Захисний ефект Herba Cistanches на індуковану статинами міотоксичність in vitro
Mar 24, 2022
Контакт: Одрі Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com
Елейн Ват a,b,1, Чун Фай Нг a,b,1, Чі Ман Кун a,b, Ерік Чун Вай Вонг a,b, Браян Томлінсон c, Клара Бік Сан Лау a,b,n
Інститут китайської медицини, Китайський університет Гонконгу, Шатін, Нові території, Гонконг
b Державна ключова лабораторія фітохімії та рослинних ресурсів у Західному Китаї, Китайський університет Гонконгу, Шатін, Нові території, Гонконг
c Відділ клінічної фармакології, Департамент медицини та терапії, Китайський університет Гонконгу, Шатін, Нові території, Гонконг
Анотація:
Етнофармакологічна значимість: HerbaЦистанчі(HC,Цистанхеdeserticola, абоЦистанхеtubulosa) — це китайська трава, яка традиційно використовується для лікування м’язових проблем. Попередні дослідження показали, що екстракт HC може зменшити пошкодження м’язів і покращити накопичення АТФ у щурів після тренування. Однак його вплив на індуковану статинами м’язову токсичність ніколи не досліджувався.
Мета:Мета цього дослідження полягала в тому, щоб визначити, чи може водний екстракт HC (HCE) запобігти токсичності, спричиненій симвастатином, у клітинах скелетних м’язів L6 щурів і чи є вербаскозид основним біологічно активним компонентом, який сприяє ефектам
Матеріали та методи:MTT проводили для визначення впливу HCE ({{0}}–2000 мг/мл) або вербаскозиду (0–160 мМ) на клітини L6, оброблені симвастатином (10 мМ). Аналіз апоптозу Annexin V-FITC/PI та аналіз каспази 3 проводили, щоб визначити захисну роль HCE щодо загибелі клітин, спричиненої симвастатином, і щоб оцінити, чи HCE виявляє свій захисний ефект через каспазний шлях. Виробництво АТФ вимірювали, щоб дослідити, чи може HCE запобігти індукованому симвастатином зниженню виробництва АТФ in vitro.
Результати:Симвастатин значно посилював апоптозну загибель клітин L6. HCE суттєво залежно від дози знижував апоптотичні клітини, індуковані симвастатином, можливо, за допомогою каспазного -3 шляху. Симвастатин знижував продукцію АТФ у клітинах L6, чому залежно від дози запобігав HCE. Була лише тенденція, але незначний вплив (за винятком високих доз) вербаскозиду на захист м’язової токсичності, спричиненої симвастатином.
Висновки:На завершення ми вперше продемонстрували, що HCE може чинити залежний від дози захисний ефект на індуковану симвастатином токсичність in vitro, що малоймовірно через присутність вербаскозиду. Наше дослідження запропонувало потенційне використання ГК у ситуації м’язової токсичності, спричиненої симвастатином.
Ключові слова:HerbaЦистанчі, StatinCholesterol, Hyperlipidemia, Muscle toxicity, Verbascoside, Caspase-3
1. Введення
Інгібітори ГМГ-КоА-редуктази (статини), будучи найбільш продаваним класом рецептурних препаратів у світі в історії, добре задокументовані як корисні для пацієнтів обох статей різного віку з помірним і високим ризиком серцево-судинних захворювань (ССЗ) (Голомб та Еванс, 2008). Потім були розроблені та клінічно схвалені різні статини, включаючи правастатин, аторвастатин, флувастатин, ловастатин, пітавастатин, розувастатин і симвастатин. Загалом усі статини діють шляхом інгібування відновлення ГМГ-КоА до мевалонової кислоти на ранній стадії мевалонатного шляху, щоб зменшити вироблення холестерину (Kromer and Moosmann, 2009; Thompson et al., 2003). Хоча статини зазвичай добре переносяться, одним із найважливіших і добре відомих клінічних побічних ефектів є токсичність скелетних м’язів (рабдоміоліз) (Kobayashi et al., 2008). Аномалії скелетних м’язів можуть варіюватися від доброякісної міалгії до важкої міопатії. У той час як запропоновано безліч механізмів, які можуть відповідати за несприятливий вплив статинів на м’язи, вважають, що мітохондріальні механізми відіграють важливу роль (Golomb and Evans, 2008). Мевалонат є не лише попередником холестерину, але й інших сполук, включаючи селенопротеїни, доліхол та убіхінон (Kaufmann та ін., 2006; Vaklavas та ін., 2009). Здатність статинів пригнічувати мевалонат, таким чином, також пригнічує виробництво селенопротеїнів, таких як глутатіонпероксидаза (GPx), які є важливими ферментами для підтримки механізму антиоксидантного захисту (Kromer and Moosmann, 2009). Статини також можуть призвести до виснаження убіхінону, спричиняючи зниження споживання кисню та синтезу АТФ (Beltowski та ін., 2009). Крім того, збільшення кількості досліджень in vitro та in vivo продемонструвало, що статин також може діяти безпосередньо на мітохондрії тканини, викликаючи Ca2þ-залежний перехід проникності мембрани (MPT) залежно від дози (Beltowski та ін., 2009; Velho та ін., 2006). ). Це також пов’язано зі збільшенням активних форм кисню (АФК) і мітохондріальним окисним стресом, що призводить до загибелі клітин і, отже, сприяє пошкодженню печінки та м’язів (Beltowski та ін., 2009; Велхо та ін., 2006).
HerbaЦистанчі, ціла висушена рослина Cistanche deserticola YC Ma, або Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight (родина Orobanchaceae), є паразитичними рослинами, які переважно ростуть у пустельних районах північного та північного сходу Китаю (Siu and Ko, 2010).HerbaЦистанчіце китайська тонізуюча трава, що підбадьорює Ян, яка в основному використовується для лікування ниркової недостатності з такими симптомами, як імпотенція, безпліддя, передчасна еякуляція. Важкий і липкий характер трави також зволожує кишечник і допомагає полегшити запор. Це також китайська трава, яку традиційно призначають пацієнтам від болю в попереку та колінах, і зазвичай використовується в китайських рецептах для лікування м’язових проблем (Siu and Ko, 2010; Xiong et al., 1998). Цікаво, що це також узгоджується з сучасними науковими дослідженнями, які продемонстрували дію проти втоми багатого полісахаридами та фенілетаноїдами екстрактуHerbaЦистанчіу щурів після фізичних вправ за рахунок зменшення пошкодження м’язів і покращення зберігання АТФ (Cai et al., 2010). Нещодавня робота показала, що метанольний екстракт Herba Cistanches може підвищити генерацію АТФ у мітохондріях (Leung and Ko, 2008). Siu and Ko (2010) продемонстрували цеHerbaЦистанчітакож може підвищити статус мітохондріального глутатіону, опосередковуючи рівні синтезу глутатіону та GPx, таким чином захищаючи тканини від окисного стресу в серцях щурів. Siu and Ko (2010) також показали цеHerbaЦистанчіможе знизити вміст Ca2þ в мітохондріях, тим самим зменшуючи Ca2þ-залежну MPT. Крім того,HerbaЦистанчітакож було доведено, що він є сильним антиоксидантом і поглиначем вільних радикалів у різних органах, зменшуючи окислювальний стрес і активність АФК in vivo (Lu та ін., 1995; Sui та ін., 2011). Що ще цікавіше, у спробі визначити активну фракцію, яка сприяє дії проти втомиHerbaЦистанчібуло виявлено, що вербаскозид був основним компонентом активної фракції (Cai et al., 2010). Було також продемонстровано, що вербаскозид зменшує м’язову втому у жаб, можливо, завдяки його антиоксидантній активності (Liao et al., 1999), що свідчить про те, що вербаскозид може бути біологічно активним компонентом, що сприяє сприятливому впливу Herba Cistanches.
Мета цього дослідження полягала в тому, щоб визначити, чи може використання трав’яного водного екстракту Cistanches (HCE) зменшити м’язову токсичність, спричинену симвастатином in vitro. Було висунуто гіпотезу, що використання ГХЕ може виправити побічні ефекти м’язової токсичності, спричинені симвастатином. Також була зроблена спроба визначити, чи сприятливий впливHerbaЦистанчіпояснюються наявністю вербаскозиду.
2. Матеріали та методи
2.1. Перевірка та приготування рослинних матеріалів
Рослинна сировинаHerbaЦистанчібув придбаний у відомого постачальника в Гуанчжоу, Китай.HerbaЦистанчібуло хімічно підтверджено за допомогою тонкошарової хроматографії (ТШХ) відповідно до Китайської фармакопеї (CP), 2010, з вербаскозидом та ехінакозидом як хімічними маркерами (дані не показані). Після хімічної аутентифікації гербарний зразокHerbaЦистанчібуло передано на зберігання до Музею Інституту китайської медицини Китайського університету Гонконгу (CUHK) із номером зразка ваучера 2014–3434.
Коротко кажучи, 1 кг сирої трави замочували протягом 1 години з наступною екстракцією двічі шляхом нагрівання протягом 1 години зі зворотним холодильником при 100 градусах з використанням 10 дистильованої води для кожної екстракції. Водні екстракти (HCE) об'єднували і фільтрували. Фільтрат концентрували при зниженому тиску при 60 градусах. Концентрований екстракт ліофілізували насухо. Відсоток виходу становив 50,1% мас./мас. Невелику кількість використовували для визначення кількості вербаскозиду та ехінакозиду за допомогою ультраефективної рідинної хроматографії (UPLC). Весь екстрагований порошок був упакований у вакуум і зберігається до використання.
2.2. UPLC аналіз водного екстракту
Аналіз UPLC проводили за допомогою Waters Acquity Ultra Performance LC System (Waters, США). Усі розчинники, необхідні для аналізу UPLC, були придбані на факультеті хімії Китайського університету Гонконгу. Вербаскозид і ехінакозид були придбані в Національному інституті контролю фармацевтичних і біологічних продуктів, Китай. Розчин зразка вводили в колонку Waters Acquity UPLC BEH C18 (10{{20}} 2,1 мм2 id, розмір частинок 1,7 мм) з Waters ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard Pre-Column ( 5-2.1 мм2 внутрішнього діаметра, розмір частинок 1,7 мм). Усі розчинники були попередньо відфільтровані за допомогою 0.45 мм дискового фільтра Millipore (Millipore) і дегазовані. Градієнтне елюювання проводили такими системами розчинників: рухома фаза А – ацетонітрил; рухома фаза B – двічі дистильована вода/мурашина кислота (99,9/ 0.1; об./об.). Елюцію проводили за допомогою градієнтної процедури таким чином: 0–5 хв, 88 відсотків B; 5–10 хв, від 88 відсотків B до 83 відсотків B. Швидкість потоку була 0,4 мл/хв, а виявлення проводилося при 331 нм відповідно до CP (2010). Кожен зразок (5 мкл) вводили в колонку після фільтрації через 0,2 мм фільтрувальний диск. Ідентифікацію хімічних маркерів проводили шляхом порівняння часу утримування та УФ-поглинання невідомих піків із значеннями стандартів. Була побудована калібрувальна крива за серією концентрацій вербаскозиду та ехінакозиду (40, 20, 10, 5, 2,5 та 1,25 мг/мл) для кількісного визначення. Кількісне визначення вербаскозиду та ехінакозиду в рослинному екстракті проводили в трьох примірниках. Система контролювалася за допомогою комп’ютера, оснащеного програмним забезпеченням Waters MassLynx для збору, інтеграції та аналізу даних.
2.3. Культура клітин
Лінію клітин скелетних м’язів щурів L6 було придбано в Американській колекції типових культур (ATCC, Манасса, Вірджинія, США). Клітини підтримували в субконфлюентній щільності в середовищі Ігла, модифікованому Дульбекко (DMEM, ATCC, Манассас, Вірджинія, США), доповненому 10% об./об. фетальної бичачої сироватки (FBS) і 1% пеніцилін-стрептоміцину (P/S), і інкубували при 37 градусах у зволоженій атмосфері, що містить 5 відсотків CO2 і 95 відсотків повітря.
Щоб визначити вплив ГХЕ на токсичність м’язів, спричинену статинами, клітини L6 обробляли симвастатином у дозі 1 0 мкМ протягом 48 годин, щоб викликати токсичність. HCE (у концентраціях 0, 250, 500, 1000 і 2000 мкг/мл) або вербаскозид (у концентраціях 0, 20, 40, 80 і 160 мкМ) додавали як супутнє лікування зі статином, щоб визначити, чи трав'яний екстракт міг би запобігти токсичності, спричиненій статинами, на клітини скелетних м'язів, і якщо вербаскозид міг би надавати подібні захисні ефекти, як рослинний водний екстракт.
Захисний ефект екстракту Herba Cistanche щодо токсичності, спричиненої симвастатином in vitro
2.4. Цитотоксичність in vitro
Клітини L6 (1x105/лунку) висівали в {{0}}лункові культуральні планшети з плоским дном (Iwaki, Японія) протягом ночі з подальшою обробкою 10 мкМ симвастатину разом з різними дозами HCE або без них ( 0–2000 мкг/мл) або вербаскозид (0–160 мкМ) протягом 48 год. Звичайне середовище (DMEM) додавали до контрольних лунок. Трав'яний екстракт і з'єднання розчиняли в DMEM.
Після 48-годинної обробки середовище з усіх клітин було видалено та додано 30 мкл 5 мг/мл 3-(4,5-диметилтіазол-2-іл)-2,{{ 8}}дифенілтетразолію бромід (MTT; Sigma, США) у фосфатно-сольовому буфері (PBS) додавали до кожної лунки та планшети додатково інкубували протягом 3 годин при 37°. Потім видаляли супернатант і в кожну лунку додавали 100 мкл ДМСО для розчинення фіолетових кристалів формазану (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. USA). Оптичну густину кожного зразка зчитували при 540 нм за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів (Biotek μ-Quant, США). Результати виражали як відсоток поглинання МТТ відносно контрольних клітин.
2.5. Аналіз фарбування Annexin-V FITC/PI
Клітини L6 (3х105/лунку) отримували лікування симвастатином разом із різними дозами HCE або вербаскозиду або без них. Потім клітини збирали, промивали та фарбували набором аннексин-V FITC згідно з протоколом виробника (Тревіген, штат Меріленд, США). Коротко, клітини двічі промивали 1 х буфером для зв’язування та кубували в 100 мкл розчину для мічення, що містив 1 мкл кон’югату аннексин-V FITC і 10 мкл PI, у темряві протягом 15 хвилин при кімнатній температурі. Флуоресценцію зразків виявляли за допомогою проточної цитометрії (Becton Dickinson FACSCanto II, США).
2.6. Аналіз активності каспази 3
Активність каспази 3 визначали за допомогою флуорометричного імуноферментного аналізу (Sigma) згідно з інструкцією виробника. Коротко, клітини L6 (3 105/лунку), оброблені симвастатином разом з різними дозами HCE вербаскозиду або без них, були лізовані за допомогою буфера для лізису. Вільний 7-аміно-4-метилкумарин (AMC), що утворюється в результаті протеолітичного розщеплення субстрату каспазою 3, вимірювали та кількісно визначали флуорометрично з довжиною хвилі збудження при 360 нм і довжиною хвилі випромінювання при 460 нм за допомогою мікропланшета BMG FLUOstarOptimamicroplate. зчитувач (BMG LABTECH GmbH, Німеччина).
2.7. Аналіз клітинного АТФ
Клітини L6 (3x105/лунку) отримували лікування симвастатином разом із різними дозами HCE або вербаскозиду або без них. Після обробки збирали клітини та вимірювали вміст АТФ за допомогою комерційно доступного колориметричного набору (Abcam, Великобританія) шляхом вимірювання вмісту гліцеринфосфату в лізованих клітинах і зчитування при 570 нм за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів (Biotek μ-Quant, США). ). Вимірювання виробництва АТФ виражали у відсотках відносно контрольної групи.
2.8. Статистичний аналіз
Дані були представлені як засоби 7SD, Prism 5 для Window (версія 5.0c, GraphPad Software, Inc., США) використовувався для статистичного аналізу. Значні відмінності між усіма групами оцінювали за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу, а потім тесту множинного порівняння Бонферроні. Імовірність po0.05 вважалася статистично значущою.
3. Результати
3.1. UPLC аналіз водного екстракту Herba Cistanches
На рис. S1A показано профіль UPLC стандартної суміші, що містить ехінакозид і вербаскозид. Точки часу утримання кожного з цих маркерів порівнювали з профілем UPLCHerbaЦистанчіводний екстракт (рис. S1B). Кількість ехінакозиду та вербаскозиду всерединіHerbaЦистанчіБуло виявлено, що водний екстракт становить {{0}}.45 мас.% і 0,085 мас.% відповідно.
3.2. Вплив HCE та вербаскозиду на цитотоксичність симвастатину in vitro в клітинах скелетних м’язів L6
Як показано на рис. 1A, симвастатин викликав значну цитотоксичність для клітин L6, що відображено значним зниженням життєздатності клітин L6 при 10 мМ симвастатину. Лікування HCE залежно від дози та значно запобігало цитотоксичності, спричиненій симвастатином, при дозах 500, 1000 та 2000 мг/мл. Вербаскозид продемонстрував тенденцію до покращення життєздатності клітин L6, оброблених разом із симвастатином. Однак жодна з концентрацій не досягла статистичної значущості (рис. 1B).
Рис. 1. Захисний ефект (а) HCE; і (b) вербаскозид на індуковану симвастатином цитотоксичність у клітинах L6. Значення представляють середнє значення 7SD (n=3). Значна різниця між лікуванням лише симвастатином і контрольною групою з використанням t-критерію Стьюдента: ### po0.{{10}}01. Значна різниця між усіма групами, які отримували симвастатин, з або без спільного лікування вербаскозидом HCE з використанням одностороннього дисперсійного аналізу: ** p0,01,*** p0,001.
3.3. Вплив HCE та вербаскозиду на спричинену симвастатином загибель клітин у клітинах скелетних м’язів L6
Щоб дослідити спосіб загибелі клітин, спричинений симвастатином, і визначити захисну роль HCE або вербаскозиду щодо загибелі клітин, спричиненої симвастатином, частку апоптичних клітин виявляли за допомогою фарбування пропідію йодидом (PI). Результати показали, що симвастатин індукував значне збільшення частки ранніх апоптотичних клітин (Annexin V-FITC позитивних і PI негативних, Q4–2) і пізніх апоптотичних/мертвих клітин (Annexin V-FITC позитивних і PI-позитивних, Q2– 2) порівняно з контрольною групою. Сумісне лікування з HCE зменшувало частку раннього апоптозу та пізніх апоптозу/мертвих клітин дозозалежним чином до 1000 мг/мл (рис. 2A). Цей захисний ефект також спостерігався в групах спільного лікування вербаскозидом. Однак жодна з перевірених концентрацій не досягла статистичної значущості (рис. 2B).
Рис. 2. Вплив симвастатину з або без супутнього лікування HCE або вербаскозидом на екстерналізацію фосфатидилсерину в клітинах L6. Клітини фарбували Annexin-V FITC і I і виявляли проточною цитометрією
3.4. Вплив HCE та вербаскозиду на активність каспази 3 у клітинах скелетних м’язів L6, оброблених симвастатином
Як показано на рис. 3A, 10 мМ симвастатину значно індукував активність каспази 3 у клітинах L6, що свідчить про те, що симвастатин індукував апоптоз клітин L6 через каскадний каскад. Однак у клітинах L6, які одночасно отримували симвастатин і HCE, HCE залежно від дози та значно знижував активність каспази 3, що свідчить про здатність HCE запобігати індукованому симвастатином апоптозу через каспазний каскад. З іншого боку, хоча вербаскозид також продемонстрував тенденцію до зменшення спричиненого симвастатином підвищення активності ферменту каспази 3, лише концентрація при 160 мМ досягла статистичної значущості (рис. 3B).
Рис. 3. Захисний ефект (а) HCE; і (b) вербаскозид на індуковану симвастатином ферментативну активність каспази 3 у клітинах L6. Значення представляють середнє значення 7SD (n=3–5). Значна різниця між лікуванням лише симвастатином і контрольними групами з використанням t-критерію Стьюдента: ###po0.001. Значна різниця між усіма групами, які отримували симвастатин з або без одночасного лікування ГХЕ або вербаскозидом, з використанням одностороннього дисперсійного аналізу: *po0.05, **p o0,01, ***po0,001.
3.5. Вплив HCE на індуковане симвастатином зниження виробництва АТФ у клітинах скелетних м’язів L6
Симвастатин (10 мМ) значно знизив виробництво АТФ у клітинах L6 приблизно на 60 відсотків порівняно з контрольною групою (рис. 4A). Сумісне лікування HCE залежно від дози послаблювало зниження виробництва АТФ у клітинах, оброблених симвастатином, з яких лише концентрації 500, 1000 та 2000 мг/мл досягали статистичної значущості. З іншого боку, хоча вербаскозид мав тенденцію до відновлення виробництва АТФ при 50 мг/мл, він не досяг статистичної значущості (рис. 4B).
Рис. 4. Захисний ефект (а) HCE та (b) вербаскозиду на індуковане симвастатином зниження виробництва АТФ у клітинах L6. Значення представляють середнє значення 7SD (n=3–5). Значна різниця між лікуванням лише симвастатином і контрольними групами з використанням t-критерію Стьюдента: ###po0.001. Значна різниця між усіма групами, які отримували симвастатин з або без ГХЕ або сумісного лікування вербаскозидом з використанням однофакторного дисперсійного аналізу: *ро0,05, **ро0,01.
4. Обговорення
Зі збільшенням поширеності серцево-судинних захворювань (ССЗ) і пацієнтів з діагнозом гіперхолестеринемія в усьому світі використання статинів стало більш поширеним. Хоча статини загалом дуже добре переносяться, ушкодження м’язів є частим побічним ефектом, пов’язаним із застосуванням статинів, який може виникнути гостро через тижні або місяці після початку прийому препарату (Fine, 2003). М’язові симптоми можуть варіюватися від легких проблем, наприклад, біль, чутливість або слабкість з або без підвищення рівня креатинкінази (КК) до найважчого стану рабдоміолізу (Armitage, 2007; Hu et al., 2012). Через появу цих побічних ефектів і відсутність ефективного лікування м’язової токсичності, спричиненої статинами, статини залишаються недостатньо використаними. У широкому опитуванні 10 409 французів, проведеному шляхом телефонного інтерв’ю, 10 відсотків пацієнтів, які отримували лікування статинами, повідомили про м’язові симптоми, з яких 30 відсотків цих пацієнтів із симптомами призвели до припинення лікування (Rosenbaum et al., 2013).
Ми вперше продемонстрували, що водний екстракт зHerbaЦистанчі, широко використовувана традиційна китайська трава, може проявляти захисну дію проти індукованої симвастатином токсичності in vitro в клітинах скелетних м’язів L6, що свідчить про потенціалHerbaЦистанчіводний екстракт (HCE) за його захисну роль, індуковану статинами м’язову токсичність, яка є визнаним поширеним побічним ефектом у пацієнтів, які приймають статини. Таким чином, потужна здатність HCE захищати від токсичності м’язів, спричиненої статинами, мала б великий потенціал.
Відповідно до традиційної теорії традиційної китайської медицини, Ян пов’язаний з мітохондріальним енергетичним обміном в організмі, і було встановлено, що рецепт трав, що підбадьорюють Ян, посилює вироблення АТФ у мітохондріях (Ko and Leung, 2007). Цікаво, що ми спостерігали зниження виробництва АТФ у клітинах скелетних м’язів L6, які отримували лікування симвастатином, і це зниження виробництва АТФ було значно покращено при спільному лікуванні HCE. У нашому дослідженні з використанням клітин скелетних м’язів щурів L6 ми продемонстрували зниження життєздатності клітин, викликане симвастатином. Це зниження життєздатності клітин було значно покращено при спільному лікуванніHerbaЦистанчізалежно від дози. Хоча точний механізм індукованої статинами м’язової токсичності не був повністю з’ясований, було припущено, що індукований статинами апоптоз здорових міоцитів скелета є фактором, що викликає міопатію, найпоширеніший побічний ефект, який відчувають користувачі статинів (Dirks and Jones, 2006). . У нашому дослідженні ми спостерігали значне збільшення апоптичних клітин, індукованих симвастатином, що було пов’язано зі значно підвищеною активністю каспази 3. Ці дані також узгоджуються з попередніми дослідженнями, які продемонстрували, що різні статини можуть індукувати апоптоз у скелетних міобластах, міотубах і в диференційованих первинних клітинах скелетних м’язів людини шляхом активації активності каспаз-9 і каспаз-3 (Діркс і Джонс, 2006). Наш HCE зміг запобігти спричиненому симвастатином посиленню апоптозу, активованого каспазою-3, залежно від дози.
HerbaЦистанчі
Крім того, попередні літературні джерела припускали, що вербаскозид є одним із основних активних компонентів у складіHerbaЦистанчі. Вербаскозид, також відомий як актеозид, належить до групи фенілетаноїдних глікозидів, природної групи поліфенольних сполук, розчинних у воді (Liao et al., 1999). Раніше було показано, що вербаскозид є потужним антиоксидантом, який може виявляти сильну активність поглинання АФК та антиоксидантну дію (Liao et al., 1999). У нашому дослідженні, щоб визначити, чи є вербаскозид основним компонентом у нашому HCE, який сприяє спостережуваним корисним ефектам, ми протестували дію вербаскозиду в концентраціях 0–160 мМ. Оскільки ми продемонстрували, що наш HCE активний у діапазоні концентрацій 250–2000 мг/мл, на основі наших результатів ВЕРХ, які припустили, що наш HCE містив вербаскозид у концентрації 0,085 відсотка маси /маса, активна концентрація вербаскозиду повинна коливатися в межах 0,2125–1,7 мг/мл (тобто 0,34–2,72 мМ), чи має вербаскозид бути активним компонентом? Тим не менш, нам не вдалося спостерігати значного сприятливого ефекту вербаскозиду в досліджуваному діапазоні концентрацій, хоча ми спостерігали залежну від дози тенденцію щодо сприятливого впливу вербаскозиду на клітини скелетних м’язів L6. Ці дані свідчать про те, що сприятливий ефект нашого HCE, який спостерігається в клітинах скелета L6, навряд чи можна віднести до ефекту лише вербаскозиду, припускаючи, що компоненти, крім вербаскозиду, можуть бути відповідальними за спостережувані корисні ефекти. Також можливо, що вербаскозид може взаємодіяти з іншими біологічно активними сполуками в екстракті, сприяючи сприятливому впливу. Додаткові експерименти з використанням фракціонування під контролем біологічного аналізу будуть корисними для забезпечення подальшого розуміння виявлення біологічно активних компонентів, відповідальних за сприяння спостережуваним захисним ефектам HCE на токсичність м’язів, спричинену симвастатином.
На завершення, дане дослідження вказує на те, що HCE може проявляти потужний захисний вплив на індуковане симвастатином зниження життєздатності м’язових клітин in vitro. Ці результати надають попередні докази, які свідчать про те, що наш водний екстракт HC може мати терапевтичну цінність як функціональна їжа або нутрицевтик для пацієнтів з гіперліпідемією, яким необхідно припинити лікування статинами через міотоксичність, спричинену статинами.
Подяка. Це дослідження фінансово підтримали Бюро харчових продуктів і охорони здоров’я HKSAR, Фонд охорони здоров’я та медичних досліджень №. 11120831.
Список літератури
Армітаж, Дж., 2007. Безпека статинів у клінічній практиці. Lancet 370, 1781–1790.
Beltowski, J., Wojcicka, G., Jamroz-Wisniewska, A., 2009. Побічні ефекти статинів – механізми та наслідки. Curr. Препарат Саф. 4, 209–228.
Cai, RL, Yang, MH, Shi, Y., Chen, J., Li, YC, Qi, Y., 2010. Антивтомна активність багатого на фенілетаноїди екстракту з Cistanche deserticola. Фітотер. рез. 24, 313–315.
Dirks, AJ, Jones, KM, 2006. Статини-індукований апоптоз і скелетна міопатія. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 291, C1208–C1212.
Файн, Д. М., 2003. М’язова токсичність, пов’язана зі статинами. Clin. Pharmacol. 3, 554.
Golomb, BA, Evans, MA, 2008. Побічні ефекти статинів: огляд літератури та доказів мітохондріального механізму. Am. J. Cardiovasc. Наркотики 8, 373–418.
Hu, M., Cheung, BM, Tomlinson, B., 2012. Безпека статинів: оновлення. Тер. Adv. Препарат Саф. 3, 133–144.
Кауфман, П., Торок, М., Захно, А., Вальдхаузер, К. М., Брехт, К., Крахенбюль, С., 2006. Токсичність статинів на мітохондрії скелетних м’язів щурів. Стільниковий. мол. Life Sci. 63, 2415–2425.
Ko, KM, Leung, HY, 2007. Підвищення потужності генерації АТФ, антиоксидантної активності та імуномодулюючої активності китайськими травами, що тонізують Ян та Інь. Підборіддя. Мед. 2, 3.
Кобаяші, М., Кагава, Т., Нарумі, К., Ітагакі, С., Хірано, Т., Ісекі, К., 2008. Добавки бікарбонату як профілактичний спосіб при пошкодженні м’язів, викликаному статинами. J. Pharm. фарм. наук. 11, -8.
Кромер, А., Мусманн, Б., 2009. Індуковане статинами ураження печінки включає перехресні зв’язки між шляхами біосинтезу холестерину та селенопротеїну. мол. фарм. 75, 1421–1429.
Leung, HY, Ko, KM, 2008. Екстракт Herba Cistanche посилює генерацію мітохондріального АТФ у серцях щурів і клітинах H9C2. фарм. Biol. 46, 418.
Liao, F., Zheng, RL, Gao, JJ, Jia, ZJ, 1999. Уповільнення втоми скелетних м’язів двома фенілпропаноїдними глікозидами: вербаскозидом і мартенситом з Pedicularis plicata Maxim. Фітотер. рез. 13, 621–623.
Lu, KG, Liu, HB, Gu, QQ, 1995. Дослідження хімічних складових Cistanche deserticola Ma. і Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Підборіддя. Традиція. трава Наркотики 26, 143.
Фармакопейна комісія, 2010. Фармакопея Китайської Народної Республіки. Chemical Industry Press, Пекін.
Rosenbaum, D., Dallongeville, J., Sabouret, P., Bruckert, E., 2013. Припинення терапії статинами через м’язові побічні ефекти: опитування в реальному житті. Nutr. Метаб. Кардіоваск. дис. 23, 871-875.
Siu, AH, Ko, KM, 2010. Екстракт Herba Cistanche покращує стан мітохондріального глутатіону та дихання в серцях щурів, з можливою індукцією роз'єднувальних білків. фарм. Biol. 48, 512–517.
Sui, ZF, Gua, TM, Liu, B., Peng, SW, Zhao, ZL, Li, L., Shi, DF, Yang, RY, 2011. Водорозчинна вуглеводна сполука з тілHerbaЦистанчі: ізоляція та його ефект поглинання вільних радикалів у шкірі. вуглеводний. полім. 85, 75.
Томпсон, П.Д., Кларксон, П., Карас, Р.Х., 2003. Статин-асоційована міопатія. JAMA 289, 1681–1690.
Vaklavas, C., Chatzizisis, YS, Ziakas, A., Zamboulis, C., Giannoglou, GD, 2009. Молекулярні основи статин-асоційованої міопатії. Атеросклероз 202, 18–28.
Velho, JA, Okanobo, H., Degasperi, GR, Matsumoto, MY, Alberici, LC, Cosso, RG, Oliveira, HC, Vercesi, AE, 2006. Статини індукують кальцій-залежну мітохондріальну проникність. Токсикологія 219, 124–132.
Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T., Kadota, S., 1998. Гепатопротекторна активність фенілетаноїдів з Cistanche deserticola. Планта Мед. 64, 120–125.
