

2.1 Групування та лікування

Щурів Wistar випадковим чином розділили на 6 груп: нормальна контрольна група, модельна група, група перорального розчину родіоли рожевої (1,78 мл·кг-'), група низької дози ФГК (75 мг·кг-), група середньої дози ФГК (15 0мг ·кг-'), група високих доз ФГК (300мг·кг-), 12 щурів у кожній групі. Кожну групу розводили в середовищі SPF. Групі нормального контролю та групі моделі вводили внутрішньошлунково дистильовану воду (1,0 мл/100 г). Іншим групам вводили внутрішньошлунково у відповідній дозі протягом 10 днів поспіль. На 8-й день решта, крім нормальної контрольної групи. Кожну групу тримали протягом 72 годин у штучній експериментальній кабіні, яка імітувала середовище плато на висоті 5 000 м. Висота в кабіні піднімається з постійною швидкістю 10 м·с-' до висоти 5000 м (атмосферний тиск 54,1 кПа, парціальний тиск кисню 11,52 кПа), при цьому тварини вільно заходять у воду і їдять, а кабіна відкривається на 0,5 год кожні 24 год. Ліки, додають корм і воду для пиття.

2.2 Поводження з тваринами

Щурів у кожній групі анестезували внутрішньоочеревинною ін’єкцією пентобарбіталу натрію (2 відсотки, 0.2 мл/100 г) відразу після виходу з кабіни, брали кров із черевної аорти, розкривали порожнину черепа, тканину мозку була взята, верхня половина лівого мозку була витягнута та зважена. Пакет використовують для визначення вмісту води, а нижню половину лівого мозку фіксують 4-процентним параформальдегідом для фарбування HE. Зважте правий мозок, додайте розчин PBS для приготування 10-відсоткового гомогенату, центрифугуйте при 3 000 r·min-' протягом 10 хвилин, аликвотуйте супернатант і зберігайте його в холодильнику при 80 градусах для визначення TNF- a, IIL-6, SOD, MDA, GSH-Px.

2.3 Спостереження за патологією тканин головного мозку

Після повної фіксації тканини мозку в 4% параформальдегіді, зневоднення, заливання, нарізання та фарбування HE патологічні зміни спостерігаються під оптичним мікроскопом під різними збільшеннями та робляться знімки.

2.4 Визначення вмісту води в мозку та визначення відповідних показників гомогенату тканини мозку, запалення та окисного стресу

Випікайте мозкову тканину, загорнуту в олов’яну фольгу, у духовці (80 градусів, 72 години) до постійної ваги, зважте суху вагу та обчисліть вміст води: вміст води=(вага тканини-суха вага тканини) / маса тканини × 100 відсотків. Використовуйте набір для імуноферментного аналізу для вимірювання вмісту TNF-, IL-6, УФ-спектрофотометр для вимірювання MDA, SOD, GSH-Px, конкретні кроки дотримуйтесь інструкцій.

2.5 Статистичний аналіз

Для аналізу використовувалося програмне забезпечення SPSS 16.0, усі дані вимірювань були представлені нижніми плюсами, дані спочатку перевірялися на нормальність, незалежний тест зразка 1 використовувався для порівняння між відповідними групами, і логарифмічне перетворення виконано для невідповідної групи. Рівень перевірки =0.05.

екстракт цистанки

3 Результати

3.1 Вплив ФГК на патологічні зміни мозкової тканини щурів HACE

Спостереження за патологічними зрізами тканин мозку щурів у кожній групі під світловим мікроскопом показало, що молекулярний шар, зовнішній зернистий клітинний шар, клітинний шар тіла хребця, внутрішній зернистий клітинний шар і багаторядна структура клітинного шару тканини головного мозку нормальної контрольної групи були ясними, уражень не було виявлено. У модельній групі тканини головного мозку щурів мали гіперемію та набряк капілярів, а набряк клітин у молекулярному шарі та шарі тіла хребця був очевидним. Група низьких доз PhGC у щурів із молекулярним шаром тканини головного мозку частина вазодилатації та застійного набряку, помірний набряк клітин, набряк менший, ніж модельна група: група із середньою дозою PhGC у тканини мозку щурів частина субменінгеальної вазодилатації та застійних судин, іноді набряк клітин , набряк порівняно з модельною групою Групу було значно зменшено; молекулярний шар групи високих доз ФГК не мав явного набряку, і спостерігався легкий периваскулярний набряк, який був значно зменшений порівняно з модельною групою. Молекулярний шар мозкової тканини щурів у групі Rhodiola Rosea мав розсіяний набряк, а розсіяні кровоносні судини мали дуже легкий набряк. Набряк значно зменшився порівняно з модельною групою. Можна побачити, що мозкова тканина щурів у модельній групі явно набрякла, і модель встановлена. ФГК і родіола рожева можуть зменшити ступінь набряку мозку у щурів моделі HACE. Результати показані на малюнку 1.

Рис. 1 Гістопатологічне спостереження мозку щурів у різних групах (HE × 400)

3.2 Вплив ФГК на вміст води в мозку щурів HACE

Порівняно з нормальною контрольною групою вміст води в мозковій тканині модельної групи збільшився, і різниця була статистично значущою (P<0.01), indicating="" that="" the="" model="" was="" established.="" the="" brain="" tissue="" water="" content="" of="" rats="" in="" the="" low,="" medium,="" and="" high="" doses="" of="" phgcs="" and="" the="" rhodiola="" rosea="" group="" was="" lower="" than="" that="" of="" the="" model="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" tissue="" water="">

3.3 Вплив ФГК на TNF-a та IL-6 у тканині мозку щурів HACE

Порівняно з нормальною контрольною групою вміст TNF-a та IIL-6 в гомогенаті тканини головного мозку модельної групи значно збільшився (P<0.01). the="" contents="" of="" tnf-α="" and="" iil-6="" in="" the="" brain="" tissue="" homogenate="" of="" phgcs="" low,="" medium,="" and="" high="" dose="" groups="" and="" rhodiola="" rosea="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" model="" group=""><0.05), and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant.="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" brain="" tissue="" tnf-a="" and="" iil-6="" levels="" between="" the="" phgcs="" dose="" groups="" and="" the="" rhodiola="" rosea="">

3.4 Вплив ФГК на окислювальний стрес у тканині мозку щурів HACE

Порівняно з нормальною контрольною групою активність ферментів SOD та GSH-Px у тканині головного мозку модельної групи була значно знижена, а вміст MDA значно збільшений (P<0.01). the="" sod="" and="" gsh-px="" enzyme="" activities="" in="" the="" brain="" tissue="" of="" the="" phgcs="" low,="" medium,="" and="" high="" dose="" groups="" and="" rhodiola="" rosea="" group="" were="" higher="" than="" the="" model="" group,="" and="" the="" mda="" content="" was="" lower="" than="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" difference="" was="" statistically="" significant=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" sod,="" gsh-px,="" and="" mda="" in="" the="" brain="" tissue="" between="" the="" phgcs="" groups="" and="" the="" rhodiola="" rosea="">

доповнення Cistanche: покращує імунітет

4 Обговорення

За останні роки вітчизняні дослідження щодо профілактики та лікування гірської хвороби за допомогою традиційної китайської медицини досягли значних інноваційних результатів, і традиційні китайські ліки з незалежними правами інтелектуальної власності для профілактики та лікування гірської хвороби були успішно розроблені. Наприклад, капсули родіоли, розроблені Тибетським військовим округом, отримали номер схвалення для спеціальних військових ліків і використовуються в силах прикордонної оборони плато як спеціальні ліки для профілактики та лікування захворювань плато. Пероральна рідина Rhodiola Rosea, випущена місцевими фармацевтичними компаніями Цинхаю та Тибету, отримала офіційний номер схвалення національних видів китайської медицини та є клінічно придатною для профілактики та лікування гострої та хронічної гірської хвороби10. Фармакологічні ефекти PhGC подібні до салідрозиду, тому ми обрали пероральний розчин родіоли рожевої, який продається та використовується на ринку та має стандартний лікарський засіб, як препарат позитивного контролю.

Велика кількість досліджень [1H12] довели, що рівні TNF- та IL-6 у пацієнтів з HACE підвищені, Zhou Qiquan et al. [3 Дослідження показали, що TNF- відіграє важливу роль у зміні проникності гематоенцефалічного бар'єру. Важливий фактор для підвищення проникності бар'єру. Під час гіпоксемії підвищується секреція TNF-. Коли TNF- аномально підвищується в крові, він може пошкодити судинні ендотеліальні клітини, спричиняючи зміни морфології судинних ендотеліальних клітин, пошкодження клітинних мембран і органел тощо, і TNF-a також можна використовувати як внутрішньоклітинний сигнал апоптозу індукує апоптоз судинних ендотеліальних клітин, сприяє виробленню ендотеліну (ET-1) і посилює пошкодження стінки кровоносних судин, а також має ефект сприяння секреції ІІЛ-614.

Гіпоксія вважається ключовим фактором, що призводить до виникнення гострої висотної хвороби. Реакція на окислювальний стрес, викликана гіпоксією, відіграє важливу роль у церебральній артеріальній гіпертензії та судинному витоку. Місцеві вільні радикали беруть участь у пошкодженні судин. Цереброваскулярне пошкодження та збільшення витоку рідини можуть спричинити набряк мозку 13i4. Чжоу Ціцюань та ін. [7] Дослідження показали, що вільні радикали кисню відіграють важливу роль у формуванні HACE і є важливим фактором у підвищенні проникності гематоенцефалічного бар’єру на великій висоті. У гіпоксичному середовищі кількість вільних радикалів і MDA буде значно збільшена, тоді як функція антиоксидантних ферментів буде знижена. Таким чином, низька функція антиоксидантних ферментів і збільшення пошкодження перекисним окисленням ліпідів можуть мати важливе значення в патогенезі гострої гірської хвороби. MDA утворюється в результаті розпаду пероксидів жирних кислот і є найбільш часто вимірюваним продуктом перекисного окислення ліпідів у біологічних системах. Антиоксидантні ферменти в організмі включають SOD, GSH-Px тощо, які або безпосередньо поглинають вільні радикали супероксиду та перекис водню, або перетворюють їх на менш активні речовини, щоб відігравати захисну роль. Таким чином, ми виявили SOD, MDA, GSH-Px в гомогенаті тканини мозку.

У цьому експерименті, порівняно з нормальною контрольною групою, кількість TNF-a та IIL-6 в гомогенаті тканини головного мозку модельної групи HACE значно зросла, активність ферментів SOD, GSH-Px знизилася, а також вміст MDA значно збільшився. Це показує, що індукована гіпоксією дисфункція окисного стресу та запалення у щурів беруть участь у формуванні HACE. Профілактичне введення ФГК може зменшити вміст води в мозковій тканині у щурів із набряком головного мозку та значно покращити патологічні зміни набряку мозкової тканини, що вказує на те, що воно запобігає виникненню HACE. ФГК можуть збільшувати СОД і GSH-Px у тканині мозку щурів під час гіпоксії. Активність ферментів знижує вміст МДА в тканинах головного мозку, викликаного гіпоксією. Вміст TNF- та IL-6 у мозковій тканині щурів у групі профілактичного введення ФГК значно нижчий, ніж у модельній групі, що свідчить про те, що наші антиокислювальний стрес і протизапальні засоби можуть бути профілактикою та лікуванням ФГК Один із механізмів розвитку гірської хвороби. Виходячи з результатів цього експерименту, ефект ФГК у групі із середньою дозою трохи кращий, ніж у високій дозі, але різниця не є статистично значущою. Немає відповідних літературних повідомлень. ФГК є індукторами печінкових ферментів, що може виключити можливість того, що ліки індукують підвищення активності печінкових ферментів і прискорюють самометаболізм. Припускають, що можливою причиною є те, що зі збільшенням концентрації препарату концентрація препарату в організмі перевищує діапазон співвідношення доза-ефект. При середній дозі всі рецептори в організмі зайняті, а рецептори насичені, тому немає постійного посилення ефекту високих доз, і препарат є глікозидом, який може гідролізувати цукор у шлунку та збільшення в'язкості обмежить ефективне всмоктування препарату, коли концентрація надто висока.

доповнення Cistanche: покращує імунітет

довідка

[1] Джон Б. Вест, англійський переклад «номенклатури, класифікації та діагностичних критеріїв високогірної хвороби в Китаї» [J]. High Altitude Med Biol, 2010, 11(2): 169-172.

[2] Бейлі Д.М., Еванс К.А., Джеймс П.Е. та ін. Змінений метаболізм вільних радикалів при гострій гірській хворобі: вплив на динамічну церебральну ауторегуляцію та функцію гематоенцефалічного бар’єру [J]. J Physiol, 2009, 587(1): 73-85.

[3] Tang YP, Wu P, Su JJ та ін. Вплив аквапорину-4 на утворення набряку після внутрішньомозкового крововиливу [J]. Experimental Neurology, 2010, (223): 485-495.

[4] Cai Hong, Bao Zhong, Jiang Yong та ін. Ефективні інгредієнти Cistanche cistanche різного походження. Кількісний аналіз [J]. Китайська фітотерапія, 2007, 38(3): 452-455.

[5] Muhebuli • Abuliz, Mao Xinmin, Rena • Kasmu та ін. PhGCs Антиоксидантна активність у клітинах HL-60 [J]. Китайський фармакологічний бюлетень, 2008, 3 (24): 362-364.

[6] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan та ін. PhGCs проти -амілоїдного пептиду Вплив і механізм на навчання та пам'ять моделі миші з хворобою Альцгеймера [J]. Науковий бюлетень китайської фармакології, 2006, 22(5): 595-599.

[7] Liu Zhiqin, Chen Quieting, Li Yan та ін. Вплив цистанхе на гемопоез і гемопоетичні ефекти хіміотерапії у мишей з пухлиною. Вплив імунної функції [J]. Журнал Пекінського університету традиційної китайської медицини, 2010, 33 (11): 758-761.

[8] Xu Yonghua, Zhang Qiong, Cao Jinjun та ін. Створити великомасштабну комбіновану камеру низького тиску для розширення медицини Типи експериментальних платформ [J]. Китайський журнал порівняльної медицини, 2012, 22(7): 60-63.

[9] Тао Іцунь, Ши Вень Хуей, Сюй Юнхуа та ін. Висотний набряк легенів у симульованому середовищі плато Створення мишачої моделі [J]. Китайський журнал експериментальних тварин, 2014, 22 (1): 76-78.

[10] Ван Хай. Фармакотерапія професійної висотної хвороби [М]. Пекін: Військово-медичне наукове видавництво, 2010: 131-148.

[11] Чень Юньтянь, Ху Ін. Зміни інтерлейкіну плазми-6 у пацієнтів із гострим ГАПЕ [J]. Китайський журнал превентивної медицини, 2006, 24 (2): 92-94.

[12] Colleen Glyde JL, Andrew WS, Megan JW та ін. Гостра гірська хвороба, запалення та проникність: нові висновки з дослідження біомаркерів крові [J]. J Appl Physiol, 2011, 111: 392-399.

[13] Zhou QQ, Tan XL, Wang J. Підвищена проникність гематоенцефалічного бар’єру, спричинена медіаторами запалення, бере участь у висотному набряку головного мозку [J]. Sci Res and Essays, 2011, 6 (3): 607-615.

[14] Ога Е, Мацусет. Зв'язок між молекулами адгезії та гіпоксією [J]. Nippon Rinsho, 2000, 59 (8): 1587-1591.

[15] Баконій Т., Радак З. Велика висота та вільні радикали [J]. J Sports Sci Med, 2004, 3(2): 64-69.

[16] Бейлі Д.М., Еванс К.А., Джеймс П.Е. та ін. Змінений метаболізм вільних радикалів при гострій гірській хворобі: вплив на динамічну церебральну ауторегуляцію та функцію гематоенцефалічного бар’єру [J]. J Physiol, 2009, 587(1): 73-85.

[17] Чжоу Ціцюань, Ван Цзін, Ван Юньлі та ін. Кров і мозок під впливом вільних кисневих радикалів на великій висоті Роль змін проникності бар'єру та її зв'язок з HACE [J]. China Micro Circulation, 2007, 11(3): 149-153.