Вплив Cistanche Shenqiwan на пошкодження нирок, GRP78 і фактори, пов’язані з аутофагією, у щурів із цукровим діабетом Zucker і цукровим діабетом 2 типу.

кількість звичайного фізіологічного розчину. Щурам безперервно вводили протягом 4 тижнів. Регулярно спостерігали за загальним станом щурів. Вимірювали рівень глюкози в крові натщесерце (FBG) і 24-годинний рівень мікроальбуміну в сечі (24-годинний U-mAlb). Ниркову тканину фарбували та спостерігали за морфологією. Ультрамікроструктуру спостерігали за допомогою трансмісійної електронної мікроскопії. Рівні мРНК GRP78, Beclin-1 і LC3 у нирковій тканині щурів досліджували за допомогою ПЛР у реальному часі, а рівні білка досліджували за допомогою вестерн-блоттингу. Результати Порівняно з модельною групою щури в групі Shenqiwan показали

покращений блиск хутра, більше збільшення ваги та більше активності; як FBG, так і 24-годинний рівень U-mAlb були знижені (P < 0.05). Theниркищурів у модельній групі показалирозширені клубочкові капіляри, нерівномірно потовщені базальні мембрани, розширені мезангіальні ділянки та сегментарний склероз; у цих нирках також спостерігалася атрофія ниркових канальців і ниркова інтерстиціальна фіброзна тканина. Ці патологічні зміни були полегшені в групі Shenqiwan. Порівняно з модельною групою, рівні як гена, так і білка GRP78 були знижені (P < 0.05) у групі Shenqiwan; рівень білка Beclin-1

було зменшено (P < {{0}}.05); і рівень білка LC3 був підвищений (P <0,05). Висновок Shenqiwan може полегшити пошкодження нирок у щурів ZDF і затримати прогресування діабетичної хвороби нирок шляхом зменшення стресу ендоплазматичного ретикулуму та посилення аутофагії.

 

Ключове слово: Shenqiwan;цукровий діабет 2 типу; діабетична хвороба нирок; стрес ендоплазматичного ретикулуму;аутофагія; GRP78; Zucker діабетичні жирні щури

Натисніть тут, щоб дізнатися більше про продукти Cistanche для лікування діабетичного захворювання нирок

ЗАПИТАЙТЕ БІЛЬШЕ ДЕТАЛІВ:

wallence.suen@wecistanche.com 0015292862950

 

 

Діабетична хвороба нирок(DKD) є важливим мікросудинним ускладненнямцукровий діабеті головна причинатермінальна стадія ниркової недостатності[1]. DKD є важливиммікросудинні ускладнення діабетуіосновною причиною термінальної ниркової недостатності[1]. Пацієнти з DKD можуть мати постійну протеїнурію та постійне зниженняшвидкість клубочкової фільтрації[2]. Theпатогенез DKDє складним, і нещодавні дослідження показали, що стрес ендоплазматичного ретикулуму (ERS) у нирках є найпоширенішою причиною кінцевої стадії ниркової недостатності. （Стрес ендоплазматичного ретикулуму (ERS) і аутофагія також тісно пов’язані з DKD, і вивчення їх патогенезу може бути важливим для лікування DKD. DKD більше схожий на «нижче згасання» в категорії розладів спраги в китайській медицині.
Типові симптоми спраги, надмірного пиття та сечовипускання описані в Jin Kui Yao (Основи Золотого гороскопу), а такожТаблетка Qi для нирокпропонується як основна терапевтична формула. Цзінь Куй Яо (金匮要略) записав типові симптоми спраги та надмірного сечовипускання та запропонувавТаблетка Qi для нирокяк основна формула лікування. Лікування DKD TCM справді може ефективно захистити функцію нирок і має безпечні та надійні характеристики [5-6]. Лікування DKD китайською медициною може ефективно захистити функцію нирок і має безпечні та надійні характеристики [5-6]. Ефективність Kidney Qi Pill у тонізуванні нирок і допомозі Ян була підтверджена у відповідних дослідженнях [7]. Наше попереднє дослідження також показало, що ниркові таблетки Ци мають хороший захисний вплив на структуру та функцію тканин нирок у мишей з діабетом [8]. У цьому дослідженні ми спостерігали вплив ниркових таблеток Ци на пошкодження ниркової тканини, ERS та фактори, пов’язані з аутофагією, у жирних щурів Цукера з цукровим діабетом (ZDF). У цьому дослідженні ми досліджували можливі механізми пошкодження нирок у щурів ZDF, спостерігаючи вплив таблеток для ниркової ци наураження ниркової тканини, ERS і фактори, пов’язані з аутофагією, опосередковані таблетками ци нирок.

1 Матеріали
1.1 Піддослідні тварини
Двадцять 12-тижневих SPF самців щурів ZDF (маса тіла 390-410 г, яких годували високоякісним кормом для гризунів 5C08 протягом 4 тижнів для повної індукції діабету 2 типу) і сім 12-тижневих старі SPF самці щурів Zucker Lean (ZL) (маса тіла 350-380 г) були придбані у Beijing Viton Lehua Laboratory Animal Technology Co. Усіх щурів містили в бар’єрному середовищі Інституту клінічної медицини Китайсько-японської лікарні дружби , номер ліцензії: SYXK (Пекін) 2016-0043, а платформа забезпечувала незалежну систему вентиляції всередині бар’єру, підтримуючи 12-годинне чергування світла й темряви, кімнатну температуру 23-25 градусів і відносна вологість у приміщенні 50 відсотків -60 відсотків . Усім щурам дозволяли вільно пити та годуватися протягом періоду годування.

1.2 Етичний огляд
Експерименти на тваринах були схвалені підкомітетом з етики експериментальних тварин Академічного комітету Пекінського університету традиційної китайської медицини (BUCM) із номером схвалення BUCM-4-2021102801-4034.
1.3 Основні препарати та реактиви
Таблички (Shu Di Huang, Shan Yu Fei, Shan Yao, Mudan Pi, Fu Ling,Цистанхе, Ze Xie, Gunner's Fructus, Gui Zhi) для відвару зЦи нирокТаблетки були придбані у Beijing Tong Ren Tang Co. Фізіологічний розчин, специфікація: 500 мл, наданий Shandong Hualu Pharmaceutical Co. Silver Staining Solution (Beijing Regen Biotechnology Co., Ltd., лот № DG0090), Magic SYBR Mixture (Jiangsu Kangwei). Century Biotechnology Co., Ltd.), набір для зворотної транскрипції мРНК (Thermo Fisher Scientific, Inc.), реагент RNA TRIzol (реагент RNA TRIzol), реагент RNA TRIzol (реагент RNA TRIzol). Реагент RNA TRIzol (Beijing Solabao Technology Co., Ltd.), набір для мікроальбуміну сечі щурів ELISA (Jiangsu Kote Biotechnology Co., Ltd., партія № KT8560-A), антитіло GRP78 BiP, антитіло LC3B і Beclin{ {5}} Антитіло (Abcam, Великобританія) (номер партії: ab108613, ab192890, ab207612), кроляче анти-GAPDH поліклональне антитіло (Proteintech, США), козячий анти-кролячий IgG(H&L)-HRP (Beijing Baiao Yijie Technology Co. Ltd.).

 

Глюкометр, тест-смужки для визначення рівня глюкози в крові (Shanghai Roche Diagnostic Products Co. Ltd.), низькотемпературна високошвидкісна центрифуга (Eppendorf, Німеччина), прилад для кількісної ПЛР флуоресценції, прилад для подвійного вертикального електрофорезу та прилад для електрофорезу з переносом (Burroughs Life Medical Products). Co. Ltd.), гелевий візерунок (Protein Simple, США), світловий мікроскоп (Leica, Німеччина), трансмісійний електронний мікроскоп (Leica, Німеччина) та гелевий візерунок. (Leica, Німеччина), просвічуючий електронний мікроскоп (Hitachi, Японія).

2 Методи
2.1 Приготування експериментальних препаратів
Відвар зТаблетки для нирок Цибув отриманий шляхом перетворення дози Kidney-Qi Pill у Jin Kui Yao [9] відповідно до давніх і сучасних співвідношень системи метрології Хань у першому виданні «Дослідження про дозу та пропорцію рецептів проти тифу» [2015 р. ], а необхідна для експерименту доза відвару була наступною: Shu Di Huang 24 г, Shan Yu Fei 12 г,Цистанхе10 г, Шан Яо 12 г, Мудан Пі 9 г, Фу Лін 9 г, Зе Се 9 г, Гуннера 3 г і Гуй Чжи 3 г. Препарати замочували в дистильованій воді протягом 2 год. Потім відвар згущують протягом 30 хв і фільтрують через стерильну марлю. Відварити трави 30 хв, потім додати решту препаратів і настояти 1 год. Після зниження температури розчину до кімнатної температури розчин концентрують і фільтрують через стерильну марлю, а фільтрат упаковують і зберігають при -20 градусах. Препарат слід зберігати не більше 1 тижня, перед введенням розчин необхідно довести до кімнатної температури.

2.2 Створення та групування моделей тварин
Щурів ZDF індукували дієтою з високим вмістом жиру 5C08 протягом 4 тижнів, і рівень глюкози в крові вимірювали шляхом збору крові з кінчика хвоста у віці 12 тижнів. Щурам у групі прийому таблеток ци нирок давали водний відвар таблетки ци нирок, і добову дозу 8,12 г/кг на щура розраховували згідно з формулою в «Моделях захворювань у експериментальних тварин» [10], а концентрація дозування становив 0,812 г/мл, і щурам модельної та контрольної груп протягом 4 тижнів давали фізіологічний розчин у відповідному об’ємі.

2.3 Загальний стан і визначення рівня глюкози в крові натщесерце (FBG) щурів
Загальний стан щурів спостерігали та записували щодня, а масу тіла регулярно зважували. Наприкінці 12-тижневого та 16-тижневого віку кров збирали з кінчика хвоста щурів після 8 годин голодування, і FBG вимірювали глюкометром Roche і тест-смужками. 2.4 24-h мікроальбуміну в сечі (24-h U-mAlb) вимірювали наприкінці 16-тижневого віку, а 24-h концентрацію U-mAlb вимірювали відповідно до інструкцій комплекту LISA.

2.5 Збір зразків ниркової тканини
Наприкінці 16-тижневого віку всі щури голодували протягом 8 годин. Після анестезії розкрили черевну порожнину і оголили двосторонні нирки, а очеревину видалили і відшарували. Кору нирки відокремлювали і частково фіксували в 4% параформальдегіді для приготування парафінових зрізів розміром 3 мкм; частково розрізали на блоки тканини 1 мм3 і фіксували в 2,5 відсотковому глутаровому альдегіді для приготування ультратонких зрізів. Решту ниркових тканин зберігали при -80° для ПЛР у реальному часі та Вестерн-блот-аналізів.

 

2.6 Застосування морфологічного спостереження тканин нирок
Для спостереження заниркові гістопатологічні змінипід світловим мікроскопом і для отримання зображень. Просвічуючу електронну мікроскопію використовували для спостереження за ультраструктурними змінами тканини нирок і збирали зображення.

 

2.7 ПЛР-тест у реальному часі
Замороженітканини нирокподрібнювали на льоду та додавали реагент TRIzol для екстракції загальної РНК і центрифугували при 4 градусах з радіусом 9,5 см. Супернатант екстрагували центрифугуванням при 12 000 об/хв протягом 10 хв, а потім центрифугували протягом 15 хв з хлороформом. Супернатант знову центрифугували протягом 15 хвилин при кімнатній температурі протягом 10 хвилин, і супернатант промивали 75% етанолом. експресія на рівні мРНК. Праймери були розроблені з використанням програмного забезпечення Primer Premier 5.0 і синтезовані Shanghai Bioengineering Co. Ltd. Послідовності праймерів такі.