Контакт: Одрі Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com

Натисніть тут, щоб перейти до частини 1

3. Наночастинки та наномедицина

Використання нанорозмірних частинок у медицині, особливо як носіїв терапевтичних засобів, має великий потенціал для лікування багатьох захворювань завдяки їхнім багатьом сприятливим властивостям, таким як розмір, форма та морфологія поверхні [56]. Крім того, нанотехнології дозволяють навмисно змінювати дизайн, надаючи можливість контролювати їхні властивості [37]. Така пластичність наночастинок (НЧ) дозволяє приєднувати різні біомолекули, таким чином забезпечуючи ефективне та безпечне транспортування фармакологічно активних агентів, таких як гени чи ліки. Засоби доставки NP розміром 1–100 нм мають здатність проникати через значні фізіологічні бар’єри, такі як ті, що знаходяться в легенях, печінці, шлунково-кишковій рідині, крові, судинній системі пухлини, слизових оболонках і гематоенцефалічному бар’єрі [57–59]. . У цьому відношенні використовувалися різні НП, кожен з яких представляв свої унікальні характеристики як терапевтичний, діагностичний або тераностичний інструмент. Здатність кон'югувати терапевтичні нуклеїнові кислоти та ліки з наночастинками відкрила шляхи для цільово-специфічнихнаномедицина. Крім медицини, НЧ можуть використовуватися в косметиці, упаковці, електроніці та біотехнологіях. NPS можна класифікувати як органічні, вуглецеві або неорганічні.

нейропротекторний ефект екстракту цистанхи

Біосумісність залежить від фізико-хімічних властивостей NPS, причому кожен NP демонструє відмінні властивості. Модифікація наночастинок полімерами та націлюючими лігандами може підвищити афінність зв’язування з геном або лікарським засобом, що кон’югується [60], на додаток до клітинно-специфічного поглинання. Благородні метали, золото (Au), срібло (Ag), платина (Pt) і паладій (Pd), широко використовуються через їх сприятливі фізико-хімічні, біологічні та оптичні властивості [58,61]. Фізико-хімічні властивості AuNP легко налаштовуються для клінічного застосування [62]. Вони продемонстрували багатообіцяючі результати при різних захворюваннях, включаючи віспу, рак, сифіліс, СНІД і виразки шкіри [63], а також використовувалися для виявлення індукованих іонами міді агрегованих пептидів А [64]. AgNPs мають антимікробні та противірусні властивості, які використовувалися як попередня обробка ранових інфекцій [65]. Використання немодифікованих AgNP як транспортних засобів перешкоджає їх схильності до агрегації та збільшення розміру [66]. Pd частіше використовується в стоматології, де він входить до складу електрообладнання [61,67]. Біметалічні Au-Pd NPS, модифіковані кверцетином, були вивчені як можливі індуктори аутофагії вхвороба Альцгеймеразахворювання[68]. Pt є хорошим антиоксидантом для зменшення вільних радикалів [58] і входить до складу протипухлинних препаратів цисплатину та оксаліплатину, які повідомляють про певну нейротоксичність [69].

Cistanche phelypaes: запобігаєхвороба Альцгеймера

Селен (Se), важливий мікроелемент, необхідний усім організмам для різноманітних біологічних функцій, причому, як повідомляється, додавання Se знижує частоту серцево-судинних захворювань, остеоартриту, діабету 2 типу танейродегенеративнийхворобитаких як AD [70,71]. НЧ Se володіють сприятливими властивостями, включаючи протипухлинні та антиоксидантні властивості Se, водночас демонструючи нижчу цитотоксичність, кращу біодоступність, біосумісність та здатність до біодеградації in vivo [71,72]. Завдяки їхньому потенційному синергічному ефекту з терапевтичним геном або препаратом ці НЧ стають все більш популярними. Застосування наночастинок мезопористого кремнезему (MSN) як нанотранспортних засобів набуло значного імпульсу завдяки їхнім пористим структурам, які пропонують як внутрішню, так і зовнішню збільшену площу поверхні для терапевтичного вантажу [73,74]. Така пориста природа MSNs дозволяє можливу комбіновану доставку терапевтичних генів і ліків, що може покращити біологічну активність [75]. Інкапсульовані кверцетином кремнієві наночастинки продемонстрували потенціал проти індукованого Cu окислювального стресу, що спостерігається внейродегенеративнийхвороби [76]

Оксиди заліза, які зазвичай називають магнітними НЧ (МНЧ), включаючи маггеміт, магнетити та ферити, були широко вивчені внаномедициназавдяки їх низькій цитотоксичності, здатності до біодеградації, стабільності, намагніченості, біосумісності, низькій чутливості до окислення та реактивних поверхонь, неканцерогенності та легкості синтезу та модифікації [77]. Цільова доставка MNP може бути досягнута процесом магніторецепції, який використовує зовнішнє магнітне поле для керування їх доставкою. Їх застосування було розширено до магнітної гіпертермії, магнітно-резонансної томографії (МРТ) і систем доставки [78,79]. Однак немодифіковані MNP є гідрофобними і можуть агрегувати та генерувати активні форми кисню, що обмежує їхню ефективність in vivo [80].

Квантові точки (КТ) мають унікальні оптичні властивості, але через свій склад, який часто включає такі метали, як кадмій і цинк, вони, як правило, токсичні. Цю проблему можна подолати за допомогою модифікованих КТ ядро-оболонка або КТ з покриттям [75]. Вуглецеві нанотрубки, як одностінні, так і багатошарові, можуть легко проникати в клітини. Однак без внутрішньої чи зовнішньої функціональності вони є нерозчинними, цитотоксичними, гідрофобними та імуногенними [81]. Використання полімерних систем доставки еволюціонувало протягом багатьох років, причому перевагу надають катіонним полімерам через їх здатність зв’язувати аніонні молекули, такі як нуклеїнові кислоти. Крім того, вибрані полімери повинні бути біосумісними, біорозкладаними та стабільними in vivo [75]. Таким чином, полімери, такі як дендримери, були популярними завдяки багатьом катіонним групам. Надалі їх використовували як відповідні стабілізатори металевих НЧ, таких як AuNP [82,83]. Полі (молочна спільно гліколева кислота), полімер, схвалений Управлінням з харчових продуктів і медикаментів (FDA), продемонстрував хороші властивості для використання в доставці ліків у поєднанні з Au [84], тоді як його пегільовані похідні були досліджені в AD [84]. 85]. З НЧ на основі ліпідів ліпосоми зазвичай використовуються для доставки біологічно активних сполук, причому деякі позитивні результати відзначені на тваринних моделях AD [86,87].

Загалом, неорганічні наночастинки в більшості випадків мають перевагу над своїми органічними аналогами, особливо щодо простоти синтезу та підходів до функціоналізації, розміру, стабільності та їх тераностичного потенціалу. Усі згадані вище НП показали потенціал унаномедицинаі може поширюватися на неврологічні розлади, такі як AD і PD. Загалом, для того, щоб ці наносистеми були придатними, необхідно звернути увагу на заздалегідь визначені властивості NP і встановити пріоритети [88], як показано на малюнку 3.

Користь для здоров’я cistanche: Запобігтинейродегенеративнийхвороби

3.1. Проблеми, що постають перед наночастинками

Використання NPS не обходиться без проблем, особливо якщо розглядати їх використання як терапевтичних засобів доставки длянейродегенеративнийхвороби. Крім ГЕБ, який є найбільшою перешкодою для терапії, нейротоксичність через наносистеми доставки також викликає занепокоєння щодо безпеки [89]. Ця нейротоксичність зазвичай відзначається утворенням окислювального стресу і переважно залежить від морфології, розміру, площі поверхні, розчинності, концентрації, а також тривалості та режиму нанотерапевтичного введення [90]. Хоча деякі метали відіграють ключову роль в організмі людини, накопичення та агрегація металевих НЧ може бути причиною для занепокоєння. Використовуючи нейронну модель клітин PC12, раніше повідомлялося, що НЧ заліза викликають значну цитотоксичність [91], тоді як НЧ марганцю та Cu створюють активні форми кисню [92]. Застосування наночастинок оксиду цинку індукувало апоптоз у нервових стовбурових клітинах [93], тоді як пероральне введення наночастинок Ag було токсичним і накопичувалося в нирках, печінці та мозку щурів Sprague Dawley [94]. Крім того, введення наночастинок оксиду заліза мишачим моделям викликало окислювальний стрес, нейродегенерацію [95], залежний від клітинного циклу апоптоз нейронів [96] і нейроповедінкову токсичність [97].

Незважаючи на ці проблеми, фізико-хімічні властивості НЧ, як згадувалося раніше, роблять їх привабливими кандидатами внаномедицина. Щоб подолати деякі з цих проблем, склади НП повинні включати біосумісні матеріали, які також піддаються біологічному розкладанню та легко виводяться з організму [98]. Їхня здатність перетинати BBB докладніше описана в розділі 3.2. Крім того, підтверджена токсичність часто залежить від типу використовуваного НЧ, причому функціоналізація поверхні є шляхом вперед у зменшенні несприятливих ефектів і взаємодій. Отже, не існує «одного розміру для всіх» щодо вибору НП та його застосування. Важливо визначити переваги та недоліки, пов’язані з використанням головним чином металів і неметалевих носіїв, маючи на увазі, що багато металів потрібні в організмі, як згадувалося раніше. Отже, використовувана концентрація буде критичною для підтримки гомеостатичної рівноваги. Використання цільових підходів у лікуванні AD і PD буде мати вирішальне значення, оскільки клітинно-специфічне націлювання є важливим для лікування пошкоджених або мутованих генів, одночасно зберігаючи цілісність нормально функціонуючих генів і клітин. Однак очевидно, що при розробці терапевтичних засобів для ЦНС необхідне більш глибоке дослідження NPS. В даний час існує дефіцит інформації про нейротоксичність НП, що свідчить про нагальну потребу в подальших дослідженнях як in vitro, так і in vivo, щоб створити основу для розробки майбутніх досліджень. Використання новітніх технологій, особливо в силіконових дослідженнях, комп’ютерне та математичне моделювання, разом із більшими знаннями в біоінформатиці, може допомогти у вирішенні викликів, з якими стикаютьсянаномедицинау формулюванні ідеального НП.

екстракт цистанки пустерної

3.2. Перетин гематоенцефалічного бар'єру

Гематоенцефалічний бар’єр (ГЕБ) — це динамічна межа, яка виконує роль самозахисту, регулюючи транспортування біомолекул із крові в мозок, одночасно перешкоджаючи проникненню токсичних хімічних речовин і більших ліків. Хоча ця роль дуже корисна, вона служить перешкодою для сучасної терапії. ГЕБ, спеціалізована частина судинної системи, складається з базальної пластинки, що містить білки позаклітинного матриксу (ламінін, гепарансульфат або колаген), а також ендотеліальні клітини, перицити, кінцеві лапки астроцитів і інтернейрони [99]. Відомо, що судинні, нейрональні та гліальні клітини взаємодіють, утворюючи клітинну мережу, яку відповідно називають нервово-судинною одиницею, яка бере участь у підтримці тканинного гомеостазу [100]. ГЕБ є найбільшим бар'єром у ЦНС і має площу поверхні 20 м2. Він вважається критичним місцем для обміну молекул між кров’ю та ЦНС [101]. Оскільки NPS невеликі (переважно<200 nm)="" molecules,="" they="" have="" the="" advantage="" of="" being="" able="" to="" traverse="" this="" bbb.="" apart="" from="" size,="" properties="" such="" as="" charge,="" especially="" a="" positive="" charge,="" suitable="" surface="" functionalizations,="" the="" addition="" of="" targeting="" ligands="" such="" as="" cell-penetrating="" peptides="" and="" polyethylene="" glycol="" for="" improved="" circulation="" time="" in="" vivo="" imbue="" nps="" with="" the="" capacity="" to="" successfully="" cross="" the="" bbb="" [99].="" it="" has="" been="" observed="" that="" molecules="" penetrate="" the="" brain="" via="" the="" carrier-mediated="" transporter="" (cmt)="" (figure="" 4),="" which="" includes="" the="" glucose="" transporter="" (glut1),="" adenosine="" transporters="" (cnt2),="" large="" neutral="" amino-acid="" transporters="" (lat1),="" and="" monocarboxylic="" acid="" (mct1)="" [8].="" drug="" delivery="" of="" chemo-nanotherapeutics="" in="" the="" treatment="" of="" brain="" diseases="" portrayed="" the="" use="" of="" circulating="" cells,="" such="" as="" exosomes,="" erythrocytes,="" neutrophils,="" and="" leukocytes,="" which="" possess="" the="" ability="" to="" spontaneously="" cross="" the="" bbb="">

Малюнок 4. Загальні механізми для проходу через BBB. (A) Транспортер, опосередкований носієм, (B) трансцитоз, опосередкований рецептором, і (C) трансцитоз, опосередкований адсорбцією.

Інші шляхи проникнення можна побачити в рецептор-опосередкованому трансцитозі (RMT) і адсорбційно-опосередкованому трансцитозі (AMT) (рис. 4) [103]. Перша транспортна система покладається на здатність наночастинок модифікуватися для володіння лігандами, які забезпечують ефективне зв’язування з рецепторами, присутніми в BBB. Ліганди можуть бути спрямовані на такі мішені, як транспортери GLUT1 або альбуміну [104], рецептори лактоферину (Lf), LRP1) [105] або рецептори трансферину (TfR) (з використанням ліганду трансферину) [106]. Було виявлено, що TfR іноді надмірно експресується в нейронах [107] і клітинах гліоми [108]. Однак рівень трансферину в мозку з віком знижується, і спостерігається різке зниженнянейродегенеративнийзахворювання, такі як AD або PD [109]. Однак TfR дійсно пропонує великі перспективи в доставці терапевтичних агентів через гематоенцефалічний бар’єр до мозку [110]. Таким чином, RMT використовує роль поверхнево-мічених наноносіїв для ефективного проникнення нанокомплексів у мозок. Однак вибір і концентрація приєднаного ліганду будуть обмежуючими факторами, які визначатимуть успіх ендоцитозу. Золоті наносфери [111] і золоті нанозірки, кон'юговані з пептидом, що проникає в клітину, продемонстрували здатність перетинати BBB [112].

Однак AMT має дещо інший механізм дії, оскільки він використовує електростатичну взаємодію між негативно зарядженими BBB і позитивно зарядженими НЧ [91]. Повідомлялося, що аглютинін зародків пшениці, прикрашений золотом, поглинався нервовими закінченнями і ретроградно транспортувався аксонами до ЦНС [113]. Всі ці транспортери-носії сприяють послабленню поверхнево-активних речовин BBB, тим самим порушуючи з’єднання ендотеліальних клітин і надаючи NPS проникнення в мозок. Дослідження на моделях мишей показали відсутність пошкодження мозку [114,115]. Однак було зазначено, що вибір моделі хвороби in vivo для тестування здатності НЧ долати ГЕБ є вирішальним, оскільки проникність ГЕБ може відрізнятися у різних гризунів і людей [99]. Великі дослідження транспортних молекул дозволяють дослідникам створювати терапевтичні засоби, які можуть використовувати природні фізіологічні бар’єри для безпечної та ефективної доставки фармакологічно активних речовин у мозок. Оптимальними параметрами для проходження нанокомпозиту через ГЕБ було запропоновано низьку молекулярну масу (<400 da),="" a="" suitable="" charge,="" log="" p="" <="" 2,="" non-ionization,="" the="" presence="" of="" hydrogen="" bonds="" (8–10),="" and="" lipophilicity="">

Окрім використання наночастинок у доставці ліків, які продемонстрували деяку нестабільність in vivo та імунні реакції через внутрішньовенне введення наносистеми, можна розглянути використання генної терапії з використанням носіїв наночастинок.

Екстракт цистанки туболозної: проти хвороби Паркінсона

3.3. Генна терапія

Ідея генної терапії сягає 1960-х років і полягає в лікуванні або профілактиці захворювання або генетичного розладу за допомогою терапевтичних нуклеїнових кислот [116]. Незважаючи на високі показники трансфекції, отримані за допомогою засобів доставки вірусів, недоліки, пов’язані з низькою ємністю навантаження, великомасштабним виробництвом, розміром гена, який він може нести, і факторами безпеки потенційної онкогенності та імуногенності спонукали до розробки невірусних методів. . Невірусні системи доставки генів мають більшу здатність націлюватися на клітини/тканини, значно знижену онкогенну та імуногенну природу, підвищену ефективність препарату за низькою ціною, відсутність обмежень щодо розміру генетичного вантажу та здатність до структурних маніпуляцій [117]. ]. З невірусних транспортних засобів катіонні полімери та конструкції на основі ліпідів, особливо катіонні ліпосоми, були найбільш вивченими на сьогоднішній день, з використанням неорганічних наночастинок, які зараз набирають обертів.

NPS може долати як внутрішньоклітинні, так і позаклітинні бар’єри, які перешкоджають доставці генів. Ці бар’єри включають ядерне поглинання, уникнення кліренсу ретикулоендотеліальною системою (RES), ендосомальний і лізосомальний вихід, захист генетичного вантажу від деградації, вивільнення нуклеїнової кислоти та націлювання на певні клітини [118]. Завдяки неорганічним наночастинкам, що відображають більше співвідношення площі поверхні до об’єму з регульованими магнітними, оптичними та біологічними властивостями, їх можна сконструювати для доставки генів з підвищеною ефективністю шляхом зміни форми, хімічного складу та розміру. Ідеальний транспортний засіб для доставки генів повинен володіти такими властивостями, як здатність руйнувати ендосомальну мембрану, перетинати плазматичну мембрану, зв’язувати, конденсувати та захищати вантаж нуклеїнової кислоти, забезпечувати доставку до мішені, мати стабільність у циркуляції та бути здатним ухиляються від імунної системи [118,119].

Широкі дослідження патогенетичних механізмівнейродегенеративнийрозладів призвело до виявлення специфічних генетичних дефектів, пов’язаних з прогресуванням захворювань. Генна терапія дозволяє доставляти геномний вантаж, який включає мікроРНК (міРНК), малу інтерферуючу РНК (міРНК), направляючу РНК (гРНК) і месенджерну РНК (мРНК). Дослідження продемонстрували успіх у стратегіях глушіння генів за допомогою РНК-інтерференції (RNAi), яка використовує siRNA, miRNA та piwi-взаємодіючу РНК для зменшення синтезу цільових молекул мРНК [120]. Коли синтетичні дволанцюгові siRNAs (розміром 21–25 нуклеотидів) трансфікуються в клітини ссавців, вони націлюються на специфічні послідовності мРНК з високим ступенем специфічності, що призводить до мовчання генів [75]. Революція RNAi відкрила новий шлях для терапевтичного втручання в широкий спектр розладів, від раку донейродегенеративнийхвороби [75,121]. Загалом, успішне застосування siRNA-опосередкованого глушіння генів у медицині вимагатиме відповідного засобу доставки, переважно наноносій, який забезпечить безпечну та ефективну доставку siRNA. Редагування геному нещодавно було впроваджено в генну терапію, і це є технікою, яка може безпосередньо націлювати аномальні генетичні зміни на хворі місця [122].

Потенційною мішенню в генній терапії є аномальне накопичення неправильно згорнутих білків, таких як амілоїдні -олігомери та -синуклеїн (рис. 1), які викликають пов'язану з ендоплазматичним ретикулумом (ER) деградацію та ER-стрес [123]. Агрегація цих білків у просвіті ER, як наслідок, спричиняє дестабілізацію кальцієвого гомеостазу ER і спотворення сигналізації розгорнутої білкової відповіді (UPR), що призводить до загибелі нейронів через проапоптотичні відповіді [124,125]. Це можна подолати шляхом націлювання на передачу сигналів UPR для посилення згортання білка, як це видно, коли лікування хвороби Паркінсона проводилося шляхом націлювання на зниження апоптозу дофамінергічних нейронів і покращення рухової активності, тим самим сповільнюючи прогресування захворювання. Це було дозволено за допомогою генної терапії, яка включала націлювання на надмірну експресію гена BiP (білок, що регулюється глюкозою 78), який пов’язаний зі зниженням реакції розгорнутого білка [126]. Отже, стратегії придушення генів можуть бути успішними в таких випадках.

Крім того, мітохондріальна респіраторна дисфункція була відзначена при таких захворюваннях, як хвороба Хантінгтона (ХГ), AD, PD та ALS, що призводить до обмеженої регуляції якості мітохондрій, виснаження НАД плюс, окисного пошкодження, агрегації білків, порушення синтезу АТФ та незбалансованих мітохондрій. гомеостаз кальцію [127–129]. Було виявлено, що генна терапія долає це явище шляхом або інгібування пошкодження мітохондрій, або сприяння мітохондріальному біогенезу. Альтернативно, нейротоксичність при експериментальному HD і PD може регулюватися надмірною експресією регуляторів мітохондріального окисного стресу та динаміки, включаючи PGC-1, HSP70, TFEB [130,131].

Інші механізми патогенезу спостерігаються в аномальній передачі сигналів рапаміцину (mTOR) при PD, AD і HD разом з епігенетичною дисрегуляцією, аутофагією та дисфункцією мікроглії та астроцитів [132]. Кожен механізм демонструє унікальні режими дисфункції внаслідок прогресування захворювання, і тому важливо розуміти, який механізм задіяний у пацієнта з цими захворюваннями, щоб призначити відповідне лікування з максимальною ефективністю. Крім того, генна терапія довела свою ефективність при різних інших захворюваннях. Тому він є великим суперникомнейродегенеративнийтерапії після дослідження генетичних аберацій у пацієнтів із ХП та АД.

У таблиці 3 висвітлено кілька НЧ, які використовувалися для генної терапії ЦНС з 2017 по 2020 рр. Успіх таких експериментів розширив знання пронаномедицинавнейродегенеративнийрозлади, сприяючи специфічному націлюванню на причинні гени або агреговані білки. Стратегії генної терапії, що здійснюються за допомогою векторів наночастинок, є привабливою альтернативою, оскільки вони потенційно можуть задовольнити багато вимог щодо безпечної та ефективної доставки через біологічні бар’єри, особливо через гематоенцефалічний бар’єр. Окрім переваг генної терапії, біологічний синтез наночастинок має власний набір переваг щодо використання специфічних екстрактів [133], які можуть працювати синергетично з терапевтичним геном.

3.4. Наномедицина в клінічних випробуваннях — оновлення

Було проведено декілька клінічних випробувань із застосуванням препаратів як інгібіторів секретази та терапевтичних антитіл при AD, лише деякі з них були завершені, а більшість припинено [8]. Цікаво, що з 2003 року в усьому світі не було розроблено нових ліків для лікування AD [138]. Це також було очевидно під час нещодавнього пошуку в бібліотеці NIH, де лише два дослідження стосувалися доставки НП. Один під назвою «Оцінка безпеки, переносимості та ефективності інтраназальних наночастинок APH-1105, нового модулятора альфа-секретази для легкого та помірного когнітивного порушення внаслідокхвороба Альцгеймеразахворювання" має розпочатися лише у 2023 році. Друге випробування, "Фаза 2, пілотне відкрите, послідовне групове сліпе дослідження магнітно-резонансної спектроскопії (31P-MRS) для оцінки впливу CNM-Au8 на біоенергетичне покращення порушення окисно-відновного стану нейронівхвороба Паркінсоназахворювання", розпочався в грудні 2019 року та мав бути завершений у липні 2021 року [139]. У цьому дослідженні використовувалися нанокристали золота. Хоча нанокристали золота нещодавно були схвалені для лікування розсіяного склерозу [140], очікуються оновлення поточного дослідження. Позитивно Результати можуть лише спонукати до використання НП у майбутніх дослідженнях.

цистанка трубчаста

4. Висновки

Наномедицинапостає як високоефективний інструмент для подолання бар’єрів, які все ще кидають виклик традиційній медицині. Поєднаннянаномедицинаі генна терапія може бути використана для більшої терапевтичної користі. У цьому огляді висвітлено деякі гени, залучені до прогресування хвороби ХП і БА, які можуть відкрити перспективу досліджень генної терапії. Краще розуміння причин генетичних аберацій і того, як вони призводять до нейродегенерації, може призвести до індивідуальної терапії у відповідь на конкретний тип мутації, представлений індивідом. Хоча лікування може бути не миттєвим, такі дослідницькі дослідження формують сходинки для остаточного створення стратегії лікування, яка одного разу викорінить хвороби, пов’язані з пошкодженням нейронів, і допоможе мільйонам пацієнтів у всьому світі жити нормальним і здоровим життям. Поєднаннянаномедицинаі нейронаука потенційно може надати нові рішення для багатьох розладів, пов’язаних з ЦНС, включаючи AD і PD. Масив доступних наночастинок потребує суворого тестування на токсичність і стабільність і повинен бути оптимізований для доставки генів або ліків до ЦНС.

Авторські внески:Концептуалізація, KJ і MS; програмне забезпечення, KJ і MS; валідація, MS; ресурси, MS; курація даних, КДж; написання—підготовка оригіналу, КДж; написання—перегляд і редагування, MS; супервізія, МС; адміністрування проекту, MS; придбання фінансування, MS Усі автори прочитали та погодилися з опублікованою версією рукопису.

Фінансування:Дослідження в цій галузі фінансувалися Національним дослідницьким фондом Південної Африки, номери грантів 120455 і 129263.

Заява інституційної ревізійної ради:Не застосовується.

Заява про інформовану згоду:Не застосовується.

Заява про доступність даних:Не застосовується.

Конфлікт інтересів:Автори заявляють про відсутність конфлікту інтересів.