Вплив Cistanche Deserticola на гостре ураження легень у щурів із сепсисом

Контакт: Одрі Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com

[Анотація]Мета: Вивчити впливCistanche deserticolaна гостромутравма легень(ALI) у щурів із сепсисом. Методи. Модель сепсису була виготовлена ​​шляхом перев’язки сліпої кишки та пункції. Проводили гістопатологічні дослідження та вимірювали біологічні маркери ALI. Результати: під світловим мікроскопом у групі фізіологічного розчину спостерігався набрякміжлегеневе проміжок, велика кількість еритроцитів і нейтрофілів, білок плазми в порожнинах альвеол. Theлегеняволога/суха вага, кількість нейтрофілів і вміст білка в рідині легеневого альвеолярного лаважу, проникність легеневих судин і легенева альвеолярна проникність і MDA, SOD, а також MPO були відповідно значно збільшені. У групі сCistanche deserticolaлікування ці показники АЛІ були вірогідно нижчими, ніж у групі фізіологічного розчину.

Висновок: Cistanche deserticolaмає великий вплив на ALI у щурів із сепсисом. Терапевтичний механізм, можливо, полягає в інгібуванні нейтрофілів і окисних вільних радикалів.

【Ключові слова】сепсис; Гостре ураження легень; Cistanche deserticola

Сепсис є невідкладною клінічною та критичною хворобою, і пошук ефективних ліків для лікування завжди був основною проблемою клінічних і фундаментальних досліджень. У традиційній китайській медицині патогенез сепсису полягає в дефіциті праведності та надлишку зла. Нападна терапія зла розквіту організму є одним з ефективних заходів лікування.Цистанхеє традиційним загальнозміцнюючим засобом китайської медицини. Фармакологічні дослідження підтвердили, що він має захисні функції, такі як підвищення швидкості синтезу клітинної ДНК і опір безкисневим радикалам. Автор експериментально спостерігає діюCistanche при пошкодженні легенівпри сепсисі, щоб забезпечити ефективне дослідження для лікування сепсису.

Cistanche Echinacoside лікує захворювання легенів

1 Матеріал і методи

1. 1 ТваринаЗдоров’я 40 самців щурів 5D вагою 200–250 г, наданих Експериментальним центром тварин Університету науки і технологій Хуачжун, номер інспекції якості: TJLA—2008—1670, були випадковим чином розділені на 3 групи: 8 група нормального фізіологічного розчину, Ig/Було 12 щурів у групі мл баклажанної пасти та 12 у групі 5 г/млЦистанхегрупа. Експериментальним тваринам вводили відповідні препарати через зонд протягом 15 днів двічі на добу (Цистанхеекстракт deserticola був наданий у відділенні традиційної китайської медицини цієї лікарні), і доза 200 мг/кг використовувалася для експериментальних тварин відповідно до методу, описаного в літературі U] через 12 хвилин після перев’язки сліпої кишки та перфорації. Колекція зразків.

1.2 Гістологічне дослідження легень щура.Візьміть невелику частину лівої частки тваринилегеняз кожної групи, зафіксуйте його 10-відсотковим формальдегідом, залийте зріз парафіном і зафарбуйте HE, спостерігайте за допомогою звичайного оптичного мікроскопа, і на цій основі візьмітьлегеняЙого фіксували у відсотковому розчині глутарового альдегіду, потім фіксували в 1-відсотковому розчині чотириокису, зневоднювали етанолом і ацетоном, заливали в Epon 81, готували ультратонкі зрізи, фарбували уран-свинець і спостерігали за допомогою електронів пропускання мікроскоп.

1.3 Визначення співвідношення вологої/сухої ваги легенів щурів, співвідношення кількості клітин у рідині альвеолярного лаважу та вмісту білка.Іншій групі щурів після торакотомії робили альвеолярний лаваж, і лаважну рідину підраховували та класифікували клітини під мікроскопом. Для визначення та розрахунку вмісту білка використовується метод кумасі блискучого блакитноголегеняіндекс проникності (протеїн рідини альвеолярного лаважу/протеїн плазми, LPI).

1.4 Зміни проникності легеневих судин (PVP) у щурівВідповідно до методу, представленого Zhou et al. (2), після введення тваринам у кожній групі проводили перев’язку та перфорацію сліпої кишки, а в стегнову вену вводили 50 мг/кг лантану, щоб відкрити грудну клітку та видалити легені. Зніміть навколишні проблеми, вмочітьлегеніу розчині формаміду (кількість формаміду становить 20 мг/100 г маси тіла), інкубувати в 45-50T-інкубаторі протягом 72 годин, дочекатися, поки всі пігменти в проблемах вимиваються, вийняти проблеми, центрифугувати та взяти супернатанту. Використовуйте ультрафіолетовий спектрофотометр для колориметрії при 620 нм і обчисліть вміст етанолу відповідно до стандартної кривої, щоб визначити зміну PVP.

1.5 Визначення малонового діальдегіду (MDA) у легенях щурівДля визначення активності МДА використовували метод тіобарбітурової кислоти (ТБК). Додайте 4 мл 1,67 моль/л сірчаної кислоти. 0.541 відсоток фосфонової кислоти до 50 мл досліджуваного зразка, добре перемішати, центрифугувати при 3000 об/хв протягом 10 хвилин і обробити осад ще раз, як зазначено вище, потім додати 1 мл подвійної дистильованої води, 1 мл розчину TBA, 95-відсоткового безводного бані протягом 60 хвилин, екстракція 5 мл н-бутанолу, тетраетоксипропан як стандарт, кінцева концентрація lnmol/L, флуоресцентний спектрофотометр при 532 нм для вимірювання абсорбції.

1.6 Визначення супероксиддисмутази (СОД) при проблемах з легенями щурівВідповідно до методу, описаного в літературі [4], активність СОД визначали за допомогою методу оксидази Хуанпуїнь (набір придбаний в Нанкінському інституті біологічної інженерії Цзяньчен).

1.7 Визначення мієлопероксидази (МПО) у щурівлегеняпроблема.Візьміть легеневу проблему, щоб максимально промити залишки крові в ізотонічному фізіологічному розчині та помістити її у фосфатний буфер, що містить {{0}}. 5 відсотків цетилтриметилброміду (PH6.0) Зробіть 5 відсотків гомогенату, і діяти відповідно до інструкцій набору.

1.8 Статистичні методиВикористовуйте статистичне програмне забезпечення SPSS і вимірюйте дані у формі (x±s), використовуючи t-тест і X2.

Цистанхе

2 результати

2.1 Порівняння співвідношення мокрої/сухої масилегеняпроблеми, співвідношення кількості клітин і вміст білка в рідині альвеолярного лаважу в кожній групі наведено в таблиці 1.легеняСпіввідношення вологої/сухої маси в групі фізіологічного розчину було значно вищим, ніж у групіЦистанхегрупа (П<0.05 or="" 0.01).="" the="" cell="" count="" ratio="" and="" protein="" content="" in="" the="" alveolar="" lavage="" fluid="" of="" the="">Цистанхеу групі були значно нижчими, ніж у групі фізіологічного розчину (P<0.05 or="" 0.01).="" 0.="" 01),="" and="" with="" the="" increase="" of="" the="" dose="" concentration,="" it="" shows="" a="" significant="">

Таблиця 1 Порівняння співвідношення вологої/сухої ваги легеневої проблеми та співвідношення кількості клітин і вмісту білка в рідині альвеолярного лаважу щурів у кожній групі (X ± S)

Порівняно з групою звичайного фізіологічного розчину, P<0.><001. below="" is="" the="">

2.2 Порівняння морфологічних змін легеневих проблем щурів у кожній групі. Загальне спостереження: Theлегеніу групі фізіологічного розчину були значно збільшені та темно-червоні, з різним ступенем гіперемії та набряку на поверхні та великою кількістю легеневих інфарктів по краю; легені вЦистанхеу групі були світло-червоні з поверхнею Легкий застій і набряк, без явного інфаркту легені. Спостереження під світловим мікроскопом показало, що в групі фізіологічного розчину спостерігалися альвеолярний і легеневий інтерстиціальний застій і набряк, велика кількість дифузної нейтрофільної інфільтрації в альвеолярній порожнині, утворення деяких абсцесів і різного ступеня ателектазу, некрозу та компенсаторної емфіземи. , Тромб і подібне утворення прозорої оболонки. Вищезазначені ураження в групі Cistanche були значно зменшені. У групі фізіологічного розчину альвеолярні епітеліальні клітини набухали, пластинчасті тільця очевидно спорожнювалися, утворювалися великі вакуолі, ендотеліальні клітини капілярів були набряклі, ендотеліальні клітини постійно ушкоджувалися, міжклітинний простір розширювався, капіляри та базальні мембрани альвеол були пухкими та розширеними. Нерівномірне потовщення, нерівномірна товщина. У групі Cistanche клітини альвеолярного епітелію не були набряклими, спорожнення пластинчастих тілець було зменшено, кількість утворених вакуолей була невеликою, зв’язок між ендотеліальними клітинами капілярів був близьким до нормального, а базальна мембрана була злегка пухкою та нерівномірно потовщеною. Порівняно з групою Ig/niL цистанх, група 5 г/мл цистанх мала менший діапазон проблемних морфологічних змін легенів, а ступінь ураження легень був легшим.

2.3 Порівняння LPI та PVP щурів у кожній групі наведено в таблиці 2. LPI та PVP у групі фізіологічного розчину були значно вищими, ніж у групі Cistanche (PV0.05 або 0,01 ). LPI та PVP групи Cistanche були нижчими, що мало значний зв’язок доза-ефект.

2.4 Порівняння активності МДА.СОД.МПО влегеняпроблеми щурів у кожній групі показано в таблиці 3. Вміст МДА влегеняПроблема групи фізіологічного розчину була значно вищою, ніж у групиЦистанхев той час як активність SOD і активність MPO в проблемі легенів групи Cistanche були значно підвищені (F<0.05 or="">

3 Обговорення

Поліорганна недостатність є основною причиною незворотного стану та високого рівня смертності на пізніх стадіях сепсису (5). Захист функції органів має велике значення для зниження високого рівня клінічної смертності від сепсису. Легені є першим органом поліорганної недостатності. 1/3 пацієнтів із сепсисом помирає від гострого ураження легенів (ГЛП) і гострого респіраторного дистрес-синдрому (ГРДС). Основним патофізіологічним механізмом ALІ є накопичення великої кількості нейтрофілів у легенях, і він активує та прилипає до ендотеліальних клітин судин. У той же час концентрація відновленої коензим II оксидази, яка переносить одиничні електрони, збільшується, викликаючи респіраторні спалахи, генеруючи велику кількість вільних радикалів кисню та викликаючи пошкодження та функціонування клітинних мембран і мембранних структур через сильне окислення. Перешкоди⑹. Перекис ліпідів відображає зміну вільних радикалів кисню в проблемі та безпосередньо пов’язаний зі ступенем ураження легень (7). У ферментативній і неферментативній системі антирадикального окислення організму активність SOD підтримує хорошу кореляцію зі ступенем пошкодження проблеми ⑺. Порівняно з групою фізіологічного розчину, активності MDA і SOD групи Cistanche показали статистично значущі відмінності. Cistanche має функції підвищення імунної функції, запобігання старінню та підвищення швидкості синтезу клітинної ДНК. Експериментальні результати показали, що легеневий коефіцієнт, PLT, співвідношення нейтрофілів у рідині альвеолярного лаважу та проникність легеневих судин групи Cistanche були значно знижені, активність MDA легеневої проблеми зменшилася, SOD значно збільшилася, а активність MPO знизилася. У той же час морфологічне спостереження показало, що ступінь пошкодження легенів був значно зменшений, інфільтрація нейтрофілів зменшилася, і група 5 г/мл Cistanche мала менше пошкоджень легень, ніж група Ig/mL Cistanche, і був хороший залежність доза-ефект. Це свідчить про те, що Cistanche має значний захисний ефект щодо ALI. Механізм може бути таким: (1) Пригнічення міграції запальних клітин улегені, зменшити вільні радикали кисню, що виробляються нейтрофілами та іншими активованими клітинами, щоб біоплівка була захищена; (2) Сприяти синтезу нуклеїнової кислоти та білка та захистити від ефекту пошкодження легенів; (3) Посилення імунної функції фагоцитів і зниженнялегеняпроблемне пошкодження, викликане ендотоксином. Експериментальні результати створюють експериментальну основу для лікування гострого ураження легень при клінічному сепсисі шляхом зміцнення організму та посилення дефіциту.

посилання

[1] Цзінь Хуймін. Модель сепсису після перев'язки сліпої кишки та перфорації [J]. Китайський журнал патофізіології "990, 6 (2): 126 ~ 127.

[2] Zhou WG, Mc Collum MO, Levine BA та ін. Роль фактора активації тромбоцитів у гострому ураженні легень, асоційованому з панкреатитом, у щурів [J]. Am J Pathol, 1992, 140: 971 -979.

[3] Ван Цянь, Чжу Сяофен, Чжао Сілун. Експериментальні методи сучасної медицини [М]. Пекін: Народне медичне видавництво, 2007:508.

[4] Чжан Сюмін, Лі Цзяньчжай, Вей Мінцзін. Сучасна клінічна біохімічна лабораторія [М]. Пекін: Народна військово-медична преса, 2008: 896.

[5] Ло Женяо. Шокові дослідження [M]. Tianjin: Tianjin Science and Technology Press, 2008:345.

[6] Ксантус CA, Hall JB. Самсель Р.В. Ендотоксин у захворюваннях людини, частина 2. Біологічний ефект і клінічна оцінка антиендотоксинових теорій [J]