Хімічний склад китайської медицини Cistanche та аналіз компонентів в організмі Ⅲ

Розділ 3 Кількісний аналіз багатокомпонентних компонентів Cistanche deserticola на основі RPLC-HILIC-MS/MS

Хімічний склад традиційної китайської медицини є складним і містить різноманітні сполуки, такі як первинні та вторинні метаболіти [55-561. Досягнення всебічного та надійного аналізу хімічних компонентів традиційної китайської медицини (включаючи гідрофільні та гідрофобні компоненти) все ще є основною технічною проблемою. Крім того, вміст кожного компонента в традиційній китайській медицині дуже різниться, а звичайними методами рідкої мас-спектрометрії важко точно визначити як основні, так і слідові компоненти одночасно. 1571 Традиційного поділу одним стовпчиком недостатньо, і аналіз слідових сполук у традиційній китайській медицині буде обмежений константами. Через взаємодію сполук явище пікового перекриття є серйозним. Незважаючи на те, що для покращення розділення складних матриць використовували різноманітні передові методи хроматографії, такі як колонки для хроматографії ядро-оболонка та субмікронних частинок, колонки для хроматографії гідрофільної взаємодії тощо, все ще важко досягти повного розділення різних сполук за допомогою один стовпець [58 -59. Багатоколонкова хроматографія, яка поєднує принаймні два ортогональні хроматографічні механізми, такі як двовимірна РХ, РХ із перемиканням колонок і тандемна двоколонкова РХ, вважається можливим інструментом, який може значно розширити охоплення метаболітів. Немає сумніву, що як двовимірний LC, так і LC з перемиканням стовпців можуть значно збільшити пікову ємність (160). Однак обидва методи залежать від клапанів, прилади є складними та трудомісткими, а з’єднувальні трубки та регулятори легко встановити. Залишки існують, і ці два методи схильні вводити ряд факторів невизначеності, що призводить до кількісної невідтворюваності1571. Хоча тандемна хроматографія з обернено-фазовою гідрофільною взаємодією (RPLC-HILIC) не може значно збільшити пікову ємність, інструментальне обладнання просте, немає залишків у з’єднувальних трубках і регуляторах, і воно все ще може реалізувати зміну від гідрофільного до гідрофобного. Комплексне збереження великої кількості широкополярних сполук [61-66. Крім того, режим моніторингу множинної реакції (MRM), унікальний для потрійного квадрупольного (QgQ) мас-спектрометра, можна використовувати як інший розмір розділення для подальшого покращення здатності розділення RPLC-HILIC. Коротше кажучи, RPLC-HILIC-MRM поєднує властиві переваги RPLC, HILIC і MRM і, як очікується, стане надійним аналітичним методом.

СКІЛЬКИ ЧАСУ ДІЄ CISTANCHE?

Вміст кожного компонента традиційної китайської медицини сильно відрізняється. Порівняно з основними компонентами, люди приділяють більше уваги розробці більш чутливих методів для повного виявлення цих слідів або навіть ультраслідів сполук. Режим MRM часто рекомендується через його чудову чутливість і хороший лінійний динамічний діапазон167. Однак через насичення кінцевого розмноження електронів камери Q3 мас-спектрометра QqQ лінійний діапазон зазвичай звужений, і верхня межа кількісного визначення (ULOQ) не може повністю охопити вміст деяких основних сполук без надійного моніторингу ці мікрокомпоненти. Отже, пригнічення виробництва продукту-іонів може розширити ULOO. Використовуючи ослаблені параметри сполук, такі як іонні пари,депотенціал(ДП) іенергія зіткнення(CE) може зменшити кількість іонів цільового продукту і таким чином розширити ULOQ[68-69]

Традиційна китайська медицинаCistanches Herbaявляє собою висушене м'ясисте стебло з лускатим листямРослина цистанції. Це один із широко використовуваних традиційних китайських ліків і відомий як «женьшень пустелі». Фенілетаноїдні глікозиди завжди були гарячою темою дослідження Cistanche deserticola, але в останні роки фармакологічні ефекти інших гідрофільних компонентів, таких як маніт, також були добре відомі! 70-721. Однак у нашому звичайному кількісному аналізі CH вміст основних компонентів, таких якехінацеазид,вербаскозиді маніту іноді були занадто високими, щоб перевищувати діапазон вимірювань УФ-детектора або детектора випарного світлорозсіювання (ELSD). Тому, з точки зору загальної оцінки якості, важливо встановити аналітичний метод, який може одночасно контролювати гідрофільні та гідрофобні компоненти та точно кількісно визначити як основні, так і слідові компоненти.

Експеримент у цій главі створив надійний метод, придатний для аналізу складних матриць – рідинну мас-спектрометрію RPLC-HILIC-MS/MS (хроматографія із серійним зв’язком оберненої фази з гідрофільною взаємодією та тандемну мас-спектрометрію), за допомогою якої вдалося виявити 23 полярності в Cistanche deserticola. . Одночасне розділення, аналіз та визначення вмісту широкого спектру сполук (що охоплюють гідрофільні та гідрофобні компоненти); під час використання режиму SMRM для забезпечення відтворюваності цього методу, використання відповідних значень CE та різних іонних пар для розширення соснової шишки ULOQ основних компонентів, таких як інулін та вербаскозид, дозволяє одночасно кількісно визначити основні компоненти та слідові компоненти в Cistanche deserticola, забезпечуючи можливий інструмент для покращення контролю якості Cistanche deserticola та допомоги у досягненні широкого цільового метаболізму рослин. Геноміка.

Розділ 1 Експериментальні матеріали

1. Інструмент

Рідинний мас-спектрометр HPLC-Qtap-MS оснащений HPLC Shimadzu (обладнаний 2 насосами LC-20ADxR, автоматичним пробовідбірником SIL-20ACxR, УФ-детектором SPD-M20A, CTO-20AC термостат, онлайн-дегазація DGU-20A3R Він складається з машини, контролера CBM-20A, Shimadzu Corporation, Японія) і мас-спектрометра SCIEX5500 Qtrap (джерело іонів ESI, SCIEX, Фостер-Сіті, Каліфорнія, США) . Збір даних і обчислення були виконані програмним забезпеченням Analyst Software 1.6.2. Система очищення надчистої води Mili-Q (Milipore Company, США), електронні аналітичні ваги Mettler ME204 (Mettler Toledo Company, Швейцарія), ультразвуковий екстрактор (230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, USA).

2. Матеріали та реактиви

Колонка Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 мм, 1,8 мкм), колонка Waters XBridge Amide (4,6 мм x 150 мм, 3,5 мкм).Поліефіретеркетон(PEEK) трубопровід (Agilent Company, США). Метанол, ацетонітрил і мас-спектрометрична чистота для хроматографії та мас-спектрометрії були придбані у ThermoFisher (Піттсбург, Пенсильванія, США), а вода була надчистою водою Milli-Q (Millipore, Бедфорд, Массачусетс, США), виготовленою в лабораторії. . Ніацин (нікотинова кислота, cLogP, 0.799), бурштинова кислота (cLogP, -0.526) були придбані у компанії Sigma-Aldrich (Сент-Луїс, Міссурі, США): уридин (cLogP, -2.219), аденоїдний аденозин (cLogP, -2.158), інозин (cLogP, {{10}}.106) та гуанозин (cLogP , -3.326) були придбані у Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Салідрозид (cLogP -0.296), 6-дезоксикаталпол (cLogP, -3.071), фенілаланін (cLogP, -1.556), 8-епілоганова кислота (cLogP , -2.366), маніт (cLogP, -2.046), сахароза (cLogP , -3.087), глюрозид (cLogP, -1.757), алашаніозид А (алашаніозид A, cLogP -0.971 ), ехінакозид (echinacoside, cLogP, -1 .811), ферулової кислоти (cLogP, 1,421), актеозиду (cLogP, -0.890), ізоактеозиду (cLogP, -0.057) і пінорезинолу- -D-глюкопіранозиду (cLogP, -0.384) надано Ключовою лабораторією природних і біоміметичних препаратів Пекінського університету, цистанозид F (цистанозид F, cLogP, -2.211), придбаний у Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., цистанозид А (цистанозид А, cLogP, -1.365), 2'-ацетилактеозид (cLogP, -0.040) і ліквіритин апіозид (cLogP , -0.267) були придбані в Шанхаї Shidande Biotechnology Co., Ltd., а тубулозід A (tubulosideA, cLogP, 0,287) було придбано в Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. Чистота всіх еталонних речовин перевірялася методом HPLC-DAD-IT-TOF-MS, а чистота була більше 98%. Усі значення cLogP контрольної речовини розраховували за допомогою програмного забезпечення ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge, MA, США).