Імунні відповіді господаря на поверхневі білки S-шару (SLP) Clostridioides Difficile

Анотація:

Clostridioides difficile, нозокоміальний збудник, є новонародженим кишковим патобіонтом, який викликає діарею, пов’язану з прийомом антибіотиків. Інфекція C. difficile включає колонізацію кишечника та руйнування епітеліального бар’єру кишечника, що призводить до індукції запальних/імунних реакцій. Експресія двох основних екзотоксинів, TcdA і TcdB, є основною причиною патогенності C. difficile. Прикріплення бактеріальних білків клітинної стінки або поверхневих білків S-шару (SLP), таких як SlpA, до епітеліальних клітин господаря є критичним для вірулентності. Крім того, що ці поверхневі компоненти є токсинами, було показано, що вони є високо імуногенними. Останні дослідження вказують на те, що SLP C. difficile відіграють важливу роль у адгезії бактерій до епітеліальних клітин кишечника, руйнуванні щільних з’єднань і модуляції імунної відповіді клітин-господарів. Ці білки можуть служити новими мішенями для вакцин і нових терапевтичних засобів. Цей огляд підсумовує наше поточне розуміння імунологічної ролі SLP у індукції імунітету господаря та їх використання в розробці вакцин і нових терапевтичних засобів для боротьби з інфекцією C. difficile.

cistanche tubulosa - покращує імунну систему

Натисніть тут, щоб переглянути продукти Cistanche Enhance Imunity

【Запитуйте більше】 Електронна пошта:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Ключові слова:

діарея, пов'язана з прийомом антибіотиків; білки клітинної стінки; терапевтичні засоби; білки S-шару; вакцина

1. Введення

Clostridioides difficile, анаеробна бактерія, що продукує токсин, є важливим умовно-патогенним та нозокоміальним патогеном у кишківнику, який викликає симптоми захворювання в результаті порушень у здоровому мікробіомі через безліч факторів, включаючи використання антибіотиків, генетичні, експозиційні, мікробні, та інші фактори господаря [1]. Відбір і проліферація C. difficile викликає небезпечний для життя стан псевдомембранозного коліту [2,3]. Згідно з останніми оцінками зі звіту Центру з контролю та профілактики захворювань за 2019 рік, C. difficile спричинив 223 900 інфекцій і 12 800 смертей у 2017 році зі збитками в 1 мільярд доларів лише в Сполучених Штатах [4]. Лікування першого епізоду інфекції C. difficile (CDI) досягається за допомогою антибіотиків. Однак хвороба має високий рівень рецидивів — 20–30% після першого лікування початкового CDI і більше 50% після першого рецидиву [5]. Тому для боротьби з CDI у всьому світі необхідне термінове терапевтичне втручання. Одним із основних молекулярних факторів патогенезу C. difficile є експресія та секреція двох основних токсинів, TcdA та TcdB, кодованих генами, розташованими в локусі патогенності 19.6-kb (PaLoc) у C. difficile геному [6]. Регуляція вироблення токсинів і різні фактори транскрипції, залучені до вироблення токсинів, були детально розглянуті Chandra та ін. в іншому місці [6].

Патогенез CDI починається з проковтування/проростання спор C. difficile у вегетативні клітини, які проростають у кишечнику, де проліферують і колонізують слизову оболонку кишечника [1,6]. Бар’єр слизової оболонки кишечника (IMB) є першою лінією вродженого захисту від патобіонтів. IMB хазяїна складається з різних типів епітеліальних клітин, які міцно з’єднані одна з одною щільними з’єднаннями та вкриті товстим захисним шаром слизу, що виділяється келихоподібними клітинами [1]. Порушення IMB дозволяє C. difficile прикріплюватися до поверхні епітеліальних клітин, де вироблення факторів вірулентності призводить до пошкодження та прояву патогенності C. difficile [1,6]. Клітинна стінка бактерій у багатьох грампозитивних і грамнегативних видів, включаючи C. difficile, пов’язана з великою кількістю відкритого на поверхні шару білкових молекул, які називаються білками поверхневого шару (білки S-шару або SLP), які переважно складаються з великої кількості білок SlpA, що складається з доменів низької та високої молекулярної маси, які розташовані як паракристалічний регулярний двовимірний масив, як видно за допомогою електронної мікроскопії [7]. Інші компоненти білка клітинної стінки (Cwp) шару SLP менш поширені та погано охарактеризовані, але також відіграють важливу роль у патогенності CD. В останні роки дослідження SLP привернули підвищену увагу, оскільки було показано, що ці білки відіграють ключову роль у поверхневій адгезії, активації Toll-подібних рецепторів, індукції виробництва цитокінів та активації запалення як частини імунної відповіді господаря, окрім їх роль у зростанні та виживанні бактерії [7–9].

У цьому огляді ми обговорюємо імунну відповідь хазяїна на основні компоненти SlpA та інші менш поширені Cwps у світлі останніх знань про SLP C. difficile і підкреслюємо їх потенціал для використання як нової вакцини та терапевтичної мішені, дуже актуальної для патогенезу CDI.

cistanche tubulosa - покращує імунну систему

2. Вроджені імунні відповіді проти CDI

Було показано, що нетоксигенні штами C. difficile (NTCD) після колонізації на тваринних моделях забезпечують захист від патогенних штамів C. difficile. На початку 1980-х років Вілсон і Шеагрен повідомили, що хом’яки, колонізовані штамом NTCD після стерилізації антибіотиком цефокситином, були захищені від зараження токсигенним штамом C. difficile (TCD) [10]. Однак обробка іншими видами, такими як C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes і нетоксигенний штам C. difficile NTCD, убитий теплом, не захистила від CDI. Крім того, захист був втрачений, коли колонізуючий NTCD був стерилізований за допомогою лікування ванкоміцином перед провокацією [11]. Підбадьорені цими висновками, спори штаму NTCD-M1 були використані в обмеженій кількості клінічних пацієнтів, які страждають на рецидив CDI (rCDI), зі значним успіхом (близько 50%) [12]. В даний час варіанти лікування CDI обмежені і значною мірою залежать від використання антибіотиків, таких як ванкоміцин, фідаксоміцин і метронідазол [13,14]. Надмірне використання антибіотиків призводить до дисбактеріозу здорового мікробіому та додатково допомагає у відборі патобіонтів, таких як C. difficile, які можуть рецидивувати пізніше [1,15]. Щоб ефективно подолати ці проблеми, необхідно негайно звернути увагу на альтернативні методи лікування. Деякі з цих варіантів лікування включають нейтралізацію токсинів C. difficile за допомогою моноклональних антитіл проти TcdB, таких як інфузія безлотоксумабу, який запобігає опосередкованому токсинами пошкодженню кишкового епітелію [16]. Іншим захоплюючим методом є відновлення здорового мікробіому за допомогою трансплантації фекальної мікробіоти (FMT) від здорового донора серед найближчих родичів. FMT показав багатообіцяючі результати проти рецидиву CDI з частотою успіху до 90% [17,18]. На жаль, ці дослідження не розглядали роль імунної відповіді господаря в захисті цих пацієнтів. Таким чином, можна стверджувати, що живий NTCD виділяє деякі антигени/компоненти клітинної стінки, які індукують сильну імунну відповідь проти токсигенного TCD. Так само погано визначений захист FMT. Таким чином, розуміння того, як впровадження FMT індукує відповіді господаря, може допомогти в ідентифікації ключових антигенів, що, у свою чергу, може допомогти в кращому розумінні імунної відповіді та розробці нових вакцин проти CDI.

У кишечнику вроджена імунна система господаря є першою лінією захисту від вторгнення патогену, який відіграє вирішальну роль у формуванні та встановленні надійної адаптивної імунної відповіді господаря [1]. Вроджена реакція складається в основному з трьох частин: (i) кишкового епітелію та слизового шару (фізичний бар’єр), (ii) антимікробних пептидів, які є екскреторним продуктом епітеліальних клітин, клітин Панета та деяких представників кишкової мікробіоти (хімічні (iii) клітинні відповіді шляхом залучення клітин вродженого імунітету, таких як нейтрофіли, еозинофіли, макрофаги, вроджені лімфоїдні клітини (ILC) і дендритні клітини (DC), які керуються кількома вродженими сигнальними шляхами для боротьби з збудником, що проникає [ 1]. Клітини-господарі несуть на своїй поверхні рецептори розпізнавання образів (PRR), такі як TLR, які розпізнають певні консервативні ознаки бактерій на мікробах, які називаються асоційованими з патогенами молекулярними шаблонами (PAMP). Ці PRR також відомі як Toll-подібні рецептори (TLR). Після розпізнавання цих сигналів небезпеки (PAMP) TLR клітина-господар запускає імунну відповідь. У зв’язку з цим було показано, що Toll-подібний рецептор 4 (TLR4) розпізнає сигнали небезпеки C. difficile, дія, яка бере участь в ініціації запальної відповіді господаря. У цьому контексті було показано, що SLP C. difficile взаємодіють із TLR господаря-4, тоді як джгутики C. difficile взаємодіють через TLR5 [19,20].

Цистанче корисний для чоловіків - зміцнює імунну систему

3. Білки S-шару (SLP) у C. difficile

В останнє десятиліття білки поверхневого шару (S-шару) C. difficile привернули значну увагу. SLP були вперше ідентифіковані Kawata та ін. в 1984 р. і становлять близько 15% від загальної маси клітин [21,22]. SLP зустрічаються у багатьох різноманітних прокаріотичних видів. Більшість SLP розташовані на зовнішній поверхні клітин як єдиний білок у двовимірному паракристалічному масиві [7]. У C. difficile S-шар складається в основному з гетеродимерних білків SlpA. SlpA — це гетеродимер, що складається з білка високої молекулярної маси (HMW) і білка низької молекулярної маси (LMW), які кодуються одним геном slpA; LMW SLP утворює відкритий верхній шар, тоді як HMW SLP утворює нижній шар. LMW SLP є унікальним у C. difficile. У штамі C. difficile 630 локус slpA є областю розміром 36,6 кб, яка містить 11 паралогів slpA. Крім того, існує ще 17 паралогів, які розкидані по геному [23,24]. Ці гени паралогів тепер називаються білками клітинної стінки клостридій (CwpX), де X позначає ідентифікований номер паралогів (X=1–29) і описані в таблиці 1. Однак чотири раніше охарактеризовані Cwps, відомі як SlpA, Cwp66, Cwp84 і CwpV були названі до того, як було прийнято цю нову конвенцію про найменування [23]. Усі Cwps є типовими білками, які містять N-кінцевий сигнальний пептид і три передбачувані домени зв’язування клітинної стінки зі значною подібністю до HMW SLP [25,26]. Різні штами C. difficile показали варіації в локусі slpA, і було задокументовано близько 12 різних типів касет S-шару. Інші 28 Cwps діють як додаткові компоненти, які закріплені в полімеризованому паракристалічному шарі, на який припадає ~5–20% S-шару [7].

Таблиця 1. Передбачувані функції 29 чашкових генів, знайдених у геномах Clostridium difficile 630.

Таблиця 1. Продовж.

4. Експресія та зміна штамів білків клітинної стінки

Повідомлялося, що в штамі C. difficile 630 експресується близько дев’яти генів, що кодують Cwps [25]. У той час як гени cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 і cwp25 експресуються на поверхні клітини за нормальних умов росту [44], гени cwp66 і cwp5 експресуються, але не виявляються в екстрактах клітинної поверхні. В окремому дослідженні Biazzo et al. проаналізували чашки, які розкидані по геному C. difficile. Вони помітили, що гени cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 і cwp25 експресуються і мають добре збережені послідовності, тоді як гени cwp17, cwp26, cwp27, cwp28 і cwp29 мають значні варіації рівнів експресії між риботипів і були менш консервативними [45]. Багато генів локусу slpA демонструють значні варіації між штамами, особливо поверхнево відкритими ділянками. Наприклад, було показано, що slpA, cwp66, secA2 і cwp2 мають високі варіації в межах локусу slpA (який утворює касету 10-kb); до цього часу було знайдено 12 дивергентних варіантів цієї касети в результаті гомологічної рекомбінації між різними генотипами [46]. За даними Karjalainen та ін., cwp66 демонструє лише 33% ідентичності між штамами [26]. Варіант cwp2 був замінений на прогнозований кластер гена глікозилювання S-шару розміром 23,8 кб у локусі slpA [46]. SlpA є найпоширенішим SLP, який міститься в екстрактах клітинної поверхні C. difficile, і є основною складовою SLP C. difficile. Зрілий білок після секреції розщеплюється на білкові форми HMW і LMW під дією протеази Cwp84 з утворенням гетеродимерного комплексу H/L комплексу, який полімеризується з утворенням S-шару [47] (рис. 1). Інактивація гена cwp84 у C. difficile 630∆erm призвела до S-шару, що складається лише з незрілого одноланцюгового SlpA зі зміненою морфологією колонії, що свідчить про важливу роль Cwp84 у формуванні зрілого S-шару [32]. Наявність гена secA2 в локусі slpA важлива для транспорту SlpA та інших Cwps через цитоплазматичну мембрану [48].

Рисунок 1. SLP C. difficile опосередковують адгезію та активацію імунних клітин. Насцентний пептид SlpA розщеплюється протеазою Cwp84 на субодиниці LMW і HMW, які утворюють зрілий комплекс SlpA шару SLP клітинної стінки [31–33]. SLP опосередковують адгезію через TLR4, порушують щільне з’єднання кишкових епітеліальних клітин і додатково активують дендритні клітини/макрофаги, які, у свою чергу, виробляють різні цитокіни та хемокіни, що призводить до індукції Th1/Th2 та гуморальної відповіді [9,27]. Інтерлейкін (IL), дендритні клітини (DC), низькомолекулярний (LMW), високомолекулярний (HMW), Toll-подібний рецептор 4 (TLR4).

5. Функції білків S-шару

SLP беруть участь у різних функціях біології C. difficile (див. таблицю 1), таких як цілісність клітини, транспорт, формування пор і якорів, деградація, адгезія/вторгнення в клітину-хазяїна, ухилення від імунної системи та захист від конкуруючих мікроорганізмів [22] . Pechineet ін. виявили антитіла проти N-кінцевого та C-кінцевого доменів антигену Cwp66 у сироватках пацієнтів із захворюванням, асоційованим із Clostridium difficile (CDAD) [49]. В іншому дослідженні Райт та ін. розділив Cwps за допомогою 2D-PAGE та ідентифікував кілька Cwps (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19), які реагували з сироватками пацієнтів, інфікованих штамом C. difficile ribotype 017, що свідчить про індукцію сильної імунної відповіді проти SLP [50]. Нещодавно Kirk et al. ідентифікували два штами C. difficile, у яких відсутній S-шар і які не були чутливі до бактеріоцину, який утворює пори та деполяризує конкуруючі бактеріальні клітини. Однак ці штами C. difficile продемонстрували значно підвищену сприйнятливість до лізоциму та антимікробного пептиду LL-37 і не викликали симптомів захворювання CDI на моделі інфекції у хом’яка [51]. У нещодавньому дослідженні досліджували вплив SlpA, виділеного з трьох токсикогенних штамів (RT126, RT001, RT084), на експресію білків щільного з’єднання (TJ) та індукцію прозапальних цитокінів у лінії клітин карциноми товстої кишки людини HT-29 . Лікування SlpA значно знизило рівні експресії білків щільного з’єднання сімейства клаудинів і JAM-A (рис. 1) [9]. Крім того, білок SlpA підвищував рівні експресії TLR-4 та індукував секрецію TNF-, IL-1 та IL-8. Ці результати демонструють, що білок SlpA опосередковує патогенез і індукує запальні реакції в кишечнику [9]. Таким чином, розумно стверджувати, що SLP є важливими для патогенності та імунної відповіді C. difficile.

cistanche tubulosa - покращує імунну систему

6. Імунна відповідь на SLP

Недавні дослідження вказали на важливу роль SlpA не тільки у виживанні та зростанні бактерій, але й у формуванні імунної відповіді господаря. Підходи, засновані на імунопротеоміці, показали наявність антитіл проти SLP у сироватці крові шести пацієнтів, інфікованих риботипом C. difficile 017, що свідчить про те, що білки SLP є імунодомінантними та експресуються під час інфекції [50]. Дослідження під керівництвом Bruxelles et al. показали підвищений рівень анти-SlpA антитіл у пацієнтів з CDI порівняно зі здоровими пацієнтами [52]. В іншому дослідженні Negm et al. виявили антитіла IgG у сироватці загалом 327 осіб із CDI проти екстрактів SLP із різних штамів C. difficile [53]. На додаток до SlpA, відкритий С-кінцевий домен другого за поширеністю білка Cwp66 дуже варіабельний, тоді як N-кінцевий домен добре збережений. Було показано, що варіабельні С-кінцеві домени Cwp66 і Cwp84 є імуногенними для людей [49,54]. Крім того, у пацієнтів з CDI середні загальні рівні анти-Cwp66 і анти-Cwp84 були нижчими, ніж у здорової контрольної групи, що свідчить про захисну природу антитіл. Таким чином, SLP, зокрема SlpA, та інші компоненти відіграють важливу роль в імунному захисті та є потенційними мішенями для імунотерапевтичних розробок та розробки вакцин, як описано в наступних розділах.

7. SLP опосередковують адгезію C. difficile

C. difficile ініціює інфекцію, прилипаючи до епітеліальних клітин кишечника, що призводить до колонізації. У цьому відношенні бактеріальні SLP, такі як SlpA та Cwp66, відіграють вирішальну роль у адгезії. Повідомлялося, що варіації SLP, зокрема SlpA, в ізольованих штамах C. difficile показали зміни в прихильності [55]. Було показано, що SLP зв’язують різні клітинні лінії, такі як клітинні лінії шлунково-кишкового тракту людини Hep-2 і Vero, а також багато білків позаклітинного матриксу. Крім того, лікування анти-HMW-SLP антитілами пригнічувало прихильність C. difficile. Крім того, попередня обробка клітин-господарів або очищеними субодиницями SlpA, або антитілами проти SlpA також запобігала адгезії C. difficile [55]. Найбільшим гомологом сімейства білків SlpA є білок CwpV, який експресується у змінній фазі. В окремому дослідженні було показано, що C-кінцевий повторюваний домен білка CwpV опосередковує агрегацію C. difficile. Крім того, цей домен різниться між штамами, і було ідентифіковано п’ять антигенно відмінних типів повторів [40].

Було показано, що інший імуногенний білок під назвою Cwp66 має властивості адгезії. Очищений Cwp66 і антитіла проти N-кінцевих і C-кінцевих доменів пригнічували адгезію C. difficile до культивованих клітин Vero, що свідчить про властивості адгезії Cwp66 [29].

8. Індукція запальних реакцій

Бьянко та ін. продемонстрували роль SLPs у запальному процесі. У цьому дослідженні SLP з гіпервірулентних та епідемічних (H/E) або не-H/E штамів C. difficile очищали та вивчали в моноцитах людини та моноцитарних дендритних клітинах (MDDC) з точки зору індукції імуномодулюючих цитокінів [інтерлейкіну (IL)-1 , IL-6 та IL- 10] [56]. Дослідження продемонструвало, що SLPs не тільки індукують дозрівання MDDCs з посиленою антигенпрезентуючою активністю, але також індукують секрецію високих рівнів IL-10. Однак не було виявлено істотних відмінностей в активації моноцитів і MDDC препаратами SLP зі штамів H/E та не-H/E, що свідчить про те, що SLP не сприяють посиленню тяжкості захворювання [56]. В іншому дослідженні Ausiello et al. екстрагували SLP з клінічного ізоляту C253 і показали, що SLP індукують секрецію підвищених рівнів прозапальних цитокінів IL-1 та IL-6 у моноцитах у стані спокою та індукують дозрівання MDDC людини та посилюють проліферацію T клітин [57]. Крім того, ці MDDC також вивільняли підвищену кількість IL-10 та IL-12p70 і індукували змішану імунну відповідь Th1/Th2. TLR-4 відіграє важливу роль у SLP-опосередкованій активації DC. Було продемонстровано, що SLP не можуть активувати DC, виділені з TLR4-мутантних мишей C3H/HeJ, і не спроможні індукувати наступну Th імунну відповідь, що свідчить про те, що SLP активують вроджений і адаптивний імунітет, опосередкований рецептором TLR4 [19]. В іншому дослідженні було продемонстровано на макрофагах, що SLP з C. difficile індукують реакцію кліренсу в термінах секреції прозапальних цитокінів і хемокінів із збільшенням міграції макрофагів і фагоцитотичної активності [58]. Лікування інгібітором р38 змінило ці відповіді, що свідчить про роль сигнальних молекул у відповідях, опосередкованих SLP [58]. Зовсім нещодавнє дослідження повідомило про активацію запалення C. difficile SLPs залежно від дози. Крім того, було продемонстровано, що багаті холестерином мікродомени (ліпідні рафти) на клітинних мембранах допомагають у зв’язуванні SLP з клітинною мембраною. Це було засновано на флуоресцентній мікроскопії, де було показано, що лікування метил- -циклодекстрином (M CD), яке виснажує мембранний холестерин, знижує зв’язування SLP, що свідчить про те, що SLP рекрутують ліпідні рафти, критичні для колонізації C. difficile та активації запалення [59]. ]. Ці дослідження стверджують, що SLP C. difficile можуть активувати вроджені та адаптивні імунні відповіді, які частково опосередковуються TLR4, що свідчить про важливу роль SLP в індукуванні імунної відповіді. Таким чином, ці результати також свідчать про потенціал SLP як кандидатів на вакцину проти CDI.

9. Реакція антитіл проти CDI

Кілька імунологічних досліджень показують, що інфекція C. difficile та результат залежать від інтенсивності імунної відповіді господаря, що є ключовим фактором патогенності CDI. Таким чином, нездатність виробити стійку відповідь антитіл може бути прогнозом для тяжкості та рецидиву захворювання [60]. У зв’язку з цим рівні антитіл проти основних токсинів корелювали з рецидивом і тяжкістю захворювання [61,62]. Антитіла проти поверхневих компонентів C. difficile також були виявлені в сироватці крові пацієнтів з CDI в попередніх дослідженнях [63]. Друді та ін. оцінювали гуморальну імунну відповідь на екстракти SLP C. difficile у когорті з 146 пацієнтів, включаючи 55 пацієнтів з діареєю, пов’язаною з C. difficile (CDAD), 34 пацієнти з безсимптомними носіями та 57 контрольних суб’єктів [64]. Дослідження виділило високо- та низькомолекулярні фракції екстракції SLPs, які містили переважно білок SlpA. Вони вимірювали сироваткові антитіла за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (ELISA) у цій когорті та не виявили суттєвих відмінностей у сироваткових рівнях антитіл IgM, IgA або IgG. Цікаво, що пацієнти з повторними епізодами CDAD мали значно нижчі рівні IgM-анти-SLP, ніж пацієнти з одиничними епізодами. Дослідження прийшло до висновку, що слід провести подальші дослідження для визначення відповіді специфічних антитіл проти SLP і досліджень захисту з використанням SLP C. difficile [64].

Пасивна та активна імунізація із застосуванням ізольованих екстрактів HMW та LMW SLPs показала обнадійливі результати з підвищенням рівня виживаності в моделях зараження летальних хом’яків. О'Браєн та ін. продемонстрували захисну відповідь анти-SLP-антитіл на інфекцію C. difficile у хом’яків, де виживаність була значно подовжена в групах, які отримували анти-SLP, порівняно з контрольними групами [65]. Показано, що захисна дія антисироватки полягає в посиленні фагоцитозу C. difficile [65]. Eidhin та ін., використовуючи активну імунізацію, протестували сирий екстракт SLP, що містить еквімолярні кількості компонентів LMW та HMW пептидів SlpA, як вакцину з різними системними та слизовими ад’ювантами на золотистих сирійських хом’яках та моделях мишей BALB/c. Дослідження повідомило про помірну або слабку стимуляцію антитілами в різних режимах, а мишачі моделі продемонстрували сильнішу відповідь антитіл на SLPs порівняно з хом’яками [66]. В іншому дослідженні Brunet ін. досліджували ад’ювантну активність in vivo двох пептидів, що складаються з рецептор-зв’язуючого домену токсину А (TxA (C314)) і фрагмента SLP-36 кДа зі штаму C. difficile C253 проти фібронектин-зв’язуючого білка А (FnbpA ), протективний антиген вакцини проти Staphylococcus aureus [67]. Вони оцінили відповідь за допомогою інтраназального та підшкірного шляхів і виявили, що обидва фрагменти підвищують продукцію циркулюючих анти-FnbpA IgG та IgA. Вони прийшли до висновку, що ці фрагменти при використанні в якості ад'ювантів по-різному впливають і поляризують імунну систему [67]. В іншому дослідженні Shirvan et al. генерували та експресували специфічні рекомбінантні антитіла проти SLP, такі як Cwp66 і SlpA, з білків C. difficile 630 за допомогою фагового дисплея та показали, що ці рекомбінантні антитіла реагують на SLP та їх компоненти штам-специфічним способом з високою специфічністю [68].

Імунну відповідь і захист у моделі хом’яка з використанням протеази Cwp84 як антигену оцінювали кількома шляхами імунізації [69]. Дослідження виявило диференціальні титри антитіл на основі шляхів імунізації. Найкращий захист спостерігався при ректальному шляху імунізації. Крім того, імунізовані групи хом’яків призвели до 26% слабшої та повільної кишкової колонізації C. difficile після зараження C. difficile зі значно вищим рівнем виживання (на 33% більше), ніж у неімунізованих групах [69].

цистанхе рослина, що підвищує імунну систему

10. Анти-C на основі SLP. difficile Therapeutics

Ефективною стратегією може бути специфічна терапія на основі антитіл для нейтралізації C. difficile. Кандалафт та ін. використовували однодоменні антитіла для націлювання на SLP [70]. Група підготувала панель SLP-специфічних однодоменних антитіл (VHH) з гіпервірулентного штаму C. difficile QCD-32g58 (027 риботип). Їхні результати продемонстрували низку VHH, пов’язаних з епітопами QCD-32g58, розташованими на низькомолекулярній субодиниці SLP з високою спорідненістю. Крім того, вони повідомили, що ці VHH мають специфічність зв’язування з риботипами 001 і 027, а підмножина цих антитіл VHH має широку перехресну реакцію з риботипами 012, 017, 023 і 078. Було також показано, що ці VHH інгібують рухливість C. difficile QCD-32g58 in vitro [70].

Розробка іншого прецизійного антибактеріального засобу Av-CD291.2 Кірком та ін. було повідомлено, що він спеціально вбиває C. difficile і запобігає колонізації мишей [51]. Було показано, що Av-CD291.2 знищує різноманітні ізоляти C. difficile на основі присутності послідовностей SLP у штамах C. difficile. Автори стверджують, що виявили нульові мутанти SLP, що містять точкову мутацію в гені slpA, стійкі до агентів Av-CD291.2. Ці мутанти також мали дефекти споруляції, але змогли колонізувати кишковий тракт, незважаючи на ослаблення вірулентності в моделі хом’яка [51]. Крім того, вони побудували панель Avidocin-CDs, яка вбиває різні штами C. difficile залежно від послідовності SLP, що свідчить про важливу роль цих антибактеріальних препаратів на основі SLP для запобігання CDI [51].

11. Заключні зауваження та критичні запитання без відповіді

Господар розвиває стійку специфічну імунну відповідь проти токсинів C. difficile та поверхневих компонентів. Показано, що SLP відіграють роль у клітинній адгезії, індукції різних цитокінів через активацію TLR4 та активації як вродженої, так і гуморальної імунної відповіді. Однак для подальшого аналізу ролі клітин CD4 і CD8 необхідні дослідження активації Т-клітинних відповідей SLPs. Завдяки активації гуморальної відповіді ці нейтралізуючі антитіла проти токсинів і поверхневих компонентів можуть запобігати клінічним ознакам CDI. Дослідження з використанням активної або пасивної імунізації проти SLP показали багатообіцяючі результати, що вказує на те, що стратегія може бути розвинена в нові терапевтичні засоби проти патогенності CDI. Велика увага приділяється SlpA як кандидату на вакцину; однак, через високу варіабельність послідовності SlpA між штамами, вакцина може бути не ефективною проти всіх риботипів. Тому, щоб уникнути цієї проблеми, можуть знадобитися вакцини на основі епітопів. У цьому відношенні однодоменні антитіла (VHH) проти SLP є життєздатними варіантами, які зв’язують субодиницю LMW-SLP C. difficile з високою специфічністю та, як було показано, пригнічують рухливість штамів C. difficile. В даний час розуміння механічної ролі SLP та їх паралогів у патогенезі CDI, адгезії та відповіді Т-клітин все ще знаходиться на початкових стадіях і в основному залишається невивченим. Потрібні подальші дослідження, щоб розібрати молекулярні функції та специфічні імунні відповіді SLPs, щоб сприяти швидкому розвитку нових мішеней для вакцин/ліків і терапевтичних засобів для боротьби з інфекціями, викликаними C. difficile.

Список літератури

1. Чандра, Х.; Шарма, К.К.; Туовінен, Огайо; Сонце, X.; Шукла, П. Патобіонти: Механізми виживання, розширення та взаємодії з господарем з акцентом на Clostridioides difficile. Кишкові мікроби 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Лоусон, Пенсільванія; Цитрон, Д.М.; Тірелл, КЛ; Finegold, SM Перекласифікація Clostridium difficile як Clostridioides difficile (Hall and O'Toole 1935) Prevot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Орен, А.; Garrity, GM Повідомлення про зміни в таксономічній думці, раніше опублікованій за межами IJSEM. Міжн. J. Syst. еволюція мікробіол. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Центри контролю та профілактики захворювань. Загрози резистентності до антибіотиків у Сполучених Штатах, 2019 р. 2019 р. Доступно в Інтернеті: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (дата доступу: 8 вересня 2022 р.).

5. Шилдс К.; Араухо-Кастільо, Р.В.; Тетіра, ТГ; Алонсо, CD; Kelly, CP Повторна інфекція Clostridium difficile: від колонізації до лікування. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Чандра, Г.; Sorg, JA; Гассетт, ді-джей; Sun, X. Регуляторні транскрипційні фактори патогенезу Clostridioides difficile з акцентом на регуляцію токсинів. Крит. Rev. Microbiol. 2022. [CrossRef]

7. Ланцоні-Мангутчі, П.; Банерджі, О.; Вілсон, Дж.; Барвінська-Сендра, А.; Кірк, JA; Ваз, Ф.; О'Бейрн, С.; Басле, А.; Ель Омарі, К.; Вагнер, А.; та ін. Будова та збірка S-шару у C. difficile. Нац. Комун. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Морі, Н.; Такахаші, Т. Характеристики та імунологічні ролі білків поверхневого шару в Clostridium difficile. Енн Лабораторія. Мед. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Noori, M.; Азімірад, М.; Есламі, Г.; Луха, Массачусетс; Ядегар, А.; Галаванд, З.; Залі, М. Р. Білок поверхневого шару А з гіпервірулентних риботипів Clostridioides difficile викликає значні зміни в експресії генів щільних з’єднань і запальної реакції в епітеліальних клітинах кишечника людини. BMC Microbiol. 2022, 22, 259. [Перехресне посилання]

10. Вілсон, KH; Sheagren, JN Антагонізм токсигенного Clostridium difficile нетоксигенним C. difficile. Ж. Інфікувати. дис. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Борріелло, С.П.; Barclay, FE Захист хом'яків від ілеоколіту Clostridium difficile шляхом попередньої колонізації непатогенними штамами. J. Med. мікробіол. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Сіл Д.; Borriello, SP; Барклай, Ф.; Велч, А.; Пайпер, М.; Bonnycastle, M. Лікування рецидивуючої діареї Clostridium difficile шляхом введення нетоксигенного штаму. Євро. Дж. Клін. мікробіол. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Джонсон, С.; Лавернь, В.; Скіннер, AM; Гонзалес-Луна, AJ; Гарі, KW; Келлі, CP; Wilcox, MH Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America (IDSA) and Society for Healthcare Epidemiology of America (SHEA): 2021 Focused Update Guidelines on Management Clostridioides difficile Infection in Adults. Clin. Інфікувати. дис. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. ван Прен, Дж.; Рейгадас, Е.; Фогельзанг, Е.Х.; Буза, Е.; Христея, А.; Гері, Б.; Крутова, М.; Норен, Т.; Аллербергер, Ф.; Коя, JE; та ін. Європейське товариство клінічної мікробіології та інфекційних захворювань: Оновлення документу з рекомендаціями щодо лікування інфекції Clostridioides difficile у дорослих за 2021 рік. Clin. мікробіол. Інфікувати. 2021, 27 (Додаток 2), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Вардакас, К.З.; Полізос, К.А.; Патуні, К.; Рафаілідіс, П.І.; Самоніс, Г.; Falagas, ME Невдача лікування та рецидив інфекції Clostridium difficile після лікування ванкоміцином або метронідазолом: систематичний огляд доказів. Міжн. J. Антимікроб. Агенти 2012, 40, 1–8. [CrossRef]

16. Навалкеле, BD; Чопра, Т. Безлотоксумаб: нова терапія моноклональними антитілами для профілактики рецидивуючої інфекції Clostridium difficile. Біологія 2018, 12, 11–21. [CrossRef]

17. Лі, Ю.Т.; Cai, HF; Wang, ZH; Сюй, Дж.; Fang, JY. Систематичний огляд із мета-аналізом: віддалені результати трансплантації фекальної мікробіоти на інфекцію Clostridium difficile. Алімент. Pharmacol. Тер. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Курайші, MN; Відлак, М.; Бхала, Н.; Мур, Д.; Ціна, М.; Шарма, Н.; Iqbal, TH Систематичний огляд із мета-аналізом: Ефективність трансплантації фекальної мікробіоти для лікування рецидивуючої та стійкої інфекції Clostridium difficile. Алімент. Pharmacol. Тер. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Райан, А.; Лінч, М.; Сміт, С.М.; Аму, С.; Nel, HJ; Маккой, CE; Доулінг, Дж. К.; Дрейпер, Е.; О'Рейлі, В.; Маккарті, К.; та ін. Роль TLR4 в інфекції Clostridium difficile і розпізнавання білків поверхневого шару. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Бата, Дж.; Denève-Larrazet, C.; Джолівот, Пенсільванія; Кюне, С.; Колліньон, А.; Marvaud, JC; Kansau, I. Джгутики Clostridium difficile переважно активують TLR5-зв’язаний шлях NF-κB в епітеліальних клітинах. Anaerobe 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Кавата, Т.; Такеока, А.; Такумі, К.; Масуда, К. Демонстрація та попередня характеристика регулярного масиву в клітинній стінці Clostridium difficile. FEMS Microbiol. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Сара, М.; Sleytr, UB Білки S-шару. J. Bacteriol. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Фаган Р.П.; Джануар, К.; Колліньон, А.; Мастрантоніо, П.; Покстон, IR; Fairweather, NF Запропонована номенклатура для білків клітинної стінки Clostridium difficile. J. Med. мікробіол. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Моно, М.; Boursaux-Eude, C.; Тібоньє, М.; Валлене, Д.; Мозер, І.; Медіг, С.; Мартін-Верстраете, І.; Dupuy, B. Реанотація послідовності геному штаму Clostridium difficile 630. J. Med. мікробіол. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Калабі, Е.; Уорд, С.; Рен, Б.; Пакстон, Т.; Паніко, М.; Морріс, Х.; Делл, А.; Дуган, Г.; Fairweather, N. Молекулярна характеристика білків поверхневого шару з Clostridium difficile. мол. мікробіол. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

26. Карьялайнен, Т.; Waligora-Dupriet, AJ; Черкетті, М.; Spigaglia, P.; Маджоні, А.; Маурі, П.; Mastrantonio, P. Молекулярний і геномний аналіз генів, що кодують поверхнево закріплені білки з Clostridium difficile. Інфікувати. Імунна. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Охоче, SE; Кандела, Т.; Шоу, HA; Сігер, З.; Меснадж, С.; Фаган, Р.П.; Поверхневі білки Fairweather, NF Clostridium difficile прикріплюються до клітинної стінки за допомогою мотивів CWB2, які розпізнають аніонний полімер PSII. мол. мікробіол. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Бредшоу, В. Дж.; Кірбі, Дж.М.; Робертс, А.К.; Шон, CC; Acharya, KR Cwp2 з Clostridium difficile демонструє розширену складку трьох доменів і клітинну адгезію in vitro. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

29. Waligora, AJ; Hennequin, C.; Маллані, П.; Bourlioux, P.; Колліньон, А.; Karjalainen, T. Характеристика білка клітинної поверхні Clostridium difficile з адгезивними властивостями. Інфікувати. Імунна. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Чжоу, Q.; Рао, Ф.; Чень, З.; Ченг, Ю.; Чжан, К.; Чжан, Дж.; Гуань, З.; Він, Ю.; Ю, В.; Кюї, Г.; та ін. Ген cwp66 впливає на адгезію клітин, стресостійкість і антибіотикорезистентність у Clostridioides difficile. мікробіол. Спектр. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Данг, TH; де ла Ріва, Л.; Фаган, Р.П.; Storck, EM; Хіл, В.П.; Джануар, К.; Fairweather, NF; Tate, EW Хімічні дослідження біогенезу поверхневого шару в Clostridium difficile. ACS Chem. Biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Кірбі, Дж.М.; Ахерн, Х.; Робертс, А.К.; Кумар, В.; Фріман, З.; Ачарья, КР; Shone, CC Cwp84, пов’язана з поверхнею цистеїнова протеаза, відіграє певну роль у дозріванні поверхневого шару Clostridium difficile. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Жануар К.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, поверхнево-асоційований білок Clostridium difficile, є цистеїновою протеазою з деградуючою активністю щодо білків позаклітинного матриксу. J. Bacteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Усеник А.; Ренко, М.; Міхеліц, М.; Ліндік, Н.; Борішек, Я.; Пердіх, А.; Претнар, Г.; Мюллер, У.; Терк, Д. Модуль кріплення клітинної стінки CWB2 виявляється за допомогою кристалічних структур білків клітинної стінки Clostridium difficile Cwp8 і Cwp6. Структура 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Едді, С.Р. Імовірнісна модель локального вирівнювання послідовностей, яка спрощує оцінку статистичної значущості. Обчислення PLoS. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36 Луо Ю.; Фрей, Е.А.; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechel, DG; Хейнс, Каліфорнія; Фінлей, Б.Б.; Стринадка Н.Ц. Кристалічна структура ентеропатогенного інтимін-рецепторного комплексу Escherichia coli. Nature 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. де ла Ріва, Л.; Охочий, SE; Тейт, EW; Fairweather, NF Роль цистеїнових протеаз Cwp84 і Cwp13 у біогенезі клітинної стінки Clostridium difficile. J. Bacteriol. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38 Майєр, Б. Дж. Домени SH3: складність у поміркованості. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

39. Сіпекі, С.; Koprivanacz, K.; Такач, Т.; Курила, А.; Ласло, Л.; Вас, В.; Будай, Л. Нові ролі доменів SH2 і SH3 у зв'язуванні ліпідів. Клітини 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Рейнольдс, CB; Емерсон, JE; де ла Ріва, Л.; Фаган, Р.П.; Fairweather, NF Білок клітинної стінки Clostridium difficile CwpV антигенно варіабельний між штамами, але демонструє збережену функцію сприяння агрегації. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Бредшоу, У. Дж.; Кірбі, Дж.М.; Робертс, А.К.; Шон, CC; Acharya, KR Молекулярна структура домену глікозид гідролази Cwp19 з Clostridium difficile. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Чжу, Д.; Баллок, Дж.; Він, Ю.; Sun, X. Cwp22, новий фермент, що зшиває пептидоглікан, відіграє плейотропну роль у Clostridioides difficile. Навколишнє середовище. мікробіол. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Фінн, Р.Д.; Коггілл, П.; Еберхардт, RY; Едді, SR; Містрі, Дж.; Мітчелл, Алабама; Поттер, SC; Пунта, М.; Куреші, М.; Санградор-Вегас, А.; та ін. База даних родин білків Pfam: на шляху до більш стійкого майбутнього. Nucleic Acids Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Райт, А.; Зачекайте, Р.; Бегум, С.; Кроссетт, Б.; Nagy, J.; Браун, К.; Fairweather, N. Протеомний аналіз білків клітинної поверхні з Clostridium difficile. Протеоміка 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Біаццо, М.; Чіонкада, Р.; Фіаскі, Л.; Тедде, В.; Spigaglia, P.; Мастрантоніо, П.; Піца, М.; Barocchi, MA; Скарселлі, М.; Galeotti, CL Різноманітність локусів cwp у клінічних ізолятах Clostridium difficile. J. Med. мікробіол. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Дінгл, К.Е.; Дідело, X.; Ансарі, Массачусетс; Ейр, DW; Воган, А.; Гріффітс, Д.; Ip, CL; Батті, Є.М.; Голубчик, Т.; Боуден, Р.; та ін. Рекомбінаційне перемикання S-шару Clostridium difficile і новий кластер генів глікозилювання, виявлений за допомогою широкомасштабного секвенування всього генома. Ж. Інфікувати. дис. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Фаган Р.П.; Альбеса-Хове, Д.; Казі, О.; Свергун Д.І.; Браун, К. А.; Fairweather, NF. Структурне розуміння молекулярної організації S-шару з Clostridium difficile. мол. мікробіол. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Фаган Р.П.; Fairweather, NF Clostridium difficile має дві паралельні та важливі системи секреції Sec. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Пешіне, С.; Глізес, А.; Джануар, К.; Gorges-Kergot, R.; Барк, MC; Дельме, М.; Collignon, A. Імунологічні властивості поверхневих білків Clostridium difficile. J. Med. мікробіол. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Райт, А.; Друді, Д.; Кайн, Л.; Браун, К.; Fairweather, NF. Імунореактивні білки клітинної стінки Clostridium difficile, ідентифіковані сироваткою крові людини. J. Med. мікробіол. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Кірк, Я.; Гебхарт, Д.; Баклі, AM; Лок, С.; Шолль, Д.; Douce, GR; Говоні, Г.Р.; Фаган, Р. П. Новий клас прецизійних протимікробних препаратів переосмислює роль S-шару Clostridium difficile у вірулентності та життєздатності. Sci. переклад Мед. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Bruxelles, JF; Мізрахі, А.; Хойс, С.; Колліньон, А.; Джануар, К.; Péchiné, S. Імуногенні властивості поверхневого шару попередника Clostridium difficile та аналізи вакцинації на моделях тварин. Анаероб 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Негм, Огайо; Хамед, MR; Дільнот, Є.М.; Шон, CC; Маршаловська, І.; Лінч, М.; Лошер, CE; Едвардс, LJ; Тайе, П. Дж.; Вілкокс, MH; та ін. Профілювання гуморальних імунних відповідей на Clostridium difficile-специфічні антигени за допомогою білкового мікрочипового аналізу. Clin. Вакцина Імунол. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Пешіне, С.; Джануар, К.; Collignon, A. Варіабельність поверхневих білків Clostridium difficile і специфічна відповідь сироваткових антитіл у пацієнтів із захворюванням, пов'язаним з Clostridium difficile. Дж. Клін. мікробіол. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Мерріган, М.М.; Венугопал, А.; Роксас, JL; Анвар, Ф.; Маллоцці, MJ; Роксас, Б.А.; Гердінг, Д.Н.; Вішванатан В.К.; Vedantam, G. Білок поверхневого шару A (SlpA) є основним фактором адгезії Clostridium difficile до клітин-господарів. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Бьянко, М.; Феделе, Г.; Кватріні, А.; Spigaglia, P.; Барбанті, Ф.; Мастрантоніо, П.; Ausiello, CM Імуномодулююча активність білків поверхневого шару, отриманих з епідемічних та гіпервірулентних штамів Clostridium difficile. J. Med. мікробіол. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Черкетті, М.; Феделе, Г.; Спенсієрі, Ф.; Палаццо, Р.; Нассо, М.; Фреза, С.; Mastrantonio, P. Білки поверхневого шару з Clostridium difficile індукують запальні та регуляторні цитокіни в моноцитах людини та дендритних клітинах. Зараження мікробами. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Коллінз, LE; Лінч, М.; Маршаловська, І.; Крістек, М.; Рочфорт, К.; О'Коннелл, М.; Віндл, Х.; Kelleher, D.; Лошер, К. Е. Білки поверхневого шару, виділені з Clostridium difficile, викликають реакцію очищення в макрофагах. Зараження мікробами. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Чень, Ю.; Хуан, К.; Чень, Л.К.; Wu, HY; Хсу, CY; Цай Ю.С.; Ко, туалет; Tsai, PJ Мембранний холестерин має вирішальне значення для зв’язування Clostridium difficile з білками поверхневого шару та активації запалення. Фронт. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP. Чи можемо ми ідентифікувати пацієнтів із високим ризиком повторної інфекції Clostridium difficile? Clin. мікробіол. Інфікувати. 2012, 18 (Дод. 6), 21–27. [CrossRef]

61 Вулт, М.; Норен, Т.; Люнг, А.; Åkerlund, T. Відповідь антитіл IgG на токсини A і B у пацієнтів з інфекцією Clostridium difficile. Clin. Вакцина Імунол. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Лів, Б.А.; Блер, Б.; Лені, М.; Кнаубер, М.; Reilly, C.; Лоуі, І.; Гердінг, Д.Н.; Келлі, CP; Качар, К.; Бакстер, Р.; та ін. Антитіла проти токсину B в сироватці корелюють із захистом від рецидивуючої інфекції Clostridium difficile (CDI). Вакцина 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Пантості, А.; Черкетті, М.; Віті, Ф.; Ортісі, Г.; Мастрантоніо, П. Імуноблот-аналіз реакції сироваткового імуноглобуліну G на поверхневі білки Clostridium difficile у пацієнтів з діареєю, пов'язаною з прийомом антибіотиків. Дж. Клін. мікробіол. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Друді, Д.; Калабі, Е.; Кайн, Л.; Sougioultzis, S.; Келлі, Е.; Феруезер, Н.; Kelly, CP Реакція людських антитіл на білки поверхневого шару при інфекції Clostridium difficile. FEMS Immunol. Мед. мікробіол. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. О'Браєн, Дж. Б.; Маккейб, MS; Атьє-Моралес, В.; Макдональд, GS; DB, NE; Kelleher, DP Пасивна імунізація хом'яків проти інфекції Clostridium difficile з використанням антитіл до білків поверхневого шару. FEMS Microbiol. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, NE; О'Брайен, Дж. Б.; Маккейб, MS; Атьє-Моралес, В.; Kelleher, DP Активна імунізація хом'яків проти інфекції Clostridium difficile з використанням білка поверхневого шару. FEMS Immunol. Мед. мікробіол. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Брун, П.; Скарпа, М.; Грілло, А.; Палу, Г.; Менголі, К.; Зекконі, А.; Spigaglia, P.; Мастрантоніо, П.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 і SLP-36kDa посилюють імунну відповідь на антиген, що вводиться одночасно. J. Med. мікробіол. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Ширван А.Н.; Aitken, R. Виділення рекомбінантних антитіл, спрямованих проти поверхневих білків Clostridium difficile. Браз. J. Microbiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Пешіне, С.; Denève, C.; Ле Моньє, А.; Хойс, С.; Джануар, К.; Collignon, A. Імунізація хом'яків проти інфекції Clostridium difficile з використанням протеази Cwp84 як антигену. FEMS Immunol. Мед. мікробіол. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Кандалафт, Г.; Гусак, Г.; Обрі, А.; ван Фаассен, Х.; Гуань, Ю.; Арбабі-Гахруді, М.; Маккензі, Р.; Логан, С.М.; Танха, Дж. Націлювання на білки поверхневого шару за допомогою однодоменних антитіл: потенційний терапевтичний підхід проти захворювання, пов’язаного з Clostridium difficile. апл. мікробіол. Біотехнологія. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]