Націлювання на катепсин B циклоастрагенолом посилює протипухлинний імунітет CD8 T-клітин через інгібування деградації MHC-I Частина 2

CAG інгібує CTSB-опосередковану лізосомну деградацію MHC-I

Глікозид цистанхи може також підвищувати активність СОД у тканинах серця та печінки та значно знижувати вміст ліпофусцину та МДА в кожній тканині, ефективно поглинаючи різні реактивні кисневі радикали (OH-, H₂O₂ тощо) та захищаючи від пошкодження ДНК, спричиненого ОН-радикалами. Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche мають сильну здатність поглинати вільні радикали, вищу відновну здатність, ніж вітамін С, покращують активність СОД у суспензії сперми, знижують вміст МДА та мають певний захисний ефект на функцію мембрани сперми. Полісахариди цистанхе можуть підвищувати активність SOD і GSH-Px в еритроцитах і легеневих тканинах експериментально старіючих мишей, викликаних D-галактозою, а також знижувати вміст MDA і колагену в легенях і плазмі і підвищувати вміст еластину, мають хороша очищувальна дія на DPPH, подовжує час гіпоксії у старіючих мишей, покращує активність СОД у сироватці та затримує фізіологічну дегенерацію легенів у експериментально старіючих мишей. Експерименти показали, що цистанша має хорошу антиоксидантну здатність до клітинної морфологічної дегенерації. і має потенціал бути лікарським засобом для запобігання та лікування хвороб старіння шкіри. У той же час ехінакозид у Cistanche має значну здатність поглинати вільні радикали DPPH і має здатність поглинати активні форми кисню та запобігати індукованій вільними радикалами деградації колагену, а також має хороший ефект відновлення при пошкодженні аніонів вільних радикалів тиміну.

Натисніть на морський коник maca ginseng cistanche

【Додаткова інформація:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Попередні дослідження показали, що MHC-I в основному розкладається в лізосомах під час прогресування пухлини, що призводить до імунної виходу пухлини.12 13 Ми припускаємо, чи може CAG також регулювати експресію MHC-I на клітинній мембрані через його цільовий білок CTSB. . Спочатку ми використали РНК-інтерференцію, щоб придушити експресію CTSB у клітинній лінії MC38, і результати показали, що рівні експресії гена та білка H2-k1 підвищилися після придушення CTSB (рис. 5A, B). Подібним чином, після нокдауну та надмірної експресії CTSB у клітинній лінії HCT-116 людини рівень експресії мРНК або білка HLA-A збільшився (малюнок 5C, D) і знизився (малюнок 5E, F), відповідно. У той же час ми виявили, що пухлинні клітини з високою експресією CTSB експресують нижчі рівні HLA-A, тоді як клітини після нокдауну CTSB підвищують експресію HLA-A (рис. 5G). Ці результати вказують на те, що CTSB здійснює негативний регуляторний вплив на експресію MHC-I. Потім ми обробили лінію клітин MC38 CAG і виявили, що CAG сприяє експресії MHC-I і не впливає на CTSB (рис. 5H, I), що узгоджується з попередніми результатами досліджень пухлинних тканин. Крім того, ми виявили, що після обробки CAG H2-Kd збирається з клітини на її мембрану (рисунок 5J), що додатково підтверджує нашу гіпотезу про те, що CAG може інгібувати деградацію молекули MHC-I і змушувати її збиратися на клітинна мембрана, яка легше захоплюється імунними клітинами. Для подальшої перевірки нашої гіпотези ми використали експеримент Co-IP, щоб дослідити, чи зв’язується CTSB з MHC-I і призводить до його деградації. Ми виявили, що CAG може інгібувати зв'язування CTSB і MHC у мишачих клітинах MC38 (малюнок 5K), і експресія MHC-I також значно збільшується. Ми також спостерігали те саме явище в клітинах HCT116 людини (малюнок 5L). Далі, щоб додатково підтвердити, чи CAG сприяє експресії MHC-I та агрегації клітинної мембрани через CTSB, ми трансфікували мутантну плазміду CTSB у клітини HCT-116 людини. Результати показали, що після трансфекції мутантних плазмід Y75A, A77V і G198V функція CAG посилення експресії генів CD74 і HLA-A була зруйнована (малюнок 5M), і молекули MHC-I агрегували з клітинної мембрани в лізосоми (малюнок 5N). Цей результат показав, що CAG пригнічує деградацію MHC-I в лізосомах, опосередковану CTSB, і сприяє реагрегації MHC-I на клітинній мембрані.

Комбінація антитіл CAG і PD-1 ефективно посилює здатність CD8 плюс Т-клітин знищувати пухлини

Імунний вихід пухлини в основному спричинений втратою функції презентації антигену пухлинними клітинами та інгібуванням імунних контрольних точок. Відповідно до наших результатів ми припустили, чи можна використовувати CAG у поєднанні з антитілом до PD-1 для знищення пухлин як для усунення недоліків презентації пухлинного антигену, так і для вирішення проблеми виснаження CD8 плюс Т-клітин, спричиненої PD{ {2}}/ шлях PD-L1. Таким чином, ми трансплантували ракові клітини MC38 мишам C57BL/6 і сформували комбіновану групу антитіл PD-1 і CAG. Результати показали, що комбінована група антитіл CAG і PD-1 показала кращі протипухлинні ефекти, ніж групи CAG і PD-1 (рис. 6A–D). Крім того, ми спостерігали значне збільшення кількості інфільтрованих клітин H2-Kd плюс, клітин CD45 плюс і CD8 плюс клітин у пухлинних тканинах (рис. 6E–G), а також експресію генів, пов’язаних з презентацією антигену. H2-K1, Psmb8 і B2m також було посилено (рис. 6H–J). Тим часом експресія генів Ifng і Tnf також була значно посилена (рис. 6K, L), а імуногістохімічне фарбування показало, що експресія H2-Kd значно збільшилася (рис. 6M).

Таким чином, це дослідження в основному прояснило протипухлинний механізм CAG, головним чином шляхом інгібування деградації MHC-I, опосередкованої CTSB, сприяння агрегації молекул MHC-I на клітинній мембрані, а потім посилення здатності ракових клітин презентувати антиген. Крім того, у поєднанні з антитілом PD-1 він може дуже ефективно вбивати ракові клітини (рис. 6N).

CAG сприяє експресії MHC-I в органоїдах колоректального раку та підвищує здатність знищувати CD8 Т-клітини

Для подальшого дослідження того, чи можна клінічно застосувати фармакологічний ефект CAG, були використані органоїди колоректального раку людини. Ми виявили, що органоїди, інкубовані з CAG, посилили експресію MHC-I (рис. 7A), а експресія пов’язаних з антигеном генів ANXA1, B2M і HLA-A також зросла (рис. 7B). У попередніх експериментах ми виявили, що CAG посилює ефект знищення CD8 T-клітин, сприяючи експресії презентації антигену пухлинними клітинами, і ефект був кращим у поєднанні з антитілом PD-1. Для подальшої перевірки цих результатів ми зібрали периферичну кров здорових людей і виділили CD8 Т-клітини, а потім інкубували їх із стимульованими CAG органоїдами протягом 24 годин (рис. 7C). Результати показали, що порівняно з групою DMSO Т-клітини CD8 в пухлинних органоїдах, оброблених CAG, більше не віддалялися, а були більш сконцентровані на поверхні органоїдів; в той же час, було менше Т-клітин CD8 у групах CAG і PD-1 (рис. 7D). Ми виявили, що IFN-G, який секретується активованими Т-клітинами CD8, був відповідно посилений (рис. 7E–H).

На даний момент ми виявили, що CAG сприяє антигенпрезентуючій експресії пухлин для посилення протипухлинного ефекту CD8 T-клітин, а комбінація CAG і антитіла PD-1 мала кращий протипухлинний ефект. Крім того, ми проаналізували дані про рак товстої кишки в базі даних Cancer Genome Atlas (TCGA) і виявили, що пов’язані з презентацією антигенів гени HLA-A, HLA-B, HLA-C, CD74 і B2M демонструють низькі рівні експресії в пухлинах, і рівень виживання цих генів із низькою експресією був дуже низьким (рис. 7I, J, рис. 7A–H).

Таким чином, ми виявили, що посилена експресія HLA-A, CD74 та інших генів за допомогою CAG була корисною для пацієнтів з пухлиною. Крім того, ми виявили, що пацієнти з високою експресією HLA-A, а також IFNG, мали вищий рівень виживання (рисунок 7K); пацієнти з високою експресією HLA-A та низькою експресією PDCD1 також мали кращий рівень виживаності (малюнок 7L). Усі ці результати свідчать про те, що CAG може бути препаратом-кандидатом для лікування колоректального раку.

ДИСКУСІЯ

Імунна втеча є критичною причиною неспроможності імунної системи контролювати ріст пухлини, але те, як з’являються варіанти втечі під час імунотерапії, залишається недостатньо вивченим.34 Дослідження показали, що втрата функції пухлинного антигенпрезентування, епігенетичні зміни, експресія антиапоптозних білки та імуносупресивні рецептори тісно пов'язані з імунним захистом пухлини. 6 7 35–37 Останніми роками, незважаючи на те, що імунотерапія, представлена ​​антитілами до PD{4}}, досягла великих успіхів, явище резистентності до ліків і безрезультатне лікування колоректального раку призвели до великого незадоволення.38 39 Таким чином, пошук хімічних речовин, які можуть сприяти презентації пухлинного антигену та синергізувати з антитілом PD-1, може краще запобігти імунній втечі пухлини.

Нещодавні дослідження показали, що активні молекули традиційної китайської медицини відіграють ефективну роль у лікуванні захворювань, таких як целастрол у лікуванні метаболічного синдрому, 32 андрографолід при коліті та раку, 40 байкалін у зниженні ліпідів і трифоліризин у лікуванні пухлин. 41 42 CAG є активною молекулою в A. membranaceus і виконує функції серцево-судинних захворювань, захисту печінки, антибактеріальну дію та лікування аневризми черевної аорти.18 43–45 Однак щодо нього мало досліджень у області колоректального раку. Тому ми мали на меті дослідити, чи і як CAG пригнічує ріст мишачого раку товстої кишки

Розробка технологій scRNA-seq і scATAC-seq значно просунула дослідження захворювань.46–48 Тому ми застосували одноклітинну мультиомічну технологію для аналізу специфічного протипухлинного механізму CAG. Було виявлено, що CAG сприяє антигенпрезентуючій функції ракових клітин, а функції CD8 плюс Т-клітин, CD4 плюс Т-клітин і NK-клітин у лімфоцитах були посилені різним ступенем. З іншого боку, клітини Spp1 плюс TAM у мієлоїдних клітинах були більш схильні до трансформації запальної відповіді, і сигнал гіпоксії значно пригнічувався після лікування CAG. Ці результати узгоджуються з результатами попередніх досліджень, інгібування сигналу гіпоксії Spp1 плюс TAM і посилення запальної відповіді можуть пригнічувати ріст пухлин.49 Таким чином, ми припустили, що CAG сприяє антигенпрезентуючій функції ракових клітин, тому відповідні CD8 плюс Т-клітини та макрофаги можуть ефективно розпізнавати та вбивати ракові клітини. Ми додатково перевірили нашу гіпотезу за допомогою експериментів in vitro. Аналіз проточної цитометрії також показав, що CAG посилює інфільтрацію імунних клітин CD45, включаючи CD8 плюс Т-клітини та NK-клітини. Крім того, здатність IFN- і GZMB, що секретуються CD8 плюс Т-клітинами, також значно посилюється CAG. Щоб визначити, чи CD8 Т-клітини або макрофаги відіграють основну роль у протипухлинному експерименті CAG, ми перевірили нашу гіпотезу з трансплантованими пухлинами у голих мишей. Внаслідок порушення розвитку Т-клітин, спричиненого імунізацією тимуса голих мишей, функція макрофагів все ще існує. Однак результати показали, що CAG не може ефективно знищувати трансплантовані пухлини у голих мишей. Ці результати свідчать про те, що CAG може посилити ефект знищення CD8 плюс Т-клітин на пухлини шляхом сприяння презентації антигену ракових клітин.

Далі ми дослідили, як CAG сприяє презентації антигену ракових клітин за допомогою технології TRAP, щоб знайти цільовий білок CAG, щоб пояснити це явище. CTSB — це цистеїнова гідролаза, яка може взаємодіяти з іншими білками та розкладатися в лізосомах.50 Ми припустили, що вона може взаємодіяти з білками, пов’язаними з презентацією антигену, викликаючи його деградацію. Крім того, було повідомлено, що молекула MHC-I розкладається в лізосомах, що призводить до втрати функції презентації антигену пухлинними клітинами. Таким чином, ми підозрювали, що CTSB може зв’язуватися з молекулою MHC-I і викликати її деградацію в лізосомах. Ми перевірили цю гіпотезу про те, що CAG може запобігти деградації MHC-I шляхом інгібування взаємодії CTSB і MHC-I. Органоїди є ефективною моделлю для вивчення розвитку пухлинних захворювань і мають велике значення для сприяння лікуванню клінічних пацієнтів із пухлинами шляхом дослідження впливу ліків на ріст пухлинних органоїдів і специфічний механізм.51 52 Завдяки нашим експериментам, ми виявили, що в поєднанні з антитілами CAG і PD-1 мають хорошу здатність пригнічувати ріст пухлини як у мишачих трансплантованих пухлинних моделях, так і в органоїдах раку товстої кишки людини. Недоліком цього дослідження є обмежена кількість зразків ксенотрансплантата та органоїдів пацієнта. Хоча існують подібні висновки між мишачими моделями та людськими органоїдами, необхідні подальші дослідження.

Тут ми описуємо специфічний механізм, за допомогою якого CAG пригнічує ріст раку товстої кишки, головним чином шляхом пригнічення деградації MHC-I, опосередкованої CTSB, для посилення протипухлинного імунітету CD8 плюс Т-клітин. З одного боку, він сприяє презентації антигену ракових клітин, а з іншого боку, полегшує стан виснаження CD8 плюс Т-клітин. Експериментальні результати також підтвердили, що комбінація антитіл CAG і PD-1 мала кращий протипухлинний ефект.

На закінчення, наскільки нам відомо, ці результати підкреслюють, що зниження регуляції CTSB надає протипухлинний імунітет. Наше дослідження також пояснило специфічний механізм CAG у пригніченні росту колоректального раку. Варто зазначити, що CAG має великий потенціал як продукт для здоров'я на європейському та американському ринках. Результати наших досліджень є потенційним кандидатом на протипухлинні ліки.

Авторські приналежності

1 Державна ключова лабораторія фармацевтичної біотехнології, Інноваційний центр хімії та біомедицини (ChemBIC), Департамент біотехнології та фармацевтичних наук, Школа природничих наук, Нанкінський університет, Нанкін, Цзянсу, Китай

2 Відділ біоінформатики прогностичної медицини, Інститут біомедичної інформатики, Лабораторія трансдукції клітинного сигналу, Школа фундаментальних медичних наук, Хенанський університет, Кайфен, Хенань, Китайська Народна Республіка

3 Цзянсуський спільний інноваційний центр традиційної китайської медицини в профілактиці та лікуванні пухлин, Перший клінічний коледж, Нанкінський університет китайської медицини, Нанкін, Цзянсу, Китай

4 Відділення загальної хірургії Шостої народної лікарні Шанхайського університету Цзяо Тонг, Шанхай, Китайська Народна Республіка

5 Ключова лабораторія метаболізму та фармакокінетики провінції Цзянсу, Державна ключова лабораторія природних ліків, Китайський фармацевтичний університет, Нанкін, Цзянсу, Китай

6 Genergy Bio-technology (Shanghai) Co. Ltd, Шанхай, Китай

7 Ключова лабораторія дослідження нових ліків і клінічної фармації Цзянсу, медичний університет Сюйчжоу, Сюйчжоу, Цзянсу, Китай

ДописувачіYS, HC і DS задумали цей проект і розробили дослідження. GD, BW і XS провели експерименти та проаналізували дані. LZ і HC проаналізували дані scRNA-seq і scATAC-seq. DS та HC надали методологічну підтримку та концептуальні поради. YS і GD написали рукопис. YS, як гарант, несе повну відповідальність за роботу та/або проведення дослідження і має право доступу до даних і контролю за рішенням про випуск.

ФінансуванняЦя робота була підтримана Національним ключовим науково-дослідним проектом (2017YFC1700602), Національним фондом природничих наук Китаю (№ 81930117, 81872877, 82074318), Пріоритетною академічною програмою розвитку вищих навчальних закладів Цзянсу та Проектом талантів альпінізму Нанкінського університету (N/A), Проект Фонду природничих наук Шанхаю, План дій науково-технічних інновацій (№ 22ZR1447400).

Конкуруючі інтересиЖодного не заявлено.

Згода пацієнта на публікаціюНе застосовується.

Схвалення етикиДослідження органоїдів раку товстої кишки людини було схвалено Науково-етичним комітетом афілійованої лікарні Нанкінського університету китайської медицини та відповідало всім відповідним етичним нормам (2020-NL-094- 02). Учасники дали інформовану згоду на участь у дослідженні перед тим, як взяти участь

Походження та рецензуванняНе здана в експлуатацію; рецензовано ззовні.

Заява про наявність данихУсі дані, що стосуються дослідження, включені до статті або завантажені як додаткова інформація в Інтернеті.

Додатковий матеріалЦей вміст надано автором(ами). Він не був перевірений BMJ Publishing Group Limited (BMJ) і, можливо, не був рецензований. Будь-які обговорювані думки чи рекомендації належать виключно авторам (авторам) і не схвалені BMJ. BMJ відмовляється від будь-якої відповідальності та відповідальності, що виникає внаслідок будь-якої довіри до вмісту. Якщо вміст включає будь-який перекладений матеріал, BMJ не гарантує точність і надійність перекладів (включаючи, але не обмежуючись місцевими правилами, клінічними рекомендаціями, термінологією, назвами препаратів і дозуванням препаратів), і не несе відповідальності за будь-які помилки та/ або пропуски, що виникають внаслідок перекладу та адаптації чи іншим чином.

Відкритий доступЦе стаття відкритого доступу, яка розповсюджується за некомерційною ліцензією Creative Commons Attribution Non-Commercial (CC BY-NC 4.0), яка дозволяє іншим поширювати, реміксувати, адаптувати, будувати на основі цього твору некомерційно та ліцензувати свої похідні роботи на інших умовах, за умови, що оригінальна робота належним чином цитується, вказується відповідне джерело, вказуються будь-які внесені зміни та використання є некомерційним.

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ

1 Siegel RL, Miller KD, Fuchs HE та ін. Статистика раку, 2022. CA A Cancer J Clinicians 2022; 72:7–33.

2 Куйперс Е.Дж., Грейді В.М., Ліберман Д. та ін. Колоректальний рак. Nat Rev Dis Primers 2015; 1: 15065.

3 Біллер Л. Х., Шраг Д. Діагностика та лікування метастатичного колоректального раку. JAMA 2021; 325: 669–85.

4 Oliveira AF, Bretes L, Furtado I. Огляд інгібіторів PD-1/PD-L1 при метастатичному колоректальному раку dMMR/MSI-H. Front Oncol 2019; 9: 396.

5 Das M, Zhu C, Kuchroo VK. Тім-3 та його роль у регуляції протипухлинного імунітету. Immunol Rev 2017; 276: 97–111.

6 Jiang X, Wang J, Deng X та ін. Роль мікрооточення пухлини в опосередкованій PD-L1/PD{3}}імунній втечі пухлини. Mol Cancer 2019; 18:10.

7 Датчинамурті К., Колберт Дж.Д., Рок К.Л. Імунне ухилення від раку через втрату презентації антигену MHC класу I. Front Immunol 2021; 12: 636568.

8 Zhu Y, Qian Y, Li Z та ін. Неоантиген-реактивні Т-клітини: нова роль в адаптивній клітинній імунотерапії. MedComm 2021; 2: 207–20.

9 Vries JE, Yssel H, Spits H. Взаємодія між комплексом TCR/CD3 і CD4 або CD8 в активації цитотоксичних Т-лімфоцитів. Immunol Rev 1989; 109: 119–42.

10 Huang J, Meyer C, Zhu C. Розпізнавання Т-клітинного антигену на клітинній мембрані. Mol Immunol 2012; 52: 155–64.

11 Еллісон Дж.П. Взаємодія CD28-B7 при активації Т-клітин. Curr Opin Immunol 1994; 6: 414–9.

12 Лю Х, Бао Х, Ху М та ін. Інгібування PCSK9 посилює терапію імунної контрольної точки для раку. Nature 2020; 588: 693–8.

13 Yamamoto K, Venida A, Yano J та ін. Аутофагія сприяє імунному уникненню раку підшлункової залози шляхом деградації MHC-I. Nature 2020; 581: 100–5.

14 Chen X, Zhao Y, Luo W та ін. Целастрол індукує опосередкований АФК апоптоз шляхом прямого націлювання на пероксиредоксин-2 у ракових клітинах шлунка. Тераностика 2020; 10: 10290–308.

15 Kong N, Chen X, Feng J та ін. Байкалін індукує фероптоз у клітинах раку сечового міхура шляхом зниження регуляції FTH1. Acta Pharm Sin B 2021; 11: 4045–54.

16 Deng G, Chen W, Wang P та ін. Інгібування циклоастрагенолом опосередкованого запаленням NLRP3 піроптозу в макрофагах сприяє полегшенню індукованого іміквімодом псоріазоподібного запалення шкіри у мишей. Int Immunopharmacol 2019; 74: 105682.

17 Li M, Li S-chun, Dou B-kai та ін. Циклоастрагенол посилює експресію SIRT1, послаблює апоптоз і пригнічує нейрозапалення після ішемії мозку. Acta Pharmacol Sin 2020; 41: 1025–32.

18 Chen C, Ni Y, Jiang B та ін. Антивікові похідні циклоастрагенолу, отримані шляхом біотрансформації. Nat Prod Res 2021;35:2685–90.

19 Fauce SR, Jamieson BD, Chin AC та ін. Фармакологічне посилення противірусної функції CD8 плюс Т-лімфоцитів людини на основі теломерази. J Immunol 2008; 181: 7400–6.

20 Wang B, Wang Y, Sun X та ін. CXCR6 необхідний для протипухлинної ефективності внутрішньопухлинних CD8 плюс Т-клітин. J Immunother Cancer 2021; 9: e003100.

21 Батлер А, Хоффман П, Сміберт П та ін. Інтеграція одноклітинних транскриптомних даних у різних умовах, технологіях і видах. Nat Biotechnol 2018; 36: 411–20.

22 Yu G, Wang LG, Han Y та ін. clusterProfiler: пакет R для порівняння біологічних тем серед кластерів генів. OMICS: журнал інтегративної біології 2012; 16: 284–7.

23 Стюарт Т., Батлер А., Хоффман П. та ін. Комплексна інтеграція одноклітинних даних. Cell 2019; 177: 1888–902.

24 Granja JM, Corces MR, Pierce SE та ін. ArchR — це масштабований програмний пакет для інтегративного аналізу доступності одноклітинного хроматину. Nat Genet 2021; 53: 403–11.

25 Корсунський І, Міллард Н, Фан Дж та ін. Швидка, чутлива та точна інтеграція одноклітинних даних із гармонією. Nat Methods 2019; 16: 1289–96.

26 Trapnell C, Cacchiarelli D, Grimsby J та ін. Динаміка та регулятори рішень клітинної долі розкриваються псевдочасовим упорядкуванням окремих клітин. Nat Biotechnol 2014; 32: 381–6.

27 Qiu X, Hill A, Packer J та ін. Кількісне визначення мРНК однієї клітини та диференціальний аналіз із переписом. Nat Methods 2017; 14: 309–15.

28 Qiu X, Mao Q, Tang Y та ін. Обернене вбудовування графів розв’язує складні одноклітинні траєкторії. Nat Methods 2017;14:979–82.

29 Патель А.П., Тірош І, Тромбетта Дж.Дж. та ін. Одноклітинна РНК-послідовність підкреслює внутрішньопухлинну гетерогенність у первинній гліобластомі. Наука 2014;344:1396–401.

30 Субраманіан А, Тамайо П, Мута В.К. та ін. Аналіз збагачення набору генів: підхід, заснований на знаннях, для інтерпретації профілів експресії в геномі. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102:15545–50.

31 Tian Y, Wan N, Ding M. Chemoproteomics картографує деякі гліколітичні мішені в ракових клітинах. bioRxiv 2020.

32 Zhu Y, Wan N, Shan X та ін. Celastrol націлений на асоційований з аденілілциклазою білок 1, щоб зменшити опосередковане макрофагами запалення та полегшити метаболічний синдром у мишей, спричинений дієтою з високим вмістом жиру. Acta Pharm Sin B 2021; 11: 1200–12.

33 Driehuis E, Kretzschmar K, Clevers H. Створення ракових органоїдів, отриманих пацієнтом, для скринінгу лікарських засобів. Nat Protoc 2020; 15: 3380–409.

34 Lin KY, Lu D, Hung CF та ін. Ектопічна експресія молекули адгезії судинних клітин -1 як новий механізм імунного ухилення пухлини. Cancer Res 2007; 67: 1832–41.

35 Kriegsman BA, Vangala P, Chen BJ та ін. Часта втрата IRF2 при раку призводить до ухилення від імунітету через зниження презентації антигену MHC класу I та збільшення експресії PD-L1. Ji 2019; 203: 1999–2010.

36 Gomez S, Tabernacki T, Kobyra J та ін. Поєднання епігенетичної та імунної терапії для подолання стійкості до раку. Semin Cancer Biol 2020; 65: 99–113.

37 Mandal R, Barrón JC, Kostova I. Caspase-8: двосічний меч. Biochim Biophys Acta Rev Cancer 1873; 2020: 188357.

38 Qin S, Xu L, Yi M та ін. Нові цілі імунної контрольної точки: вихід за межі PD-1 і CTLA-4. Mol Cancer 2019; 18: 155.

39 Lizardo DY, Kuang C, Hao S та ін. Ефективність імунотерапії при колоректальному раку з дефіцитом репарації невідповідності: від столу до ліжка. Biochim Biophys Acta Rev Cancer 2020; 1874: 188447.

40 Guo W, Sun Y, Liu W та ін. Інгібування запалення NLRP3, кероване малими молекулами, опосередковане мітофагією, відповідає за запобігання раку, асоційованого з колітом. Autophagy 2014;10:972–85.

41 Dai J, Liang K, Zhao S та ін. Хімопротеоміка показує, що байкалін активує печінковий CPT1 для полегшення спричинених дієтою ожиріння та стеатозу печінки. Proc Natl Acad Sci USA 2018;115:E5896–905.

42 Sun D, ​​Tao W, Zhang F та ін. Трифоліризин індукує залежний від аутофагії апоптоз при раку товстої кишки за допомогою сигналізації AMPK/mTOR. Sig Transduct Target Ther 2020; 5:174.

43 Gu M, Zhang S, Zhao Y та ін. Циклоастрагенол покращує стеатоз печінки шляхом активації сигналізації фарнезоїдного X рецептора. Фармакологічні дослідження 2017; 121: 22–32.

44 Wang J, Wu ML, Cao SP та ін. Циклоастрагенол полегшує експериментальне пошкодження серця у щурів, сприяючи аутофагії міокарда шляхом пригнічення передачі сигналів AKT1-RPS6KB1. Biomed Pharmacother 2018; 107: 1074–81.

45 Wang Y, Chen C, Wang Q та ін. Інгібуючий вплив циклоастрагенолу на аневризму черевної аорти та пов’язані з нею механізми. Br J Pharmacol 2019; 176: 282–96.

46 Lee JJ, Bernard V, Semaan A та ін. Виявлення неоднорідності пухлини та строми та взаємодії ліганд-рецептор за допомогою одноклітинної транскриптоміки в реальних біопсіях раку підшлункової залози. Clin Cancer Res 2021; 27: 5912–21.

47 Zhang L, Li Z, Skrzypczynska KM та ін. Одноклітинний аналіз інформує про механізми мієлоїдної таргетної терапії раку товстої кишки. Cell 2020; 181: 442–59.

48 Gao J, Wu Z, Zhao M та ін. Алостеричне інгібування виявляє SHP2-опосередковану пухлинну імуносупресію при раку товстої кишки за допомогою одноклітинної транскриптоміки. Acta Pharm Sin B 2022; 12: 149–66.

49 Wei J, Chen Z, Hu M та ін. Характеристика міжклітинної комунікації панраку виявляє SPP1 плюс асоційований з пухлиною макрофаг, розширений в умовах гіпоксії та сприяючи злоякісності раку через одноклітинні дані RNA-Seq. Front Cell Dev Biol 2021; 9: 749210.

50 Chen X, Yu C, Kang R та ін. Системи клітинної деградації при фероптозі. Смерть клітини відрізняється 2021; 28: 1135–48.

51 Puschhof J, Pleguezuelos-Manzano C, Martinez-Silgado A та ін. Співкультури кишкових органоїдів з мікробами. Nat Protoc 2021; 16: 4633–49.

52 Lee SH, Hu W, Matulay JT та ін. Еволюція пухлини та реакція на ліки в органоїдних моделях раку сечового міхура, отриманих пацієнтом. Cell 2018; 173: 515-28.

【Додаткова інформація:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】