Дендритні клітини (ДК) типу 1 при захворюваннях нирок

для отримання додаткової інформації:ali.ma@wecistanche.com

Традиційні дендритні клітини типу 1 (cDC1) при захворюваннях нирок людини: клініко-патологічні кореляції

Titi Chen, Qi Cao та ін.

АНОТАЦІЯ

фон: Дендритні клітини 1 типу(cDC1) є підмножиною звичайних DC, найбільш визнаною функцією яких є перехресне представлення CD8 плюс Т-клітинам. Ми провели це дослідження, щоб дослідити кількість і місцезнаходженняДендритні клітини 1 типу(cDC1s) у різних людейхвороби нирока також їх кореляція з клініко-патологічними особливостями та CD8 Т-клітинами.

Методи: ми проаналізували 135нирказразки біопсії.Хвороби нироквключено: гострий тубулярний некроз (ГТН), гострий інтерстиціальний нефрит (ГІН), проліферативний гломерулонефрит (ГН) (нефропатія IgA, вовчаковий нефрит, малоімунний ГН, анти-ГБМ захворювання), непроліферативний ГН (хвороба мінімальних змін, мембранозна нефропатія ) і діабетична нефропатія. Для кількісного визначення cDC1 використовували непряме імунофлуоресцентне фарбування (Дендритні клітини 1 типу), CD1ct DC і CD8 плюс Т-клітини.

Результати:Дендритні клітини 1 типу(cDC1s) рідко були присутні в нормінирки. Їх кількість значно зросла в ATN і проліферативному GN, пропорційно набагато більше, ніж CD1ct DC. cDC1s (Дендритні клітини 1 типу)в основному виявлялися в інтерстиції, за винятком вовчакового нефриту, слабкоімунного ГН і захворювання проти ГБМ, де вони були помітні в клубочках і навколоклубочкових областях. Кількість cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)корелював із тяжкістю захворювання при ATN, кількістю півмісяців при пауціімунному GN, інтерстиціальним фіброзом при нефропатії lgA та вовчаковому нефриті, а також прогнозом при нефропатії IgA. Кількість CD8 плюс Т-клітин також значно збільшилася в цих умовах і cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)кількість корелює з кількістю CD8 плюс Т-клітин при вовчаковому нефриті та слабкоімунному ГН, причому багато з них тісно локалізовані разом. Висновки: cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)кількість корелює з різними клініко-патологічними особливостями та прогнозом, що відображає можливу роль у цих станах. Їх зв'язок із CD8 плюс Т-клітинами свідчить про комбінований механізм, що відповідає результатам, отриманим на тваринних моделях.

ВСТУП

Дендритні клітини(DC) є центральними оркестрантами ефективного імунітету. Ці клітини гетерогенні і можуть бути розділені на окремі підгрупи на основі їх фенотипу та функції. Дендритні клітини можна розділити на плазмоцитоїдні ДК (Дендритні клітини)(pDC) і звичайні DC (Дендритні клітини)(cDC).cDC складається з двох основних підмножин: cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)(CD141* DC (Дендритні клітини) у людей і CD103t або CD8ot DC у гризунів) і cDC2 (CD1c DC у людей і CD1 lbt DC у гризунів) (1).cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)були виявлені спочатку у мишей, а потім у людей і характеризуються своєю чудовою здатністю фагоцитувати некротичні клітини за допомогою рецептора Clec9A, пов’язаного з пошкодженням молекулярного шаблону (DAMP), і перехресно представляти CD8 плюс Т-клітини. Навпаки, cDC2 є ефективними активаторами Т-клітин CD4*, але поступаються їм щодо активації Т-клітин CD8t (2).

DC (Дендритні клітини)були вивчені на людиніхвороба печінкиі їх кількість була збільшена при гломерулонефриті (ГН) (3, 4). Після відкриття cDCl численні дослідження на тваринах показали, що вони відіграють ключову роль ухвороби нирок, наприклад при адріаміциновій нефропатії та серпоподібному ГН, через взаємодію з Т-клітинами (5-8). Однак таких досліджень на людях бракуєхвороба печінкилише одне дослідження продемонструвало збільшення кількості cDC (ЗвичайнийДендритні клітини)в GN (9). Ми провели це дослідження, щоб забезпечити аналіз ключових підмножин cDC, cDC1 (Дендритні клітини 1 типу), і cDC2, у широкому діапазоні людськиххвороби нироквключаючи негломерулярні захворювання [гострий тубулярний некроз (ГТН), гострий інтерстиціальний нефрит (ГІН)], проліферативний ГН (нефропатія IgA, вовчаковий нефрит, недостатньо імунний ГН, анти-ГБМ хвороба), непроліферативний ГН (хвороба мінімальних змін ( MCD), мембранозна нефропатія) і діабетична нефропатія. Ми виявили, що cDC суттєво корелює з патологічними ознаками, включаючи тяжкість ATN, утворення півмісяця при слабкоімунному ГН та інтерстиціальний фіброз при імуноопосередкованому ГН. Крім того, це відповідає їх спеціалізованій здатності активувати CD8 плюс Т-клітини у тварин моделях, ми також продемонстрували їх кореляцію з Т-клітинами CD8t у цих зразках. Ці висновки дають поштовх для вивчення нових терапевтичних мішеней, які маніпулюють цими клітинами для лікуванняниркахвороби.

Клацніть, щоб стебло цистанчі при захворюваннях нирок

МАТЕРІАЛ І МЕТОДИ

Пацієнти та зразки тканин

Дослідження проводилося відповідно до принципів Гельсінської декларації та було схвалено Комітетом з етики людських досліджень місцевого округу охорони здоров’я Західного Сіднея. Була отримана інформована згода пацієнта. Ми проаналізували 176 заморожених діагностниркаbiopsy samples taken from non-pregnant adult patients(>18 років) з 18 червня 2016 року по 30* червня 2017 року в лікарні Westmead, Сідней, Австралія.ниркатканини були швидко заморожені в OCTcompound (Tissue-Tek Sakura, США) і зберігалися при -80 градусах. Сорок один (41) зразок мав низьку якість тканин і був виключений з дослідження. Вихідні дані про пацієнта, включаючи вік, стать, розрахункову швидкість клубочкової фільтрації (eGFR) і ступінь протеїнурії, збирали під часниркаbiopsy.eGFR розраховували за формулою CKD-EPI. Діагноз був поставлений патологоанатомом нирок на основі світлової, імунофлюоресцентної (ІФ) та електронної мікроскопії, а також історії хвороби.

Було проаналізовано різноманітні захворювання, включаючи негломерулярні захворювання (ATN, AIN), проліферативний GN (IgA-нефропатія, вовчаковий нефрит, недостатньо імунний GN, анти-GBM захворювання), непроліферативний GN (MCD, мембранозна нефропатія) і діабетичну нефропатія. Для ATN ми включили лише несептичні випадки, оскільки септична ATN має іншу патофізіологію. ATN було далі класифіковано як захворювання легкого та середнього ступеня (визначене як<50%cortical tubules="" showing="" injury)and="" severe="" disease="" (="">=50 відсотків пошкоджених кортикальних канальців). IgA-нефропатію класифікували відповідно до Оксфордської шкали MEST (мезангіальна гіперцелюлярність М, ендокапілярна гіперцелюлярність Е, сегментарний гломерулосклероз S, атрофія Т-канальців/інтерстиціальний фіброз). Ми також проаналізували кореляцію між cDC1 (Дендритні клітини 1 типу) number and prognosis (defined a priori as >20% reduction in eGFR on or before 31t December 2019)in IgA nephropathy by dividing patients into 2 groups according to cDC number with a cut-off point at the upper quartile(>=15). Вовчаковий нефрит далі класифікували на 2 групи відповідно до рівня інтерстиціального фіброзу (<25%,>=25 відсотків залучення кортикального інтерстиціалу). Пауціімунний ГН класифікували на 2 групи за відсотком клубочків із півмісяцями (<40%,>=40 відсотків).

Як звичайнониркаконтроль, ми використовували 5 нормальних зразків кори нирок із нефректомічних зразків, а також 2 донорських зразкиниркине підходить для пересадки. Для нефректомії пухлини зразки брали з полюса, протилежного пухлини, і щонайменше на 5 см від краю пухлини. Ці тканини мали нормальний макроскопічний вигляд. Мікроскопічно нічого з цьогонирказразки мали ознаки значного клубочкового або тубулоінтерстиціального запалення або пошкодження. Ми використовували нормальну тканину селезінки дорослого донора як позитивний контроль для тестування антитіл.

Імунофлуоресцентне фарбування

Серійні зрізи кріостата розрізали на 5 мкм і помістили на предметне скло Superfrost Ultra Plus (Thermo Scientific, США). Слайди зберігалися при -80 градусах. Зрізи тканини фіксували 100% метанолом при -20 градусах протягом 10 хвилин, а потім висушували на повітрі. Непряме імунофлуоресцентне фарбування проводили за допомогою наступного методу: зрізи тканин промивали в DPBS (Lonza, США) і блокували 2% бичачого сироваткового альбуміну (Sigma-Aldrich, США) протягом 15 хвилин; потім їх фарбували первинними антитілами при 4 градусах протягом ночі, а потім вторинними антитілами протягом 40 хвилин при кімнатній температурі. У таблиці 1 наведено список використаних первинних і вторинних антитіл та їх розведень. Ядра фарбували DAPI (1:250, 000, ThermoFisher, США) перед тим, як зразки встановлювали на покривні скельця з флуоресцентним середовищем (Dako, США). Було перевірено та виключено неспецифічне фарбування та перехресну реактивність між різними первинними та вторинними антитілами.

ТАБЛИЦЯ 1|Первинні та вторинні антитіла, використані в дослідженні

cDCl ідентифікували шляхом фарбування на маркер Clec9A. У людей експресія Clec9A сильно обмежена cDCl у крові та тканинах (10, 11). Щоб підтвердити це внирки, ми провели подвійне фарбування Clec9A і HLA-DRB1, а також Clec9A і CD1lc у вибраних нормальних і хворобливих станах. Більшість, якщо не всі, Clec9A перекривалися з HLA-DRB1 (додатковий малюнок 1) і CD1lc (додатковий малюнок 2).

МАЛЮНОК 1|Нормальна нирка cDC1 (Дендритні клітини 1 типу), cDC2 і CD8 плюс Т-клітини.

DC (Дендритні клітини)рідко були присутні в норміниркиі числа cDC2 приблизно в 7 разів перевищували кількість cDC1 (Дендритні клітини 1 типу). (Брус=100 мм).

РЕЗУЛЬТАТИ

Вихідні характеристики пацієнта.Вихідні характеристики пацієнтів у контрольній когорті та групі захворювання підсумовані в таблиці 2. Загалом у дослідження було включено 135 пацієнтів. Широкий діапазонниркахворобибули проаналізовані, включаючи негломерулярні захворювання [ATN (22), AIN (10)], проліферативну GN [gA-нефропатію (44), вовчаковий нефрит (12), недостатньо імунну GN (12), хворобу проти GBM (4)] , непроліферативна ГН [MCD (5), мембранозна нефропатія (5)] та діабетична нефропатія (21). У групі вовчакового нефриту було більше жінок, і їхній вік, як правило, був молодшим порівняно з іншиминиркахвороби, що узгоджується з літературою (12). Пацієнти з недостатньо імунним ГН та анти-ГБМ захворюванням мали найнижчу СКФ. Рівень протеїнурії був найвищим при МКД та мембранозній нефропатії.

ТАБЛИЦЯ 2|Базові характеристики.

Кількість і розташування ДК (Дендритні клітини)в галузі контролю та захворювань.cDCl рідко були присутні в нормінирки(Малюнок 1) і числа cDC2 приблизно в 7 разів перевищували кількість cDC1 (Дендритні клітини 1 типу).Число cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)значно зросла в ATN і проліферативному GN (Малюнок 2A), тоді як їх кількість залишалася незмінною порівняно з контролем у AIN, мембранозній нефропатії, MCD і діабетичній нефропатії (Додатковий малюнок 3). Кількість cDC2 також значно зросла в ATN і проліферативному GN (Малюнок 2B). Відбулося зниження cDC2 (Дендритні клітини 2 типу)/cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)співвідношення, що вказує на cDCl (Дендритні клітини 1 типу)збільшився пропорційно більше, ніж cDC2 (рис. 2C).

МАЛЮНОК 2|Кількість cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)і cDC2, співвідношення cDC2/cDC1 і CD8 плюс Т-клітини в контрольних і вибраних захворюваннях.

Р-значення розраховується для кожного захворювання порівняно з контролем. Обидва cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)і cDC2 значно збільшився при ATN, IgA, вовчаковому нефриті, слабкоімунному ГН та анти-GBM захворюваннях (A, B)

з cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)збільшився пропорційно більше, ніж cDC2, у ATN, вовчаковий нефрит, недостатньо імунний GN та анти-GBM захворювання (C).

CD8 плюс Т-клітини були значно збільшені в ATN, IgA, вовчаковий нефрит, пауціімунний GN і анти-GBM захворювання (D).

Більшість cDCl були розташовані в інтерстиції, за винятком вовчакового нефриту, слабкоімунного ГН та захворювання проти ГБМ, де вони також були виявлені в перигломерулярній та внутрішньоклубочковій областях (рис. 3А). Крім того, ми також виявили значну кількість Т-клітин CD8t у перигломерулярних і внутрішньоклубочкових областях (рис. 3A), і багато з них локалізовані спільно з cDCls (рис. 3B). З іншого боку, cDC2 рідко виявлялися у внутрішньоклубочкових областях, і було мінімальна спільна локалізація з CD8 плюс Т-клітинами.

МАЛЮНОК 3|(A) cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)і CD8 плюс Т-клітини у внутрішньоклубочкових областях. (B) Ко-локалізація cDC1 з CD8 плюс Т-клітинами. (Брус=100 мм). * P < 0.05,="" **="" p=""><>

Асоціація між cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)З клініко-патологічними особливостями та CD8 плюс Т-клітинами Ми проаналізували кореляцію між cDCl (Дендритні клітини 1 типу)і клініко-патологічні особливості, а також CD8 плюс Т-клітини. Було 22 випадки ATN (легке захворювання n=12, важке захворювання n=10). Більш важке захворювання було пов’язане з більшою кількістю cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)(p=0.032), але не cDC2 (Малюнок 4A).cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)зросла пропорційно більше, ніж cDC2 (співвідношення cDC2/cDC1 2,5, p=0.019). Кількість CD8 плюс Т-клітин також значно зросла в ATN(p=0.005) (таблиця 3, малюнок 2D). Число cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)не корелює з кількістю Т-клітин CD8* в ATN.

ТАБЛИЦЯ 3|CD8 плюс кількість Т-клітин і коефіцієнт кореляції між cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)і кількість CD8 плюс Т-клітин у контрольних і хворих нирках.

Проаналізовано 44 випадки IgA-нефропатії. Використовуючи шкалу MEST за Оксфордською класифікацією (мезангіальна гіперцелюлярність M, гіперклітинність ендокапілярів E, сегментарний гломерулосклероз S, тубулярна атрофія T/інтерстиціальний фіброз), більша кількість cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)було пов’язано з вищим балом T (p=0.008), але не з балами MES (рис. 4B). Було 7 випадків із півмісяцями, і кількість cCD1 не була пов’язана з кількістю півмісяців. КількістьниркаCD8* Т-клітин було значно вище при нефропатії IgA, ніж у контролі (стор<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d).="" there="" was="" no="" correlation="" between=""> (Дендритні клітини 1 типу) and CD8+ T cell numbers. Thirty-five(35)patients had follow-up data on or before 31sf December 2019, of whom9experienced>20-відсоткове зниження eGFR. Розподіл хворих на 2 групи за хДКЛ (Дендритні клітини 1 типу) number with a cut-off point at the upper quartile(>=15), вищий cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)числова група була пов’язана з гіршими результатами (рис. 4E).

МАЛЮНОК 4|Кореляція між cDC1 (Дендритні клітини 1 типу), cDC2 і CD8 плюс кількість Т-клітин і тяжкість захворювання (A–D).

Крива Каплана-Мейєра виживаності при нефропатії IgA (E). Оцінка T 0 відноситься до відсотка площі, де спостерігається атрофія канальців/інтерстиціальний фіброз <=25>

Оцінка T 1 означає відсоток площі, на якій спостерігається атрофія канальців/інтерстиціальний фіброз 26 - 50 відсотків, оцінка T 2 означає відсоток площі, на якій спостерігається атрофія канальців/інтерстиціальний фіброз > 50 відсотків.

Виживання визначалося як > 20-відсоткове зниження eGFR до 31 грудня 2019 р. NS, незначне.

Було 12 випадків вовчакового нефриту. Як і при IgA-нефропатії, більша кількість cDCl була пов’язана з більш важким фіброзом (p=0.020) (Рис. 4C). Крім того, кількість CD8 плюс Т-клітин також значно зросла (P<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d)="" and="" this="" correlated="" with="" the="" number="" of="" cdcl="" cells="" (r="0.614," p="0.034)" (table="" 3).a="" significant="" number="" of=""> (Дендритні клітини 1 типу)і CD8t Т-клітини були виявлені в перигломерулярних, а також внутрішньоклубочкових, що вказує на те, що вони можуть відігравати роль у цьому стані. По-друге, при імуноопосередкованому захворюванні, пов’язаному з інтерстиціальним фіброзом (нефропатія IgA та вовчаковий нефрит), ми виявили, що cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)число корелювало з тяжкістю фіброзу, а також прогнозом при IgA-нефропатії, тоді як такої кореляції не було виявлено при неімуноопосередкованому фіброзному захворюванні (діабетична нефропатія). По-третє, існувала сильна кореляція між кількістю cDCl і утворенням півмісяця в пауці-імунному ГН, і cDCl були присутні у великій кількості в перигломерулярних і внутрішньоклубочкових областях, що вказує на їх можливу роль у формуванні півмісяця. По-четверте, кількість cDC1 корелювала з кількістю CD8 плюс Т-клітин при вовчаковому нефриті та слабоімунному ГН, причому численні cDCl локалізовані спільно з CD8 плюс Т-клітинами, що свідчить про їх можливу взаємодію. Це узгоджується з нашими висновками на тваринних моделяхнирказахворюванняякі демонструють мишачі гомологи cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)клітини переважно активують Т-клітини CD8t. У сукупності ці висновки свідчать про те, що cDCl відіграє важливу роль у рядіниркахворобивключаючи ATN, інтерстиціальний фіброз при імуноопосередкованому захворюванні та утворення півмісяця, і що вони потенційно можуть діяти через активацію Т-клітин CD8t.

cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)Число, корельоване з тяжкістю захворювання в ATN. У несептичному АТН ми вперше показали суттєво збільшену кількість ДК (Дендритні клітини), особливо cDCl порівняно з cDC2. Важливо, що cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)кількість корелює з тяжкістю захворювання. Крім того, кількість CD8 плюс Т-клітин також була збільшена. ATN зазвичай викликається ішемічно-реперфузійним ушкодженням (IRI), нефротоксинами або сепсисом. Традиційно IRI і токсини викликають стерильне запалення, і вважалося, що вроджений імунітет, де DC і Т-клітини менш важливі. Проте все більше доказів, отриманих у дослідженнях на тваринах, показують, що як cDCl, так і CD8 плюс Т-клітини є важливими гравцями. Попередні дослідження IRI на тваринах і нефротоксичності цисплатину виявили збільшення загальної кількості DC і Т-клітин (13-17). Наші попередні дослідження показали, що при адріаміциновій нефропатії кількість cDCl значно зросла (5). У IRI підгрупа активованих дендритних клітин демонструє підвищену здатність перехресно презентувати антиген CD8t Т-клітинам (18). При адріаміциновій нефропатії ми також виявили, що cDCl викликають відповідь CD8 плюс Т-клітин, що призводить до пошкодження (5). Відсутність кореляції між cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)і CD8* Т-клітина в ATN людини, на відміну від результатів на тваринних моделях, може відображати різні неімунологічні шляхи пошкодження в ATN людини порівняно з IRI в мишачих моделях, де cDCls відіграють значну роль через CD8* T-клітини. Крім того, на гризунах було продемонстровано, що cDCl рекрутується в тканини хемоаттрактантом XCL1, що виробляється природними клітинами-кілерами (19). Тому, можливо, варто вивчити це далінирказахворювання.

cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)Кількість, корельована з імуноопосередкованим інтерстиціальним фіброзом. Другий важливий висновок у цьому дослідженні полягає в тому, що кількість cDCl корелює з тяжкістю інтерстиціального фіброзу, пов’язаного з імуноопосередкованим захворюванням (нефропатія IgA та вовчаковий нефрит), але не з неімуноопосередкованим фіброзним захворюванням (діабетична нефропатія), як показало попереднє дослідження збільшення кількості cDCl і cDC2 при інтерстиціальному фіброзі (9). Ми вперше показали, що це справедливо лише для імуноопосередкованих захворювань і cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)кількість зросла пропорційно більше, ніж cDC2. Крім того, ми також продемонстрували cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)кількість, що корелювала з прогнозом, і кількість CD8* Т-клітин також значно зросла при нефропатії IgA. Це підтверджується дослідженнями на тваринах, які показують DC (Дендритні клітини)безпосередньо сприяють фіброзу. Наприклад, амфірегулін, отриманий з DC, сприяв розвитку фіброзу (20). Також можливо, що cDCl сприяли фіброзу через CD8 плюс Т-клітини, які, як відомо, сприяють фіброзу інших органів (21-23). Оскільки інтерстиціальний фіброз пов'язаний з прогресуванням хронічногонирказахворювання, не дивно, що ми знайшли cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)бути хорошим прогностичним маркером при нефропатії IgA. Інші дослідження показали кореляцію Т-клітин CD8t з прогнозом IgA-нефропатії (24), що може бути результатом перехресного представлення від cDCl. При вовчаковому нефриті ми продемонстрували кореляцію між cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)кількість і інтерстиціальний фіброз, а також кількість Т-клітин CD8t. Попередні дослідження також показали збільшенняниркаcDC1 (Дендритні клітини 1 типу)кількість хворих на вовчаковий нефрит (25), особливо вовчаковий нефрит класів III і VI, з відповідним зменшенням їх кількості в крові (26). Ми розширили ці висновки, показавши, що вони також корелюють із хронічними змінами. Добре встановлено, що інтерстиціальне запалення, яке складається з Т-клітин, В-клітин, дендритних клітин і макрофагів, відіграє домінуючу роль у прогресуванні вовчакового нефриту (27). cDCls можуть сприяти прогресуванню вовчакового нефриту в різних способів. По-перше, активація інтерферону відіграє ключову роль у патогенезі вовчакового нефриту (28-30), а cDCl є видатним продуцентом IFN-入.（31）По-друге, cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)може сприяти прогресуванню вовчакового нефриту через Т-клітини CD8t (32-37), і наш висновок про кореляцію між cDCl і CD8 плюс Т додатково підтверджує їх можливу взаємодію. Раніше була продемонстрована роль CD8 плюс Т-клітин у вовчаковому нефриті. CD8 плюс Т-клітини контролюють аутореактивний імунітет шляхом вивільнення цитотоксичних молекул. Було виявлено, що CD8 плюс Т-клітини при вовчаковому нефриті мають послаблену цитотоксичну функцію, що може спровокувати аутоімунітет (38). Крім того, ці клітини також можуть генерувати аутоантигени вовчака (39). Існує велика кількість доказів того, що CD8* Т-клітини в обохнирка(32, 33) і сечі (34-36) корелюють з активністю захворювання та гістологічними пошкодженнями при вовчаковому нефриті. Крім того, було показано, що виснаження Т-клітин CD8* передбачає сприятливий прогноз (37).

cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)Кількість, корельована з кількістю півмісяців у Pauci-Immune GN. У пауці-імунному ГН ми виявили cDCl, агреговані в перигломерулярній та внутрішньоклубочковій областях, і їх кількість корелювала з кількістю півмісяців і CD8 плюс Т-клітин. Попередні дослідження показали, що DC (Дендритні клітини)рідко присутні всередині клубочка (3, 4, 9) або лише в дуже невеликій кількості (40). З іншого боку, Т-клітини були помітними в інтерстиціальній, перигломерулярній та внутрішньоклубочковій областях ({{6} }). Ми виявили, що як cDCls, так і CD8* Т-клітини помітні в перигломерулярній та внутрішньоклубочковій областях, причому багато з них локалізовані спільно. Крім того, cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)число корелювало з числом серповидних і CD8 плюс Т-клітин. Усі ці результати свідчать про роль cDCl у формуванні півмісяця через взаємодію з Т-клітинами CD8*. Патогенна роль Т-клітин CD8t у слабкому імунітеті ГН та утворенні півмісяця вже була продемонстрована на тваринних моделях (45, 46). Відповідно до наших знахідок у людей, у тварин серповидний GN, cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)і CD8* Т-клітини були виявлені особливо в перигломерулярній області (47, 48). Було показано, що капсула Боумена забезпечує захищену імунологічну нішу, запобігаючи доступ DC і цитотоксичних CD8 плюс Т-клітин до простору Боумена і, таким чином, до подоцитів (45, 47). Однак, коли капсула Боумена була порушена, ці запальні клітини отримали доступ і знищили подоцити, що призвело до швидкого прогресування ГН (47).

Одним з обмежень цього дослідження є те, що техніка фарбування IF дозволяє використовувати лише обмежену кількість маркерів. Було б корисно розширити наші висновки за допомогою такої технології, як проточна цитометрія, яка може поєднувати декілька маркерів для подальшого аналізу фенотипу цих DC. (Дендритні клітини)і їхні відповідні профілі цитокінів і хемокінів. Однак інформацію про місцезнаходження буде втрачено. Інші методи, такі як мультиплексна імуногістохімія та наноструна, також можуть бути розглянуті в майбутніх дослідженнях для подальшого вивчення цих клітин унирказахворювання. Крім того, при фарбуванні cDC2 за допомогою CD1c, HLA-DRB1 і CD1lc може бути невеликий відсоток В-клітин, які також експресують ці маркери, що не виключено.

ВИСНОВКИ

Незважаючи на те, що cDC1 (Дендритні клітини 1 типу)містить незначну підмножину DC (Дендритні клітини)в гомеостатичних умовах це дослідження демонструє значну кореляцію між цією популяцією клітин і клініко-патологічними особливостями у людининирказахворювання. Це відображає їх можливу важливість у хворобливих процесах, таких як АТН, утворення півмісяця при проліферативному ГН та інтерстиціальний фіброз при імуноопосередкованому ГН. Крім того, їхня спільна локалізація та кореляція з Т-клітинами CD8t можуть надати пояснення механізму їх дії, підтверджуючи дані, отримані на тваринних моделях. Ці висновки дають поштовх для вивчення нових терапевтичних мішеней, які маніпулюють цими клітинами для лікуванняниркахвороби, як ми робили в дослідженнях на тваринах (6), і досліджувати їх використання як прогностичного маркера. Щоб дослідити роль cDC1, необхідні подальші дослідження як на людях, так і на тваринах (Дендритні клітини 1 типу), їх механізм дії та те, як найкраще їх терапевтично націлити.

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ

1. Пакальніськіте Д., Шрамль Б.Ю. Тканиноспецифічна різноманітність і функції звичайних дендритних клітин. Adv Immunol(2017)134:89-135.doi:10.1016/bs.ai.2017.01.003

2. Merad M, Sathe P, Helft J, Miller J, Mortha A. The Dendritic Cell Lineage: Ontogeney and Function of Dendritic Cells and Their Subsets in the Steady State and the Inflamed Setting. Annu Rev Immunol (2013)31:563-604.doi:10.1146/annual imunol-020711-074950

3. Segerer S, Heller F, Lindenmeyer MT, Schmid H, Cohen CD, Draganovici D, et al. Компартмент-специфічна експресія маркерів дендритних клітин при гломерулонефриті людини.ниркаInt (2008)74(1):37-46.doi:10.1038/ki.2008.99

4. Woltman AM, de Fiter JW, Zuidwijk K, Vlug AG, Bajema IM, van der Kooij SW та ін. Кількісна оцінка підмножин дендритних клітин у нирковій тканині людини за нормальних і патологічних умов.ниркаInt (2007)71(10):1001-8. doi: 10.1038/sj.ki.5002187

5. Cao Q, Lu J, LiQ, Wang C Wang XM, Lee VW та ін. Cd103 плюс дендритні клітини викликають реакцію Cd8 плюс Т-клітин для прискоренняниркаТравмапри адріаміциновій нефропатії. J Am Soc Nephrol (2016) 27(5):1344-60.doi: 10.1681/ASN.2015030229

6. Wang R, Chen T, Wang C, Zhang Z, Wang XM, Li Q та ін. Інгібування Flt3 полегшуєХронічнийниркаЗахворюванняшляхом придушення CD103 плюс опосередкованої дендритними клітинами Т-клітинної активації. Nephrol Dial Transplant (2019)34(11):1853-63. DOI: 10.1093/gfy385

7. Evers BD, Engel DR, Bohner AM, Tittel AP, Krause TA, Heuser C та ін. Cd103 plusниркаДендритні клітини захищають від серповидного ГН, підтримуючи -10-вироблення регуляторних Т-клітин. J Am Soc Nephrol (2016)27(11):3368-82. DOI: 10.1681/ASN.2015080873

8. Кітчінг AR, Ooi JD. Ниркові дендритні клітини: довгий і звивистий шлях. J Am Soc Nephrol (2018)29(1):4-7.doi: 10.1681/ASN.2017101145

9. Kassianos AJ, Wang X, Sampangi S, Muczynski K, Healy H, Wilkinson R. Increased Tubulointerstitial Recruitment of Human CD141(hi)CLEC9A(plus) and CD1c(plus)Myeloid Dendritic Cell Subsets in Renal Fibrosis and BниркаB. Am J Physiol Renal Physiol (2013)305(10): F1391-401. doi:10.1152/adrenal.00318.2013

10. Guilliams M, Dutertre CA, Scott CL, McGovern N, Sichien D, Chakaro S, et al. Високовимірний аналіз без нагляду вирівнює дендритні клітини за тканинами та видами. Імунітет (2016)45(3):669-84.doi: 10.1016/j.immuni.2016.08.015

11. Villani AC, Satija R, Reynolds G, Sarkizova S, Shekhar K, Fletcher J, et al. Одноклітинний RNA-seq розкриває нові типи дендритних клітин, моноцитів і клітин-попередників крові людини. Science(2017)356(6335):4-6. DOI: 10.1126/science.aah4573

12. Almaani S, Meara A, Rovin BH. Оновлення щодо вовчакового нефриту. Clin I Am Soc Nephrol (2017)12(5):825-35.doi: 10.2215/CJIN.05780616

Примітка:наведений вище список не є повним