Монотерпенові компоненти з Cistanche Tubulosa — хімічні структури канканозидів A—E і канканолу—

Цистанка трубчаста (SЧРЕНК) R. WНІЧ(Orobanchaceae) — багаторічна рослина-паразит, що росте на кореняхСальвадораабоКалотропісвид і поширений у Північній Африці, Аравії та країнах Азії.1) Стебла цієї рослини (японською мовою Kanka-nikujuyou) традиційно використовувалися для лікування імпотенції, безпліддя, люмбаго та слабкості організму.2) Раніше кілька іридоїдів, монотерпеноїдів,фенілетаноїди, а лігнани були виділені з Китаю та ПакистануС. трубочка. 1,3–7) У ході наших серійних досліджень біологічно активних компонентів китайських природних ліків,8–18) чотири нових іридоїдних глікозиди, канканозиди А (1), B (2), C (3), і D (4), хлорований іридоїд канканол (5), а також ациклічний монотерпеновий глікозид канканозид Е (6), були виділені з метанольного екстракту цього фітопрепарату разом із 16 відомими сполуками, включаючи 12 монотерпенів (7-18). Ця стаття стосується виділення та з’ясування структури нових монотерпенових компонентів (1-6). 

НАТУРАЛЬНА ЦИСТАНКЕ ТУБУЛОЗА ДЛЯ ПОКРАЩЕННЯ СТАТЕВОЇ ФУНКЦІЇ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Метанольний екстракт висушених стебел C. tubulosa (26,8% від цього фітопрепарату) піддавали нормальнофазовій та оберненофазовій колонковій хроматографії на силікагелі та повторній ВЕРХ, щоб отримати канканозиди A (1, 0.{{7} }{{10}}54%), B (2, 0.030%), C (3, 0.{ {32}}027%) і D (4, {{40}}.0015%), канканол (5, {{57 }}.0034%) і канканозид Е (6, 0.027%) разом із мусаєнозидовою кислотою19) (7, 0 .020%), геніпозидова кислота19) (8, 0,030%), 8-епілоганова кислота7) (9, 0,033%), глурозид19) (10, 0,14%), антиририд20) (11, 0,0079) %), аджугол19) (12, 0,011%), барциозид19) (13, 0,21%), 6-дезоксикаталпол19) (14, 0,11%), аргіол21) (15, 0,0030%), цистанін22,23) (16 , 0,0040%), цистахлорин22) (17, 0,0035%), (2E,6Z)-8-bD-глюкопіранозилокси-2,6-диметил-2,6- октадієнова кислота24) (18, 0,0028%), Dманітол25) (4,19%), уридин25) (0,0069%), (3R)-3-гідрокси-2- піролідинон26,27) (0,0020%) та (3R )-3-гідрокси-1-метил- 2-піролідинон27) (0,0059%).

Структура канканозиду А (1)

Канканозид A (1) був отриманий у вигляді аморфного порошку з негативним оптичним обертанням ([a]D 25 - 107.4 градуси в MeOH). ІЧ-спектр 1 показав смугу поглинання при 1647 см- 1, яку можна віднести до функції олефіну, на додаток до сильних смуг поглинання при 3410 і 1076 см- 1, що вказує на наявність глікозидної частини. Під час бомбардування позитивними та негативними іонами швидкими атомами (FAB)-MS 1 піки квазімолекулярних іонів спостерігалися при m/z 369

(M Na) і 345 (M-H)-, а також FAB-MS-аналіз з високою роздільною здатністю показав, що молекулярна формула 1 є C16H26O8. Кислотний гідроліз 1 за допомогою 1.0 М соляної кислоти (HCl) вивільнив D-глюкозу, яку ідентифікували за допомогою ВЕРХ-аналізу з використанням оптичного детектора обертання.8,10-12,15-18) 1 H-(CD3OD, таблиця 1) і 13C-ЯМР (таблиця 2) спектри 1, які були віднесені різними експериментами ЯМР,28) показали сигнали, які можна віднести до двох метилів [d 1,31 (s, 10-H3) , 1,51 (br s, 11-H3)], два метилени [d 1,49, 2,02 (обидва m, 6a- і 6b-H), 1,64, 1,67 (обидва m, 7b- і 7a-H)], два метини [d 2,21 (dd, J= 2.7, 9,5 Гц, 9-H), 2,71 (m, 5-H)] і a,b-ненасичена ацетальна група [d 5,33 (d, J= 2,7 Гц, 1-H), 5,95 (br s, 3-H)] разом із b-глюкопіранозильним фрагментом [d 4,62 (d, J= 7.9 Гц, 1' -H)]. Як показано на рис. 1, експеримент кореляційної спектроскопії 1 H–1 H (1 H–1 H COSY) на 1 показав наявність часткових структур, написаних жирними лініями. В експерименті гетероядерних кореляцій множинних зв’язків (HMBC) на 1 спостерігалися дальні кореляції між такими протонами та вуглецями (3-H, 1' -H і 1-C; {{88} }H3 і 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 і 4- C; 11-H3 і 5-C; 10-H3 і 1-H, 7-H , 10-H3 і 8-C; 10-H3 і 9-C; 7-H2 і 10-C), як показано на рис. 1. Ферментативний гідроліз 1 b-глюкозидазою дав аглікон, канкагенін a (1a), як показано на рис. 3. Порівняння спектру 13CNMR для 1 із спектрами 1a виявило зміщення глікозилювання навколо 1-положення в 1 [ 1: d C 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); 1a: d C 92,9 (1-C), 135,3 (3-C), 54,7 (9-C)]. Таким чином, зв’язність bD-глюкопіранозильного фрагмента в 1 також була з’ясована як у 1-положенні 1a. Далі відносна стереоструктура 1 була охарактеризована за допомогою експерименту ядерної посиленої спектроскопії Оверхаузера (NOESY), який показав кореляції NOE між наступними

низькі протонні пари ({{0}}H і 10-H3; 3-H і 11-H3; 5-H і 6b-H, {{9 }}H; 7a-H і 9-H, як показано на рис. 2. 22}}положення в 1 було визначено шляхом застосування правила зсуву глікозилювання 13CNMR 1,1'-дисахариду,29), яке, як виявилося, застосовується до напівацетальних сполук.30,31) Стереоструктура 1-положення в 1 було підтверджено, що зберігається в 1a шляхом порівняння аналізу 1 H-ЯМР, включаючи експеримент NOESY. Значення зсуву глікозилювання [Dd 1,2 ppm (1' -C) і 0,9 ppm (1- C), у піридині-d5], як виявилося, є характерними для комбінації R, Rдигеміацеталь, що відповідає абсолютній стереоструктурі 1, як показано на рис. 3. Отже, абсолютна конфігурація в 1-положенні 1 була визначена як S-конфігурація, а абсолютна стереоструктура 1 була з’ясована, як показано.

НАТУРАЛЬНА ЦИСТАНКЕ ТУБУЛОЗА КИТАЙСЬКІ ТРАДИЦІЙНІ ЛІКИ PHGS75% ECH 30% ДІЯ 12%

Структури канканозидів B (2) і C (3)

Канканозид B (2) також виділяли у вигляді аморфного порошку з негативним оптичним обертанням ([a]D 26 - 118.7 градуси в MeOH). ІЧ-спектр 2 показав смуги поглинання при 3410, 1647 і 1085 см- 1, що приписуються гідроксильним, олефіновим та ефірним функціям. Молекулярна формула C15H24O10 2 була визначена за піками квазімолекулярних іонів у FABMS з позитивними іонами та за допомогою FAB-MS з високою роздільною здатністю. Кислотний гідроліз 2 за допомогою 1.0 M HCl вивільнив D-глюкозу, яку ідентифікували аналізом ВЕРХ за допомогою оптичного детектора обертання.8, 10-12, 15-18) 1 H- ( CD3OD, таблиця 1) та 13C-ЯМР (таблиця 2) спектри28) 2 показали сигнали, які можна віднести до двох метиленів [d 1,40 (ddd, J= 5.2, 7,3, 13,5 Гц, 6a-H), 2,52 ( ddd, J= 7.0, 9.2, 13.5 Гц, 6b-H), 3.85, 3.99 (обидва d, J= 11.9 Гц, 10-H2)], чотири метини [ d 2,21 (дд, J= 6,4, 8,6 Гц, 9-H), 2,83 (м, 5-H), 4,02 (dd, J= 5,2, 7,0 Гц, 7-H), 5,49 (d, J= 6.4 Гц, 1-H)], і пара цис-олефінів [d 4,95 (dd, J{{84) }}.0, 6,1 Гц, 4-H), 6,22 (dd, J= 1.8, 6,1 Гц, 3-H)] разом із b-глюкопіранозильним фрагментом [d 4,72 (d, J= 7,9 Гц, 1' -H)]. Сигнали протонів і вуглецю в даних 1 H- і 13C-ЯМР 2 були подібні до сигналів 6-дезоксикатальполу (14), за винятком сигналів, викликаних 7- і 8- позиції. Як показано на рис. 1, експеримент 1 H–1 H COSY на 2 вказав на наявність часткових структур, написаних жирними лініями, а в експерименті HMBC спостерігалися довгострокові кореляції між наступними парами протона та вуглецю ({ {117}}H, 1-C; 1-H і 10-H2 і 1- }H, 7-H, 9-H, 10-H2 і 8-C 7-H, 10-H2 і 9- C; 7-H і 10-C). Відносна стереоструктура 2 була охарактеризована за допомогою експерименту NOESY, який показав кореляції NOE між наступними парами протонів (1-H і 10-H2; 3- H і 4-H; { {144}}H і 6b-H, 9-H; 6b-H і 7-H; 7-H і 9-H), як показано на рис. 2. Нарешті , лужна обробка 14 5% водним розчином гідроксиду калію (КОН) дала 2 і 19, 32), так що стереоструктура 2 була прояснена.

КанканозидC (3) виділяли у вигляді аморфного порошку з негативним оптичним обертанням ([a]D 26 - 34.0 ступінь у MeOH). У негативно-іонній FAB-MS 3 спостерігали пару ізотопних квазімолекулярних іонних піків при m/z 399 і 401 (M-H)-. Молекулярна формула 3 була визначена як C15H25ClO10 за допомогою вимірювання FAB-MS з високою роздільною здатністю. Кислотний гідроліз 3 за допомогою 1,0 М HCl вивільнив D-глюкозу, яку ідентифікували за допомогою ВЕРХ-аналізу з використанням детектора оптичного обертання.8,10-12,15-18) 1H- (CD3OD, таблиця 1) і 13C-ЯМР (таблиця 2) спектри28) 3 показали сигнали, які можна віднести до трьох метиленів [d 1,70 (br dd, J= приблизно 3, 13 Гц, 4a-H), 2,70 (br dd, J{{ 41}} приблизно 6, 13 Гц, 4b-H), 1,68 (br d, J= приблизно 13 Гц, 6aH), 2,44 (m, 6b-H), 4,01, 4,04 (обидва d, J= 11,3 Гц, 10-H2)], п’ять метинів [d 2,47 (дд, J= 2,5, 7,9 Гц, 9-H), 2,61 (м , 5- H), 3,94 (широкий с, 7-H), 5,10 (широкий д, J= приблизно 3 Гц, 3-H), 5,48 (d, J= 2,5 Гц, 1-H)] та b-глюкопіранозильний фрагмент [d 4,60 (d, J= 8,0 Гц, 1' -H)]. Сигнали протонів і вуглецю в спектрах 1 H- і 13 C-ЯМР 3 накладалися на сигнали 2, за винятком сигналів, пов’язаних із положеннями 3- і 4-. Положення bD-глюкопіранозилу та хлорної функції в 3 було з’ясовано з експериментів H–H COSY та HMBC, як показано на рис. 1. Отже, плоска структура 3 була побудована так, як показано. Відносну стереоструктуру 3 було визначено за допомогою експерименту NOESY, у якому спостерігалися кореляції NOE між наступними парами протонів (1-H і 3-H, 10-H2; 3- H і 4b-H і 5-H і 7-H; }H і 9-H), як показано на рис. 2.

НАТУРАЛЬНА ЦИСТАНКЕ ТУБУЛОЗА ДЛЯ ПОКРАЩЕННЯ СТАТЕВОЇ ФУНКЦІЇ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Структури канканозиду D (4) і канканолу (5)

Канканозид D (4) виділяли у вигляді аморфного порошку з негативним оптичним обертанням ([a]D 25 - 30.6 градуси в MeOH). ІЧ-спектр 4 показав смугу поглинання при 1655 см- 1, що приписується функції олефіну, і сильні смуги поглинання при 3410 і 1078 см- 1, що свідчить про його глікозидність структура. У FAB-MS з позитивними іонами 4 пік квазімолекулярного іона спостерігався при m/z 341 (M Na). Молекулярна формула C15H26O7 4 була визначена методом FAB-MS з високою роздільною здатністю. Кислотний гідроліз 4 за допомогою 1,0 М HCl вивільнив D-глюкозу,8,10-12,15-18), тоді як (R)-ротундіол (4a) 33,34) був отриманий шляхом ферментативного гідролізу 4 за допомогою b- глюкозидаза. Спектри 1 H-ЯМР (таблиця 3, CD3OD) і 13C-ЯМР (таблиця 4) 4 показали сигнали, які можна віднести до метилу [d 1,69 (s, 10-H3)], трьох метиленів [d 1,41, 2,06 (обидва m, 4-H2), 1,51, 2,01 (обидва m, 6a- і 6b-H), 2,23 (br dd, J= приблизно 8, 15 Гц, 7a-H) , 2,37 (br dd, J= приблизно 8, 15 Гц, 7b-H)], метин [d 2,90 (m, 5-H)] і два метилени, що містять кисневу функціональну групу { d [3,56 (ddd, J= 2.8, 7.4, 13.2 Гц), 3.97 (ddd, J= 4.9, 8.0, 13.2 Гц), 3-H2], 4.04, 4,18 (обидва d, J= 12,2 Гц, 1-H2)} разом із b-глюкопіранозильною частиною [d 4,25 (d, J= 7,7 Гц, 1' -H )]. Положення bD-глюкопіранозильної частини в 4 було з’ясовано в експерименті HMBC як 3-положення (рис. 1). На основі цих доказів було визначено, що абсолютна стереоструктура 4 така, як показано.

Канканол (5) був отриманий у вигляді аморфного порошку з позитивним оптичним обертанням ([a]D 25 11.1 градус). Хімічна іонізація (CI)-MS 5 показала пару ізотопних іонних піків при m/z 221 і 223 через квазімолекулярний іон (MH). Вимірювання CI-MS з високою роздільною здатністю 5 виявило молекулярну формулу C9H13ClO4. Спектри 1 H-ЯМР (таблиця 1, CD3OD) і 13C-ЯМР (таблиця 2)28) 5 показали наявність таких функцій: три метилени [d 1,60 (ddd, J= 2 .5, 5,5, 13,1 Гц, 4a-H), 1,80 (br dd, J= приблизно 3, 13 Гц, 4bH), 1,83 (br d, J= приблизно 12 Гц, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75, 3,88 (обидва d, J= 9,2 Гц, 10-H2)], п'ять метинів [d 2,76 (dd, J{ {58}}.3, 8,0 Гц, 9-H), 2,50 (м, 5-H), 3,80 (шир. с, 7-H), 5,17 (шир. д, Дж{ {71}} приблизно 3 Гц, 3-H), 5,26 (d, J= 4.3 Гц, 1-H)]. Плоска структура 5 була підтверджена експериментами 1 H–1 H COSY та HMBC. Тобто експеримент 1 H–1 H COSY на 5 показав наявність часткових структур, написаних жирними лініями, а в експерименті HMBC спостерігалися дальні кореляції, як показано на рис. 1. Відносна стереоструктура 5 була визначено експериментом NOESY, в якому кореляції NOE спостерігалися між наступними парами протонів (1-H і 9-H; 3-H і 4a-H; 4b-H і {{95 }} H; 5-H і 9-H; 7-H і 9-H). Рис. 2. Шляхом порівняння даних 1 H- і 13 C-ЯМР для 5 з даними для 14a, отриманих обробкою 14 5% водним розчином HCl, як показано на діаграмі 1,35) положення групи хлору у 5 підтримувалося як 3-позиція. Крім того, ацетилювання 5 оцтовим ангідридом (Ac2O) і піридином дало 3,7-оксид (5a), тоді як 14a дало діацетат (14b) за тих самих умов ацетилювання. Ці докази також змусили нас підтвердити, що функція хлору знаходиться в положенні 3b (Діаграма 3). Отже, стереоструктура 5 була визначена такою, як показано.

Структура канканозиду E (6) Канканозид E (6) виділяли у вигляді аморфного порошку з негативним оптичним обертанням ([a]D 25 - 20.0 ступінь у MeOH). ІЧ-спектр 6 показав смуги поглинання при 3410, 1647 і 1085 см- 1, які можна віднести до глікозидних і карбонільних функцій, тоді як його УФ-спектр показав максимум поглинання при 211 нм (log e 4,63), що вказує на наявність a,b-ненасиченої карбонової кислоти. Молекулярна формула C16H28O8 6 була охарактеризована за допомогою FAB-MS з позитивними та негативними іонами та вимірюванням MS з високою роздільною здатністю. Кислотний гідроліз 6 вивільняє D-глюкозу,8,10-12,15-18), тоді як (2E,6R)-8-гідрокси-2,6-диметил{{31 }}октанова кислота (6а) 36) була отримана шляхом ферментативного гідролізу 6 b-глюкозидазою. Спектри 1 H-ЯМР (таблиця 3, CD3OD) і 13C-ЯМР (таблиця 4)28) 6 показали наявність (2E,6R)-8-гідрокси-2,6- фрагмент диметил-2-октенової кислоти [d 0,95 (d, J= 6.4 Гц, 10-H3), 1,30, 1,48 (обидва m, 5-H2), 1,45, 1,70 (обидва m, 7-H2), 1,65 (m, 6-H), 1,81 (s, 9-H3), 2,22 (2H, m, 4-H2) , 3,61, 3,94 (обидва m, 8-H2), 6,78 (dd, J= 1,2, 7,3 Гц, 3-H)] разом із bD-глюкопіранозильною частиною [d 4,26 (d, J= 7.6 Гц, 1' -H)]. Шляхом порівняння сигналів вуглецю в спектрі 13C-ЯМР 6 із сигналами 6a було виявлено зрушення глікозилювання навколо 8-положення 6. Положення глюкозидного зв’язку також було підтверджено експериментами HMBC, як показано на Рис. 1. Отже, абсолютна стереоструктура 6 була з’ясована як (2E,6R)-8-bD-глюкопіранозилокси-2,6-диметил-2-октенова кислота.

НАТУРАЛЬНА ЦИСТАНКЕ ТУБУЛОЗА ДЛЯ ПОКРАЩЕННЯ СТАТЕВОЇ ФУНКЦІЇ PHGS75% ECH 30% ACT 12%