Вакцини викликають високоперехресно реактивний клітинний імунітет до SARS-CoV-2 Omicron Variant

Контакт: Одрі Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com

Цзіньян Лю1*, Абішек Чандрашекар1*, Деніел Селлерс1*, Джулія Барретт1, Мішель Ліфтон1, Кетрін Макмехан1, Мікаела Шакка1,

Гейлі ВанВік1, Сінді Ву1, Цзінйоу Ю1, Ай-ріс Ю. Коллієр1, Ден Х. Баруч1,2*

1 Медичний центр дияконеси Бет Ізраїль, Бостон, Массачусетс, США;

2 Інститут Рагона MGH, MIT, і Гарвард, Кембридж, Массачусетс, США

Показано, що сильно мутований варіант SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) ухиляється від значної частки реакцій нейтралізуючих антитіл, викликаних поточними вакцинами, які кодують імуноген WA1/2020 Spike1, що призводить до збільшення кількості проривних інфекцій і зниження ефективності вакцини. Клітинні імунні відповіді, зокрема відповіді CD8 плюс Т-клітини, ймовірно, мають вирішальне значення для захисту від важкої хвороби SARS-CoV-22-6. Тут ми показуємо, що клітинний імунітет, індукований поточними вакцинами проти SARS-CoV-2, має високу перехресну реакцію проти варіанту SARS-CoV-2 Omicron. Особи, які отримали вакцини Ad26.COV2.S або BNT162b2, продемонстрували стійкі відповіді Т-клітин CD8 плюс і CD4 плюс, які продемонстрували широку перехресну реакцію як на варіанти Дельта, так і на Омікрон, у тому числі в субпопуляціях центральних і ефекторних клітин пам’яті. Медіана специфічних для Omicron відповідей CD8 плюс Т-клітин становила 82-84 відсотків від WA1/2020-специфічних відповідей CD8 плюс Т-клітин. Ці дані свідчать про те, що нинішні вакцини можуть забезпечити значний захист від важкого захворювання, викликаного варіантом SARS-CoV-2 Omicron, незважаючи на значне зниження реакції нейтралізуючих антитіл.

cistanche користь для здоров'я: підвищення імунітету

Нещодавні дослідження показали, що викликані вакциною нейтралізуючі антитіла (NAbs) значно зменшуються до сильно мутованого варіанту SARS-CoV-2 Omicron, що призводить до швидкого глобального поширення, включаючи проривні інфекції у повністю вакцинованих осіб1. Щоб оцінити перехресну реактивність викликаних вакциною клітинних імунних відповідей проти варіанту SARS-CoV-2 Omicron, ми оцінили відповіді Т-клітин CD8 plus і CD4 plus у 51 людини, які були вакциновані аденовірусним вектором Ad26. Вакцина COV2.S7 (Johnson & Johnson; N=20) або вакцина BNT162b2 на основі мРНК8 (Pfizer; N=31).

Після вакцинації BNT162b2 ми спостерігали високі відповіді на WA1/2020-специфічні NAb на 1-му місяці з подальшим різким зниженням до 8-го місяця, як і очікувалося9,10 (рис. 1a). Після вакцинації Ad26.COV2.S початкові відповіді на WA1/2020-специфічні NAb були значно нижчими на 1-му місяці, але ці відповіді були більш стійкими та зберігалися протягом 89, 11 місяців (рис. 1a). Однак для обох вакцин спостерігалися мінімальні перехресно-реактивні Omicron-специфічні НАТ (рис. 1а), що відповідає останнім даним за відсутності додаткового стимулювання1. Відповіді антитіл, специфічних для домену зв’язування рецептора (RBD), оцінювали за допомогою ELISA та показали подібні тенденції з мінімальною перехресно-реактивною антитілами, специфічними для зв’язування Omicron (рис. 1b). На відміну від відповідей антитіл, клітинні імунні відповіді, специфічні для Spike, оцінювали за допомогою Об’єднані пептидні аналізи IFN-g ELISPOT показали значну перехресну реактивність до Omicron (розширені дані, рис. 1). Далі ми оцінили Спайк-специфічні реакції CD8 плюс і CD4 плюс Т-клітин за допомогою аналізів фарбування внутрішньоклітинних цитокінів. Ad26.COV2.S індукував медіану спайк-специфічних IFN-g CD8 плюс Т-клітинних відповідей 0.061 відсоток, 0.062 відсотки та {{ 72}}.051 відсоток проти WA1/2020, Delta та Omicron, відповідно, через 8 місяців після вакцинації (рис. 2a). BNT162b2 індукував медіану спайк-специфічних IFN-g CD8 плюс Т-клітинних відповідей 0.028 відсотка та 0,023 відсотка проти WA1/2020 та Omicron відповідно через 8 місяців після вакцинації (рис. 2a). Ці дані свідчать про те, що специфічні для Omicron відповіді CD8 плюс Т-клітини були 82-84 відсотків перехресно реактивними з WA1/2020-специфічними відповідями CD8 плюс Т-клітин. Спайк-специфічні IFN-g CD4 плюс відповіді Т-клітин, викликані Ad26.COV2.S, становили медіану 0,026 відсотка, 0,030 відсотка та 0,029 відсотка проти WA1/2020, Delta та Omicron відповідно, а BNT162b2 становили медіану 0,033 відсотка та 0,027 відсотка проти WA1/2020 та Omicron відповідно, що також вказує на значну перехресну реакцію CD4 плюс Т-клітинних відповідей (рис. 2b). Значна перехресна реактивність Omicron також спостерігалася для T-клітинних відповідей TNF-a та IL-2, що секретують специфічні TNF-a та IL-2 (розширені дані, рис. 2).

Лінійний регресійний аналіз показав, що специфічні для Omicron відповіді CD8 плюс Т-клітин корелювали з WA1/2020-специфічними відповідями CD8 плюс Т-клітин для вакцини Ad26.COV2.S для обох часових точок (R=0.78, P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">

Наші дані демонструють, що Ad26.COV2.S і BNT162b2 викликають широкий перехресно-реактивний клітинний імунітет проти варіантів SARS-CoV-2, включаючи Omicron. Узгодженість цих спостережень за двома різними технологіями платформи вакцин (вірусний вектор і мРНК) свідчить про можливість узагальнення цих висновків. Широка перехресна реактивність специфічних для Омікрон відповідей Т-клітин CD8 плюс і CD4 плюс різко контрастує з помітно зниженими відповідями нейтралізуючих і зв’язуючих антитіл, специфічних для Омікрон. Ці дані узгоджуються з попередніми дослідженнями, які показують більшу перехресну реакцію викликаних вакциною клітинних імунних відповідей порівняно з гуморальними імунними відповідями проти варіантів SARS-CoV-2 Alpha, Beta та Gamma12. 82-84 відсоток перехресної реакції CD8 плюс Т-клітин на Omicron узгоджується з теоретичними прогнозами, заснованими на мутаціях Omicron6.

Доклінічні дослідження показали, що CD8 плюс Т-клітини сприяють захисту від SARS-CoV-2 у макак-резусів, особливо коли відповідь антитіл неоптимальна5. Також повідомлялося про тривалу відповідь Т-клітин CD8+ і CD4+ після інфікування та вакцинації2- 4,6,9,11,13,14. Враховуючи роль CD8 плюс Т-клітин у кліренсі вірусних інфекцій, цілком ймовірно, що клітинний імунітет робить значний внесок у захист вакцини від важкого захворювання SARS-CoV-2. Це може бути особливо актуально для Omicron, який ухиляється від значної частини відповідей антитіл. Наші дані свідчать про те, що поточні вакцини можуть забезпечити суттєвий захист від важких захворювань, спричинених варіантом SARS-CoV-2 Omicron, незважаючи на зниження реакції нейтралізуючих антитіл і збільшення кількості проривних інфекцій.

порошок цистанчі

методи

Досліджувана популяція

Зразки від осіб, які отримали вакцину BNT162b2, були отримані з біосховища зразків Бет Ізраїльського медичного центру (BIDMC). Зразки від осіб, які отримали Ad26.COV2.S, були отримані з дослідження COV1001 (NCT04436276). Обидва дослідження були схвалені інституційною наглядовою радою BIDMC. Усі учасники дали інформовану згоду. Особи були виключені з цього дослідження, якщо вони мали в анамнезі інфекції SARS-CoV- 2, отримували інші вакцини проти COVID-19 або отримували імуносупресивні препарати. Аналіз на антитіла, що нейтралізують псевдовірус

Псевдовіруси SARS-CoV-2, що експресують репортерний ген люциферази, використовували для вимірювання антитіл, що нейтралізують псевдовірус. Коротше кажучи, конструкти упаковки psPAX2 (Програма ресурсів і реагентів для СНІДу), репортерна плазміда люциферази pLentiCMV Puro-Luc (Addgene) і pcDNA3, що експресує спайковий білок.1-SARS-CoV-2 SΔCT, були спільно трансфікували клітини HEK293T (ATCC CRL_3216) ліпофектаміном 2000 (ThermoFisher Scientific). Псевдовіруси варіантів SARS-CoV-2 були створені за допомогою штаму WA1/2020 (Wuhan/WIV04/2019, ідентифікатор доступу GISAID: EPI_ISL_402124), варіант B.1.1.7 (Альфа, ідентифікатор доступу GISAID: EPI_ISL_601443), варіант B.1.351 (бета, ідентифікатор доступу GISAID: EPI_ISL_712096), B.1.617. 2 (Delta, GISAID ID доступу: EPI_ISL_2020950) або B.1.1.529 (Omicron, GISAID ID: EPI_ISL_7358094.2). Супернатанти, що містять віруси псевдотипу, збирали через 48 годин після трансфекції; віруси псевдотипу очищали шляхом фільтрації за допомогою фільтра 0.45-мкм. Щоб визначити нейтралізуючу активність сироватки крові людини, клітини HEK293T-hACE2 висівали в 96-лункові планшети для культури тканин із щільністю 1,75 × 104 клітин на лунку протягом ночі. Готували триразові серійні розведення термоінактивованих зразків сироватки та змішували з 50 мкл псевдовірусу. Суміш інкубували при 37 градусах протягом 1 години перед додаванням до клітин HEK293T-hACE2. Через 48 годин клітини лізували за допомогою Steady-Glo Luciferase Assay (Promega) згідно з інструкціями виробника. Титри нейтралізації SARS-CoV-2 визначалися як розведення зразка, при якому спостерігалося 50-відсоткове зниження (NT50) у відносних світлових одиницях відносно середнього значення контрольних лунок вірусу.

Імуноферментний аналіз (ELISA)

Специфічні зв’язувальні антитіла SARS-CoV-2 домен зв’язування рецепторів (RBD) у сироватці крові оцінювали за допомогою ELISA. 96-планшети з лунками вносили 2 мкг/мл SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), B.1.351 (Бета) або білок B.1.1.529 (Omicron) RBD в 1 × сольовому розчині з фосфатним буфером Dulbecco (DPBS) та інкубували при 4 градусах протягом ночі. Після інкубації планшети один раз промивали промивним буфером (0,05% Tween 20 в 1 × DPBS) і блокували 350 мкл розчину казеїнового блоку на лунку протягом 2-3 годин при кімнатній температурі. Після інкубації розчин блоку викидали, а планшети висушували. Послідовні розведення термоінактивованої сироватки, розведеної в казеїновому блоці, додавали до лунок, і планшети інкубували протягом 1 години при кімнатній температурі, перед тим як провести ще 3 промивання та 1-годинну інкубацію з розведенням 1:4000 анти- людського IgG пероксидази хрону (HRP) (Invitrogen, ThermoFisher Scientific) при кімнатній температурі в темряві. Планшети промивали 3 рази і в кожну лунку додавали 100 мкл розчину SeraCare KPL TMB SureBlue Start; розвиток планшета було припинено додаванням 100 мкл розчину SeraCare KPL TMB Stop на лунку. Оптичну густину при 450 нм із еталоном при 650 нм реєстрували за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів VersaMax (Molecular Devices). Для кожного зразка титр кінцевої точки ELISA розраховували за допомогою 4-підгонки логістичної кривої параметрів для розрахунку зворотного розведення сироватки, яке дає скориговане значення абсорбції (450 нм-650 нм) 0,2. Повідомлялося про інтерпольовані кінцеві титри.

Екстракт цистанки пустирної: покращує імунітет

Імуноферментний (ELISPOT) аналіз.

Планшети ELISPOT покривали мишачим моноклональним антитілом проти людського IFN від MabTech у кількості 1 мкг/лунку та інкубували протягом ночі при 4 градусах. Планшети промивали DPBS і блокували середовищем R10 (RPMI з 10% термоінактивованого FBS з 1% 100x пеніцилін-стрептоміцину, 1М HEPES, 100мМ пірувату натрію, 200мМ L-глутаміну та 0,1% 55мМ 2-меркаптоетанол) протягом 2-4 год при 37 градусах. SARS-CoV-2 об’єднані S-пептиди з SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) або B.1.1.529 (Omicron) (21st Century Biochemicals) були підготовлені та висівали в планшет у концентрації 2 мкг/лунку, і 100 000 клітин/лунку додавали в планшет. Пептиди та клітини інкубували протягом 15-20 год при 37 градусах. Усі етапи після цієї інкубації проводили при кімнатній температурі. Планшети промивали промивним буфером ELISPOT та інкубували протягом 2-4 год з біотинільованим мишачим моноклональним антитілом проти людського ІФН від MabTech (1 мкг/мл). Планшети промивали вдруге та інкубували 2-3 год з кон’югованим козячим антибіотином AP від ​​Rockland, Inc. (1,33 мкг/мл). Після останнього промивання додавали розчин субстрату хлориду тетразолію Nitor-blue/5-бромо-4-хлоро-3'індолілфосфату п-толуїдинової солі (хромаген NBT/BCIP) протягом 7 хвилин. Хромаген викидали, а пластини промивали водою і сушили в затемненому місці протягом 24 годин. Планшети сканували та підраховували на аналізаторі Cellular Technologies Limited Immunospot.

Внутрішньоклітинний аналіз фарбування цитокінами (ICS).

Відповіді Т-клітин CD4 плюс і CD8 плюс кількісно оцінювали за допомогою об’єднаних аналізів стимульованого пептидом внутрішньоклітинного фарбування цитокінами (ICS). Пули пептидів містили 15 амінокислотних пептидів, які перекривалися 11 амінокислотами, що охоплювали SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Дельта) або B.1.1 .529 (Omicron) Spike протеїни (21st Century Biochemicals). 106 лунок мононуклеарних клітин периферичної крові ресуспендували в 100 мкл середовища R10, доданого моноклональним антитілом CD49d (1 мкг/мл) і моноклональним антитілом CD28 (1 мкг/мл). Кожен зразок оцінювали за допомогою імітації (100 мкл R10 плюс 0,5 відсотка ДМСО; фоновий контроль), пептидів (2 мкг/мл) та/або 10 пг/мл форболміристатацетату (PMA) та 1 мкг/мл іономіцину (Sigma- Aldrich) (100 мкл; позитивний контроль) та інкубували при 37 градусах протягом 1 години. Після інкубації 0,25 мкл GolgiStop і 0,25 мкл GolgiPlug у 50 мкл R10 додавали до кожної лунки та інкубували при 37 градусах протягом 8 годин, а потім витримували при 4 градусах протягом ночі. Наступного дня клітини двічі промивали DPBS, фарбували водним живим/мертвим барвником протягом 10 хвилин, а потім фарбували попередньо визначеними титрами моноклональних антитіл проти CD279 (клон EH12.1, BB700), CD4 (клон L200, BV711), CD27 (клон M-T271, BUV563), CD8 (клон SK1, BUV805), CD45RA (клон 5H9, APC H7) протягом 30 хв. Потім клітини двічі промивали 2% буфером FBS/DPBS та інкубували протягом 15 хвилин з 200 мкл розчину BD CytoFix/CytoPerm Fixation/Permeabilization solution. Клітини двічі промивали буфером для промивання 1X Perm Wash (BD Perm/WashTM Buffer 10X у наборі CytoFix/CytoPerm Fixation/ Permeabilization kit, розведений водою MilliQ і пропускали через фільтр 0,22 мкм) і фарбували внутрішньоклітинно моноклональними антитілами проти IFN- (клон B27; BUV395) і CD3 (клон SP34.2, Alexa 700) протягом 30 хв. Клітини двічі промивали 1X Perm Wash буфером і фіксували 250 мкл свіжоприготованого 1,5% формальдегіду. Фіксовані клітини переносили в 96-планшет з круглим дном і аналізували за допомогою системи BD FACSymphony™. Дані були проаналізовані за допомогою FlowJo v9.9.

добавка Cistanche:покращують імунітет

Список літератури

1. Cele S, Jackson L, Khan K та ін. SARS-CoV-2 Omicron має велику, але неповну втечу Pfizer BNT162b2, викликану нейтралізацією, і для зараження потрібен ACE2. medRxiv 2021.

2. Ден Дж.М., Матеус Дж., Като Й. та ін. Імунологічна пам’ять на SARS-CoV-2 оцінюється протягом 8 місяців після інфікування. Наука 2021;371.

3. Сетт А, Кротті С. Адаптивний імунітет до SARS-CoV-2 та COVID-19. Комірка 2021;184:861-80.

4. Goel RR, Painter MM, Apostolidis SA та ін. МРНК-вакцини індукують стійку імунну пам’ять на SARS-CoV-2 та варіанти, що викликають занепокоєння. Наука 2021; 374: abm0829.

5. McMahan K, Yu J, Mercado NB та ін. Кореляти захисту від SARS-CoV-2 у макак-резусів. Nature 2021; 590: 630-4.

6. Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI та ін. Мішені реакції Т-клітин на коронавірус SARS-CoV-2 у людей із захворюванням COVID-19 та осіб, які не зазнали контакту. Комірка 2020;181:1489-501 e15.

7. Садофф Дж., Грей Г., Вандебош А та ін. Безпека та ефективність однодозової вакцини Ad26.COV2.S проти Covid-19. N Engl J Med 2021; 384: 2187-201.

8. Полак Ф.П., Томас С.Дж., Кітчін Н. та ін. Безпека та ефективність мРНК BNT162b2 вакцини Covid-19. N Engl J Med 2020.

9. Кольєр А.Ю., Ю.Дж., Макмехан К. та ін. Диференціальна кінетика імунних реакцій, викликаних вакцинами проти Covid-19. N Engl J Med 2021; 385: 2010-2.

10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE та ін. Нейтралізація SARS-CoV-2 за допомогою вакцини BNT162b2, доза 3. N Engl J Med 2021.

11. Barouch DH, Stephenson KE, Sadoff J, et al. Стійкі гуморальні та клітинні імунні відповіді через 8 місяців після вакцинації Ad26.COV2.S. N Engl J Med 2021; 385: 951-3.

12. Alter G, Yu J, Liu J та ін. Імуногенність вакцини Ad26.COV2.S проти варіантів SARS-CoV-2 у людей. Nature 2021; 596: 268-72.

13. Poon MML, Rybkina K, Kato Y та ін. Інфекція SARS-CoV-2 створює імунологічну пам’ять, локалізовану в тканинах людини. Наукова імунологія 2021; 6: eabl9105.

14. Vidal SJ, Collier AY, Yu J та ін. Кореляти нейтралізації проти SARS-CoV-2 варіантів, що викликають занепокоєння, сироватками ранньої пандемії. J Virol 2021; 95: e0040421.

переваги добавки цистанчі:покращують імунітет