Гострий дозозалежний нейропротекторний ефект полі(про{1}} естрадіолу) у мишачої моделі травми спинного мозку

Анотація

17 -Естрадіол (E2) забезпечує нейропротекторію на доклінічних моделях ушкодження спинного мозку при системному введенні. Мета цього дослідження полягала в тому, щоб застосувати E2 локально до ушкодженого спинного мозку протягом тривалого часу з використанням полі(про-E2) плівкових біоматеріалів.

Оскільки люди дізнаються більше про травми спинного мозку, ми починаємо усвідомлювати, який вплив вони мають на фізичне та психічне здоров’я людей. Хоча травми спинного мозку можуть спричинити багато негативних наслідків, на щастя, їхній вплив на пам’ять можна контролювати.

По-перше, ми повинні уточнити, що таке травма спинного мозку. Спинний мозок – це нерв, захищений у хребті, який відповідає за передачу інструкцій від мозку до різних частин тіла. Якщо спинний мозок пошкоджено, деякі частини тіла втратять хороший зв’язок із мозком, що призведе до порушення рухів кінцівок, чутливості та вегетативного контролю.

Травми спинного мозку можуть мати певний вплив на пам'ять людини, особливо на ранніх етапах реабілітації хворих з ушкодженнями спинного мозку. Травми спинного мозку можуть призвести до погіршення уваги, робочої пам’яті та здатності емоційної обробки, що вплине на здатність людини пам’яті.

Однак ці негативні наслідки поступово зменшаться в міру проходження пацієнтами реабілітаційного лікування. Пацієнти можуть покращити свою пам’ять, беручи участь в іграх на пам’ять та інших когнітивних тренуваннях. У той же час фізична реабілітація також сприяє відновленню рухових і сенсорних функцій організму, тим самим покращуючи емоційні та когнітивні функції.

Ми повинні заохочувати пацієнтів із травмами спинного мозку активно брати участь у реабілітаційному лікуванні та наполегливо проходити реабілітаційне навчання для покращення фізичного та психічного здоров’я. Будь ласка, повірте, що за допомогою правильного пізнання та післяопераційного лікування пацієнти можуть подолати вплив травми спинного мозку на пам’ять і продовжувати жити активним життям. Можна побачити, що нам потрібно покращити пам’ять, і Cistanche може значно покращити пам’ять, оскільки Cistanche також може регулювати баланс нейромедіаторів, наприклад, підвищувати рівні ацетилхоліну та факторів росту, які дуже важливі для пам’яті та навчання. Крім того, Cistanche також може покращити кровотік і сприяти доставці кисню, що може гарантувати, що мозок отримує достатню кількість живлення та енергії, тим самим покращуючи життєздатність і витривалість мозку.

Клацніть знати добавки для покращення пам'яті

Після травми спинного мозку у дорослих мишей-самців полі(про-Е2) плівки імплантували субдурально, а нейропротекторію оцінювали за допомогою імуногістохімії через 7 днів після травми та імплантації. У цих дослідженнях полі(про-Е2) плівки помірно покращували нейропротекторію, не впливаючи на запальну відповідь у порівнянні з пораненими контрольними групами.

Щоб збільшити вивільнену дозу Е2, плівки полі(про-Е2), що вивільняють болюс, були виготовлені шляхом включення незв’язаного Е2 у плівки полі(проЕ2).

Однак, порівняно з постраждалими контрольною групою, полі(про-Е2) плівки, що вивільняють болюс, суттєво не посилили нейропротекцію або не обмежили запалення через 7 або 21 день після травми. Майбутня робота буде зосереджена на розробці полі(про-Е2) біоматеріалів, здатних точніше вивільнення терапевтичних доз E2.

ВСТУП

Травматичне ураження спинного мозку (ТСМ) — це виснажливий стан, який щороку вражає понад 18{1}} людей у ​​Сполучених Штатах1, тоді як глобальна поширеність СПМ становить від 236 до 1009 на мільйон.2

Пацієнти, уражені SCI, мають серйозні неврологічні дефіцити, включаючи втрату чутливості, порушення функції кишечника/сечового міхура та параліч.3,4 Первинний вплив на спинний мозок призводить до загибелі нейронів у місці пошкодження, що ще більше посилюється кількома каскадами вторинних пошкоджень, що включають астроцити та макрофаги. .

З часом ці астроцити утворюють гліальний рубець, який перешкоджає виходу аксонів за межі ураження.5 На сьогоднішній день не існує схвалених FDA нейропротекторних препаратів для лікування ТСМ.

Дослідження, що охоплюють кілька десятиліть, були зосереджені на системному введенні біомолекул для запобігання втрати нейронів через вторинне ушкодження та/або для сприяння регенерації аксонів, що зрештою призводить до відновлення втраченої функції.6 Однією з біомолекул, яка продемонструвала значну перспективу в доклінічних моделях ТСМ, є жіноча статевий гормон, 17 -естрадіол (E2).

Введення E2 є широко корисним для центральної нервової системи шляхом зменшення запалення,7–9 полегшення реактивності гліальних клітин,10 обмеження окислювального стресу,11–14 та пом’якшення спричиненої глутаматом ексайтотоксичної загибелі нейронів.15 E2 покращує функціональне відновлення в різних моделях SCI у гризунів.10, 16,17 Цікаво, що багаторазове системне введення E2 викликає функціональне відновлення швидше18,19 порівняно з тваринами, які отримували лише одну дозу.17

Оскільки E2 сприяє більш ефективному функціональному відновленню за допомогою багаторазових схем дозування, нашою метою було стабільне вивільнення E2 локально в місці пошкодження (щоб запобігти будь-яким нецільовим ефектам), щоб уникнути проблем, що виникають через багаторазові дозування/системні ін’єкції E2.

З цією метою ми застосували стратегію полі(проліків) біоматеріалів, у якій нативний препарат (E2) спочатку функціоналізували реакційноздатними аллільними групами, а потім полімеризували за допомогою фотоініційованого додавання тіол–енового радикалу з гнучким оліго-(етиленгліколь)дитіолом, як описано раніше .20 Ми отримали полімерні ланцюги з високою молекулярною масою, які складаються з проліків E2 як повторюваної одиниці в полімері.

Після гідролітичної деградації полімер поступово вивільняє E2 у навколишнє середовище. Єдиними іншими побічними продуктами вивільнення є вуглекислий газ і оліго(етиленгліколь) (oEG) (рис. 1). Полі(про-E2) ланцюги, виготовлені у плівки або мікроволокна, можуть вивільняти E2 у наномолярних концентраціях in vitro в часовому масштабі від місяців до років. .20

Е2, що вивільняється з цих полі(про-Е2) каркасів, є біологічно активним, і ці каркаси сприяють нейротрофізму та нейропротекції in vitro, захищаючи нейрони від окислювального стресу, спричиненого перекисом водню. Тут ми застосували полі(про-E2) плівки в мишачій моделі контузії SCI відразу після травми та оцінили їхню нейропротекторну здатність in vivo.

Наша початкова конструкція полі(про-Е2) плівки різко посилила нейропротекторію (7 днів після травми) у місці пошкодження, не впливаючи на запальну реакцію. Оскільки полі(про-Е2) плівки вивільняють нанограми Е2 на день, ми розробили іншу стратегію вивільнення, де незв’язаний Е2 був включений у полі(про-Е2) матрицю. Ми припустили, що болюсне вивільнення незв'язаного E2 може забезпечити додаткові нейропротекторні переваги.

Полі(про-E2) плівки вивільняли E2 у вигляді вибуху з подальшим тривалим вивільненням E2 з полімеру при нижчих концентраціях. Імуногістологічне фарбування оцінювало нейрони, астроцити та макрофаги/мікроглію, присутні в місці пошкодження гостро (7 днів після травми) та хронічно (21 день після травми) після SCI у присутності цих болюсних полі(про-Е2) плівок.

РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ

Плівки полі(про-Е2) вивільняють Е2 у наномолярних концентраціях, сприяють росту нейронів із ганглія спинного корінця та захищають нейрони від індукованого перекисом водню оксидативного стресу in vitro.20 Представлене тут дослідження спрямоване на визначення здатності полі(про-Е2) плівки для забезпечення нейропротекції in vivo з використанням мишачої моделі контузії SCI.

Помірна контузія SCI була викликана у дорослих самців мишей, і відразу після травми полі(про-E2) плівки були розміщені безпосередньо над травмою (Рис. 2A). Щоб забезпечити збереження полі(про-Е2) плівок після імплантації, полі(про-Е2) плівки, завантажені родаміном В, імплантували в спинний мозок травмованих тварин. Через сім днів після імплантації спинний мозок був зібраний і зображений за допомогою світлового мікроскопа (Рисунок 2B). У всіх тварин імплантовані полі(про-Е2) плівки, навантажені родаміном B, залишалися на місці, підтверджуючи протокол імплантації.

Щоб перевірити здатність полі(про-Е2) плівок забезпечувати нейропротекторію та полегшувати запалення, полі(про-Е2) плівки (без родаміну В) імплантували після травми хребта, а спинний мозок збирали через 7 днів після травми та імплантації. Поздовжні зрізи (товщиною 10 мкм) були вирізані, центровані навколо епіцентру пошкодження та імунно позначені для візуалізації нейронів і макрофагів у спинному мозку (рис. 3).

Зрізи позначали NeuN для оцінки присутності нейронів, і кількісний аналіз фарбування показав, що полі(про-E2) плівки значно збільшували позитивну область NeuN навколо епіцентру ушкодження порівняно з постраждалими контрольними особами, які не отримали плівкові імплантати (Малюнок 3A; p=0.0002). Додаткове фарбування аксонів за допомогою NFH (нейрофіламентний важкий ланцюг) також виявило гострий нейропротекторний ефект імплантованих полі(про-Е2) плівок (Рис. 3B; p=0.0017).

Ми помітили, що ця зміна нейропротекції не була зумовлена ​​зміною апоптозу (каспаза 3) у місці пошкодження (допоміжний малюнок S1; p=0.9966). Фарбування на активовані макрофаги (CD68) також не виявило жодних значні відмінності між тваринами, обробленими полі(про-Е2) плівкою, і тваринами, які не застосовували лікування (Малюнок 3C; p= 0.7207).

Взяті разом, плівки полі(про-Е2) помірно посилюють нейропротекторію різко, не змінюючи запальну реакцію. Плівки полі(про-Е2) різко збільшували щільність нейронів майже на 20%, але плівки не мали явного протизапального ефекту (на основі кількісного визначення площа, зайнята активованими макрофагами) (Малюнок 3).

Ця відсутність зменшення запалення може вказувати на те, що протизапальні та нейропротекторні дози E2 є різними і що обидві не були досягнуті за допомогою поточного складу плівки.20 Ми припустили, що збільшення вивільнення E2 з полі(про-E2) плівок може різко зменшити запалення і забезпечують більш надійну нейропротекторну відповідь.

Щоб збільшити дозу Е2, що вивільняється різко, полі(про-Е2) плівки були модифіковані таким чином, щоб болюсне вивільнення Е2 відбувалося одразу після імплантації. Після болюсного вивільнення E2, розкладання полімеру буде відбуватися з вивільненням E2 у тій самій концентрації, що й раніше. Описаний вище експеримент повторювали з використанням цих полі(про-Е2) плівок, що вивільняють болюс, і нейропротекторію та запалення оцінювали через 7 днів після травми (dpi).

Однак замість додаткової переваги полі(про-Е2) плівки, що вивільняють болюс, не збільшили суттєво позитивну площу NeuN порівняно з ушкодженими необробленими контрольними особами (Рис. 4A; p=0.6770). Плівки полі(проЕ2), що вивільняють болюс, підвищували експресію CD68, але збільшення не було статистично відмінним (p= 0.1780).

Посилення тенденцій до реактивності глії та запалення мікроглії також спостерігалося в присутності полі(про-Е2) плівок, що вивільняють болюс, через збільшення експресії GFAP (астроцити) та Iba1 (мікроглія); однак це збільшення не було статистично більшим, ніж те, що спостерігалося у поранених, нелікованих контрольних (p=0.3233 та p=0.3053, відповідно). У сукупності полі(про-Е2) плівки, що вивільняють болюс, не посилювали нейропротекцію, а реактивність астроцитів і присутність макрофагів/мікроглії не були знижені, як передбачалося спочатку.

Оскільки різниці між травмованими нелікованими тваринами та травмованими тваринами, обробленими плівкою полі(проЕ2) з болюсним вивільненням, не спостерігалося в гострій часовій точці 7 dpi, для подальшого дослідження було обрано хронічну часову точку, оскільки плівки полі(про-Е2) може вивільняти E2 довгостроково.20 Описаний вище експеримент повторювали з плівками полі(про-E2), що вивільняють болюс, але тварини постійно оцінювалися при 21 dpi (рис. 5).

Спинний мозок позначали тими самими типами клітин, які були зазначені раніше. Після аналізу спостерігалася тенденція до збільшення частки площі NeuN у тварин, яким була імплантована полі(про-Е2) плівка, що вивільняла болюс, порівняно з травмованими нелікованими тваринами (Рис. 5A; p=0.0897) Крім того, спостерігалися тенденції, коли полі(про-Е2) плівки, що вивільняли болюс, зменшували фракцію експресії CD68 та GFAP у порівнянні з даними контрольних тварин, які не отримували лікування, з травмами (Рисунок 5B, C; p=0.0859 та p=0.2780).

Однак жодна з тенденцій не відрізнялася статистично. З іншого боку, мічені Iba1 зрізи тканин тварин, які отримували полі(про-Е2) з болюсним вивільненням, продемонстрували підвищену експресію порівняно з даними необроблених травмованих контрольних тварин (p < 0.0001). Наша попередня робота показує, що полі(про -E2) плівки, нанесені на покривні скельця розміром 15 мм × 15 мм, вивільняють близько 266 нг E2 на день,20 що означає приблизно 2 нг E2 на день з плівок (1 мм × 1,8 мм), які тут використовуються. Плівки полі(про-Е2), що вивільняють болюс, вивільняють додаткові 40 мкг незв’язаного Е2 одразу після імплантації.

Дослідження, зосереджені на застосуванні E2 у моделях SCI у гризунів, показують, що низькі дози естрогену (10 мкг/кг), введені внутрішньовенно, послаблюють реактивний гліоз і забезпечують нейропротекторію, пом’якшуючи запальні явища, пригнічуючи апоптоз і посилюючи ангіогенез.21 Навпаки, високі системні дози естрогену мають несприятливі наслідки, які включають підвищення рівня тромбозу глибоких вен і раку22,23 і розвиток жіночих фізичних рис у чоловіків. Це заслуговує на увагу, оскільки більшість досліджень E2 були зосереджені на системній доставці E2 або внутрішньовенно, або внутрішньочеревно.

Враховуючи питання безпеки при системному застосуванні високих доз E2, важливо оптимізувати концентрацію E2 для місцевої доставки до пошкодженого спинного мозку, щоб запобігти побічним ефектам. На сьогодні лише одне дослідження доставляло E2 з біоматеріалу за допомогою наночастинок для локальної доставки E2 (2,5 мкг або 25 мкг). Вивільнення з наночастинок різко зменшило запалення в щурячій моделі контузії SCI.9 Відсутність статистично значущої відповіді в наших даних (рис. 4 і 5) може бути наслідком дисбалансу в кількості E2, яку ми доставляємо локально до спинного мозку з занадто багато E2 (40 мкг) вивільняється гостро, тоді як дуже мало (2 нг) вивільняється хронічно.

Хоча те, що ми спостерігаємо з цих даних, є скромними тенденціями, це дослідження підкреслює важливість дозування E2 для сприяння нейропротекції in vivo. Зменшення початкової дози Е2 і коригування кінетики розпаду полі(про-Е2) біоматеріалу може допомогти полегшити цю проблему та потенційно забезпечити кращі нейрозахисні результати.

Незважаючи на те, що це дослідження проводилося виключно на самцях, дуже важливо оцінити вплив цих полі(про-Е2) плівок в обох статей, щоб встановити дійсний трансляційний потенціал для цього біоматеріалу. Дослідження показали, що після ТСМ підвищення рівня естрогену у жінок може бути частково відповідальним за їх покращення функціональних результатів порівняно з чоловіками.24 Оскільки присутність естрогену у жінок підвищена, будь-яка стратегія біоматеріалу з використанням естрогену повинна враховувати цей підвищений рівень і змінювати матеріал. кінетика вивільнення відповідно, щоб гарантувати, що доставлена ​​доза залишається однаковою для самців і самок.

МЕТОДИ

Виготовлення плівок Poly(pro-E2).

Полі(про-E2) полімер P1 був синтезований і охарактеризований, як детально описано раніше.20 Полімер має середньомасову молекулярну масу ~ 80 кДа і дисперсність Đ ~ 3, згідно з гельпроникною хроматографією (GPC). Полі(про-E2) плівки виготовляли шляхом розчинення полімеру в хлороформі (5 мас.%/мас.; полімер/хлороформ), наливання розчину на скляні покривні скельця розміром 15 мм × 15 мм (100 мкл розчину на покривне скельце) і залишаючи їх сушити протягом ночі під вакуумом (<100 mTorr) at room temperature (RT). In a subset of experiments, the polymer solution was supplemented with rhodamine B (0.005 wt %/wt; rhodamine B/chloroform) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) to verify the presence of the poly(pro-E2) films in animals post-implantation.
Щоб створити полі(про-E2) плівки з незв’язаним E2, плівки виготовляли шляхом додавання незв’язаного E2 (Abcam, Кембридж, Массачусетс) до розчину полімеру (0.0625 мас. %/мас.; E2/хлороформ) перед краплинним литтям розчин на покривне скло. Перед імплантацією покривні скельця з плівками стерилізували за допомогою ультрафіолетового (УФ) випромінювання протягом 30 хв, а плівки знімали з покривних скель у стерильній біозахисній камері. Потім плівки полі(про-Е2) розрізали на шматки 1 мм × 1,8 мм, придатні для імплантації дорослій миші, як описано нижче.

Контузія спинного мозку та імплантація полі(про-Е2) плівок.

Усі хірургічні та післяопераційні процедури догляду схвалені Політехнічним інститутом Ренсселера та Інституційними комітетами з догляду та використання тварин Університету штату Огайо (IACUC). Щоб викликати контузію SCI, дорослих самців мишей C57BL/6 (від 10- до 12-тижневого віку), придбаних у лабораторії Джексона (номер запасу 000664; Бар-Харбор, ME), анестезували за допомогою внутрішньочеревної ін’єкції. кетаміну (80 мг/кг) і ксилазину (10 мг/кг). Спину тварин голили та асептично готували з використанням 70% етанолу та бетадину.

Після розміщення тварини на грілці, що підтримується при температурі 37 градусів, шкірний і м’язовий шари були відкриті, щоб відкрити хребетний стовп, і була виконана дорсальна ламінектомія на грудному дев’ятому (T9) хребці, щоб відкрити спинний мозок. Помірний (75 кдин) удар SCI був викликаний на цьому рівні за допомогою ударника Infinite Horizons (Precision Systems and Instrumentation, Lexington, KY).

Після досягнення гемостазу тверду мозкову оболонку розкривали (Малюнок 2) і полі(про-Е2) плівку або полі(про-Е2) плівку (1 мм × 1,8 мм), що вивільняє болюс, поміщали під тверду мозкову оболонку та над спинним мозком, покриваючи місце травми. У контрольних тварин тверду оболонку розкривали, але полі(про-Е2) плівки не імплантували. Потім шари м’язів закривали за допомогою стерильних швів, а шкіру закривали за допомогою стерильних металевих затискачів для ран.

Мишам вводили підшкірно 2 мл стерильного фізіологічного розчину, їх повертали в клітини та поміщали на предметне скло, нагріте до 37 градусів на ніч. Щоб забезпечити належну гідратацію та запобігти інфекціям, мишам вводили підшкірно 1–2 мл стерильного фізіологічного розчину та гентоцин (1 мг/кг) щодня протягом перших 5 днів після травми (dpi). Сечові міхури віджимали вручну двічі на день протягом експериментів. Усіх тварин утримували в звичайних умовах із 12--годинним циклом світло-темрява з довільним доступом до їжі та води.

Забір тканин.

У визначені кінцеві моменти часу 7 або 21 dpi мишам вводили летальну дозу кетаміну/ксилазину (1,5× хірургічна доза) і транскардіально перфузували 0.1 Мфосфатно-сольовим буферним розчином (PBS; pH 7,4) потім 4% параформальдегіду (PFA; pH 7,4). Спинний мозок видаляли, фіксували протягом 2 годин у 4% PFA, а потім переносили в 0.2M фосфатний буфер (PB; pH 7,4) на ніч.

Спинний мозок кріозахищали в 30% сахарозі протягом 48 годин при 4 градусах, а потім блокували на сегменти по 10 мм, центровані навколо місця пошкодження спинними стовпами вгору. Ці зрізи поміщали в середовище з оптимальною температурою різання Tissue-Tek (VWR International, Radnor, PA) і швидко заморожували на сухому льоду. Усі спинні мозки розрізали на 10 мкм на кріостаті Microm HM505E, поміщали на слайди ColorFrost Plus (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA), а потім зберігали при -20 градусах до використання для імунного фарбування.

Імуногістохімія та кількісне визначення.

Предметні скла розморожували на нагрівачі предметних стекол протягом 1 години, а потім промивали 3 рази в 0,1 MPBS. Активність ендогенної пероксидази була придушена шляхом інкубації предметних стекол у 6% H2O2, розведеному в метанолі, протягом 15 хвилин при кімнатній температурі. Після триразового промивання в 0.1 М PBS зрізи інкубували з 4% BSA та 0.1% Triton X-100 в 0.1 М PBS протягом 1 h з наступною нічною інкубацією первинних антитіл при 4° або кімнатній температурі (Таблиця 1).

Скела інкубували з відповідними біотинільованими вторинними антитілами (1:1000; Vector Laboratories, Берлінгейм, Каліфорнія) при кімнатній температурі протягом 1 години. Щоб візуалізувати зв’язане антитіло, слайди інкубували з Vectastain Elite-ABC (Vector Laboratories) протягом 1 години та проявляли з ImmPACT3,3′-діамінобензидином (DAB) або субстратом Vector SG (Vector Laboratories) протягом 10 хвилин.

Ці зрізи зневоднювали послідовними інкубаціями 2 × 2 хвилини в 70 % і 90 % етанолі, 2 × 3 хвилини в 100 % етанолі, потім 3 × 3 хвилини в Histoclear і, нарешті, покривали Permount (ThermoFisher Scientific). Для кількісного аналізу використовували шість зрізів на тварину, розташованих на відстані 100 мкм один від одного в ушкодженому спинному мозку.

Імуномічені зрізи знімали за допомогою мікроскопа Axioplan 2, обладнаного камерою AxioCamdigital і програмним забезпеченням AxioVision версії 4.8.2 (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Єна, Німеччина) і об’єктивом 5×.

Кількість позитивних пікселів у кожній із секцій підраховували за допомогою програмного забезпечення аналізу зображень MIPAR (MIPAR, Worthington, OH) для розрахунку частки позитивної площі на секцію. Середній відсоток позитивної площі шести зрізів на тварину розраховували для кожного з плям і повідомляли.

Статистичний аналіз.

Усі дані представлені як середнє ± стандартне відхилення. Статистичний аналіз проводили за допомогою статистичного програмного забезпечення GraphPad Prism 9 (програмне забезпечення GraphPad, Сан-Дієго, Каліфорнія). У всіх експериментах використовували 5–6 тварин на групу, що походять принаймні з двох різних партій тварин. Щоб перевірити відмінності між контрольною групою та групою полі(про-E2) плівок, використовувався t-критерій Стьюдента (рис. 3, 4 і 5). Значущість була встановлена ​​на p Менше або дорівнює 0.05.

Додатковий матеріал

Зверніться до веб-версії PubMed Central, щоб отримати додаткові матеріали.

ПОДЯКА

Автори дякують Веньмін Лай за її допомогу в операціях на мишах.

Фінансування

Цю роботу підтримали стипендії Фонду Крейга Х. Нільсена (грант 468116) і стипендії Дослідницького фонду паралізованих ветеранів Америки (грант 3171) для MKG, а також від NIH R01 (грант NS092754) і гранту ради оцінки травм спинного мозку штату Нью-Йорк C32245GG для RJG Усі дослідження на тваринах проводилися за підтримки відділу нейронауки Університету штату Огайо за підтримки гранту NINDS P30NS104177.

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ

(1). Національний центр статистики травм спинного мозку. (2020) Короткий огляд фактів і цифр про травму спинного мозку, Університет Алабами в Бірмінгемі, Бірмінгем, Алабама.

(2). Кріппс Р.А., Лі Б.Б., Вінг П., Вертс Е., МакКей Дж. та Браун Д. (2011) Глобальна карта епідеміології травматичних ушкоджень спинного мозку: до живого сховища даних для запобігання травмам. Спинний мозок. 49, 493–501. [PubMed: 21102572]

(3). Донован В. Х. (2007) Травма спинного мозку - минуле, теперішнє та майбутнє. Journal of Spinal CordMedicine 30, 85–100.

(4). Pickelsimer E, Shiroma EJ, and Wilson DA (2010) Statewide Investigation of Medically Attended Adverse Health Conditions of Persons with Spinal Cord Injury. J. Spinal Cord Med. 33 (3), 221–231. [PubMed: 20737795]

(5). Сільвер Дж. та Міллер Дж. Х. (2004) Регенерація за межами гліального рубця. Нац. Rev. Neurosci. 5 (2), 146–156. [PubMed: 14735117]

(6). Varma AK, Das A, Wallace G, Barry J, Vertegel AA, Ray SK, and Banik NL (2013) SpinalCord Injury: A Review of Current Therapy, Future Treatments, and Basic Science Frontiers.Neurochem. рез. 38, 895–905. [PubMed: 23462880]

(7). Zendedel A, Mönnink F, Hassanzadeh G, Zaminy A, Ansar MM, Habib P, Slowik A, Kipp M, and Beyer C (2018) Естроген послаблює локальну експресію запалення та активацію після травми спинного мозку. мол. нейробіол. 55 (2), 1364–1375. [PubMed: 28127698]

(8). Lee JY, Choi HY, Ju BG та Yune TY (2018) Естроген полегшує невропатичний біль, спричинений після травми спинного мозку, шляхом інгібування мікроглії та активації астроцитів. Біохім. біофіз. Acta, Mol. Основа дис. 1864 (7), 2472–2480. [PubMed: 29653184]

(9). Cox A, Varma A, Barry J, Vertegel A та Banik N (2015) Наночастинки естрогену при пошкодженні спинного мозку щурів викликають швидку протизапальну дію в плазмі, спинномозковій рідині та тканинах.J. Нейротравма 32 (18), 1413–1421. [PubMed: 25845398]

(10). Sribnick EA, Samantaray S, Das A, Smith J, Matzelle DD, Ray SK, and Banik NL (2010)Після травми естрогенове лікування хронічної травми спинного мозку покращує рухову функцію у щурів. J. Neurosci. рез. 88 (8), 1738–1750. [PubMed: 20091771]

(11). Honda K, Shimohama S, Sawada H, Kihara T, Nakamizo T, Shibasaki H, and Akaike A (2001)Негеномна антиапоптозна трансдукція сигналу естрогеном у культивованих кортикальних нейронах. J.Neurosci. рез. 64 (5), 466–475. [PubMed: 11391701]

(12). Sribnick EA, Wingrave JM, Matzelle DD, Ray SK і Banik NL (2003) Естроген як нейропротекторний агент у лікуванні травми спинного мозку. Енн NY акад. наук. 993,125-133. [PubMed: 12853305]

For more information:1950477648nn@gmail.com