Дослідження екстракту Cistanche Deserticola, що регулює поляризацію макрофагів M2, щоб зменшити міграцію клітин і утворення колоній при раку молочної залози

Анотація: Мета Дослідити регуляторний механізм етанолового екстракту Cistanche deserticola epimedium brevican на поляризацію макрофагів in vitro та його вплив на M{{0}}-подібні макрофаги, що сприяють міграції клітин 4T1 та утворенню колоній. Методи. Метод CCK-8 використовувався для виявлення впливу різних концентрацій етанольного екстракту Cistanche deserticola deserticola на активність макрофагів кісткового мозку (BMDM) та визначення безпечної концентрації етанольного екстракту Cistanche deserticola deserticola deserticola; Вестерн-блоттинг і ПЛР-терапію використовували для виявлення впливу етанольного екстракту Cistanche deserticola deserticola на експресію аргінази-1 (Arg-1) і CD163, маркерів М2-подібних макрофагів; QRT PCR використовувався для виявлення впливу спиртового екстракту Cistanche deserticola deserticola на зону запалення 1 (Fizz1) і рецептор, активований проліфератором пероксисом (PPAR) генів M2, пов’язаних з пухлиною макрофагів (TAMs) (рецептор, активований проліфератором пероксисом, PPAR). ）, Ефект експресії мРНК хітинази 3-як 3 (Ym1), хемокіну 24 (CCL24), лектину 2 типу С-типу макрофагів галактози (MGL2) та експресії мРНК регуляторного фактора інтерферону (IRF4); Вплив етанольного екстракту Cistanche deserticola deserticola на M2 TAM, що сприяють міграції клітин 4T1, було виявлено за допомогою тесту на подряпини; Вплив етанолового екстракту Cistanche deserticola deserticola на ріст клітин 4T1, стимульований M2 TAM, було виявлено за допомогою колонійного експерименту. Результати показали, що етаноловий екстракт Cistanche deserticola deserticola Epimedium не мав токсичних чи побічних ефектів на клітини BMDM у концентрації від 0.015 625 до 2.000 000 мг/мл; Етанольний екстракт Cistanche deserticola значно пригнічує M2 TAMs-пов’язані гени Arg{{ 36}}, CD163, Fizz1, PPAR, експресія CCL24, Ym1, MGL2 та IRF4 (P<0.05, 0.01, 0.001) inhibited the migration and colony formation ability of M2-TAMs in 4T1 cells (P<0.05, 0.001). Conclusion The ethanol extract of Cistanche deserticola can weaken the promotion of M2-like macrophages on 4T1 Cell migration and colony formation, and its mechanism may be related to the inhibition of M2-type polarization of macrophages.

Ключові слова: Cistanche deserticola; Макрофаги; M2 поляризація; Рак молочної залози; міграція; Формування колонії; бензойна кислота; Коніферіл альдегід; Емодін; Ванільна кислота

Ефекти Cistanche-Antitumor

Рак молочної залози є основною злоякісною пухлиною, що загрожує здоров’ю жінок, а також другою причиною смерті від раку у світі [1-2]. На пізній стадії раку молочної залози спостерігаються метастази в легені і печінку. Коли відбувається метастазування органів, виживаність і якість життя пацієнтів значно знижуються [3]. Лікування раку молочної залози першої лінії в основному ґрунтується на хіміотерапії антрацикліном, паклітакселом та іншими цитотоксичними препаратами, але резистентність до ліків часто виникає під час лікування. Тому дуже важливо вивчити патологічний механізм раку молочної залози та знайти ефективні методи лікування. Макрофаги мають вирішальне значення для виникнення та розвитку різних пухлин [4-5], а біомаркери макрофагів можуть служити прогностичними індикаторами. Високий рівень інфільтрації макрофагами пов'язаний з поганим прогнозом раку молочної залози. Пухлиноасоційовані макрофаги (ТАМ) є найбільш типовим типом імунних клітин, що проникають у пухлину. Вони відіграють важливу роль від раннього раку раку молочної залози до прогресування, особливо метастазування [6]. TAM беруть участь у метастазуванні, ангіогенезі, ремоделюванні матриксу, інвазії та імуносупресії раку молочної залози. Традиційна китайська медицина відіграє важливу роль у всьому курсі лікування раку молочної залози. Традиційна китайська медицина має характеристики багатьох компонентів, шляхів і мішеней, які можуть зменшити частоту рецидивів і метастазів у пацієнтів із пухлинами, покращити якість їхнього життя та продовжити час виживання. Cistanche deserticola deserticornu Максим. Це рослина Berberidaceae Ranunculales. Він солодкий і солодкуватий на смак, теплий за своєю природою, і проходить через два канали печінки та нирок. Він зміцнює м’язи та кістки, тонізує нирковий ян, захищає серцево-судинну систему [7], сприяє формуванню кісток [8], регулює імунну здатність [9] і пригнічує рак [10]. Дослідження показують, що спиртовий екстракт Cistanche deserticola може пригнічувати проліферацію клітин раку молочної залози [11], але дослідження того, як спиртовий екстракт Epimedium впливає на пухлинне імунне мікрооточення раку молочної залози, не повідомлялося. Таким чином, це дослідження має на меті вивчити вплив спиртового екстракту Cistanche deserticola deserticola на M2--подібні макрофаги та його регуляцію на міграцію та формування колоній раку молочної залози 4T1, щоб забезпечити експериментальну основу та теоретичні вказівки для подальшого спостереження. клінічне застосування Epimedium.

Користь для здоров'я порошку цистанчі - протипухлинна

Натисніть тут, щоб переглянути продукти Cistanche

【Запитуйте більше】 Електронна пошта:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Матеріал

1.1 Тварина і клітина

SPF Grade Female C57BL/6 Mouse, 8 тижнів, придбаний у Sibeifu (Beijing) Biotechnology Co., Ltd., з номером сертифіката на тварину 110324210105240115. Мишей вирощували в Експериментальному центрі тварин П’ятого медичного центру Загальної лікарні м. Народно-визвольної армії. Протягом усього періоду експерименту мишам давали безкоштовну їжу та воду, а також мали цикл 12-годин світла/12-годин темряви. Експерименти на тваринах проводилися згідно з інструкціями з догляду та використання піддослідних тварин і були схвалені П'ятим медичним центром загального госпіталю ЛНР. Номер етичного схвалення для експериментів на тваринах – IACUC-2021-0007. Клітини 4T1 були придбані у Shanghai Fuheng Biotechnology Co., Ltd.

Експериментальне дослідження Cistanche deserticola

1.2 Препарат

Cistanche deserticola був ідентифікований дослідником Сяо Сяохе як Epimedium E., рослина Berberidaceae Сухе листя з Brevicornum Maxim. Взяти листя Cistanche deserticola deserticola, подрібнити, пропустити через сито № 4, точно зважити, додати розбавлений етанол, провести обробку ультразвуком (потужність 400 Вт, частота 50 кГц) протягом 1 год, охолодити, знову зважити, використовуйте розведений етанол, щоб компенсувати втрачену вагу, збовтайте їх, відфільтруйте, візьміть продовжений фільтрат, заморозьте та висушіть їх, щоб отримати екстракт Cistanche deserticola deserticola. 1.3 Препарати та реагенти Антитіло до аргінази-1 (Arg-1) (номер партії: 93668) було придбано у компанії CST із США; - Антитіло до актину (номер партії 20536 1-AP) придбано у компанії Protentech; HRP-мічене вторинне козяче антитіло проти кролика IgG (номер партії J111-035-003) було придбано у Jackson Immuno Research; Реагент Тризол (номер партії BSC51M1) придбано у компанії Біолюкс; Реагент CCK-8 (номер партії KTA1020-1000T) був придбаний у компанії Abbkine; Фактор інтерлейкіну 4 (IL-4) (номер партії 96-214-14-20) був придбаний у Peprotech.

1.4 Інструмент

QB-9002 Seismic Plate Instrument (Haimen Qilin Bell Company); Імуноферментний аналіз Epoch та аналізатор концентрації нуклеїнових кислот P100 plus (компанія Bio Tek, США); Quantstudio 6 Flex fluorescence quantitative PCR instrument (Thermo Fisher Scientific, США); Пальмова центрифуга MINI6K (Hangzhou Aosheng Company); Вібратор Vortex-Genie 2 (Scientific Industries, США).

2 Методи

2.1 Компонентний аналіз спиртового екстракту Cistanche deserticola

2.1.1 Зразокприготування Додайте метанол до спиртового екстракту Cistanche deserticola, щоб отримати суспензію 5 мг/мл, екстрагуйте її ультразвуком протягом 40 хв, візьміть 1 мл і центрифугуйте при 12 000 об/хв протягом 10 хв. , візьміть супернатант після центрифугування, пропустіть 0,22 мкМ мембрану фільтра, зразок у UPLC-MS/MS. Компоненти Cistanche deserticola були зібрані за допомогою фармакологічної бази даних і аналітичної платформи систем традиційної китайської медицини (TCMSP). Результати МС аналізували за допомогою платформи даних Progression QI (на основі баз даних NPATLAS і GNPS), а результати порівнювали з пошуком компонентів Cistanche deserticola для нецільового аналізу компонентів.

2.1.2 Умови хроматографії:

Отримання хроматографічної колонки UPLC BEH C18 (100 мм × 2,1 мм, 1,7 мкм), рухомою фазою є двічі дистильована вода (A) - ацетонітрил (B), градієнтне елюювання: 0-3 хвилин, 5 відсотків B; від 3 до 35 хвилин, від 5 до 95 відсотків В; 35-42 хвилин, 95 відсотків -5 відсотків B. Об’ємна швидкість потоку 0,3 мл/хв; Об'єм ін'єкції - 5 мкл; Температура камери температури колонки становить 40 градусів. 2.1.3 Умови мас-спектрометрії: електророзпилювальне джерело іонів (ESI) використовується для виявлення в режимі позитивних іонів, а температура капіляра становить 275 градусів; Об'ємна витрата оболонкового газу 20 Arb; Об'ємна витрата допоміжного газу 5 Arb; Напруга джерела іонів 5 кВ. 2.2 Культура клітин Макрофаги кісткового мозку (BMDM) були виділені з кісткового мозку стегнової кістки 8-тижневих самок мишей C57BL/6. Їх культивували в середовищі DMEM, що містило 10 відсотків фетальної бичачої сироватки, 1 відсоток пеніциліну/стрептоміцину та фактор стимуляції колоній макрофагів миші M-CSF (50 нг/мл), і поміщали в інкубатор при 37 градусах і 5 відсотках CO2 на 6 днів.

Розщеплюйте клітини за допомогою 0.25% трипсину EDTA (2:1) зі швидкістю 1,2 × Інокуляція 106/мл щільності в лунковий планшет протягом ночі. На другий день після додавання спиртового екстракту Cistanche deserticola протягом 1 години клітини стимулювали IL-4 (20 нг/мл) протягом 24 годин.

2.3 Метод CCK{{0}} був використаний для виявлення цитотоксичності спиртового екстракту Cistanche deserticola deserticola для клітин BMDM × Інокуляція 106/мл щільності в 96-лункові планшети, поміщення в інкубатор на ніч, обробляти клітини з різними масовими концентраціями (0, 0.015 625, {{10}}.031 25, 0.{{ 9}}, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4 мг/мл) спиртового екстракту Cistanche deserticola протягом 24 год. Викиньте культуральне середовище, додайте розчин CCK-8-культурального середовища (1:10), інкубуйте в інкубаторі протягом 1 години, виміряйте поглинання (А) при 450 нм за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів і виявіть токсичність спиртового екстракту Cistanche deserticola deserticola до клітин.

2.4Вестерн-блот використовували для виявлення експресії білка Arg{{0}} у клітинах BMDM. Були створені контрольна група, модельна група та група спиртового екстракту Cistanche deserticola з різними масовими концентраціями (0.062 5, 0.125, 0,25 мг/мл). Препарат вводили за методикою п. 2.2. Клітини збирали і додавали лізат RIPA для екстракції білка. Зразок білка піддавали електрофорезу в 10-відсотковому додецилсульфаті натрію-поліакриламідному гелі, переносили на мембрану PVDF, закривали в TBST, що містить 5 відсотків знежиреного молока, на 1 годину, додавали первинні антитіла та інкубували протягом ночі при 4 градусах; Після промивання за допомогою TBST інкубуйте з вторинним антитілом і проявіть за допомогою реагенту для виявлення хемілюмінесценції.

2.5 QRT PCR використовувався для виявлення клітинного хемотаксичного фактора BMDM 24 (CCL24), запальної зони 1 (Fizz1), хітинази 3-like 3 (Ym1), макрофагальної галактози типу С-типу лектину 2 (MGL2) і пероксисомного проліфератора- активований рецептор (приймач, активований проліфератором пероксисом, PPAR ）, регуляторний фактор інтерферону 4 (IRF4), експресія мРНК Arg-1 і CD163 була встановлена ​​в контрольній групі, групі моделі та різні масові концентрації ({{17} }.062 5, 0.125, 0.25 мг/мл) спиртового екстракту Cistanche deserticola згідно з «2.2»

2.6Приготування кондиціонованого середовища Контрольний метод [12]: BMDM культивували відповідно до методу під «2.2». Після приєднання пластини для посіву клітин додали безсироваткове середовище, що містило спиртовий екстракт Cistanche deserticola (0,25 мг/мл), і IL-4 (20 нг/мл ) було додано через 1 годину. Через 24 години зберіть супернатант як кондиціоноване середовище. Кондиціоноване середовище центрифугували при 2000 об/хв для осадження фрагментів, аспірували та зберігали при -80 градусах для експериментів з міграцією клітин. BMDM культивували відповідно до методу, описаного в пункті «2.2», і середовище DMEM, що містить спиртовий екстракт Cistanche deserticola (0,25 мг/мл), додавали після того, як пластину для посіву клітин прикріпили до стінки, і IL-4 (20 нг /мл) додавали через годину. Через 24 години зберіть супернатант як кондиціоноване середовище. Центрифугуйте кондиціоноване середовище 2000 для осадження фрагментів, аспіруйте супернатант і зберігайте його при -80 градусах для експериментів із клітинними колоніями.2.7 Експеримент із міграцією клітин. Помістіть {{0}}плагін для загоєння ран у 12-планшет з отворами, і клітини 4T1 обробляють 3,6 × 105/мл вакцини . Після того, як клітини прилипнуть до стіни протягом ночі, видаліть плагін і змийте плаваючі мертві клітини PBS. Додайте середовище без сироватки, що містить 50 відсотків кондиціонованого середовища. Інкубуйте в термостаті 24 години. Через 0 і 24 години зробіть фотографії за допомогою інвертованого мікроскопа, проаналізуйте зображення за допомогою зображення J і обчисліть швидкість міграції клітин. Швидкість міграції клітин=(0 год площі рани -24 год площі рани)/0 год площі рани

2.8Експеримент із клітинними колоніями 1000 4Клітини T1 інокулюють у кожну лунку 6-лункових планшетів та інкубують із середовищем, що містить 50 відсотків кондиціонованого середовища, протягом 8 днів. Фіксуйте 2% параформальдегідом, фарбуйте 1% кристалічним фіолетовим, фотографуйте та аналізуйте зображення за допомогою Image J.

2.9Статистичний аналіз проводили за допомогою програмного забезпечення GraphPad Prism 8, дані вимірювань виражали як xs ±, а порівняння між групами проводили за допомогою одностороннього дисперсійного аналізу.

3 Результати

3.1 Аналіз складу спиртового екстракту Cistanche deserticola deserticola показаний на малюнку 1 і в таблиці 2. Спиртовий екстракт Cistanche deserticola deserticola містить бензойну кислоту, коніфериловий альдегід, емодін, ванільну кислоту, гіалін і лепірудин А.

Таблиця 1 Послідовності праймерів

Рисунок 1 Аналіз спиртових екстрактів з Cistanche deserticola deserticola

Таблиця 2 Компонентний аналіз спиртового екстракту Cistanche deserticola deserticola

3.2Цитотоксичність спиртового екстракту Cistanche deserticola на BMDM. Результати показали, що 0.015 625 - 2 мг/мл спиртового екстракту Cistanche deserticola не має токсичного впливу на клітини BMDM після обробки клітин BMDM різними концентраціями спиртового екстракту Cistanche deserticola. протягом 24 годин (рис. 2).

Рис. 2 Цитотоксичність спиртового екстракту Cistanche deserticola deserticola до BMDM (xs ±, n=3)

3.3 Етаноловий екстракт Cistanche deserticola інгібує M2 поляризацію макрофагів in vitro. У макрофагах BMDM M0 маркери Arg-1 і CD163 M2-подібних макрофагів мають низьку експресію, а експресія значно підвищується після індукції IL-4, що вказує на що BMDM успішно поляризується в M2--подібні макрофаги. Були використані методи Вестерн-блоттингу та ПЛР-ПЛР для підтвердження того, що спиртовий екстракт Cistanche deserticola може залежно від дози модулювати експресію Arg-1 і CD163, індуковану IL-4 (рис. 3), що вказує на що спиртовий екстракт Cistanche deserticola може безпосередньо інгібувати М2-подібну поляризацію макрофагів. Для подальшого вивчення впливу спиртового екстракту Cistanche deserticola deserticola на M2-поляризацію макрофагів qRT PCR використовувався для вивчення пов’язаних з M2 макрофагами генів Fizz1 і PPAR. Рівні транскрипції Ym1, CCL24, MGL2 і IRF4 показані на малюнку. 4. Порівняно з модельною групою рівні експресії мРНК Fizz1, Ym1, CCL24 та IRF4 у спиртовому екстракті Cistanche deserticola (0.062 5, 0.125, { {29}}.25 мг/мл) група значно знизилася (P<0.05, 0.01, 0.001), and the PPAR in the alcohol extract of Cistanche deserticola (0.125, 0.25 mg/mL) group γ The mRNA expression level decreased significantly (P<0.01, 0.001), and the MGL2 mRNA expression level in the alcohol extract of Cistanche deserticola deserticola (0.25 mg/mL) group decreased significantly (P<0.001).

3.4 Етаноловий екстракт Cistanche deserticola послаблює стимулювання M2-подібних макрофагів до міграції клітин 4T1. Тест подряпин використовувався для спостереження за ефектом супернатанту етанольного екстракту Cistanche deserticola на міграційну здатність клітин раку молочної залози. BMDM інкубували в безсироватковому середовищі, що містить IL-4 і спиртовий екстракт Cistanche deserticola deserticola протягом 24 годин, і супернатант збирали як кондиціоноване середовище. 4T1 культивували в безсироватковому середовищі, що містило 50 відсотків кондиціонованого середовища, як показано на малюнку 5, кондиціоноване середовище, зібране BMDM, оброблене лише IL-4, значно сприяло міграції клітин 4T1 (P<0.05), while the conditioned medium of BMDM treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the migration of 4T1 cells (P<0.05). 3.5 Cistanche deserticola alcohol extract weakens the promotion of M2-like macrophages on 4T1 cell colony formation Use colony formation experiment to evaluate the effect of Cistanche deserticola alcohol extract on M2-like macrophages promoting 4T1 cell colony formation. As shown in Figure 6, the conditioned medium treated with IL-4 significantly promoted the colony formation of 4T1 cells (P<0.05), while the conditioned medium treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the colony formation of cells (P<0.001)

4 Обговорення

Переваги cistanche tubulosa - Протипухлинний

В даний час рак молочної залози все ще є глобальною проблемою охорони здоров'я. Рівень захворюваності на рак молочної залози зростає з року в рік і молоді, що серйозно загрожує здоров'ю жінки [13]. Традиційна китайська медицина вважає, що на ранніх стадіях пухлин, через нездатність організму розсіювати ци через дефіцит ян, інь ци недостатньо і не може формувати нормальне накопичення сперми. Однак аномальне накопичення призводить до патологічних продуктів, таких як помутніння мокротиння та застій крові, що призводить до трансформації токсинів у пухлини [14]. Cistanche deserticola deserticola, як основний засіб для тонізування ян, має ефект тонізування життєвої енергії та ян нирок і може регулювати імунітет. У клінічній практиці це китайська медицина, що тонізує нирки. Зараз він часто використовується для лікування раку молочної залози і часто використовується як високочастотний складний препарат. Однією з ознак раку є імунна дисфункція. Імунні клітини, які повинні боротися з пухлинами, є специфічно статевим інгібуванням навколишніми тканинами та мікрооточенням пухлини, що призводить до неконтрольованого росту та поширення пухлин [15]. Дедалі більше доказів показує, що коли він існує в мікрооточенні пухлини, клітини вродженого імунітету (макрофаги, нейтрофіли, дендритні клітини, вроджені лімфоїдні клітини, клітини статевого гальмування кісткового мозку та NK-клітини) та адаптивні імунні клітини (Т-клітини та В-клітини) ) сприяють прогресуванню пухлини [16]. Макрофаги є незамінними медіаторами тканинного гомеостазу, і їх поляризація на альтернативні активовані макрофаги (тип М2) може сприяти проліферації ракових клітин, ангіогенезу та метастазам. Таким чином, регуляція TAM та підтримка їх гомеостазу стали центром лікування пухлин [17]. TAM беруть участь у метастазуванні, ангіогенезі, ремоделюванні матриксу, інвазії та імуносупресії раку молочної залози. TAM в основному поділяються на два різні фенотипи, а саме класичні активовані M1--подібні макрофаги та альтернативні активовані M2--подібні макрофаги [18]. У доброякісних або нефункціональних пухлинах більшість TAM є класично активованими M1--подібними макрофагами, які активуються інтерфероном, IFN-） або ліпополісахаридом (LPS), таким чином сприяючи TAM виробленню прозапальних факторів і фагоцитозу пухлинних клітин. M2-подібні макрофаги можуть бути активовані цитокінами Th2, такими як IL-4, для виробництва великої кількості протизапальних факторів, які безпосередньо сприяють розвитку раку молочної залози [19]. Таким чином, реверсування або інгібування поляризації M2--подібних макрофагів є стратегією імунотерапії раку молочної залози. Arg-1 є маркером M2-подібних макрофагів, і його надмірна експресія пов’язана з поганим прогнозом у хворих на рак [20].

Китайська трава цистанка - протипухлинна

CD163 є специфічним маркером M2--подібних макрофагів [21], який асоціюється з метастазами пухлини. CD163 плюс TAM індукує епітеліально-мезенхімальний перехід (EMT) і сприяє міграції ракових клітин [22]. Результати цього дослідження показують, що екстракт Cistanche deserticola deserticola певною мірою відіграє роль у регуляції імунітету, пригнічуючи експресію Arg-1 і CD163, поверхневих маркерів M2-подібних макрофагів, та інгібування поляризації макрофагів типу M2-. PPAR Це метаболічний сенсор, який регулює ліпідний гомеостаз через активацію різних жирних кислот і похідних жирних кислот (таких як пальмітинова кислота) [23]. PPAR Пов’язаний із поляризацією M2 макрофагів, PPAR став основним регулятором поляризації M2 у макрофагах [24], було показано, що ліганди PPAR мають сильний інгібуючий вплив на ріст пухлин in vivo [25]. Fizz1 і Ym1 є M2-подібними маркерними генами макрофагів, а Fizz1 і Ym1 беруть участь у фіброзі під час відновлення тканин [26]. M2-подібні макрофаги продукують велику кількість CCL24 in vitro [27], і підвищена експресія CCL24 може сприяти проліферації пухлини, міграції та інвазії [28]. IRF4 є членом сімейства IRF. Він бере участь у процесі поляризації M2 макрофагів і діє як негативний регулятор сигналів Toll-подібних рецепторів шляхом поєднання з молекулою адаптера MyD88 [29]. MGL2 є членом сімейства лектинів типу галактози типу C макрофагів, і він також експресується в макрофагах, стимульованих за альтернативних умов активації [30]. Результати цього дослідження вказують на те, що екстракт Cistanche deserticola deserticola пригнічує M2-подібний до макрофагів ген PPAR. Експресія Fizz1, Ym1, CCL24, IRF4 і MGL2 пригнічує поляризацію типу M2 макрофагів, вказуючи на те, що Epimedium може служити ефективним інгібітор М2-подібних макрофагів. Все більше доказів свідчить про те, що M2-подібні макрофаги можуть сприяти метастазам і росту раку [31]. Кондиціоноване середовище з M2-подібних макрофагів може симулювати мікрооточення пухлини та індукувати міграцію та ріст пухлини, що подібно до макрофагів, виділених із злоякісних пухлин [12]. IL-4 може сприяти поляризації макрофагів до типу М2, а також сприяти проліферації пухлини та ангіогенезу [18]. Це дослідження продемонструвало кореляцію між поляризацією макрофагів і протипухлинною дією Cistanche deserticola deserticola. Кондиціоноване середовище з IL-4-активованих макрофагів сприяло міграції та росту клітин 4T1, а після спільного втручання з Cistanche deserticola скасовувало цей M2-активований пухлинний ефект, що свідчить про те, що IL{{55} }активована M2 поляризація була усунена Cistanche deserticola.

Це дослідження продемонструвало кореляцію між поляризацією макрофагів і протипухлинною дією Cistanche deserticola deserticola. Кондиціоноване середовище з IL-4-активованих макрофагів сприяло міграції та росту клітин 4T1, а після спільного втручання з Cistanche deserticola скасовувало цей M2-активований пухлинний ефект, що свідчить про те, що IL{{7} }активована M2 поляризація була усунена Epimedium. Це дослідження показало, що екстракт Cistanche deserticola пригнічує міграцію клітин і утворення колоній раку молочної залози шляхом регулювання поляризації макрофагів in vitro, що вказує на те, що лікування раку молочної залози Cistanche deserticola може бути пов’язане з регуляцією мікрооточення пухлини, а Epimedium може діяти як регулятор мікрооточення пухлини в місці метастазування, впливаючи на макрофаги, що дає нові знання про механізми протипухлинної функції Cistanche deserticola. Він розкриває новий потенційний механізм Cistanche deserticola для лікування раку, який може допомогти знизити рівень захворюваності на рак рак і смертність, пов’язана з раком. У майбутньому дослідницька група продовжить дослідження впливу Cistanche deserticola на ріст і метастазування раку молочної залози після інгібування М2-поляризації макрофагів in vivo, щоб додатково пояснити протипухлинний механізм Cistanche deserticola та створити основу для клінічного застосування Cistanche deserticola в лікуванні пухлинних захворювань.

Список літератури

Список літератури

[1] Співробітники GBD 2019 щодо факторів ризику раку. Глобальний тягар раку, який можна віднести до факторів ризику, 2010-19: систематичний аналіз для дослідження глобального тягаря захворювань 2019 [J]. Lancet, 2022, 400(10352): 563-591.

[2] Yin L, Duan JJ, Bian XW та ін. Молекулярний підтип потрійного негативного раку молочної залози та прогрес у лікуванні [J]. Breast Cancer Res, 2020, 22(1): 61.

[3] Medeiros B, Allan A L. Молекулярні механізми метастазування раку молочної залози в легені: клінічні та експериментальні перспективи [J]. Int J Mol Sci, 2019, 20(9): 2272.

[4] Pathria P, Louis TL, Varner J A. Націлювання на асоційовані з пухлиною макрофаги при раку [J]. Trends Immunol, 2019, 40(4): 310-327.

[5] Shen MJ, Chen YB, Xu LJ та ін. Підвищена інфільтрація макрофагами до радіорезистентних клітин раку легенів сприяє розвитку додаткової стійкості пухлинних клітин до цитотоксичної дії NK-клітин [J]. Int J Oncol, 2018, 53(1): 317-328.

[6] Tariq M, Zhang JQ, Liang GK та ін. Поляризація макрофагів: Протиракові стратегії, спрямовані на асоційовані з пухлиною макрофаги при раку молочної залози [J]. J Cell Biochem, 2017, 118(9): 2484-2501.

[7] Ma Li Вплив глікозиду Cistanche deserticola на фактор, отриманий зі стромальних клітин -1 (SDF-1) і його рецептор CXCR-4 у щурів із гострим інфарктом середньої мозкової артерії [D] Нанкін : Нанкінський університет китайської медицини, 2014

[8] Hao Fuliang Вплив і механізм глікозиду Cistanche deserticola на відновлення та загоєння дефектів черепа кролика [D] Shijiazhuang: Hebei Medical University, 2013

[9] He J, Zang SL, Liu N та ін. Полісахариди епімедіуму послаблюють гематотоксичність шляхом зменшення окислювального стресу та посилення імунної функції у мишей на моделі індукованої бензолом недостатності кісткового мозку [J]. Biomed Pharmacother, 2020, 125: 109908.

[10] Hua Ciyi, Shi Youyang, Xie Ying та ін. Дослідження механізму дії Cistanche deserticola, активного інгредієнта в лікуванні раку молочної залози [J] Китайська фітотерапія, 2022, 53 (20): 6593-6600

[11] Чень Сяолей, Тан Ліцзянь, Лі Цінлінь. Дослідження проти проліферації клітин раку молочної залози за допомогою екстрактів Cistanche deserticola та frazil in vitro [J] China Pharmacy, 2007, 18 (15): 1124-1127

[12] Xu F, Cui WQ, Wei Y та ін. Астрагалозид IV пригнічує прогресування та метастазування раку легенів шляхом модуляції поляризації макрофагів через передачу сигналів AMPK [J]. J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1): 207.

[13] Брітт К. Л., Кузік Дж., Філліпс К. А. Ключові кроки для ефективної профілактики раку молочної залози [J]. Nat Rev Cancer, 2020, 20(8): 417-436.

[14] Хао Фейфей, Тянь Сішен Дослідження «Ян домінуючого слідування Інь» у злоякісних пухлинних метастазах на основі теорії газифікації [J] Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2021, 32 (1): 164-166

[15] Denk D, Petrocelli V, Conche C та ін. Експансія стовбурових клітин Т-пам'яті з чудовим протипухлинним імунітетом шляхом мітофагії, індукованої уролітином А [J]. Імунітет, 2022, 55(11): 2059-2073.

[16] Hinshaw DC, Shevde L A. Мікрооточення пухлини вроджено модулює прогресування раку [J]. Cancer Res, 2019, 79(18): 4557-4566.

[17] DeNardo DG, Ruffell B. Макрофаги як регулятори пухлинного імунітету та імунотерапії [J]. Nat Rev Immunol, 2019, 19(6): 369-382.

[18] Dong R, Gong YL, Meng W та ін. Участь інгібування поляризації макрофагів M2 у хіміопрофілактичних ефектах фенретиніду на рак товстої кишки [J]. Cancer Lett, 2017, 388: 43-53. [19] Jiménez-Garcia L, Herránz S, Luque A та ін. Критична роль p38 MAPK в IL-4-індукованій альтернативній активації перитонеальних макрофагів [J]. Eur J Immunol, 2015, 45(1): 273-286.

[20] Ma ZG, Lian J, Yang M та ін. Надмірна експресія аргінази-1 є показником поганого прогнозу у пацієнтів з колоректальним раком [J]. Pathol Res Pract, 2019, 215(6): 152383.

[21] Tao SF, Chen Q, Lin C та ін. Linc00514 сприяє метастазам раку молочної залози та поляризації М2 асоційованих із пухлиною макрофагів через сигнальний шлях Notch, опосередкований Jagged1- [J]. J Exp Clin Cancer Res, 2020, 39(1): 191.

[22] Wei C, Yang CG, Wang SY та ін. Перехресні перешкоди між раковими клітинами та асоційованими з пухлиною макрофагами необхідні для метастазування колоректального раку, опосередкованого мезенхімальними циркулюючими пухлинними клітинами [J]. Mol Cancer, 2019, 18(1): 64.

[23] Francque S, Szabo G, Abdelmalek MF та ін. Неалкогольний стеатогепатит: роль рецепторів, активованих проліфератором пероксисом [J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol, 2021, 18(1): 24-39.

[24] Tian Y, Yang CM, Yao QY та ін. Проціанідин B2 активує PPAR, щоб індукувати поляризацію M2 у макрофагах миші [J]. Front Immunol, 2019, 10: 1895.

[25] Такада І, Макісіма М. Агоністи та антагоністи рецепторів, активованих проліфератором пероксисом: Огляд патенту (2014- наявний) [J]. Expert Opin The Pat, 2020, 30(1): 1-13.

[26] Окузумі С, Міята Дж, Кабата Х та ін. Агоніст TLR7 пригнічує вроджене запалення, опосередковане лімфоїдними клітинами групи 2, через інтерстиціальні макрофаги, що продукують IL-27- [J]. Am J Respir Cell Mol Biol, 2021, 65(3): 309-318.

[27] Makita N, Hizukuri Y, Yamashiro K та ін. ІЛ-10 посилює фенотип макрофагів М2, індукований ІЛ-4, і надає здатність збільшувати міграцію еозинофілів [J]. Int Immunol, 2015, 27(3): 131-141.

[28] Jin L, Liu WR, Tian MX та ін. CCL24 сприяє злоякісній пухлині ГЦК через шлях ангіогенезу RhoB-VEGFA-VEGFR2 і вказує на поганий прогноз [J]. Oncotarget, 2017, 8(3): 5135-5148.

[29] Сато Т., Такеучі О., Ванденбон А та ін. Вісь Jmjd3-Irf4 регулює поляризацію макрофагів M2 і реакцію господаря на інфекцію гельмінтами [J]. Nat Immunol, 2010, 11(10): 936-944.

[30] Raes G, Brys L, Dahal BK та ін. Макрофагальна галактоза типу C-типу лектини як нові маркери для альтернативно активованих макрофагів, викликаних паразитарними інфекціями та алергічним запаленням дихальних шляхів [J]. J Leukoc Biol, 2005, 77(3): 321-327.

[31] Мантовані А, Аллавена П, Сіка А та ін. Запалення, пов’язане з раком [J]. Nature, 2008, 454(7203): 436-444.