Антиоксидантна дія фенілетаноїдів з Cistanche Deserticola

Контакт: Одрі Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com

Куанбо Сюн/Шігетоші Кадота, Тадато Тані,6 і Цунео Намба

Екстракт ацетон-H2O (9:1) зі стебла Cistanche deserticola продемонстрував сильну активність поглинання вільних радикалів. Дев'ять основних фенілетаноїдних сполук були виділені з цього екстракту. Вони були ідентифіковані за допомогою ЯМР як актеозид, ізоактеозид, l^ацетилактеозид, тубулозид B, ехінакозид, тубулозид A, сірінгалід A, 3z-a-рамнопіранозид, цистанозид A і цистанозид F. Усі ці сполуки показали сильнішу активність поглинання вільних радикалів, ніж -токоферол на 1,1 -дифеніл-2-пікрилгідрази 1 (DPPH) радикалі та ксантин/ксантиноксидаза (XOD), утворені супероксидним аніон-радикалом (Oj). Серед дев’яти сполук ізоактеозид і тубулозид B, кофеїльний фрагмент яких знаходиться в d'-положенні глюкози, продемонстрували інгібуючу дію на XOD. Ми далі вивчали вплив цих фенілетаноїдів на перекисне окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів, індуковане ферментативними та неферментативними методами. Як і очікувалося, кожен з них продемонстрував значне пригнічення як аскорбінової кислоти/Fe2 плюс, так і АДФ/НАДФН/Fe3 плюс індукованого перекисного окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів, які були сильнішими, ніж а-токоферол або кавова кислота. Було виявлено, що антиоксидантний ефект потенціюється збільшенням кількості фенольних гідроксильних груп у молекулі.

Ключові слова: Cistanche deserticola; фенілетаноїди;антиоксидантний; DPPH (1,1 -дифеніл-2-пікрилгідразил) радикал; аніон-радикал супероксиду; перекисне окислення ліпідів

стебло Cistanche deserticola

Стебло Cistanche spp. (Цистанхея трав'яна, сімейство Orobanchaceae) — тонізуючий засіб у традиційній китайській медицині, який використовується при нирковій недостатності, що характеризується імпотенцією, відчуттям холоду в стегнах і колінах, жіночим безпліддям і запорами через сухість кишечника в старечому віці.З цих рослин було виділено ряд компонентів, включаючи фенілетмоїди (іноді їх називають фенілпропаноїдами),2) іроїди3* та полісахариди4). Sato et al5} повідомили, що деякі фенілетаноїди з цього необробленого препарату показали захисний ефект проти зниження як сексуальної поведінки, так і поведінки, що навчається, у висячих мишей, які зазнали стресу. Фенілетаноїди є основними складовими цих рослин і, як вважають, сприяють різним діям цього препарату.6)

Фенілетаноїди широко поширені в царстві рослин, і було виявлено, що деякі з них мають дію проти аноксиї,7) проти новоутворень,8) інгібування ферментів,9* протизапальну,10) протинефритну,1n протимікробну дію та імуномодуляція.12) Також повідомлялося про дослідження антиоксидантної активності деяких фенілетаноїдів з Pedicularis, 13 -15), але не було знайдено звітів про антиоксидантну активність фенілетаноїдів з видів Cistanche.

Загальновідомо, що вільні радикали є критично залученими в різні патогенези, такі як рак, серцево-судинні розлади, артрит, запалення, а також у дегенеративних процесах, пов’язаних зі старінням.16™18) У нашому скринінгу засобів проти старіння з природних ресурсів ми виявили, що кожен із CHC13 (C), EtOAc (E), ацетону (A), ацетон-H2O (9:1) (AH) і водного (H) екстракту стебла Cistanche deserticola показав потужний DPPH радикальну активність (рис. 1), серед яких найсильніше виявляв ацетон—Н?.(9:1) екстракт (АХ). Екстракт ацетон-H2O (9:1) містив високий відношення фенілетаноїдів, які, ймовірно, були активними складовими ефектів поглинання вільних радикалів. Ми виділили основні фенілетаноїди з цього екстракту та вивчили їх антиоксидантну дію шляхом поглинання радикалів DPPH і супероксид-аніон-радикалів, утворених ксантином/XOD, а також інгібування ними аскорбінової кислоти/Fe2 плюс і ADP/NADPH/Fe3 плюс індукованого перекисного окислення ліпідів у печінці щурів. мікросоми.

Cistanche deserticola

МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ

Реагенти Поліамід C-200 (75一150/zm) і силікагель (Wakogel C-200, 75—150^m) порошок для колонкової хроматографії, DPPH (1,1 -дифеніл{{ 8}}пікрилгідразил), ксантин, XOD (ксантиноксидаза), NBT (нітросиній тетразолій), ADP, g-NADPH, кавова кислота та a-токоферол були придбані у Wako Pure Chemicals, Осака, Японія. Малональдегід біс(диметилацеталь) був з Tokyo Kasei, Токіо, Японія. BSA (бичачий сироватковий альбумін) і алопуринол були отримані від sigma, St. Луїс, США. Інші хімікати мали аналітичну чистоту.

Інструменти УФ-поглинання вимірювали на aЗаписувальний спектрофотометр Shimadzu UV-2200, ЯМР-спектри записували на JEOL GX-400 або JEOL JNM-LA 400WB FT ЯМР-системі.

Рослинні матеріали Комерційний необроблений лікарський засіб (вироблений у Ней-Монгголі, придбаний на ринку сирих наркотиків Бочжоу, провінція Аньхой, Китай, 1995; зразок ваучера, TMPW № 15479, зберігається в Музеї Materia Medica, Аналітичний дослідницький центр етномедицини, Дослідження Institute for Wakan-Yaku, Toyama Medical and Pharmaceutical University) було ідентифіковано як стебла Cistanche deserticola YC Ma шляхом порівняння його морфологічних і анатомічних ознак з автентичним зразком, наданим професором Дауен Ши, кафедра фармакогнозії, Шанхайський медичний університет, Китай.

Екстракція та виділення Порошкоподібний сирий лікарський засіб (5,87 кг) послідовно екстрагували CHCl3 (12, 9 1x2) та EtOAc (9 1 x 3) при кімнатній температурі та кип’ятили зі зворотним холодильником із ацетоном (9 1 x 3), ацетон-玦0 (9:1,91x3) і H2O (7.5 1x4), щоб отримати екстракти CHC13 (C) (28,7 г), EtOAc (E) ( 13,4 г), ацетон (A) (95 г), ацетон-H2O (9:1) (AH) (175 г) і H2O (H) (2,51 кг), відповідно. Порцію 100 г екстракту ацетон-H2O (9:1) піддавали колонці з поліамідом C-200 (4{{50}}0 г) і елюювали H2O ({{41 }}), а потім MeOH (5 1). Елюент MeOH (20 г) завантажували в колонку з силікагелем (600 г) і елюювали CHCl3-MeOH-H2O (8:3:0,3) (5 1), щоб отримати 10 фракцій. Кожну фракцію піддавали колонці Sephadex LH-20 і елюювали різними співвідношеннями MeOH-H2O (0±50 відсотків); дев'ять основних фенілетаноїдів 1 (607 мг), 2 (286 мг), 3 (43 мг), 4 (187 мг), 5 (1,1 г), 6 (100 мг), 7 (208 мг), 8 (168 мг) , отримано 9 (75 мг).

Тварини Самці Std: використовували щурів Wistar (8 тижнів, 230 × 250 г). Тварин було придбано в Shizuoka Laboratory Animal Center, їх годували лабораторним гранульованим кормом (Clea Japan) і давали воду ad libitum.

Приготування суспензії мікросом печінки щурів Фракцію мікросом печінки щурів готували за методом Kiso та ін.19), але без попередньої обробки фенобарбіталом. Після того, як тварини голодували протягом 24 годин, печінку перфузували охолодженим 0.9% розчином NaCl in situ, потім нарізали на тонкі шматочки та гомогенізували в холодному 1,15% розчині KC1 (1.{{9} } мл/г вологої ваги печінки). Гомогенат розбавляли в чотири рази 1,15% розчином KCl і центрифугували при 8000 g протягом 20 хвилин при 4 градусах. Фракцію супернатанту потім збирали та ультрацентрифугували при 105000 g протягом 60 хв. Отриманий осад ресуспендували в тому ж обсязі 1,15% розчину KCl. Вміст білка визначали за методом Lowry et al., використовуючи альбумін як стандарт.

Підготовка зразків Досліджувані зразки розчиняли у воді або етанолі та розбавляли водою до різних концентрацій. Кінцеві концентрації етанолу були нижче 1 відсотка в усіх системах аналізу, за винятком аналізу поглинання радикалів DPPH. Етанол у кінцевій концентрації нижче 1 відсотка не вплинув на ці системи аналізу.

Ефект поглинання радикалів DPPH Ефект поглинання відповідав інтенсивності гасіння радикала DPPH, як описано Hatano та ін.21) П’ятьсот /A 60 мкм DPPH в EtOH додавали до 500 /zl розчину зразка і давали прореагувати протягом 30 хв при кімнатній температурі, потім вимірювали оптичну густину при 520 нм. Для холостого зразка використовували EtOH замість розчину DPPH, а для контролю використовували H2O замість розчину зразка. Значення IC50 розраховували за лініями регресії, де абсциса представляла концентрацію досліджуваної сполуки, а ордината – середній відсоток зменшення радикала DPPH з чотирьох окремих тестів.

Вплив на генерацію супероксидних аніон-радикалів Виробництво супероксидних аніонів у системі ксантин/XOD було визначено за допомогою половинного розміру методу Imanari та ін.22) Суміш, що складається з 900/zl 0.05m Na2CO3 (рН 10,2), 50/л кожного з 3мМ ксантину, 3мМ EDTA, 1,5мг/мл BSA, 0,75мМ NBT і досліджуваного зразка додавали 50/л 0,1мг/мл XOD для початку реакція. Після інкубації протягом 30 хвилин реакцію зупиняли 50 мкл 6 мМ CuCl2 і вимірювали поглинання при 560 нм. Контрольний розчин готували так само, але замість розчину зразка використовували 50 мкл H2O. У холостому розчині замість розчину XOD використовували 50 мкл H2O. Значення IC50 розраховували за лініями регресії, де абсциса представляла логарифм концентрації досліджуваної сполуки, а ордината – середній відсоток інгібування зниження NBT на чотири у залежних тестах.

Інгібуючі ефекти на активність XOD Інгібуючі ефекти на активність XOD оцінювали за методом Hatano et al.* з деякими модифікаціями. Суміш, що складається з 600/11 буфера (0.1 М розчину фосфату, pH 7,5), 50 μ розчину XOD (0,068 ОД/мл у буфері) та 50 мкл розчину зразка попередньо інкубували протягом 10 хвилин при 25 градусах. Потім до суміші додавали 300 мкл розчину ксантину (0,1 мМ у буфері) і отриманий розчин інкубували протягом 30 хвилин при 25°С. Ферментну реакцію припиняли додаванням 1 н. НС1 (100/мкл) і виміряли поглинання реакційної суміші при 295 нм. Концентрацію сечової кислоти, що утворилася в суміші, розраховували з абсорбції після віднімання абсорбції холостого розчину, який готували, як описано вище, за винятком того, що розчин XOD замінювали 50 мкл буфера. Інгібуючий вплив на XOD виражався відсотком інгібування (відсоток) утворення сечової кислоти порівняно з контролем, у якому замість розчину зразка використовувалася вода. В якості позитивного контролю використовували відомий інгібітор XOD, алопуринол.

Інгібуючий вплив на перекисне окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів Перекисне окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів, неферментативно індуковане аскорбіновою кислотою/Fe2 плюс і ферментативно індуковане АДФ/НАДФН/Fe3 плюс, вимірювали за методом Kiso et al.19) з деякими модифікаціями. .

a) Аскорбінова кислота/Fe2 плюс індуковане перекисне окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів: реакційна суміш складалася з 390/11 100мМ KC1/45мМ Трис-HCl (pH 8,0), 50 мкл мікросомальної фракції в 1,15 відсотках KC1 (20 мг білка/мл) і 50 μ розчину зразка. Після додавання 10/11 10 мМ аскорбінової кислоти/0,5 мМ FeSO4 і потім інкубації при 37° протягом 20 хв реакційну суміш охолоджували льодом, щоб зупинити реакцію. Перекисне окислення ліпідів вимірювали методом тіобарбітурової кислоти24) і виражали як утворення MDA (малонового діальдегіду). що

b) АДФ/НАДФН/Fe3 плюс індуковане перекисне окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів: реакційна суміш містила 290 мкл 100мМ KC1/45him Tris-HCl (рН 8,0), 50/л мікросомальної суспензії в 1,15% KC1 (20 мг білка/мл) і 50 μ зразка у воді. П'ятдесят свіжоприготованих 20 мМ ADP, 50 мкл 1 мМ NADPH і 10 2 мМ FeCl3 додавали, а потім інкубували при 37 градусах протягом 30 хвилин. Вимірювали перекисне окислення ліпідів і розраховували IC50 за описаним вище методом.

Переваги цистанчу: захищають печінку

РЕЗУЛЬТАТИ

Визначення структури Шляхом прямого порівняння даних ^H-ЯМР та 13C-ЯМР з літературними даними2* дев’ять фенілетаноїдів було ідентифіковано як 2,-ацетилактеозид (1), цистанозид А (2), тубулозид А (3), ехінакозид ( 4), актеозид (5), сірінгалід A 3'-a-рамнопіранозид (6), тубулозид B (7), ізоактеозид (8) і цистанозид F (9) відповідно (рис. 2). Однак для актеозиду, репрезентативної сполуки фенілетаноїдів, віднесення сигналів 13C-ЯМР C-3 і C-4 в агліконовому фрагменті, C-3, C-4 , C-5 і C-6 у кавовій частині в попередніх звітах25) вводили в оману. За допомогою методу 2D-ЯМР, такого як HMBC та HMQC, ми однозначно призначили дані 13C-ЯМР актеозиду як агліконового фрагмента Cl: 131,49, C-2: 117,14, C-3: 146,07, C{ {41}}: 144,62, C-5: 116,34, C-6: 121,29, Ca: 72,33, C# 36,54; кофеїльний фрагмент Cl: 127,63, C-2: 115,26, C-3: 146,79, C-4: 149,78, C-5: 116,55, C-6: 123,24 , Ca: 168,33, Cg: 114,68, Cy: 148,04; фрагмент глюкози C-l': 104,16, C-2': 75,97, C{-3': 81,66, C4: 70,39, C-5': 76,16, C-6' : 62,35; та фрагмент рамнози: Cl: 102,99, C-2: 72,22, C-3: 72,05, C-4: 73,79, C-5: 70,58, C-6 : 18,46.

Взаємозв’язки між структурою та активністю були вивчені для цих дев’яти фенілетаноїдів за їх активністю поглинання радикалів DPPH і супероксидних аніон-радикалів, створених ксантином/XOD, аскорбінової кислоти/Fe2 плюс і ADP/NADPH/Fe3 плюс індукованого перекисного окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів. Кофейну кислоту та a-токоферол, які є добре відомими поглиначами вільних радикалів і антиоксидантами, використовували як речовини позитивного контролю.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>сірінгалід A S'-a-рамнопіранозид (6) (IC5O=5.52 /мкм) > цистанозид F (9) (IC50=6.29 /мм) > a-токоферол (IC{{10 }}.2//m). Тубулозид B ⑺, ехінакозид (4), 2/-ацетилацетозид (1), тубулозід A (3), актеозид (5) та ізоактеозид (8) (IC5O=2.99一3.49 /мм), кожен з яких містить чотири фенольні гідроксильні групи в молекулі, так само виявляв сильнішу активність, ніж цистанозид А (2), у якого 3-OH агліконового фрагмента було метильовано. Сирінгалід A 3z-a-рамнопіранозид (6), який має лише одну ОН-групу в агліконовому фрагменті, показав відносно слабку активність. Цистанозид F (9), який має лише дві гідроксильні групи, розташовані в кафеоїльному фрагменті, але не має фенілетанол-аглікону, виявляв найслабшу активність.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>цистанозид A (2) (IC5O=3.69 jUm) > a-токоферол (IC50 > 10 〃m).

Інгібуючий вплив на активність XOD. Лише ізоактеозид (8) і тубулозид B (7), кофеїльний фрагмент яких знаходиться в 6z-положенні глюкози, мали інгібуючий вплив на активність XOD, та інші фенілетаноїди, які містять кафеоїловий фрагмент у ^- положення глюкози, не показало жодних ефектів при досліджуваних концентраціях (25 × 200 мкм) (Таблиця 1). виділив дев'ять основних фенілетаноїдних сполук із цього екстракту та визначив їх структуру за допомогою ЯМР. система як тубулозид B (7)M2'-ацетилактеозид (1) ізо-актеозид (8) ехінакозид (4) тубулозид A (3) M acteo side (5) > сірінгалід A 3'-a-рамнопіранозид (6) > цистанозид A (2) > цистанозид F (9); у системі ADP/NADPH/Fe3 плюс як тубулозид B (7)2,-ацетилактеозид (^^ізо актеозид (8) актеозид (5) > тубулозид A (3) > сторона ехінако (4) > сірінгалід A 3z-a-рамнопіранозид (6) > цистанозид A (2) > цистанозид F (9). Обидва ці порядки були подібними до тих, що були в наведених вище тестах поглинання вільних радикалів, особливо в тесті поглинання радикалів DPPH. Проте кількість фенольних гідроксильних груп у молекулі відіграв найважливішу роль у інгібуванні перекисного окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів.

ефекти цистанхи

ДИСКУСІЯ

Ми перевірили активність поглинання вільних радикалів у різних розчинниках екстрактів стебла Cistanche deserticola на радикал DPPH і виявили, що екстракт ацетон-H2O (9:1) демонструє найсильнішу активність. Щоб знайти активні компоненти, що поглинають вільні радикали, ми виділили з цього екстракту дев’ять основних фенілетаноїдних сполук і визначили їх структуру за допомогою ЯМР.

Антиоксидантну дію цих фенілетаноїдів оцінювали за їхньою активністю поглинання вільних радикалів і активністю проти перекисного окислення ліпідів. В якості позитивного контролю використовувався широко відомий а-токоферол. Якліпофільність a-токоферолу може впливати на його активність у поточних системах аналізу, за винятком аналізу поглинання радикалів DPPH, ми взяли кавову кислоту як іншу речовину позитивного контролю.

Спочатку ми провели випробування активності поглинання вільних радикалів. Усі 9 протестованих фенілетаноїдів, безсумнівно, продемонстрували сильнішу активність поглинання радикалів DPPH і супероксид-аніон-радикалів, ніж а-токоферол, але деякі були сильнішими, а інші слабшими, ніж кавова кислота. Активність поглинання радикалів зростала зі збільшенням кількості фенольних гідроксильних груп. Вважається, що неповний паралелізм активності поглинання радикалів DPPH і супероксид-аніонів пояснюється різними характеристиками між видами радикалів і деякими іншими факторами, залученими до цих двох реакційних систем,21,26), оскільки радикал DPPH є хімічно індукованим радикалом, який реагує з поглиначами радикалів простим хімічним способом, тоді як супероксид-аніон-радикал генерується ферментною реакцією ксантин/XOD.

Якщо фенілетаноїди інгібують утворений ксантин/XOD супероксид-аніон-радикал, інгібування можна розглядати як результат їх активності поглинання супероксид-аніон-радикалів або (та) інгібування ними ферменту XOD,23), тому ми провели тест на їх інгібуючий ефект ксантиноксидази. Цікаво, що вибірково інгібували лише ізоактеозид (8) і тубулозид B (7), кофеїльний фрагмент яких знаходиться в 6/-положенні глюкози. Вони показали ефект при концентрації 25—200 мкМ на 3,4x10^3U/мл (10 мкг/мл) XOD, хоча активність була слабшою, ніж алопуринол; інші сполуки, кофеїльний фрагмент яких знаходиться в 《-положенні глюкози, не виявляли інгібуючої дії. Цей результат забезпечив перше повідомлення про інгібуючу дію фенілетаноїдів на фермент XOD. Chan та ін.21) повідомили, що кавова кислота та деякі її аналоги мали інгібуючий вплив на активність XOD, однак ми не виявили такого ефекту кавової кислоти в поточних умовах реакції. У цьому тесті концентрація XOD була подібною до такої в тесті впливу на генерацію супероксид-аніон-радикалу (4,3 мкг/мл), але концентрація сполук була значно вищою, ніж в останньому. Отже, інгібування генерації Oj цими фенілетаноїдами зумовлено їхньою активністю поглинання радикалів, але не інгібіторною активністю ферменту XOD.

Добре відомо, що вільнорадикальна ланцюгова реакція зрештою призводить до перекисного окислення ліпідів.28,29) Тому ми досліджували ці фенілетаноїдні сполуки на предмет їх впливу на перекисне окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів, індуковане ферментативною системою ADP/NADPH/Fe3 plus, а також індуковане неферментативна система аскорбінова кислота/Fe2 плюс. Усі ці сполуки продемонстрували сильніші ефекти проти перекисного окислення ліпідів, ніж кавова кислота та а-токоферол в обох системах. Загальновизнано, що обидві системи каталізуються іонами заліза, або Fe2 плюс, або Fe3 плюс, пов’язаними з пероксильними радикалами ліпідів,30,31) і що гідроксильний радикал OH відіграє найважливішу роль у перекисному окисленні ліпідів, 32 _34) хоча ініціація OH була піддана сумніву в деяких звітах.35祁6) З іншого боку, супероксидний аніон-радикал OJ, який є основним продуктом атаки e_ на O2 в радикальному ланцюзі, є досить погано реактивний радикал і не призводить до самого перекисного окислення ліпідів. Хоча ці фенілетаноїди показали слабшу активність поглинання супероксидного аніонного радикалу, ніж кавова кислота, вони показали набагато сильнішу дію проти перекисного окислення ліпідів, ніж остання. Таким чином, ми вважаємо, що вони, як і деякі інші ароматичні поліфеноли, що розривають ланцюг, можуть інгібувати описане вище перекисне окислення ліпідів у мікросомах печінки щурів шляхом хелатування іонів Fe2 плюс або Fe3 плюс, а також шляхом поглинання супероксидного радикала Oj для руйнування радикальної ланцюгової реакції. .37,38) Крім того, вони також можуть поглинати більш токсичні види радикалів, такі як гідроксильний радикал і ліпідний пероксильний радикал, щоб безпосередньо переривати перекисне окислення ліпідів з більшою ефективністю, ніж кавова кислота.38,39)

Лі та ін. досліджували деякі фенілетаноїдні глікозиди, включаючи актеозид (вербаскозид) (5), ізоактеозид (ізовербаскозид) (1) і ехінакозид (4) з Pedicularis на предмет їх інгібування автоокислення лінолевої кислоти в міцелах, небіологічної системи,13) для їх захисту від окислювального гемолізу in vitro,14''1, а також для їх поглинаючої дії на генерований NBT/PMS/NADH супероксид та інгібування перекисного окислення ліпідів, індукованого аскорбіновою кислотою/Fe2 плюс у мікросомах печінки миші.15) Подібна активність -структурний зв'язок спостерігався у звітах Li et al. і наші результати. Тобто, активність фенілетаноїдів щодо інгібування перекисного окислення ліпідів залежить головним чином від кількості та стеричного положення фенольних гідроксильних груп.15) На основі їх стереохімії фенольні гідроксильні групи кофеоїльного фрагмента на актеозиді (5), тубулозиді A ( 3) і ехінакозид (4), які містять кофеїл у 4z-положенні глюкози, легше утворять водневий зв’язок із гідроксильними групами рамнозилу, ніж ті, що містяться в ізоактеозиді (8) і тубулозиді B (7), які мають кофеїл у 6'-положенні глюкози. Таким чином, останній зарезервував більше вільних фенольних гідроксильних груп, ніж перший, і тому продемонстрував сильнішу антиліпідну перекисну активність. Ми також помітили, що 2z-ацетилювання цих фенілетаноїдів, хоча й незначно, посилило їх антиоксидантну дію. Наприклад, актеозид (5) та ізоактеозид (8), коли 2'-ацетильовані у 2/-ацетилактеозид (1) і тубулозид B (7), відповідно, показали більш сильну активність у всіх чотирьох системах аналізу. Через перевагу стереохімії та 2'-ацетилювання тубулозид B (7) продемонстрував найсильнішу антиоксидантну активність серед досліджуваних зразків. Можливо, через заміну третього цукрового фрагмента в положенні 6'~ ця кореляція не підходить добре у випадку тубулозиду А (3) або ехінакозиду (4); однак у системі ADP/NADPH/Fe3 plus тубулозид A ⑶ все ще виявляв сильнішу активність проти перекисного окислення ліпідів, ніж ехінакозид (4).

Крім того, порядок активності поглинання радикалів DPPH продемонстрував кращий паралелізм із таким для перекисного окислення ліпідів, ніж порядок активності поглинання супероксидних аніон-радикалів. Це знову довело, що аналіз поглинання радикалів DPPH є зручним і надійним методом для аналізу антиоксидантів,26) хоча радикал DPPH є хімічно індукованим радикалом, тоді як супероксидний аніонний радикал може бути біологічно ендогенним радикалом.

Підсумовуючи, у цьому дослідженні всі дев’ять фенілетаноїдів продемонстрували значну активність поглинання вільних радикалів і дію проти перекисного окислення ліпідів. Антиоксидантний ефект потенціювався збільшенням кількості фенольних гідроксильних груп у молекулі. Як можна собі уявити, доведені тут антиоксидантні ефекти цих фенілетаноїдів можуть відігравати важливу роль у дії препарату Cistanchis Herba і можуть частково пояснити механізми дії деяких фенілетаноїдів проти новоутворень,8* запалення10) та нефриту, 1 n, в якому серйозно задіяні вільні радикали.

Cistsanche Echinacoside: Антиокислювач

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ

1) Намба Т., "Енциклопедія вакан-яку (традиційна китайсько-японська медицина) з кольоровими малюнками", 5, том II, Хоікуша, Токіо, 1994, стор. 16-17.

2) а) Кобаясі Х., Карасава Х., Міясе Т., Фукусіма С., Хім. Pham. Бюл., 32, 3009—3014 (1984); б) Там само, там же, 32, 3880—3885 (1984); c) Idem, там же, 33, 1452—1457 (1985); d) Карасава Х., Кобаясі Х., Такідзава Н., Міясе Т., Фукусіма С., Якугаку Зассі, 106, 562—566 (1986); д) Там же, там же, 106, 721—724 (1986); /) Кобаясі Х., Огучі Х., Такідзава Н., Міясе Т., Уено А., Усмангані К., Ахмад М., Хім. фарм. Bull., 35, 3309一3314 (1987); g) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., ibid., 38, 1927—1930 (1990).

3) a) Kobayashi H, Komatsu J., Yakugaku Zasshi, 103, 508一511 (1983); b): Кобаясі Х., Карасава Х., Міясе Т., Фукусіма С., Хім. фарм. Бюл., 32, 1729—1734 (1984); c) Там же, там же, 33, 3645—3650 (1985).

4) Наран Р., Ебрінгерова А., Громадкова З., Патопрстий В., Фітохімія, 40, 709—715 (1995).

5) Сато Т., Козіма С., Кобаясі К., Кобаяші Х., Якугаку Засші. 105, 1131—1144 (1985).

6) Jin XL, Zhang QR, China J. Chinese Materia Medica, 19, 695-697 (1994).

7) Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y., Yakugaku Zasshi, 110, 932-935 (1990).

8) a) Pettit G. R・, Numata A., Takemura T., Ode RH, Narula A, S., Schmidt JM, Cragg GM, Pase CP, J. Nat. вироб., 53, 456—58 (1990); b) Saracoglu I., Inoue M., Calis I., Ogihara Y., Biol. Pharm, Bull., 18, 1396-1400 (1995).

9) Andary C., '4Caffeic Acid Glycoside Esters and Pharmacology/ ed. Скальберт А., Поліфенольні явища, видання INRA, Париж, 1993, стор. 237-245.

10) Murai M., Tamayama Y., Nishibe S., Planta Med.. 61, 479― 80 (1995).

11) Хаясі К., Нагамацу Т., Іто М., Хатторі Т., Сузукі Ю., Японія. J. Pharmacol., 66, 47一52 (1994).

12) a) Molnar J., Gunics G., Mucsi I., Koltai M., Petri L, Shoyama Y., Matsumoto M., Nishioka L, Acta Microbiol. Hung.. 36, 425― 32 (1989); b) Sasaki H., Nishimura T., Morota T., Chin M., Mitsuhashi H", Komatsu Y., Maruyama H., Tu GR, He W., Xiong YL, Planta Med., 55, 4582462 (1989).

13) Li J., Wang PF, Zheng RL, Liu ZM, Jia 乙 J., Planta Med., 59, 315-317 (1993).

14) Zheng RL, Wang PF, Li J., Liu Z. M,, Jia ZJ, Chem. фіз. Ліпіди. 65, 151—154 (1993).

15) Li J., Zheng RL, Liu 乙 M., Jia 乙 J., Acta Pharmacol. Sinica, 13, 427T30 (1992).

16) Барбер Д.А., Гарріс С.Р., American Pharmacy. 34, 26一35 (1993).

17) Elstner EF, Klin Wochenschr, 69, 949-956 (1991).

18) Мартін Г.Р., Даннер Д.Б., Холбрук, Нью-Джерсі, Енн. Rev. Med., 44, 419-29 (1993).

19) Кісо Ю., Токіно Х., Хатторі М., Сакамото Т., Намба Т., Planta Med.. 50, 298-302 (1984).

20) Лоурі О.Г., Роузбро Нью-Джерсі, Фарр А.Л., Рендалл Р.Дж., Дж. біол. Chem.. 193, 265-275 (1951).

21) Hatano T., Edamatsu R., Hiramatsu M., Mori A., Fujita Y., Yasuhara T" Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 37, 2016 一 2021 (1989).

22) Іманарі Т., Хірота М., Міядзакі М., Ігаку Но Аюмі, 101, 496—497 (1977).

23) Хатано Т., Ясухара Т., Йосіхара Р., Агата Л., Норо Т., Окуда Т., Хім. фарм. Бюл., 38, 1224—1229 (1990).

24) Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K., Anal. Biochem., 95, 351一358 (1979).

25) a) Lahloub M, F., Zaghloul AM, El-Khayat SA, Afifi MS, Sticher O., Planta Med.. 57, 481-85 (1991); b) Нісімура Х., Сасакі Х., Інагакі Н., Чін М. (Чжень 乙 X.), Міцухаші Х., Фітохімія. 30, 965-969 (1991); c) Budzianowski J., Skrzypczak L., ibid,, 38, 997—1001 (1995),

26) Marsden SB, Nature (London), 181, 1199—1200 (1958).

27) Chan WS, Wen PC, Chiang HC, Anticancer Res., 15, 703一 708, (1995).

28) Janero DR, Burghardt B., Biochem, Pharmacol.. 37, 3335一3342 (1988).

29) Бюттнер Г.Р., арх. Біохім. Biophys., 300, 535一543 (1993).

30) Герберт В., Шоу С., Джаятіллеке Е., Стоплер-Касдан Т., Стовбурові клітини, 12, 289-303 (1994).

31) Aust SD, Miller DM, Samokyszyn VM, Methods Enzymol., 186, 457-463 (1990).

32) Кубота С., Ікегамі Ю., Курокава Т., Сасакі Р., Сугіока К., Накано М., Biochem. біофіз. Res, Commun., 108, 1025一1031 (1982).

33) Ягі К., Ішіда Н., Комура С., Охіші Н., Кусаї М., Кохно М., Biochem. біофіз. рез. Commun., 183, 945一951 (1992).

34) Хокенбері Д. М., Олтвай З. Н., Інь Х. М., Мілліман К. Л., Корсмайер С. Дж., Cell. 75, 241—251 (1993).

35) Bucher JR, Tien M., Aust AD, Biochem. біофіз. Res, Commun., Ill, 777—784 (1983).

36) Yoshida T., Otake H., Aramaki Y., Hara T., Tsuchiya S., Hamada A., Utsumi H., Biol. фарм. Бюл.. 19, 779—782 (1996).

37) Афанас5 Е. І. Б., Дорожко А. Л., Бродський А. В., Костюк В. А., Потапович Л. А., Biochem. Pharmacol., 38, 1763-1769 (1989).

38) Robak J., Gryglewski RJ, Biochem. Pharmacol.. 37, 837-841 (1988).

39) Чімі Х., Морель І., Лескоат Г., Пасделуп Н., Сіллард П., Сіллард Дж., Токсикологія in Vitro, 9, 695一702 (1995)