Частина 2: Біоактивні сполуки з Ephedra Fragilis: оптимізація екстракції, хімічна характеристика, антиоксидантна та антиглікаційна активність
Mar 26, 2022
Для отримання додаткової інформації. контактtina.xiang@wecistanche.com
2.7. Антиглікаційна активність
2.7.1. УФ-видимий аналіз
Спектр ультрафіолетового випромінювання є швидкою, послідовною та простою технікою, яка зазвичай використовується для виявлення конформаційних змін білка та утворення комплексу. Спектри поглинання нативного та глікованого БСА, інкубованого протягом 15 днів у присутності або відсутності CEE/фракції, а такожкверцетин(позитивний контроль) представлені на малюнку 3A.
Було чітко показано, що нативний BSA демонструє характерний пік при 入2s0 нм, що здебільшого пов’язано з ароматичними амінокислотами, включаючи тирозин, триптофан і фенілаланін [47].
Після модифікації глюкозою поглинання при λ280 нм було на 60,57% більш гіперхромним, ніж нативний BSA. Підвищення інтенсивності поглинання при 入2s0 нм можна пояснити розгортанням білкової спіралі, спричиненим глікацією, що може вплинути на його нормальну фізіологічну функцію.
Treatment with CEE/fractions reduced significantly the absorbance at入2so nm compared to glycated BSA, and this reduction varied markedly between fractions according to the solvent polarity. Overall, descending antiglycation activity was portrayed as EAF>WBF>DMF>CCE>WF>HE, які були 1,82, 1,71, 1,57, 1,35, 1,28 і в 1{11}} рази нижчими, ніж глікований ПТП. Проте ця активність була помітно нижчою, ніж укверцетинвикористовувався як позитивний контроль (у 2.24-рази нижчий, ніж глікований ПТП). Отже, з досліджень поглинання можна зробити чіткий висновок, що EAF з E.fragilis має захисну дію проти розгортання BSA, викликаного глікацією білка.
2.7.2. Інгібування глікації білка в моделі BSA-Glu
AGE є гетерогенною групою сполук із характеристиками флуоресценції при λ440 нм при збудженні при 入370 нм. Здатність CEE та його різних фракцій з E. fragilis інгібувати утворення AGE оцінювали за допомогою аналізу BSA-глюкози, і результати представлені на малюнку 3B.
Як показано на малюнку 3B, швидкість інгібування AGEs усіх досліджуваних зразків демонструвала тенденцію до зростання зі збільшенням концентрацій. При 1 мг/мл CCE, HE, DME EAE, WBF, WF і кверцетин інгібували утворення AGE на 53,26, 39,83, 54,82, 76,68, 69.{19}}9,48,83 і 97,84 відсотка відповідно після інкубації. протягом 15 днів. EAF (ICs =0.375±0.034 мг/мл) був найефективнішим інгібітором AGE серед усіх фракцій, за яким йдуть WBF, DMF, CCE та WF з IC5 0 значення 0.595 ± {{30}}.047, 0.857 ± 0,018, 0,951 ± 0,099 і 1,044± 0,032 мг/мл відповідно. HF виявив найслабшу активність із значенням ICso 1,212±0,063 мг/мл.
Високийантиглікаціяпотенціал EAF може бути пов’язаний з високим вмістом фенолів і флавоноїдів, які були описані як дуже хороші інгібітори утворення AGE [48]. Чжан та ін. [31] у порівнянні з фракціями дихлорметану, н-бутанолу та води.
Як наведено в таблиці 5, інгібування AGEs сильно корелізовано позитивним чином з обома TF(r=0.950;p<0.01)and tp(r=""><0.01)contents, which="" were="" in="" line="" with="" previously="" reported="" studies="" [2,29].="" the="" ages="" inhibition="" was="" also="" correlated="" in="" a="" positive="" way="" to="" dpph",abts,h2o2,reducing="" power,="" tac,andβ-carotene="" assays="" withr="">
r=0.914, r=0.983, r=0.975, r=0.923 і r=0.963 (p<0.01),respectively. these="" reflected="" that="" ages="" inhibition="" is="" linked="" to="" the="" efficiency="" of="" primary="" antioxidants="" [6].="" kaewseejan="" and="" siriamornpun="" [29]="" also="" reported="" that="" phenolic="" compounds="" prevented="" the="" formation="" of="" ages="" through="" its="">поглинання вільних радикалівіантиоксидантємності.
2.7.3. Вплив на окислення білка, викликане глікацією
Глікація білків (реакція Майяра) — це реакція, яка розпочинається ковалентним приєднанням відновлюючого цукру до аміногрупи білків (переважно залишків лізину та аргініну), що призводить до утворення нестабільного та оборотного продукту, тобто основи Шиффа, яка далі зазнає перегрупування Амадорі для утворення більш стабільних продуктів кетаміну, названих Амадорі. Згодом продукти Амадорі піддаються ендіольній реакції з утворенням карбонільованих білків [48]. Деградація цього кетаміну може спричинитивільні радикалитакі як супероксидні радикали, які далі перетворюються в HO·через реакцію Фентона, викликаючи окисне та клітинне пошкодження [49].
Protein oxidation is accompanied by carbonyl protein formation and loss of protein thiols, which are often employed as protein oxidation indicators[50]. As given in Figure 3C, the level of carbonyl content in native BSA was 1.16±0.04 nmol/mg protein, which was increased to more than 3.62-fold (4.21 ± 0.10 nmol/mg protein) upon glycation. The treatment with CEE and its various fractions reduced the level of carbonyl content with the increase of samples concentrations ranging from 0.1 to 1 mg/mL. Furthermore, the inhibition effect of quercetin on the formation of carbonyl proteins was stronger than that of all fractions at every concentration point. When the concentration was 1 mg/mL, CEE, HF, DMF, EAF, WBF, WF, and quercetin decreased the level of carbonyl content by 42.29, 17.37,58.68,73.44,69.17,28.84,and 98.68%, respectively, compared to native BSA. Overall descending, the inhibition of carbonyl content formation was portrayed as Q>EAF>WBF >DMF > CCE> WF >HF.
Вплив CEE/фракції на окислення тіолу протеїну, спричинене глікацією, представлено на малюнку 3D. У нативному BSA рівень тіолу білка становив 1.06± 0.086 нмоль/мг білка, який був знижений більш ніж у три рази (0 .34± 0,021 нмоль/мг білка) у глікованому білку. У присутності CEE/фракції рівень тіолової групи значно підвищувався залежно від дози в діапазоні від 0,1 до 1 мг/мл. При цьому рівень тіолу протеїну зростав у такому порядку: HF<><><><>
Подібні результати спостерігалися в рослині Teucrium polium, оскільки EAF був більш ефективним, ніж інші фракції (діетиловий ефір і фракції води) проти опосередкованого глікуванням окислення білка [51]. У своєму дослідженні Golshahi та Bahramikia [52] також повідомили про подібні результати при використанні кількох розчинників із зростаючою полярністю (діетилового ефіру та води) у розщепленні лікарської рослини Trachyspermum copticum. Згідно з цими авторами, EAF має найпотужніший захисний ефект проти опосередкованого глікуванням окислення білка, за яким із відсталістю йдуть діетиловий ефір і вода. Це демонструє присутність у EAF таких сполук, які можуть володіти профілактичним ефектом проти окисного пошкодження білка, спричиненого гіперглікемією, яке, як вважають, відбувається під час процесів глікоксидації шляхом зменшення утворення карбонілу білка та захисту білкових тіолів від окислення, як припускають дані.
2.8. Ідентифіковані фенольні сполуки в EAF
Для ідентифікації основних біологічно активних сполук за допомогою ОФ-ВЕРХ було відібрано ДСП, який показав найвищу біологічну активність з інших фракцій. Загалом було ідентифіковано шість сполук шляхом порівняння їх часу утримування з часами утримування еталонних стандартів. Ідентифіковані фенольні сполуки представлені на малюнку 4. Галова, ванілова, кавова та ферулова кислоти були ідентифіковані як фенольні кислоти, тоді як лише дві сполуки, а саме рутин і кверцетин, були ідентифіковані як флавоноїди. Згідно з дослідженням Soumaya et al. [53], ферулова кислота, лютеолін-7-O-глюкозид, мірицетин і кемпферол 3-O-рутинозид були ідентифіковані як присутні в EAF надземних частин туніського E.fragilis, тоді як присутність рутина , кверцетин, галова кислота та кофеїнова кислота були виявлені лише вперше в нашому дослідженні. Різниця в хімічному складі EAF, отриманого з одного виду рослин, може відрізнятися в різних частинах рослини, стадії розвитку рослини, умовах зростання (наприклад, ґрунт, світло, температура, вода, вологість і добрива), час збирання, система сушіння та процедура екстракції [54]. Отримані результати фітохімічного профілю відбитків пальців показали високий рівень E.fragilis, який містив кілька фенольних сполук, які вважаються основними учасниками поглинання вільних радикалів і антиоксидантної активності [55]. Крім того, ці сполуки відомі своєю потужною антиглікаційною здатністю [48]. Кілька досліджень виявили прямий зв'язок між антиоксидантною активністю фенольних сполук та їхньою антиглікаційною здатністю.
2.9. Дослідження молекулярного докінгу ідентифікованих сполук
Щоб чітко візуалізувати детальний механізм, за допомогою якого ідентифіковані сполуки в EAF E. fragilis зв’язуються з BSA та RAGE, ми провели дослідження молекулярного докінгу. Результати докінгу представлені в таблиці 6, тоді як взаємодії між найбільш активною сполукою та мішенями показано на малюнку 5. Результати показали, що кверцетин щільно вписується в сайт зв’язування, розташований у гідрофобній порожнині субдомену IB BSA з найнижчою енергією зв’язування { {2}}.7 ккал/моль (рис. 5A). Навпаки, менша енергія зв’язку була отримана з феруловою кислотою, ваніліновою кислотою, кавовою кислотою, галовою кислотою та рутином (-6.35,{{7} }.05, -5.84, -5.25 і -4.41 ккал/моль відповідно). Зазвичай високий ступінь негативності енергії зв'язку є більш ефективним, і з'єднання буде використовуватися для контролю процесів глікації. З малюнка 5B видно, що кверцетин утворює вісім водневих зв’язків із SER109, ASP111, LEU112, LEU115, ARG144, ARG185 та ARG458 BSA, а також чотири гідрофобні взаємодії, опосередковані аліфатичними амінокислотами (PRO110, PRO113, LYS114 та ARG144). . Крім того, чотири амінокислоти (ASP108, HIS145, LEU189 і LEU462), що оточують кверцетин, взаємодіють через сили Ван-дер-Ваала. Повідомлялося, що лізин і аргінін є основними амінокислотними залишками, які беруть участь у процесі глікації [56]. Таким чином, маскування кверцетину залишками лізину та аргініну може бути одним із можливих механізмів інгібування E. fragilis глікації білка на початковій стадії.
![. The 3D view of the binding mode between quercetin (A) and gallic acid (C) with BSA and RAGE, respectively. The 2D detailed view showed the interaction between quercetin (B) and gallic acid (D) with neighboring residues of BSA and RAGE, respectively. Engagement of AGEs products with RAGE are known to trigger, through ROS formation via NADPH oxidase and mitochondria [57], the activation of multiple intracellular signaling pathways (including JAK/STAT, phosphoinositol-3 kinase, rho GTPases, SAPK/JNK MAP kinases, p38 and erk1/2 (p44/p42) MAP kinases), and culminating in the activation of the NF-κB transcription factors [58], leading to the pathogenesis of diabetes and aging-associated disorders [5]. Therefore, blocking the AGEs–RAGE interactions can repress stress-provoking signals transduction, which is considered a therapeutic strategy of inhibiting glycation at a later stage. Docking results with RAGE, as shown in Table 6, proved that gallic acid has the highest docking score (ΔG= −6.8 kcal/mol) in comparison to those of vanillic acid, ferulic acid, caffeic acid, quercetin, and rutin (−6.68, −5.94, −5.89, −5.58 and −4.89 kcal/mol, respectively). Moreover, 2D modeling of gallic acid and RAGE showed that gallic acid formed five conventional hydrogen bonds with CYS38, GLY40, ALA41, LYS43, and SER83 of RAGE (Figure 5C,D). Also, LYS37 and LYS43 were responsible for the hydrophobic interactions of gallic acid with RAGE. Five amino acids surrounding gallic acid (GLU32, LYS39, PRO42, ASN81, and GLY82) were attached by van der Waal's forces, thereby stabilizing the gallic acid-RAGE complex by providing a strong cohesive environment. In summary, the current study has shown the efficient interaction of certain bioactive compounds in the EAF of E. fragilis with the target proteins of BSA and RAGE. E. fragilis could be a source of potential competitors to glucose and AGEs, which might resist their binding towards BSA and RAGE, respectively, and therefore reducing the subsequent development of oxidative stress and inflammation (Figure 6). Figure 5. The 3D view of the binding mode between quercetin (A) and gallic acid (C) with BSA and RAGE, respectively. The 2D detailed view showed the interaction between quercetin (B) and gallic acid (D) with neighboring residues of BSA and RAGE, respectively](/Content/uploads/2022842169/202203241046127d567c69ab264671b6814abd1b4544c7.png ". The 3D view of the binding mode between quercetin (A) and gallic acid (C) with BSA and RAGE, respectively. The 2D detailed view showed the interaction between quercetin (B) and gallic acid (D) with neighboring residues of BSA and RAGE, respectively. Engagement of AGEs products with RAGE are known to trigger, through ROS formation via NADPH oxidase and mitochondria [57], the activation of multiple intracellular signaling pathways (including JAK/STAT, phosphoinositol-3 kinase, rho GTPases, SAPK/JNK MAP kinases, p38 and erk1/2 (p44/p42) MAP kinases), and culminating in the activation of the NF-κB transcription factors [58], leading to the pathogenesis of diabetes and aging-associated disorders [5]. Therefore, blocking the AGEs–RAGE interactions can repress stress-provoking signals transduction, which is considered a therapeutic strategy of inhibiting glycation at a later stage. Docking results with RAGE, as shown in Table 6, proved that gallic acid has the highest docking score (ΔG= −6.8 kcal/mol) in comparison to those of vanillic acid, ferulic acid, caffeic acid, quercetin, and rutin (−6.68, −5.94, −5.89, −5.58 and −4.89 kcal/mol, respectively). Moreover, 2D modeling of gallic acid and RAGE showed that gallic acid formed five conventional hydrogen bonds with CYS38, GLY40, ALA41, LYS43, and SER83 of RAGE (Figure 5C,D). Also, LYS37 and LYS43 were responsible for the hydrophobic interactions of gallic acid with RAGE. Five amino acids surrounding gallic acid (GLU32, LYS39, PRO42, ASN81, and GLY82) were attached by van der Waal's forces, thereby stabilizing the gallic acid-RAGE complex by providing a strong cohesive environment. In summary, the current study has shown the efficient interaction of certain bioactive compounds in the EAF of E. fragilis with the target proteins of BSA and RAGE. E. fragilis could be a source of potential competitors to glucose and AGEs, which might resist their binding towards BSA and RAGE, respectively, and therefore reducing the subsequent development of oxidative stress and inflammation (Figure 6). Figure 5. The 3D view of the binding mode between quercetin (A) and gallic acid (C) with BSA and RAGE, respectively. The 2D detailed view showed the interaction between quercetin (B) and gallic acid (D) with neighboring residues of BSA and RAGE, respectively")
Відомо, що взаємодія продуктів AGE з RAGE запускає через утворення АФК через НАДФН-оксидазу та мітохондрії [57] активацію багатьох внутрішньоклітинних сигнальних шляхів (включаючи JAK/STAT, фосфоінозитол-3 кіназу, rho GTPases, SAPK/INK MAP-кінази, p38 і erk1/2 (p44/p42) MAP-кінази), і завершується активацією факторів транскрипції NF-kB [58], що призводить до патогенезу діабету та розладів, пов’язаних зі старінням [5]. Таким чином, блокування взаємодії AGEs-RAGE може пригнічувати передачу сигналів, що провокують стрес, що вважається терапевтичною стратегією інгібування глікації на пізнішому етапі. Результати стикування за допомогою RAGE, як показано в таблиці 6, довели, що галова кислота має найвищий показник стикування (G=-6,8 ккал/моль) порівняно з показниками ванілової кислоти, ферулової кислоти, кавової кислоти, кверцетину та рутин (-6.68, -5.94, -5.89, -5.58 і -4.89 ккал/моль відповідно). Крім того, двовимірне моделювання галової кислоти та RAGE показало, що галова кислота утворює п’ять звичайних водневих зв’язків із CYS38, GLY40, ALA41, LYS43 і SER83 RAGE (рис. 5C, D). Крім того, LYS37 і LYS43 були відповідальними за гідрофобну взаємодію галової кислоти з RAGE. П'ять амінокислот, що оточують галову кислоту (GLU32, LYS39, PRO42, ASN81 і GLY82), були приєднані силами Ван-дер-Ваала, тим самим стабілізуючи комплекс галова кислота-RAGE, створюючи міцне когезійне середовище. Підсумовуючи, поточне дослідження показало ефективну взаємодію певних біологічно активних сполук у EAF E. fragilis з цільовими білками BSA та RAGE. E. fragilis може бути джерелом потенційних конкурентів глюкози та AGEs, які можуть протистояти їх зв’язування з BSA та RAGE, відповідно, і, отже, зменшуючи подальший розвиток окислювального стресу та запалення (рис. 6).
3. Матеріали та методи
3.1. Хімічні речовини та реагенти
22-азінобіс-(3-етилбензотіазолін-6-сульфокислота) (ABTS), бутильований гідрокситолуол (BHT), азид натрію, гуанідин гідрохлорид, твін-40,1,{ {7}}дифеніл-2-пікрилгідразил (DPPH), реактив Фоліна Чокальто, -каротин, лінолева кислота, глюкоза, 2,4-динітрофенілгідразин (DNPH),5,5'-дитіобіс-({{16) }}Нітробензойна кислота) (DTNB), молібдат амонію та стандарти поліфенолів були придбані у Sigma-Aldrich (Сент-Луїс, Міссурі, США). Перекис водню (H2O2) було придбано у Fluka (Базель, Швейцарія). Хлорид алюмінію (AICl3), карбонат натрію (NazCO3), хлорид заліза (FeCl3), персульфат калію (K2S2Os), фериціанід калію (K3Fe(CN)6), сірчану кислоту та всі розчинники були отримані від Merck Life Science (Дармштадт, Німеччина). ). Аскорбінова кислота та трихлороцтова кислота (ТХК) були отримані з Scharlau (Барселона, Іспанія).
3.2.Рослинна сировина
E. fragilis (надземні частини) було зібрано з Dour Lagfifat, Oulad Teima, Taroudant, Марокко (широта, 30 градус 24'0"N; довгота,9 градус 12'36"W) протягом травня 2019 року. був ідентифікований професором Наджатом ЕЛХІАТІ, ботаніком з нашого інституту, де була депонована колекція ваучерних зразків. Рослину промивали дистильованою водою, сушили на повітрі, подрібнювали в блендері і зберігали при 49°C до використання.
3.3. Планування експерименту
3.3.1. Вибір змінних
Відомо, що багато параметрів мають значний вплив на екстракцію фенольних сполук, таких як тип розчинника, концентрація розчинника, час екстракції та температура екстракції [59]. Різні розчинники, такі як ацетон, метанол і етанол, підходять для екстракції різних фенольних сполук [16], але в якості розчинника в цьому дослідженні було обрано етанол через його їстівну безпеку та екологічність виробництва [60]. Тому всі фактори, включаючи концентрацію етанолу (X), температуру екстракції (X2) і час екстракції (X3), були обрані як змінні.
3.3.2. BBD для оптимізації видобутку
Було розроблено процедуру оптимізації з використанням RSM для визначення впливу факторів екстракції та вибору оптимальних експериментальних умов екстракції фенольної сполуки E. fragilis. Для дослідження впливу трьох незалежних факторів, включаючи X1 (концентрація етанолу, відсоток), X (температура екстракції, градус) і X3 (час екстракції, год), на вміст TP і TF було проведено трирівневий трифакторний BBD. екстрактів E, fragilis [17]. З метою оптимізації випадковим чином було проведено 15 випробувань, включаючи три центральні точки (Таблиця 1). На основі нашого попереднього однофакторного експерименту (дані не показано), усі змінні були встановлені на трьох рівнях (-1, 0 і плюс 1), з X (40, 60 і 80 відсотків), X , (25, 42,5 і 60 градусів), і X3 (6, 15 і 24 години) (Таблиця 1). Наступне поліноміальне рівняння другого порядку (Рівняння (1)) було використано для підгонки змінних відповіді:
де Y - прогнозована відповідь; о, ; я і ; – коефіцієнти регресії для членів перетину, лінійного, квадратичного та взаємодії відповідно; і X;, і X; – незалежні змінні (i ≠ j).
3.3.3. Процедура вилучення
Порошкоподібний зразок (10 г) екстрагували методом мацерації в заданій концентрації етанолу (40-80 відсотків; 1:10, мас./об.) при змінних температурах (25-60 градусів) протягом різних періодів ({ {5}} h) на орбітальному шейкері-інкубаторі (160 об/хв). Для видалення нерозчинної маси використовували марлю та фільтрувальний папір ватман №1. Потім фільтрат сушили при 40 градусах під низьким тиском, використовуючи R-3 Rotavapor (Büchi), щоб отримати неочищений етанольний екстракт (CEE).
3.4. Фракціонування CEE, отримане в оптимальних умовах
CEE, отриманий в оптимальних умовах, розчиняли в дистильованій воді (100 мл) і проводили рідинно-рідинну екстракцію різними розчинниками зростаючої полярності з отриманням фракції гексану (HF, 3×100 мл), фракції дихлорметану (DMF, 3×100). мл), фракція етилацетату (EAF.3×100 мл), фракція насиченого водою н-бутанолу (WBF, 3×100 мл),
і решта води (WF). Потім ці фракції фільтрували та сушили, як описано вище, і вихід екстракції реєстрували згідно з рівнянням (2):
We Wo і W - маса висушеного CEE/фракції та початкова маса порошку E.fragilis; відповідно.
3.5. Фітохімічний аналіз
Спектрофотометричні методи, які використовуються для оцінки фітохімічного вмісту екстрактів E. fragilis, детально описані в Додаткових матеріалах [61,62].
3.6. Біологічна активність
Деталі тестів антиоксидантної [43,63-67] і антиглікаційної активності [68-70] in vitro наведено в Додаткових матеріалах.
3.7. ОФ-ВЕРХ аналіз EAF
Аналіз фенольних сполук у EAF проводили за допомогою Agilent 1100 (Agilent Technologies, Санта-Клара, Каліфорнія, США), оснащеного обернено-фазовою аналітичною колонкою ZORBAX Eclipse SB-C18 100×4 мм і 3,5 мкм. розмір частинок [71]. Температуру колонки підтримували постійною на рівні 48 градусів. Ізократичне елюювання ацетонітрилом, 0,1% оцтової кислоти у воді (12:88, об’єм/об’єм) як рухомої фази та швидкість потоку 1 мл/хв забезпечили гарне відділення поліфенолів у EAF E.fragilis. Введений об'єм становив 10 мкл, а хроматограми вимірювали при 330 нм. Часи утримування фенольних сполук у EAF порівнювали з часом утримування чисто доступних стандартів для їх ідентифікації.
3.8. Молекулярний докінг
Інструменти AutoDock (ADT) версії 1.5.6 використовували для дослідження молекулярного докінгу. Формат SDF усіх сполук був отриманий з бази даних PubChem, а потім конвертований у файл 3Dpdb за допомогою Open Babel GUI (версія 2.4.1). Кристалічні структури BSA (PDB ID: 4ORO) і RAGE (PDB ID: 4LP5) були зібрані з RCSB Protein Data Bank (PDB). Коротко кажучи, білки спочатку були підготовлені до докінгу шляхом (i) видалення всіх гетероатомів і молекул води, (i) додавання полярних атомів водню та (ii) присвоєння зарядів Колмана. Розмір поля сітки було встановлено на x{{10}},y=126,z=126 та x=80,y=80.Z{{ 15}} із центром сітки ×=8.415,y=21.626,z=106.57 і x=37.98,y=-43.581 ,z=9.371 з інтервалом сітки 0,375A, створеним навколо сайту зв’язування BSA та RAGE відповідно. Програмне забезпечення для стикування було запущено 100 разів за допомогою генетичного алгоритму Ламарка (LGA), щоб знайти найкращу позу зв’язування. Ліганд з найнижчою оцінкою енергії зв'язування був обраний для подальшого дослідження. Для візуалізації результатів стикування використовувалося програмне забезпечення Discovery Studio версії 2020 (BIOVIA, Сан-Дієго, Каліфорнія, США).
3.9. Статистичний аналіз
Для виконання RSM використовувалося програмне забезпечення Design-Expert версії 119 (Stat-Ease Inc., Міннеаполіс, Міннесота, США). Аналіз даних проводили за допомогою одностороннього дисперсійного аналізу (ANOVA) з подальшим ретельним тестом Дункана з використанням SPSS 26.0(IBM Co., США);p<0.05 was="" considered="" statistically="" significant.="" pearson="" correlation="" analysis="" was="" conducted="" to="" investigate="" correlations="" between="" variables="" and="" their="" significance.="" all="" graphics="" were="" constructed="" using="" graphpad="" prism="" 7.0="" software="" (san="" diego,="" ca,="" usa).="" all="" experiments="" were="" conducted="" in="" triplicate="" and="" presented="" as="" mean="" values="" ±standard="" deviation="">
4. Висновки
RSM з BBD використовувався для встановлення оптимізованих параметрів для екстракції біоактивних сполук з марокканської лікарської трави E. fragilis. Оптимальна концентрація етанолу, температура екстракції та час екстракції були передбачені для максимуму
вихід фенольних сполук і показали 61,93 відсотка, 44,43 градуси С і 15,84 години відповідно. CEE, отриманий за оптимальних умов екстракції, і його різні фракції аналізували на вміст TP і TF, а також їхантиоксиданті антиглікаційну діяльність. Фракція EAF демонструє найвищий вміст TP і TF і найсильнішу антиоксидантну активність порівняно з іншими фракціями. Крім того, оцінка кількох біомаркерів, таких як спектр поглинання в УФ-виді, специфічна флуоресценція AGE, вміст карбонілу та група вільних тіолів, показала найбільший захисний ефект EAF проти глікації, опосередкованої глюкозою. Крім того, спостерігався значний позитивний зв'язок між антиоксидантною здатністю фенольних сполук та їх антиглікаційною активністю. Це вказує на те, що фенольні сполуки можуть бути основними переважаючими компонентами, відповідальними як за антиоксидантну, так і за антиглікаційну активність. Біологічно активні сполуки в EAF були охарактеризовані аналізом RP-HPLC, і було ідентифіковано шість сполук. Аналіз молекулярного докінгу in silico також продемонстрував ефективну взаємодію між кверцетином і галовою кислотою з BSA і RAGE як цільовими білками відповідно. У сукупності це дослідження свідчить про те, що E.fragilis може бути потенційним джерелом природних біологічно активних сполук із потужною антиоксидантною та антиглікаційною діяльністю, і його слід застосовувати для лікування та профілактики старіння та ускладнень, пов’язаних із глікацією. Необхідно провести подальші дослідження із виділення біологічно активних сполук і фармакологічного скринінгу (тобто дослідження цитотоксичності), щоб дослідити фітохімію та механізми дії фармакологічних властивостей E. fragilis.
Список літератури
1. Мартінс, Н.; Баррос, Л.; Сантос-Буелга, К.; Сільва, С.; Енрікес, М.; Ferreira, ICFR Відвар, настій та водно-спиртовий екстракт культивованого чебрецю: антиоксидантна та антибактеріальна активність, а також фенольна характеристика. Харчова хім. 2015, 167, 131–137. [CrossRef]
2. Діта, П.; Парічанон, П.; Trakunleewatthana, P.; Chanseetis, C.; Lertsiri, S. Антиоксидантні та антиглікаційні властивості тайських трав’яних чаїв у порівнянні зі звичайними чаями. Харчова хім. 2012, 133, 953–959. [CrossRef]
3. Яо, К.; Лян, Ю.; Шао, Ю.; Біан, В.; Фу, Х.; Сюй, Дж.; Суї, Л.; Яо, Б.; Li, M. Розширені концентрації кінцевого продукту глікації у фолікулярній рідині жінок, які проходять IVF/ICSI з протоколом агоністів GnRH. Репрод. Біомед. Онлайн 2018, 36, 20–25. [CrossRef] [PubMed]
4. Грімм С.; Отт, К.; Хьорлахер, М.; Вебер, Д.; Хен, А.; Грюн, Т. Утворення імунопротеасом, індуковане кінцевим продуктом гликації: залучення RAGE та Jak2/STAT1. Біохім. J. 2012, 448, 127–139. [CrossRef]
5. Мінетчі, П.; Пурушотхаман, А.; Maneemegalai, S. Антиоксидантні, антиглікаційні та інсулінотрофні властивості Coccinia Grandis (L.) in Vitro: можлива роль у профілактиці діабетичних ускладнень. Ж. Традит. Доповнюють. Мед. 2017, 7, 54–64. [CrossRef] [PubMed]
6. Накагава, Т.; Йокодзава, Т.; Терасава, К.; Шу, С.; Juneja, LR Захисна активність зеленого чаю проти вільних радикалів і опосередкованого глюкозою пошкодження білка. Дж. Агрік. Харчова хім. 2002, 50, 2418–2422. [CrossRef] [PubMed]