Лікування каменів у нирках: Г. Фрутікос
Mar 22, 2022
Контактна особа: Одрі Ху Ватсапп/к.с.: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com
ЧАСТИНА І.: Оцінки лікувальної ефективності екстрактів розчинників G. fruticosus в експериментально індукованих нефролітіатичних щурах-самців Вістар
Тілахун Алелінь, Тесфайє Сісай Тессема, Асфау Дебелла і Бейєне Петрос
Тло
Сечокам'яна хвороба(Каменів сечовивідних шляхах) вражає близько 12% населення планети на певному етапі їх життя [1]. Інші дослідження повідомили, що поширеність у всьому світікамені в нирках,коливається від 2 до 20%[2, 3]. Сечокам'яна хвороба вражає будь-який вік, статі та раси[4,5], але зустрічається частіше у чоловіків, ніж у жінок у віці від 20 до 49 років [6]. патогенезкамені в нирках,залишається неповно зрозумілим [7], і його лікування залишається проблемою, хоча існують сучасні модальності лікування, включаючи ESWL[8]. Послідовність подій, що спрацьовуютькаміньосвіта включає в себе зародження, ріст, агрегацію і утримання кристалів всередині нирок [9, 10].
Нирковий каміньосвіта вимагає стійкого утримання кристалів вНирокпісля завершення процесу кристалізації[11, 12]. Взаємодія кристалів ХМ з поверхнею ниркових епітеліальних клітин є критичною ініціюючою подією при нефролітіозі [13]. Кристалоцеляційні взаємодіяння призводять до переміщення кристалів з базолатеральної сторони клітин до базальної мембрани [14]. Дослідження на моделях тварин також показало, що введення високих концентрацій кристалів CaOx або іонів оксалатів виявляється токсичним, викликаючи пошкодження ниркових трубчастих клітин [7]. Вплив більш високих рівнів кристалів оксалату або CaOx індукує пошкодження епітеліальних клітин, що є сприятливим фактором для подальшогокаміньутворення [15, 16].
Дисбаланс міжСечовивіднихкаміньінгібітори та промоутери були запропоновані як причинакаміньутворення [17]. Промоутери полегшуютькаміньутворення [18], але інгібітори зменшують ініціювання перенасичення, зародження, росту кристалів і швидкість агрегації [17]. Однак інгібітори працюють однаково для всіх; тому деякі люди утворюють камені; а інші - ні [19]. Серед повторюванихкаміньколишні, екскреція оксалату сечі була вищою, тоді як виведення цитрату було нижчим Дослідження також показало, що оксалат може сприяти реабсорбції хлориду, натрію та води в проксимальних канальцях та активувати множинні сигнальні шляхи в клітинах епітелію нирок [20].
Незважаючи на значні поліпшення медичної терапії, такі як корисність екстракорпоральної ударно-хвильової літотрипсії (ESWL), не існує задовільного препарату для лікування ниркових конкрементів [21]. Лікування ESWL пов'язане з гострим ураженням нирок внаслідок травматичного впливу Ударної хвилі, та інфекціями після лікування [22]. Це також призводить до неповногокамінькліренс, і не в змозі уникнути новогокаміньутворення [23], абокаміньрецидиви часто до 60%[24,25]. Після першого епізодукамінь, частота рецидивів становить понад 50% протягом 10 років [26,27]. Томукамінь в нирках,рецидив є основним ризиком, який вважається невиконаним клінічним викликом в області урології [28].Каміньформуючи пацієнти схильні до його рецидивів після першої хірургічної терапії [29]. Незважаючи на хімічні склади акаміньвпливають на вибір втручання [30], відкрита хірургія залишається опорою лікування [31]. Деякі лікарські рослини, вивчені до цих пір проти сечокам'яної хвороби, наведені в таблиці 1
В Ефіопії більшість пацієнтів покладаються на традиційні лікарські рослини як на альтернативну терапію різних захворювань, включаючи сечокам'яну хворобу. Лікарські рослини доступні за ціною, доступні, ефективні, з меншою кількістю побічних ефектів, і краще сумісні з організмом людини [41], в порівнянні зі звичайними препаратами [42]. У цьому дослідженні,G. fruticosus(Л.) були відібрані для вивчення їх впливу на експериментально індуковану сечокам'яну хворобу. Було проведено ретельне літературне обстеження, щоб з'ясувати, що жодна з відібраних частин лікарських рослин досі не була вивчена на антиуролітарній діяльності. На сьогоднішній день також недостатньо наукових даних, що повідомляють про антигероїко-літиатичну активність цієї лікарської рослини. Тому метою дослідження була оцінка лікувальної ефективності лікарських рослин у експериментально індукованих нефролітіатичних щурів чоловічої статі.
Таблиця 1 Лікарські рослини, що володіють антиуролітіативною дією в попередніх дослідженнях
Матеріали і методи
Ідентифікація та збір лікарського рослинного матеріалуГомфокарпусfruticosus(G. fruticosus)листя збиралися в період його цвітіння або плодоношення. УG.fruticosus(Л) Ait.f, відомий як Тіфрієна (місцева назва), був зібраний у Боле Бульбулі навколо"93 Мазорія"Аддіс-Абеба під час Octo-ber 2018.G. fruticosusL.Ait.f(Asclepiadaceae)(повідомляє ключовий інформатор) був заявлений для лікування сечокам'яної хвороби. Зразки рослин були подані до Національного гербарію, кафедри біології рослин та управління біорізноманіттям Університету Аддіс-Абеби (ААУ) для таксономічної аутентифікації (TA238), а також надано відповідний номер збору. Зразки були відкладені в Національному гербарії ААУ для подальших довідок.
Приготування сирого екстракту
Рослинну сировину ретельно зачищали водопровідною водою для видалення забруднень і сушили в сараї при кімнатній температурі від 2 до 3 тижнів в лабораторії біомедичних наук ААУ. Висушені частини рослини дрібно присипали за допомогою кухонної болгарки (ступки і товкача, розміром близько 9 in.in діаметр). Порошки ставили через сито розміром 3 сітчастих коробок так, щоб фільтрувати грубу тверду речовину.
Екстракти готувалися за допомогою процедури, подібної до тієї, яка часто використовується традиційними цілителями або пацієнтами, з деякими незначними модифікаціями. Рослинні порошки замочували в дистильованій воді, яку поміщали на шейкер на 72 години. Суміш фільтрували через бавовну/марлю, потім через фільтрувальний папір Ватмана No 1 (розмір пір:1л мкм), щоб видалити дрібні тверді частинки рослин або нерозчинні складові. Всі екстракти були зосереджені до сухості за допомогою ліофілізатора, видаляючи необроблену воду під зниженим тиском. Потім напівтверді концентрати висипали в скляні петрі-тарілки і давали повністю висохнути на водяній бані з поправкою на 45°С. Остаточні висушені екстракти збирали і зберігали в маркованих стерильних флаконах, накритих щільною пробкою, і зберігали в морозильній камері на температурі-20°C до використання в дослідах.
Препарати послідовних екстракцій розчинників
Gomphocarpus fruticosusматеринський екстракт (водний) був розділений розчинниками зростаючої полярності від неполярних до полярних розчинників, гарантуючи, що більш широкий діапазон полярності сполук може бути витягнутий. Послідовна екстракція послідовно починалася нафтовим ефіром, за яким слідували хлороформ, етилацетат, бутанол і вода, в яких ці розчинники були видалені і зосереджені під роторним вакуумним випарником. Рослинні матеріали, мацеровані в дистильованій воді, ліофілізували під сушаркою для заморожування для отримання порошкоподібних залишків. Висушені екстракти щільно закупорювали пробкою і зберігали в скляних пляшках і зберігали в холодильнику при температурі -20°КК до використання для експерименту.
користь cistanche deserticola: лікування захворювань нирок
Хімічні речовини та реагенти/стандартні препарати
Хімічні речовини та реагенти або набори, що використовувалися, були аналітичними сортами, придбаними з різних джерел. Закупівля нафтового ефіру, хлороформу, етилацетату, бутанолу та етанолу були з Wisteam PLC (Аддіс-Абеба, Ефіопія), дигідрогенфосфату калію (безводний), фосфату натрію (двоосновного безводного екстра чистого), буфера Tris-HCl (CaHuNO) та хлориду натрію (NaCl) були придбані у Міжнародному торговому домі Micron PLC (Аддіс-Абеба Ефіопія). Аналогічно, ізофлуран і формальдегід були придбані у Компанії Neway Chemicals PLC (Аддіс-Абеба, Ефіопія). Етиленгліколь (ЕГ) і хлорид амонію (NH,Cl) були придбані у Pharma PLC (Аддіс-Абеба, Ефіопія). Трубки EDTA, трубки-сепаратори для сироватки, капілярні трубки та хірургічні леза були придбані у компанії Micro Pharma PLC (Аддіс-Абеба, Ефіопія). Крім того, набори для тестів на функції печінки та нирок були придбані у Roshi PLC (Лондон, Англія). Набори для аналізу оксалату (щавлевої кислоти) колорімет-ріки та колориметричний/фторметричний аналіз цитрату, придбаний у комплектах BioVision Incorporated, були (Milpitas, США). Порошок цитрату калію був отриманий з реферальної лікарні Чорного Лева (Аддіс-Абеба, Ефіопія). Цистон (полігербальна рецептура) був придбаний у Мумбі, Індія. Аскорбінова кислота, яка була придбана в Міжнародному торговому домі Micron PLC (Аддіс-Абеба, Ефіопія).
Солюбілізація рослинного екстракту та стандартних препаратів Тестові екстракти/препарати різної концентрації розчинялися за допомогою відповідних транспортних засобів, які були дистильованою водою та 3% Tween 80.Усі рослинні екстракти та цитрат калію розчинялися у дистильованій воді в різних концентраціях. Процедура, яка використовувалася для розчинення Цистона, була схожа на методи Pha-tak і Hendre [43] і Garimella et al. [44] з деякими модифікаціями. Таблетки цистона були порошкоподібні за допомогою ступки і товкача (розмір: 0,23 м), розчинені (зважені) в дистильованій воді (900 мкл) і 100 мкл 3% Твін 80 (тобто 750 мг/мл). Потім їх тримали протягом 3 годин для розчинення, центрифугували при 1000 об/хв протягом 5 хв і фільтрували через фільтрувальний папір розміром 0,22 мм. Чіткий супернатант збирався і використовувався для зародження оксалату кальцію, а також аналізів агрегації. Екстракти збирали за допомогою пробірок Falcon (45 мл), підтягували повітря і зберігали в холодильнику до експериментального використання. Тестові екстракти та стандартні препарати готувалися щодня та незадовго до тестування введень у дозі 200 мг/кг екстрактів, 750 мг/кг цистона та 2,5 г/кг цитрату калію. Об'єм дозування досліджуваної речовини становив 2 мл/100г маси тіла. Деіонізована вода використовувалася для приготування всіх колишніх трактатів / ліків, і вони готувалися щодня перед введенням тестів.
In vivo урололітичні фармакологічні дослідження
Цільові тварини: Використовувалися здорові дорослі чоловічі щури-альбіноси Wistar тієї ж вікової групи від 8 до 10 тижнів і зважування (220-280 г), придбані в Ефіопському інституті громадського здоров'я (EPHI) і породи в лабораторії тварин біомед-наук, ААУ. Експеримент проводився в Лабораторії біомедичних наук ААУ і ЕФІ, відповідно до міжнародно прийнятих стандартних рекомендацій щодо використання тварин в наукових дослідженнях. Перед початком експерименту щурів акліматизували до стандартних лабораторних умов(6 щурів на поліпропіленові клітки) протягом 7 днів. Вони утримувалися в контрольованому середовищі температури (27±2°C), відносної вологості (55±5%) та світла (12 год світлих/темних циклів). Цих щурів годували звичайними гранулами (стандартна дієта)і дозволяли безкоштовно пити воду (ad libitum) протягом 28 днів.
користь cistanche deserticola: лікування захворювань нирок
Індукція сечокам'яної хвороби
Камені в ниркахбули індуковані за допомогою етиленгліколю (ЕГ) разом з хлоридом амонію (NHCl), введеним у питну воду щура. У цій моделі гіпероксалурії 1%(ш/в) NHACl давали з 0,75%(в/в)ЕГ протягом перших 5 днів для прискорення літіазу, після цього водопостачання було переведено на 0,75% тільки EG протягом наступних 25 днів [45-47]. Вплив цих доз був досить терпимим у дослідженнях на тваринах [48]. Введення ЕГ призводить до гіпероксалурії, що, в свою чергу, призводить до відкладення CaOx в нирках [49]. Піддослідні щури присвоєні яккаміньотримували лікувальні групикаміньіндукуюче лікування протягом 28 днів.
Лікувальні ефекти сечокам'яної хвороби
У лікувальному лікуванні (розчиненні) в цілому 54 щури-самці аль-біно Вістар були розділені випадковим чином на 9 груп, що включають 6 особин на групу з відповідною масою тіла. При лікувальному лікуванні захворювання індукувалося апріорі з 1 по 14 день. Потім кожен з колишніх трактів/препаратів вводився перорально з 15 по 28 день одночасно з протоколами індукції захворювання (ЕГ) для визначення лікувальних ефектів [50, 51]. В кінці 28-го дня щурів приносили в жертву для біохімічних і гістопатологічних досліджень. Експериментальна конструкція була присвоєна як I група (нормальний контроль), II група (літіа-тик-контроль), група I(K-Cit), IV група (цистон), група V(G. fruticosusПЕТ екстракт), VI група (G.fruti-cost Chl. extract), VI група(G. fruticosusEtOAc ex-tract),Група VIII (екстракт G.fruticosus BuOH), і Група IX(G. fruticosusакв. дріб). Інші дослідники також використовували цитрат калію (2,5г/кг) як позитивний контроль [52, 53]. Обсяг дозування становив 2мл/100г маси тіла. Контрольна група отримувала дистильовану воду один раз на день протягом усього експерименту. В кінці 28-го дня щурів приносили в жертву для біохімічних і гістопатологічних досліджень.
Збір сечі і мікроскопічний аналіз
Сеча, сироватка та гістологічні профілі є показникамикаміньутворення, а також рецидиви. Велика кількість і морфологія кристалів оксалату кальцію, що утворюються під in vivoкаміньіндукції досліджувалися за допомогою світлового мікроскопа (Wagtech Thatcham Berkshire RG194QD, Великобританія,40x збільшення). Щурів поміщали в окремі метаболічні клітки і піддавали 24-годинному збору сечі на 28-му дні для лікувального тесту [50]. В аналізі кристалурії близько 3 мл зібраних свіжих зразків сечі були поміщені в скляну трубку і центрифуговані при 3000 об/хв протягом 10 хвилин для видалення сміття, а наднатанти були викинуті. Ці відкладення сечі використовувалися для визначення утворення кристалів CaOx. Близько 10 мкл вихрових відкладень були поміщені на скляний слайд мікроскопа (покритий покривною щілиною) і досліджені на наявність кристалів CaOx з урахуванням їх кількості і розміру під світловим мікроскопом (40x). Кристали, що утворилися з хімічних речовин в сечі, були ретельно досліджені з інших артефактів сечі. Фотографії мікроскопічних спостережень були зроблені за допомогою цифрової камери (Sony Cyber-shot DSC-W180 10,1MP з 3-кратним оптичним зумом, Нью-Джерсі, США), встановленої вручну поверх неї.
Біохімічний аналіз сечі
В кінці відповідних періодів лікування тварин індивідуально розміщували в метаболічних клітках, збирали 24-годинні зразки сечі (підкисленої і некислення). Сечу підкислювали 1 мл 6N HCL (соляної кислоти) і зберігали при температурі 4°C протягом 5 діб. Потім вони були центрифуговані при 3000 об / хв протягом 10 хв (REMI, R24), а супернатант підкисленої сечі використовувався для оцінки виділень, таких як вміст оксалату, кальцію, магнію і фосфатів. У некислених зразках сечі вміст, таких як цитрат, креатинін і сечова кислота, а також загальні концентрації білка були проаналізовані за допомогою комерційно доступних діагностичних наборів автоматизованим аналізатором клінічної хімії. Як концентрації оксалату, так і цитрату аналізувалися за допомогою багато свердловинного спектрофотометра (ІФА-зчитувача) відповідно до посібника, наданого комплектами. З метою кількісної оцінки була підготовлена калібрувальна крива з використанням в стандартній комплектації оксалату і цитрату.
Збір і аналіз сироватки
Після закінчення експериментального періоду (28-й день) щурів знеболювали за допомогою ізофлурану і збирали 3 мл кров'яних сам-плесів з ретроорбітальної вени шляхом проколу капіль-ларі. Сироватку відокремлювали після центрифугування зі швидкістю 3000 об/хв, 20°С°С протягом 15 хв. Зібрана сироватка була досліджена на біохімічні показники, такі як креатинін, азот сечовини крові, сечова кислота, сечовина, кальцій, магній та фосфат, за допомогою аутоаналізатора клінічної хімії (аналізатор Cobas 6000, Німеччина) з відповідними діагностичними наборами. Багатопомітні концентрації оксалату та цитрату за допомогою 1 були спектрофотометрами (Зчитувачем ІФА) відповідно до посібника, забезпеченого комплектами. З метою кількісної оцінки була підготовлена калібрувальна крива з використанням в стандартній комплектації оксалату і цитрату.
користь cistanche deserticola: проти запалення
Аналіз гомогенату нирок
В кінці експериментального періоду (28-й день) щурів приносили в жертву під ізофлурановим наркозом з подальшим вивихом шийки матки. Потім відкрилося черевце і з кожного щура зібрали обидві нирки. Ізольовані нирки ретельно виймали та очищали (промивали/промивали) від сторонніх тканин крижаним фізіологічним сольовим розчином (0,15 М NaCl). Ліві нирки від кожної тварини зберігалися в 10% буферизованому нейтральному формаліні і використовувалися для гістологічних досліджень. Праві нирки нарізали на дві рівні половинки за допомогою леза, а половину сушили при температурі 80°C в духовці гарячого повітря. Використовуваний метод був схожий на Ashok et al. [35] з деякими модифікаціями, при яких фіксована маса в 200 мг (29%) від загальної середньої ваги нирок (0,67 г) додатково нагрівалася окремо в 10 мл 1Н соляної кислоти (1% HCl), яку поміщали на киплячу водяну баню 100°КК протягом 30 хв. Потім його дрібно нарізали на шматки за допомогою леза, розбивали товкачем і ступкою, і далі гомогенізували протягом 10 хв за допомогою Ultra-Sonicator. Гомогенат центрифугувався при 3000 об / хв протягом 15 хвилин, а супернатант був зібраний за допомогою маркованих кріотрубів. Нарешті, супернатанти використовувалися для оцінки вмісту кальцію, оксалату та фосфатів з комерційно доступними біохімічними наборами (BioVision PLC, США), згідно з протоколом виробника [54,55].
Гістопатологічні дослідження
Проводилися гістопатологічні дослідження на предмет тканин нирок піддослідних щурів. Всі щури були принесені в жертву гуманно за допомогою ізофлуранової анестезії в кінці 28-го дня (сечокам'яна хвороба лікувальних досліджень). Шматочки тканин брали з нирок і аналізували на наявність уролітіатних лікувальних потенціалів рослинних екстрактів. Тканини були закріплені 10% буферним розчином нейтрального формаліну, а згодом вбудовані в парафін. Секції (товщиною 5 мкм) були вирізані за допомогою Ротаційного мікротома 4060E (Німеччина), встановлені на скляних гірках, і пофарбовані гематоксиліном і еозином для вивчення гістопатологічних змін[34]. Всі поля морфології тканин були досліджені під світловим мікроскопом (100-кратне збільшення) (Wagtech Thatcham, Berkshire, RG19 4QD, Великобританія), а фотомі-крографи були зняті за допомогою цифрової камери, вручну змонтованої ним (Sony Cyber-shot DSC-W180 10,1MP з 3-кратним оптичним зумом, Нью-Джерсі, США) для подальших посилань.
Відкладення кристалів оксалату кальцію
У нирках відкладення кристалів визначалися за допомогою напівкількісних аналізів, що представляє собою мікроскопічний метод оцінки [46,56]. Використовувався філярний мікрометр мікроскопа (0,1 мм) окуляр (10x, широке поле 23,3 мм, Olympus Optics OSM 212422 виробництва Японії). Тобто кристалічні відкладення в тканинах нирок підраховувалися за допомогою світлового мікроскопа. Ступеня тяжкості родовищ кристалів були присвоєні як 0=<1 crystal(no="" crystal="" deposition),1="1-10,2=11-30," 3="31-50," 4="51-75" and="" 5="">75 кристалів підраховує, приймаючи середні значення [46].
При підрахунку відкладів кристалів CaOx сагітальний відділ кожного ниркового зразка був розділений на чотири області однакового розміру на дві віртуальні лінії, і повідомлялося про показання в середньому 4 мікроскопічних полів [57,58]. Потім з кожного регіону випадковим чином було вибрано поле 100x і підраховувалися родовища CaOx. Зображення однієї з чотирьох областей під світловим мікроскопом було знято випадковим чином [58] за допомогою цифрової камери, вручну встановленої поверх мікроскопа.
Статистичний аналіз
Дані були проаналізовані за допомогою програмного забезпечення Graph Pad Prism версії 6 (Graph Pad Software, Сан-Дієго, Каліфорнія, США). Односторонній аналіз дисперсії (ANOVA) з подальшим тестовим порівнянням пост-хока Даннетта був проведений, коли це було необхідно для порівняння між обробленими та необробленими групами. Значення даних виражалися як середнє±стандартне відхилення (SD). значення П<0.05 was="" considered="" statistically="">
користь cistanche deserticola: лікування захворювань нирок