Частина Ⅱ: Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche Tubulosa індукують апоптоз клітин гепатоцелюлярної карциноми мітохондріально-залежним і MAPK-шляхом і підсилюють протипухлинну дію завдяки комбінації з цисплатином

Контакт: Одрі Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com

Ми додатково оцінили імуностимулюючий ефект CTPG (Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche Tubulosa) на мишах. Після внутрішньовенної ін’єкції, підшкірної ін’єкції та внутрішньовенного введення CTPG (200 і 400 мг/кг) не спостерігалося істотних змін у стані мишей порівняно з групою, яка не отримувала лікування. Маса тіла мишей також не мала істотної різниці між групами, які отримували CTPG, і групами, які не отримували лікування (Фігура 7A). Індекси серця, печінки, селезінки, легенів, нирок і тимуса мишей були подібними серед усіх груп, за винятком індексів селезінки мишей у групі внутрішньовенної ін’єкції 400 мг/кг CTPG (табл. 1). Результати показали, що вибрані дози CTPG не мали побічних ефектів у мишей. Селезінка є важливим органом імунного захисту ссавців, і її розвиток безпосередньо впливає на імунну функцію і здатність людини протистояти хворобам. Індекс імунних органів відображає розвиток і імунну функцію імунних органів. Селезінка містить різноманітні імунні клітини, включаючи Т-клітини, В-клітини, природні клітини-кілери (NK-клітини), макрофаги, дендритні клітини (DC) та інші, які відіграють важливу роль в імунній системі.30 Повідомлялося що полісахариди можуть збільшити кількість імунних клітин для посилення організмуімунітет.31 Оскільки внутрішньовенне введення CTPG значно збільшило індекс селезінки (збільшення в 0.55 разів), ми додатково проаналізували кількість різних імунних клітин у селезінці. Результати показали, що внутрішньовенне введення CTPG значно збільшило кількість Т-клітин (CD3 плюс CD19-клітини) (збільшення в 0.49 разів), В-клітин (CD3-CD19 плюс клітини) (збільшення 0 .49 разів) і NK-клітин (CD3-CD19-CD49b плюс клітини) (збільшення в 1,63 рази) порівняно з групою без лікування. CD4 плюс і CD8 плюс Т-клітини, як основні підтипи Т-клітин, відіграють важливу роль в антиген-специфічній клітинній імунній відповіді.32 Тому ми додатково проаналізували кількість і статус активації CD4 плюс і CD8 плюс Т-клітин у селезінка. Результати показали, що внутрішньовенне введення CTPG не тільки значно збільшило кількість CD4 плюс і CD8 плюс Т-клітин (збільшення в 0.55 і 0.34 разів відповідно), але також посилило стан активації CD4 плюс Т-клітини (CD4 плюс CD44 плюс клітини) (збільшення в 0.84 рази) (Малюнок 7B), ці результати свідчать про те, що CTPG мав функцію посилення імунітету.

Комбінація CTPG(Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche Tubulosa) і цисплатин продемонстрували сильний протипухлинний ефект на мишачій моделі пухлини H22

Загальновизнано, що хіміотерапія або променева терапія можуть призвести до поганого прогнозу та викликати численні побічні ефекти, які можуть бути спричинені пригніченням імунної системи та пошкодженням нормальних тканин і органів. Полісахариди з TCM мають ефект посилення імунітету та полегшують пошкодження імунних органів та імунних клітин, викликане хіміотерапією, наприклад, хітозан33 і полісахариди Lycium barbarum.34 Наведені вище результати показали, що CTPG(Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche Tubulosa) може зменшити побічні ефекти цисплатину на імунну систему. Таким чином, протипухлинну дію CTPG у поєднанні з цисплатином оцінювали на мишачій моделі пухлини H22. Як показано на малюнку 8A, лише CTPG, окремо цисплатин і комбінація CTPG і цисплатину (CTPG плюс цисплатин) значно пригнічували ріст пухлини H22 порівняно з контрольною групою. CTPG плюс цисплатин показали сильніший інгібуючий ефект, ніж CTPG і цисплатин окремо. На 20-й день об’єм пухлини в контрольній групі, яка отримувала лише цисплатин, лише CTPG і CTPG плюс цис-платин, становив приблизно 1707,8, 722,5, 1033,8 і 367,5 мм3 відповідно. Того ж дня пухлини збирали для візуального спостереження (Фіг. 8B) і порівняння ваги (Фіг. 8C). CTPG плюс цисплатин показали кращі терапевтичні ефекти на моделі миші з пухлиною H22, ніж CTPG або цисплатин окремо. Маса пухлини в групі CTPG плюс цисплатин була нижчою, ніж в інших групах. Ці результати свідчать про те, що протипухлинна активність CTPG і цисплатину призводить до синергічного ефекту.

Масу тіла мишей вимірювали, щоб відобразити стан здоров'я мишей. Маса тіла помітно зменшилася після лікування цисплатином, що свідчить про серйозну системну токсичність, спричинену цисплатином.35 Для порівняння, CTPG у поєднанні з цисплатином значно полегшує втрату маси тіла, спричинену цисплатином, тоді як CTPG(Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche Tubulosa) сам по собі не мав істотного впливу на масу тіла мишей (Рис. 8D). Органи, включаючи селезінку, серце, печінку, легені, нирки та тимус, також були виділені для розрахунку індексів органів. Порівняно з нелікованою групою індекси селезінки були значно знижені та збільшені цисплатином та CTPG відповідно. CTPG плюс цисплатин відновив індекси селезінки порівняно з монотерапією цисплатином. Індекси інших органів не показали істотної різниці між усіма групами (табл. 2). CTPG(Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche Tubulosa) У поєднанні з цисплатином покращуєІмунітетпухлинних мишей.

Наведені вище результати показали, що CTPG(Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche Tubulosa) зміцнили імунітетмишей і інгібував апоптоз спленоцитів, індукований цисплатином. Ми далі досліджували, чи корелює протипухлинний ефект CTPG плюс цисплатин з посиленням імунітету. У процесі виникнення та розвитку пухлини імунна система організму відіграє важливу функцію імунного нагляду, а Т-клітинний клітинний імунітет відіграє ключову роль. CD4 плюс Т-клітини виконують функцію підтримки клітинного імунітету та гуморальної імунної відповіді, а CD8 плюс Т-клітини є основними ефекторними клітинами імунної відповіді, які можуть спеціально вбивати клітини-мішені та відіграють важливу роль у імунітеті проти пухлин і противірусному імунітеті.32 Селезінки мишей із пухлинами були зібрані для визначення кількості Т-клітин і В-клітин за допомогою проточної цитометрії. Частота та кількість Т-клітин, включаючи CD4 плюс і CD8 плюс Т-клітини, у групі CTPG плюс цисплатин були значно вищими, ніж у контрольній групі (збільшення в 0.55 і 0.7 разів відповідно) і групи цисплатину (збільшення 0.92 і 1,16 рази відповідно) (рис. 9A і B). Порівняно з контрольною групою, лише CTPG також частково збільшило кількість Т-клітин CD4 plus і CD8 plus, хоча істотної різниці не було. Частота та кількість В-клітин не мали істотної різниці між усіма групами.

Супресорні клітини мієлоїдного походження (MDSC) і регуляторні Т-клітини (Treg) розмножуються в пухлинах і пригнічують протипухлинні імунні відповіді; вони пригнічують активацію та експансію Т-клітин CD4 плюс, функцію ефекторних Т-клітин, активацію та/або проліферацію та утворення цитокінів CD4 плюс і CD8 плюс Т-клітин, проліферацію В-клітин і виробництво імуноглобуліну та перемикач класів, цитотоксичні функції NK і природних Т-клітин-кілерів (NKT), а також функцію та дозрівання DC.36-38 Частоти та кількість MDSC (CD11b плюс Gr-1 плюс ), макрофагів (CD11b плюс Gr -1−) і Tregs (природні Tregs: CD4 плюс CD25 плюс Foxp3 plus ; індуковані Tregs: CD4 плюс CD25−Foxp3 plus ) у селезінках пухлинних мишей аналізували за допомогою проточної цитометрії. Порівняно з контрольною групою частота та кількість MDSC значно зменшилася після ін’єкції цисплатину окремо (зменшення в 1,56 раза) або в комбінації з CTPG.(Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche Tubulosa) (зменшено в 0,62 рази). Кількість макрофагів CD11b плюс Gr-1− також значно зменшилася, хоча суттєвих змін у їх частотах не було (рис. 9C). Крім того, КТПГ(Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche Tubulosa) окремо та лікування CTPG плюс цисплатин значно знизили частоту індукованих Tregs (зменшилися в {{0}}. 33 та 0,37 рази відповідно) (Малюнок 9D). Ці результати свідчать про те, що протипухлинний ефект CTPG плюс цисплатин може корелювати з посиленням імунітету, що характеризується збільшенням кількості Т-клітин і зниженням числа MDSC і Tregs.