Дослідження скибочок Cistanche Deserticola та винного продукту, обробленого парою з Cistanche Deserticola

Різниця хімічних компонентів і біологічної активності скибочок сирих продуктів і винного продукту, обробленого парою від Cistanche

Контакт: emily.li@wecistanche.com

Ін Чжан, 1, 2 Юеу Ван, 3 Сон Ян, 1 Юньфен Сяо, 3 Хайбінь Гуань, 2 Сінь Юе, 2 Сяоцінь Ван, 2 і Сянгрі Лі 1

Анотація

Як добре відомий китайський лікарський засіб на травахCistanche deserticolaвикористовувався для лікування синдрому ниркової недостатності в Китаї протягом тисяч років. Обидва сирий продуктСкибочки цистанки десертної(УЗО) та йогоВино, оброблене парою(WSCD) використовуються клінічно для різних ефектів. У цьому дослідженні вплив процесу пропарювання вина (SPW) відCistanche deserticolaна хімічний склад і біологічні ефекти були досліджені. Аналіз головних компонентів (PCA) і кількісний аналіз були використані для вивчення відмінностей у хімічному складі. Також досліджували вплив живлення нирок, щоб порівняти відмінності між RCD (скибочками Cistanche deserticola)та WSCD (Вино, оброблене парою). Результати PCA показали, що очевидне розділення було досягнуто в RCD(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD (Вино, оброблене парою). Результати кількісного аналізу показали, що WSCD містить більшу кількість загальних полісахаридів, загальних PhG, ізоактеозиду та османтузиду B, ніж RCD(скибочками Cistanche deserticola), а вміст 2′-ацетилактеозиду та актеозиду після СЗВ зменшувався. Порівняння RCD і WSCD за біологічною активністю показало, що обидва можуть відновлювати рівень статевого гормону в моделі дефіциту ниркового яну і покращувати антиоксидантний ефект. WSCD(Вино, оброблене парою)був набагато кращим у збільшенні ваги внутрішніх органівниркаі насіннєвий пухирець. Результати показали, що SPW змінила свої хімічні компоненти та посилила свою біологічну активність.

1. Введення

Cistanche deserticolaє загальноприйнятою традиційною китайською медициною і зазвичай використовується як тонізуючий засіб у Китаї та Японії протягом багатьох років, широко відомий як «женьшень пустелі».Cistanche deserticolaвперше був зареєстрований як найвищий клас у «Трав’яній класиці Шеннонга з Materia Medica (Shen Nong Ben Cao Jing)» приблизно в 100 році до нашої ери та використовувався для лікування різних захворювань, включаючи ниркову недостатність, імпотенцію, жіноче безпліддя, патологічну лейкорею, профузну метрорагію (білі) , відчуття холоду в попереку та колінах, а також хронічні запори у людей похилого віку [1]. На даний момент виділено декілька основних компонентів, таких як полісахариди [2, 3], фенілетаноїдні глікозиди (PhG) [1, 4], іридоїди [1] та лігнаноїди [1, 5]. Доведено, що основними біологічно активними компонентами є ФГ і полісахаридиCistanche deserticola[6–9]. Сучасні фармакологічні експерименти довели, що Cistanche deserticola може підвищувати вироблення тестостерону та захищати сперматозоїди, стимулювати проліферацію клітин та підвищувати рівень виживання клітин, демонструючи помітну активність для сексуальної потенції, покращуючи пам’ять, запобігаючи старінню, поглинаючи вільні радикали та нейрозахист [10]. –13].

Щоб зменшити токсичність і/або посилити ефект, більшість традиційних китайських трав слід обробити перед призначенням. Традиційні стадії процесу включають очищення, водну обробку (подрібнення у воді, пропарювання та смаження) та вогонь (перемішування, нагрівання з вином, оцтом, сіллю або медом) [14]. Під час процесу хімічні компоненти можуть змінюватися: може змінюватися відносний вміст певних компонентів або утворюватися нові компоненти [15]. ПроцесCistanche deserticolaмає давню історію іCistanche deserticolaслід обробляти шляхом замочування в рисовому вині, пропарювання, як описано в китайській фармакопеї (видання 2015 р.) [16]. Відповідно до теорії традиційної китайської медицини (ТКМ) було доведено вплив SPW на меридіан нирок [17]. WSCD(Вино, оброблене парою)вперше задокументовано в «Трактаті Lei Gongs про приготування та кип’ятіння Materia Medica (Lei Gong Pao Zhi Lun)» у Північній та Південній династіях Китаю. WSCD краще використовувати для лікування ниркової недостатності та захисту сперми, як зазначено в «Taiping Shenghui Fang» китайської династії Сун. Однак порівняльних досліджень хімічних компонентів між УЗО не було(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою)так далеко.

Сучасні фармакологічні дослідження показали, що WSCD може тонізувати нирки для забезпечення есенції, стимулюючи вісь гіпоталамус-гіпофіз-гонади різним ступенем, і використовується для лікування дефіциту нирок, такого як дефіцит ниркового ян [18]. Однак до цих пір відмінності в біологічній активності між РКД(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою)не досліджені. Нещодавно, щоб полегшити експериментальні дослідження, модель тварин з дефіцитом нирок-ян була дубльована шляхом введення щурам високої дози гідрокортизону, у яких щури демонструватимуть симптоми, дуже схожі на описані при дефіциті нирок-ян ТКМ [19, 20] . Щури з дефіцитом нирок-ян завжди мають деякі симптоми, такі як втрата ваги, зменшення споживання їжі, слабкість, збільшення споживання води та зниження активності. На основі цієї тваринної моделі було виявлено відмінності в ефектах живлення нирок між RCD і WSCD і навіть розкрито наукову суть традиційного китайського процесу.

Cistanche deserticola виконує багато функцій

2. Матеріали та методи

2.1. Матеріали та хімікати

Стандартну речовину, таку як актеозид, ізоактеозид, ехінакозид, цистанозид А та 2′-ацетилактеозид, було придбано у Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (Шанхай, Китай). Цистанозид F, цистанозид C, османтузид B і тубулозид B були придбані у Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (Ченду, Китай). Чистота всіх стандартів становила не менше 98 відсотків. Метанол та ацетонітрил класу HPLC були придбані у Aladdin Chemistry Inc. (Шанхай, Китай). Деіонізовану воду отримували за допомогою MilliQ50 SP Reagent Water System (Бедфорд, Массачусетс, США) для приготування зразків і мобільних розчинів. Усі інші органічні розчинники, використані в цьому дослідженні, були аналітичного класу та придбані у Shanghai Chemical Co. Ltd (Шанхай, Китай).

2.2. Колекція зразків

Все сиреCistanche deserticola(7 партій зразків) були зібрані медичним університетом Внутрішньої Монголії з провінцій Внутрішня Монголія та Нінся. Всі були ідентифіковані якцистанка пустирськаYC Ma Сяо-цінь Ван, професора кафедри фармакогнозії Медичного університету Внутрішньої Монголії. Зразок ваучера було збережено у Школі фармації Медичного університету Внутрішньої Монголії. Після збору суцвіття зCistanche deserticolaбули видалені, стебла були нарізані та висушені при кімнатній температурі на повітрі, а потім скибочки були випадковим чином розділені на дві групи в кожній партії: одна - RCD(скибочками Cistanche deserticola)а інший використовується для приготування WSCD(Вино, оброблене парою).

WSCD(Вино, оброблене парою)були виготовлені в лабораторії відповідно до китайської фармакопеї (видання 2015 р.) [16], що означає, що нарізаний РКД(скибочками Cistanche deserticola)замочували в рисовому вині в закритому посуді протягом 6 год до розм’якшення, пропарювали на водяній бані ще 12 год до почорніння поверхні та сушили при кімнатній температурі на повітрі.

2.3. Аналіз основних компонентів (PCA)

Аналіз головних компонент (PCA) — це складна техніка, яка широко використовується для зменшення розмірів багатовимірних задач. Це зменшує розмірність вихідного набору даних, пояснюючи кореляцію між великою кількістю змінних з точки зору меншої кількості базових факторів без значної втрати інформації. У цьому дослідженні відмінності УЗО(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою)були проведені неконтрольованим PCA з використанням програмного забезпечення SIMCA 13.0 на основі відносних площ піків у ВЕРХ-хроматографії. За допомогою PCA було виявлено вплив основних хімічних речовин на класифікацію різних зразків.

2.4. Підготовка зразка

2.4.1. Препарат екстракту для тварин

УЗО(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою)були відібрані із зразків, зібраних і підготовлених, як описано в розділі 2.2.

Висушений на повітрі та нарізаний RCD(скибочками Cistanche deserticola)подрібнювали за допомогою пульверизатора (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), точно зважували 1.0 кг і замочували в 50-відсотковому етанолі на 30 хвилин, а співвідношення рослин/етанолу було 1/ 10 (в/в). Потім його екстрагували зі зворотним холодильником двічі по 1 год кожен раз. Два екстракти об'єднували і фільтрували, а етанол відновлювали при зниженому тиску при 60 градусах. Загальний неочищений екстракт PhGs висушували у вакуумі при 60∘C і очищали макропористою смолою. Нарешті, був отриманий і точно зважений екстракт PhGs RCD.

Екстракт PhGs WSCD(Вино, оброблене парою)було отримано за тією ж процедурою, що описана вище.

Осади від екстрагування PhGs сушили на повітрі та двічі по 1,5 години відварювали водою у 20 разів. Два екстракти об'єднували і центрифугували при 4000 об/хв протягом 10 хвилин, а супернатант концентрували і осаджували 95% етанолом. Після центрифугування осад сушили у вакуумі при 60 градусах. Нарешті, полісахаридний екстракт RCD(скибочками Cistanche deserticola)був отриманий і точно зважений.

Екстракт полісахаридів WSCD(Вино, оброблене парою)було отримано за тією ж процедурою, що описана вище.

PhGs і полісахаридні екстракти RCD(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою)були змішані суспензії у воді, відповідно, коли щурам вводили перорально.

2.4.2. Пробопідготовка для визначення PhG

Екстракти PhGs у Розділі 2.4.1 були точно зважені як 0.15 г і екстраговані ультразвуком 50мл 50% водного розчину метанолу протягом 40 хв. Після охолодження втрату маси поповнювали 50-відсотковим метанолом. Усі зразки та розчинники фільтрували через мембрану 0,45 мкм перед аналізом. Вміст чотирьох ФГ в РКД(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою)визначали за допомогою ВЕРХ, а загальні PhG визначали за допомогою УФ-спектрофотометрії.

2.4.3. Пробопідготовка для визначення полісахариду

Екстракти полісахаридів у Розділі 2.4.1 були точно зважені як 0.10 г і екстраговані ультразвуковою обробкою 50 мл гарячої води протягом 40 хвилин; після охолодження втрату ваги поповнювали водою. Усі зразки та розчинники фільтрували через мембрану 0,45 мкм перед аналізом.

2.5. Хроматографічні умови ВЕРХ і визначення чотирьох PhG

Хроматографічне розділення проводили в системі ВЕРХ UltiMate 300{{40}} (Thermo Fisher Scientific, США), обладнаній подвійним градієнтним насосом, колонковим відділенням і детектор DAD. Дані були зібрані та оброблені за допомогою ChromeLeon Chromatography Data System. Зразки розділяли на Agilent Zorbax SB-C18 (250 мм × 4,6 мм, 5 мкм) із запобіжною колонкою C18 (4,6 мм × 12,5 мм, 5 мкм). Рухома фаза складалася з ацетонітрилу (A) і 0.1% розчину фосфорної кислоти (B) зі швидкістю потоку 1 мл/хв. Градієнтне елюювання таке: початкові 0–13 хв, лінійна зміна від AB (5:95, об’єм) до AB (15:85, об’єм); 13–25 хв, лінійна зміна на АВ (20:80, об/об); 25–43 хв, лінійна зміна на АВ (25:75, об/об). Довжину хвилі детектора контролювали при 330 нм. Температуру колонки встановлювали на рівні 30 градусів, а об’єм введеного зразка становив 10 мкл [21]. Основний розчин, що містить чотири еталонні стандарти, готували шляхом розчинення еталонних стандартів у 50% метанолі до кінцевої концентрації 0,20 мг/мл для 2-ацетилактеозиду, 0,20 мг/мл для актеозиду, 0,05 мг/мл для османтузиду B, і 0,10 мг/мл для ізоактеозиду. Потім розчин розбавляли до п’яти різних концентрацій у трьох повторах для створення калібрувальних кривих. Вміст зразка виражали в г/кг сирої маси.

Дослідження скибочок Cistanche deserticola та винного продукту, обробленого парою з Cistanche deserticola

2.6. Визначення загального PhG

Загальні PhG визначали за допомогою методу УФ-спектрофотометрії при довжині хвилі 330нм на спектрофотометрі UV1000 (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). Базовий розчин готували розчиненням ехінакозидних стандартів у 50% метанолі до кінцевої концентрації 0,10 мг/мл, а потім розбавляли до п’яти різних концентрацій у трьох повторах для створення калібрувальних кривих.

2.7. Визначення полісахаридів

Визначення полісахаридів проводили фенол-сірчанокислотним методом. У пробірку на 20 мл зі скляною пробкою помістили 1 мл розчину зразка, додали 1 мл 6%-ного розчину фенолу та 5 мл концентрованої сірчаної кислоти та струшували протягом 5 хв. Суміш переносили на киплячу водяну баню на 10 хв і охолоджували до кімнатної температури для ультрафіолетового детектування. Ультрафіолетове поглинання контролювали при 480 нм на спектрофотометрі UV1000. Еталонний стандарт безводної D-глюкози точно зважували та розчиняли в дистильованій воді до кінцевої концентрації 0,10 мг/мл. Потім розчин розбавляли до п’яти різних концентрацій у трьох повторах для створення калібрувальних кривих.

2.8. Експерименти на тваринах

2.8.1. Тварини та житло

Самці щурів SD статевої зрілості (180-200 г) були придбані в Xinglong (Beijing) Experimental Animal Farm (вік: 6 тижнів), а ліцензія на лабораторних тварин була SCXK (Jing):2016-0003. Усі процедури з тваринами були схвалені Комітетом досліджень тварин Медичного університету Внутрішньої Монголії та проведені відповідно до рекомендацій Національного інституту охорони здоров’я щодо принципів догляду за тваринами (2004). Усіх тварин утримували в бар’єрній системі з регульованою температурою 21–23 градуси та відносною вологістю 40–65 відсотків і в 12-годинному циклі темрява/світло. Щурам давали ad libitum їжу та воду та акліматизували до вищевказаного середовища протягом тижня.

2.8.2. Дозування та відбір проб

Щурів перевели в окремі метаболічні клітки та випадковим чином розділили на 6 груп (= 10 у кожній групі). Їм робили внутрішньом’язову ін’єкцію 15 мг/кг гідрокортизону натрію сукцинату (придбаного у Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Тяньцзінь, Китай) протягом 2 тижнів, за винятком групи 1, якій вводили рівний об’єм фізіологічного розчину. На 14-й день вага тіла, споживання їжі, споживання води, об’єм сечі та спонтанна активність протягом 5 хвилин були зібрані, щоб переконатися, що модель дефіциту нирок-ян була успішною. З 15-го дня 6 груп лікували таким чином: група 1 та група 2 (модельна група, М) отримували рівний об’єм дистильованої води, група 3 (екстракт PhGs RCD).(скибочками Cistanche deserticola)група, PR) обробляли 0.42 г/кг PhGs екстракту RCD, що дорівнювало приблизно 1,8 г/кг сирогоCistanche deserticolaа інші групи були такими ж, група 4 (екстракт PhGs WSCD(Вино, оброблене парою)група, PW) отримували дозу 0.49 г/кг PhG екстракту WSCD(Вино, оброблене парою), група 5 (полісахаридний екстракт РЦД(скибочками Cistanche deserticola)група, SR) обробляли 0.18 г/кг полісахаридного екстракту RCD, а група 6 була (полісахаридний екстракт WSCD(Вино, оброблене парою)група, SW) отримували дозу 0.22 г/кг полісахаридного екстракту WSCD. Усім щурам проводили перфузію шлунка на добу. Після місячного лікування щурам відмовляли в їжі протягом 12 годин перед забором крові. На наступний день усіх щурів анестезували та забивали. Під час тестування щурів зважували раз на тиждень для коригування дозування та зважували знову перед умертвінням. Зразки крові збирали в пробірку Епендорфа з 10-відсотковим розчином EDTA-2Na. Сироватку відокремлювали центрифугуванням при 2000 об/хв протягом 15 хв і зберігали при -80° для подальшого використання. Крім того, нирки, яєчка, придаток яєчка, передміхурову залозу та насіннєвий пухирець видаляли та швидко зважували. Після зважування яєчка заморожували в рідкому азоті для визначення СОД і МДА.

2.9. Аналіз гормонального та антиоксидантного ефекту

Рівень тестостерону (Т) і естрадіолу (Е2) визначали в Центрі контролю якості Циндао Кечуан радіоімунним і колориметричним методом. Заморожені яєчка зважували та змішували з 20-кратним холодним фізіологічним розчином (W/W). Гомогенат яєчок, отриманий гомогенатом тканини на крижаній бані, центрифугували для отримання супернатанту. Вміст СОД і МДА яєчка визначали наборами СОД і МДА згідно з інструкцією.

2.10. Статистичний аналіз

Значущість відмінностей між групами порівнювали за допомогою одностороннього тесту ANOVA з наступним тестом Шеффе з межею значущості 0.05 за допомогою програмного забезпечення SPSS 25.0. Усі дані були виражені як середнє ± стандартне відхилення (SD) (n=3).

3. Результати

3.1. Аналіз змін ФГ після СКС за допомогою PCA

Для порівняння змін PhGs після SPW було вибрано 9 хроматографічних піків як характерні піки та ідентифіковано. Їхні структури були показані на малюнку 1, відносні площі піків яких були розраховані для кількісного вираження. ВЕРХ-хроматограма, як показано на малюнку 2, показує, що відносний вміст основних PhG змінювався під час SPW. Для розрізнення різних зразків був проведений аналіз PCA на відносних площах піків 9 компонентів. УЗО(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою)були далеко один від одного на графіку балів (рис. 3(a)), що вказувало на те, що зразки були класифіковані на два кластери. Тому вважається, що вміст хімічних компонентів був різним. Для подальшого пошуку потенційних хімічних маркерів для дискримінації було проведено розширений статистичний аналіз для створення графіка Bi навантаження (рис. 3(b)). Піки 2, 3, 4, 6 і 7 зменшаться після SPW, а піки 5, 8 і 9 збільшаться, і всі вони були найважливішими компонентами для розрізнення УЗО(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою). Відносний вміст піку 1 не сильно змінюється після SPW.

Рисунок 1. Хімічні структури PhG вCistanche deserticolaYC Ma.

Рисунок 2 ВЕРХ хроматограма стандартної речовини (а), RCD(скибочками Cistanche deserticola)(b) і WSCD(Вино, оброблене парою)(c). Піки: (1) цистанозид F, (2) ехінакозид, (3) цистанозид A, (4) актеозид, (5) ізоактеозид, (6) цистанозид C, (7) 2'-ацетилактеозид, (8) османтузид B та (9) тубулозід В.

Рисунок 3 Діаграма балів PCA (a) і графік Bi навантаження (b) RCD(скибочками Cistanche deserticola)(зелене коло) і WSCD (червоне коло). RCD і WSCD були класифіковані на два кластери. Піки 2, 3, 4, 6 і 7 є найважливішими компонентами для розрізнення RCD і WSCD, які будуть знижуватися під час SPW; піки 5, 8 і 9 також є найважливішими компонентами для відмінностей між RCD і WSCD(Вино, оброблене парою), яка зростатиме під час СПР.

3.2. Зміни вмісту загальних полісахаридів і ФГ після СПВ

Як показано на малюнку 3(b), 8 компонентів (5, 8 і 9 збільшені та 2, 3, 4, 6 і 7 зменшені) суттєво змінилися та мали великий вплив на кластеризацію вибірки. Серед них найбільше зросли ізоактеозид і османтузид B, тоді як 2'-ацетилактеозид і актеозид знизилися найбільше. Так, методом ВЕРХ визначали вміст ізоактеозиду, османтузиду Б, 2′-ацетилактеозиду та актеозиду. Як показано на малюнку 1, пік 4 був актеозидом, пік 5 був ізоактеозидом, пік 7 був 2'-ацетилактеозидом, а пік 8 був османтузидом B. Загальний рівень PhG у RCD(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою)визначали за допомогою УФ-методу, а загальні полісахариди проводили за допомогою фенол-сірчано-кислотного методу, результати наведені в таблиці 1, ізоактеозид, османтузид B, загальні полісахариди та PhG у WSCD значно зросли порівняно з RCD. 2'-ацетилактеозид і актеозид значно знизилися.

Таблиця 1 Вміст полісахаридів і ФГ в РКД(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD(Вино, оброблене парою)(мг/г) (n=3).

Примітка. Істотні відмінності з УЗО(скибочками Cistanche deserticola)були позначені як *p < 0.05.

3.3. Була створена модель ниркового дефіциту Янг, викликаного гідрокортизоном

Порівняно з нормальною групою після 2-тижневої внутрішньом’язової ін’єкції 15 мг/кг гідрокортизону натрію сукцинату маса тіла, споживання їжі та спонтанна активність значно зменшилися (P<0.05) and="" the="" water="" intake="" and="" urine="" volume="" were="" increased;="" the="" results="" were="" shown="" in="" table="" 2.="" the="" t="" and="" e2="" levels="" in="" the="" serum="" of="" the="" model="" group="" were="" lower="" than="" the="" normal="" group="" as="" shown="" in="" figure="" 4.="" from="" the="" above,="" the="" kidney-yang="" deficiency="" model="" was="" successfully="">

Таблиця 2 Зміна показників після внутрішньом’язового введення гідрокортизону натрію сукцинату, (n=10).

Примітка. Достовірні відмінності з групою N були позначені як^# p<>

Рисунок 4 Рівні T і E2: (a) рівень T і (b) рівень E2. Достовірні відмінності з групою М були позначені як^∗p < 0.05.="" значні="" відмінності="" з="" групою="" n="" були="" позначені="">^#p < 0.05.

3.4. Вплив екстрактів на середню вагу та індекс внутрішніх органів

Усіх щурів та їхні нутрощі зважували, а потім розраховували середній індекс нутрощів.

Порівняно з групою N, група M значно зменшила вагу внутрішніх органів нирки, насіннєвого пухирця, придатка яєчка та яєчка, що також вказувало на успішне створення моделі дефіциту нирок-ян, викликаного гідрокортизоном. Порівняно з групою M, у групі PW та SR зросла вага всіх спостережуваних внутрішніх органів, у групі PR збільшилася вага яєчка, придатка яєчка, сім’яного пухирця та передміхурової залози, а в групі SW збільшилася вага нирки, яєчка, придатка яєчка, і насіннєвий пухирець. Порівняно з групами PR, група PW була кращою для нирок, насінних бульбашок і передміхурової залози. Не було істотної різниці між групами SR і SW у вазі яєчка, придатка яєчка, насінного пухирця та передміхурової залози. Результати наведені в таблиці 3.

Таблиця 3 Вага нутрощів (г) (n=10).

Примітка. Достовірні відмінності з групою М були позначені як^∗p < 0.05.="" значні="" відмінності="" з="" групою="" n="" були="" позначені="">^#p < 0.05.

Порівняно з групою N, у групі M були знижені вісцеральні індекси нирки, яєчка, придатка яєчка та сім’яного пухирця. Порівняно з групою M у групах PW та SR збільшився індекс нирки, яєчка, передміхурової залози та насіннєвого пухирця, у групах PR збільшився індекс яєчка, передміхурової залози та насінного пухирця, а у групі SW підвищений індекс нирки, яєчка та сім'яного бульбашки. Порівняно з групами PR, група PW була кращою для нирок, насінних бульбашок і передміхурової залози. Групи SW і SR мали подібний індекс нирки, яєчка, насінного пухирця та придатка яєчка. Результати наведені в таблиці 4.

Таблиця 4 Середній індекс нутрощів (г/100 г) (n=10).

Примітка. Достовірні відмінності з групою М були позначені як^∗p < 0.05.="" значні="" відмінності="" з="" групою="" n="" були="" позначені="">^#p < 0.05.

3.5. Вплив екстракту на рівень гормону (Т і )

Як показано на малюнку 4, порівняно з групою M, рівні T і E2 у всіх групах лікування (PW, PR, SW та SR група) значно підвищилися (P<0.05). however,="" the="" pw="" group="" was="" better="" than="" the="" pr="" group="" at="" levels="" t="" and="" e2.="" the="" sr="" and="" sw="" groups="" had="" no="" significant="">

3.6. Вплив екстрактів на антиоксидантну дію

СОД є важливим антиоксидантним ферментом. МДА є продуктом перекисного окислення ліпідів, який є показником, що відображає ступінь пошкодження окисником. Вміст СОД і МДА відображає ступінь окисної та антиоксидантної здатності. Як показано на малюнку 5, порівняно з групою M антиоксидантний ефект у всіх групах лікування (PW, PR, SW та SR) був посилений. Група SW була найбільшоюантиоксидантефект.

Рисунок 5 Вміст MDA та SOD: (a) вміст MDA та (b) вміст SOD. Достовірні відмінності з групою М були позначені як^∗p< 0.05.="" significant="" differences="" with="" the="" n="" group="" were="" designated="" as=""><>

4. Обговорення

Перед клінічним застосуванням необроблені матеріали повинні бути піддані традиційним китайським методам обробки. Обробка парою є одним із традиційних підходів до обробки деяких китайських лікарських трав, який дає чорний колір у результаті реакції Майяра [22], збільшуючи кількість деяких біоактивних компонентів [23] і фармакологічну активність. WSCD(Вино, оброблене парою)як один із продуктів процесу є кращим з точки зору живлення нирок порівняно з RCD(скибочками Cistanche deserticola)як задокументовано у виданні Китайської фармакопеї 2015 року. У цьому дослідженні результати PCA показали, що SPW змінив хімічний профіль RCD(скибочками Cistanche deserticola). Більше того, 8 компонентів у PhG зазнали істотних змін. Загальні PhG, загальні полісахариди, ізоактеозид і османтузид B найбільше зросли, тоді як 2'-ацетилактеозид і актеозид знизилися після SPW. Результати показали, що SPW може змінити хімічні складові RCD(скибочками Cistanche deserticola). Вміст PhG з 1,3,4-тризаміщеними глюкопіранозильними фрагментами (такими як актеозид, 2′-ацетилактеозид і цистанозид С) зменшився у WSCD(Вино, оброблене парою), однак концентрації їхніх ізомерів з 1,3,5-тризаміщеним глюкопіранозильним фрагментом (таких як ізоактеозид і тубулозид B) зросли, що вказувало на те, що перетворення хімічних складових могло відбутися під час SPW, і реакція гідролізу буде однією з з причин. Пропоновані шляхи трансформації показані на малюнку 6. Збільшення полісахаридів після SPW також повідомлялося в женьшені [24].

Рисунок 6 Пропоновані шляхи трансформації PhG у Cistanche deserticola YC Ma під час SPW.

Cistanche deserticolaБуло задокументовано, що активізує роботу нирок і повертає назад зниження рівня тестостерону, має антиоксидантний ефект і протизапальну дію [25], а PhG і полісахариди були двома основними біологічно активними компонентами Cistanche deserticola. Як PhG, ізоактеозид і османтузид B мали антиоксидантну та протизапальну дію [26, 27]. Отже, порівняння фармакологічних ефектів за рівнем тестостерону та антиоксидантної дії РЦД та ВСЦД(Вино, оброблене парою)було вивчено. У моделі індукованого гідрокортизоном дефіциту нирок-ян ендокринна система була порушена, а рівень статевих гормонів у крові значно знизився. У цьому дослідженні результати аналізу статевих гормонів показали, що обидва РЦД(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD могли істотно підвищити рівень Т і Е2, і як PhG, так і полісахариди показали поліпшення статевих гормонів. WSCD був кращим, ніж RCD(скибочками Cistanche deserticola), особливо в групах екстракту PhG. Результати індексів нутрощів показали, що як PhG, так і полісахариди можуть покращити вагу нутрощів та їх вагові індекси. У групах екстракту PhG, WSCD(Вино, оброблене парою)краще, ніж RCD, у збільшенні ваги та індексів нирки та насіннєвого пухирця. На додачу,Cistanche deserticolaмає значну антиоксидантну дію, особливо групи екстракту полісахаридів з WSCD. Як було сказано вище, обидва УЗО(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD може покращити синдром дефіциту нирок-ян; однак WSCD є кращим, ніж RCD, щодо підвищення рівня T, E2, ваги та індексів придатка яєчка та яєчка. Результати дослідження фармакологічних ефектів показали, що СПВ змінив хімічні компоненти ФГ і збільшив вміст полісахаридів, що в свою чергу підвищило рівень статевих гормонів і посилилоантиоксидантефект.

5. Висновок

Дослідження мало виявити зміну PhG, загальних полісахаридів і фармакологічний ефект при RCD(скибочками Cistanche deserticola)і WSCD на щурах з дефіцитом нирок Ян, особливо на рівень гормонів і антиоксидантну дію. Це дослідження показало, що обробка традиційних китайських трав може змінити їхні хімічні складові та вплинути на їх біоактивність. Також підтверджується те, що в клініці сирі та оброблені продукти призначалися по-різному.

Доступність даних

Дані, використані для підтвердження результатів цього дослідження, доступні у відповідного автора за запитом.

Конфлікт інтересів

Автори заявляють, що не мають конфлікту інтересів.

Внески авторів

Ін Чжан і Сон Ян розробили експерименти. Ін Чжан, Юеу Ван і Юньфен Сяо провели збір і підготовку зразків. Ін Чжан проаналізував дані та склав документ. Xiangri Li і Xiaoqin Wang відповідали за нагляд за дослідженням. Усі автори брали участь у написанні та наданні відгуків на статтю. Усі автори прочитали та схвалили остаточну роботу.

Подяки

Ця робота була підтримана грантами від Processing Procedures for the Prepared Slices of Chinese Crude Drugs (№ YP-PZ-2014). Особлива подяка Wenjia Qu і Tianying Jia за їх велику допомогу в зборіCistanche deserticola.

Список літератури

1. Ю. Цзян і П.-Ф. Tu, "Аналіз хімічних складових у видах Cistanche", Journal of Chromatography A, vol. 1216, вип. 11, стор. 1970–1979, 2009.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

2. В. Чжао, Х. Янь, З.-Й. Лян, Ю.-Ж. Чжан і X.-Q. Цзяо, «Структурний аналіз водорозчинного полісахариду SPA, виділеного зі стеблаCistanche deserticolaМа, "Хімічний журнал китайських університетів, том 26, № 3, стор. 461–463, 2005.

Переглянути на: Google Scholar

3. Дон К., Яо Дж., Дж.-Н. Fang, and K. Ding, "Структурна характеристика та імунологічна активність двох екстрагованих холодною водою полісахаридів зCistanche deserticolaYC Ma, "Дослідження вуглеводів, том 342, № 10, стор. 1343–1349, 2007.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

4. X.-М. Ву та П.-Ф. Ту, «Виділення та характеристика -(1→6)-глюканів зCistanche deserticola"Journal of Asian Natural Products Research, том 7, № 6, стор. 823–828, 2005.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

5. B. Košíková, A. Ebringerová та R. Naran, «Характеристика лігнін-вуглеводних фракцій, виділених з деревного паразитаCistanche deserticolaYC Ma.," Holzforschung, том 53, № 1, стор. 33–38, 1999.

Переглянути на: Google Scholar

6. G. Sheng, X. Pu, L. Lei, P. Tu та C. Li, "Тубулозид B із Cistanche salsa рятує нейрональні клітини PC12 від 1-метил-4-фенілпіридинію, індукованого іоном апоптоз і окислювальний стрес", Planta Medica, том. 68, вип. 11, стор. 966–970, 2002.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

7. М. Денг, Дж.-Й. Чжао, X.-D. Ю, П.-Ф. Ту, Ю. Цзян, З.-Б. Li, "Захисний ефект тубулозиду B на TNF-альфа-індукований апоптоз у нейронних клітинах", Acta Pharmacologica Sinica, том. 25, вип. 10, стор. 1276–1284, 2004.

Переглянути на: Google Scholar

8. X. Geng, L. Song, X. Pu і P. Tu, "Нейрозахисні ефекти фенілетаноїдних глікозидів з Cistanches salsa проти 1-метил-4-феніл-1,2,3 ,6-тетрагідропіридин (MPTP)-індукована дофамінергічна токсичність у мишей C57," Biological & Pharmaceutical Bulletin, vol. 27, вип. 6, стор. 797–801, 2004.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

9. H. Chen, FC Jing, CL Li, PF Tu, QS Zheng і ZH Wang, "Ехінакозид запобігає зниженню позаклітинних рівнів моноамінових нейротрансмітерів у смугастому тілі у щурів із 6-ураженням гідроксидофаміну", Journal of Ethnopharmacology, vol. . 114, вип. 3, стор. 285–289, 2007.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

10 J. Pan, C. Yuan, C. Lin, Z. Jia та R. Zheng, "Фармакологічні дії та механізми природних фенілпропаноїдних глікозидів", Die Pharmazie, vol. 58, вип. 11, стор. 767–775, 2003.

Переглянути на: Google Scholar

11. G. Fu, H. Pang і YH Wong, "Фенілетаноїдні глікозиди, що зустрічаються в природі: потенційні переваги для нових терапевтичних засобів", Current Medicinal Chemistry, vol. 15, немає. 25, стор. 2592–2613, 2008.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

12. X.-W. Ван, X.-F. Ван і Л.-Ю. Ву, «Поліпшення запам'ятовування мишей фенілетаноїдних глікозидівCistanche deserticola," Китайський фармакологічний бюлетень, № 19, стор. 41-42, 2002.

Переглянути на: Google Scholar

13. Ж.-Х. Се та К.-Ф. Ву «Вплив етанолового екстрактуCistanche deserticolaпро вміст моноамінових нейромедіаторів у мозку щурів», «Китайські традиційні та рослинні препарати», № 24, стор. 417–419, 1993.

Переглянути на: Google Scholar

14. Х. Ву та К.-Ж. Ху, дисципліна процесу китайської медицини, Народне медичне видавництво, Пекін, Китай, 2012.

15. ZZ Zhao, ZT Liang, K. Chan та ін., "Унікальна проблема в стандартизації китайської materia medica: обробка", Planta Medica, vol. 76, вип. 17, стор. 1975–1986, 2010.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

16. Китайська фармакопейна комісія, Фармакопея Китайської Народної Республіки 2015 р., том. IV, Фармакопея Китайської Народної Республіки, Пекін, Китай, 2015.

17. Ж.-М. Chen, Enlightening Primer of Materia Medical, Traditional Chinese Medicine Ancient Books Press, Пекін, Китай, 2009.

18. Б.-Р. Лі та Ю.-К. Вона, «Вплив тонізуючих ліків для нирок на вісь гіпоталамус-гіпофіз-гонади (HPG),» Журнал традиційної китайської медицини, №. 7, стор. 63–65, 1984.

Переглянути на: Google Scholar

19. М. Чен, Л. Чжао та В. Цзя, "Метабономічні дослідження біохімічних профілів тваринної моделі, індукованої гідрокортизоном", Journal of Proteome Research, vol. 4, № 6, стор. 2391–2396, 2005.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

20. Q. Chen і N.-Y. Йі, «Тваринні моделі та ліки для дефіциту Інь і Ян», у Експериментальній методології фармакологічних досліджень у традиційній китайській медицині, Видавництво Народного здоров’я, Пекін, Китай, 1993 р.

Переглянути на: Google Scholar

21. З.-Г. Ма, З.-Л. Ян, П. Лі та К.-Х. Li, «Одночасне визначення восьми фенілетаноїдних глікозидів у різних видах роду Cistanche методом високоефективної рідинної хроматографії», Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, vol. 31, вип. 18, стор. 2838–2850, 2008.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

22. Z. Liu, Z. Chao, Y. Liu, Z. Song і A. Lu, "Реакція Майяра, яка бере участь у процесі пропарювання кореня Polygonum multiflorum", Planta Medica, vol. 75, вип. 1, стор. 84–88, 2009.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

23. В.-Т. Chang, YH Choi, R. Van Der Heijden та ін., «Традиційна обробка сильно впливає на склад метаболіту шляхом гідролізу в коренях Rehmannia glutinosa», Chemical & Pharmaceutical Bulletin, том. 59, вип. 5, стор. 546–552, 2011.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

24. Ю. Цзінь, Ю.-Ж. Кім, Дж.-Н. Джеон та ін., «Вплив білого, червоного та чорного женьшеню на фізико-хімічні властивості та гінзенозиди», «Рослинна їжа для харчування людини», том. 70, вип. 2015. – С. 141–145.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

25. Т. Ван, X.-Y. Чжан і В.-Й. Се, "Cistanche deserticolaYC Ma, «Женьшень пустелі»: огляд», «Американський журнал китайської медицини», том 40, № 6, стор. 1123–1141, 2012.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

26. С.-Й. Нам, Х.-Й. Кім, М.-С. Yoou та ін., "Протизапальні ефекти ізоактеозиду з Abeliophyllum distichum", Immunopharmacology and Immunotoxicology, vol. 37, вип. 3, стор. 258–264, 2015.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

27. S. Chae, JS Kim, KA Kang та ін., "Антиоксидантна активність ізоактеозиду з Clerodendron trichotomum", Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. Current Issues, vol. 68, вип. 5, стор. 389–400, 2005.

Переглянути на: Сайт видавця|Google Scholar

З: Доказова комплементарна та альтернативна медицина / 2019 / Стаття

Том 2019 |Ідентифікатор статті 2167947|https://doi.org/10.1155/2019/2167947