Дослідження антиоксидантної активності фенілетаноїдних глікозидів з Cistanche Deserticola

Контакт: Одрі Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li та інші (Центральна лабораторія Чанчунського педагогічного університету, Чанчунь, Цзілінь 130032)

Анотація[ Мета ] Дослідження спрямоване на систематичне вивчення антиоксидантної активності фенілетаноїдних глікозидів зЦистанхеdeserticola. [Метод] Для вимірювання антиоксидантної активності екстракту C. deserticola використовували дві модельні системи: аналіз вільних радикалів 2,2-дифеніл-1-пікрилгідразилу (DPPH ') і аналіз фотохемілюмінесценції (PCL), актеозид, ізоактеозид і ехінакозид. [Результат] Результати показали, що загальний вміст фенолів (TPC) в ехінакозиді, актеозиді, ізоактеозиді та 80-відсотковому етанольному екстракті C. deserticola становив 753,95, 659,94, 356,14 і 14,73 мг галової кислоти/г зразка. Екстракт C. deserticola продемонстрував сильну антиоксидантну активність в експерименті PCL, а потім ехінакозид, актеозид та ізоактеозид. Однак ехінакозид продемонстрував сильну антиоксидантну активність в експерименті DPPH, за яким слідували актеозид, ізоактеозид і екстракт C. deserticola.

[ Висновок ]Це дослідження могло б надати посилання для вивчення фармакології та біологічної активності фенілетаноїдних глікозидів з C. deserticola.

Ключові слова Cistanche deserticola ; актеозид ; ізоактеозид ; Ехінакозид ; Антиоксидантна активність ; DPPH ; PCL

Цистанхе (Cistanche deserticolaYC Ma.) — рослина зЦистанхероду (Oro-banehaeeeae) вЦистанхерід (Цистанхе). Висушене м'ясисте стебло цистанхи з лускатим листям. Велика кількість досліджень виявила, що основними діючими інгредієнтами рослин цистанхи є глікозидні сполуки фенетилового спирту. . Фенілетанолглікозидна сполука належить до різновиду поліфенольної сполуки, яка широко поширена в багатьох видах рослин. Дослідження фармакологічних випробувань показали, що ці сполуки мають широкий спектр фармакологічної та біологічної активності, такої як антигепатотоксин, протизапальна, знеболювальна та антиоксидантна активність. Серед них найбільш вражаючим є те, що глікозидна сполука феноксіетанолу має дуже хорошу антиоксидантну дію. Автор в основному провів систематичний аналіз антиоксидантної активності глікозидних сполук фенетилового спирту вЦистанхе, використовуючи два методи оцінки антиоксидантів in vitro, а саме фотогемілюмінесценцію (PCL) і 2,2-дифеніл-1-піерил-гідроксил (DPPH'). Дві різні системи використовувалися для вимірювання антиоксидантної активності 80 процентного спиртового екстрактуЦистанхе, ергостерозид, ізоергозид, іехінакозид.

1 Матеріал і методи

1.1 Зразки та реактиви

Цистанхе (Cistanche deserticola)Лікарські матеріали були закуплені в Beijing Tongrentang Pharmacy.Ергостерозид, ізоергозид,ехінакозид, Фолін. Реактив Ciocalteu, галова кислота, 2,2-дифеніл-1-пікрилгідразил (DPPH.) тощо були придбані у SigmaChemicalCo. Компанія (Сент-Луїс, Міссурі). Розчинник, використаний для аналізу PCL, надав Analytik Jena AG (Берлін, Німеччина). Усі інші реагенти є аналітичними реагентами (вироблені Пекінським хімічним заводом). Вода надчиста (18,2 нПа).

1.2 Відбір проби

Зважте точно 2,0005 гЦистанхепорошок зразка, використовуйте 50мл 80% етанолу для ультразвукової екстракції при кімнатній температурі протягом 0,5 години, двічі екстрагуйте, фільтруйте розчин зразка, випарюйте на роторному випарнику насухо (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 Визначення загального вмісту поліфенолів у зразку

Загальний вміст фенолу в зразку визначають за допомогою методу F{{0}}lin-Ciocaheu, і результат виражають у міліграмах галової кислоти на грам екстракту. Візьміть розчин зразка з певною концентрацією 0.2rnI (щоб абсорбція впала на стандартну криву), додайте 1 мл реактиву Фоліна-Чокагеу з концентрацією 0.5mol/L і потім додайте 0.8 мл розчину карбонату натрію з концентрацією 7,5 відсотка, щоб добре перемішати, помістили при кімнатній температурі на 0.5 годин, а потім виміряли абсорбцію при 765 нм (ультрафіолетовий видимий спектрофотометр: DU800, Beckman Couher, Inc. США). Використовуйте розчин галової кислоти (діапазон масової концентрації 0.02-0.20me,/м1), щоб побудувати стандартну криву, і всі випробування повторюють двічі.

1.4 Антиоксидантна активність аналіз in vitro

1.4.1 Визначення методу PCL.

У тесті використовувався ультрашвидкий автоматичний аналізатор антиоксидантів і вільних радикалів Photochem@(Берлін, Німеччина). Принцип полягає у створенні вільних радикалів фотохімічним методом і використанні методу хемілюмінесценції для виявлення вільних радикалів. В експерименті для збудження реакційних молекул використовувався фотосенсибілізатор з ефектом фотохімічного збудження, завдяки чому під дією ультрафіолетової лампи реакція окислення відбувалася 1000 раз швидше, ніж у звичайних умовах, і вільні радикали швидко утворювалися." Оберіть метод PCL-ACW-Kit. Виміряйте антиоксидантну активність водорозчинних компонентів підзразків псилію. Додайте 1.0мл реакційного буфера (включаючи концентрацію 0.1моль/л карбонату натрію, значення рН 10.5 і концентрацію 0.1ммоль/LNA, один EDTA, 1,5 мл розчинника ACW (вода) ), концентрація 1 ммоль/Llumino1) діє як фотосенсибілізатор для збудження реакційних молекул, завдяки чому вільні радикали швидко генеруються, і водночас як фотохемілюмінесцентна речовина. І зразок, і стандарт мають 10 "л. Вимірюючи різні концентрації (0,5, 1,0, 2,0 і 3,0 нмоль/л) L. Рівняння стандартної кривої для аскорбінової кислоти: Y=24.640Ox плюс 2.9311, R²=0.9969. Необхідно розбавити зразок або стандартний розчин у тесті так, щоб інтервал часу затримки потрапляв у лінійний діапазон стандартної кривої. Photochem генерує стандартну криву та автоматично перевіряє антиоксидантну активність зразка, і антиоксидантна активність зразка еквівалентна L． Розраховується за кількістю наномолей аскорбінової кислоти.

1.4.2 Визначення методу DPPH.

Дифенілпікрилгідразинорадикал [DPPH ·] є стабільним азотоцентрованим радикалом із максимальним поглинанням при довжині хвилі 515 нм. Розчин метанолу [DPPH ·] має фіолетовий колір, і його концентрація має лінійну залежність від поглинання». Після додавання антиоксидантів до розчину метанолу [DPPH ·] антиоксиданти можуть поєднуватися з вільними радикалами [DPPH ·] або замінювати їх, утворюючи [DPPH ·] ] Кількість вільних радикалів зменшується, а колір розчину стає світлішим, що проявляється безперервним зменшенням поглинання на довжині хвилі 515 нм до досягнення стабільності». У тесті замість метанолу використовувався етанол. Точно зважте [DPPH ·] і налаштуйте концентрацію на 0. [DPPH ·] розчин етанолу 0.040 76мг/мл, отримано стандартну криву [DPPH ·]: Y: 18.032x-0.0016 , R=0.9993. Спосіб вимірювання залишкової швидкості вільних радикалів наведено в літературі [16]. Використовуючи етанол як розчинник, приготуйте різні концентрації зразка та стандартного розчину, візьміть 0,1 мл зразка або стандартного розчину відповідно та додайте 3,9 мл [DPPH·] стандартного розчину з масовою концентрацією 2,5 мг/л (наразі використовується)), замініть розчин зразка етанолом як порожнім. Збовтайте змішаний розчин, за допомогою кювети виміряйте його абсорбцію в різний час на довжині хвилі 515 нм і переведіть його в масову концентрацію [DPPH·] відповідно до стандартної кривої, щоб обчислити залишкову швидкість [DPPH·]. Відповідно до залишкової швидкості [DPPH ·] і відповідної кількості доданого зразка можна побудувати криву для видалення [DPPH -] вільних радикалів із зразка. Відповідно до кривої залежності між масовою концентрацією [DPPH ·] і абсорбцією, абсорбція, виміряна після додавання поглинача вільних радикалів, може бути перетворена в масову концентрацію [DPPH ·] для обчислення [DPPH ·] після додавання поглинача вільних радикалів. Формула розрахунку для залишкової швидкості така: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 відсотків, де [DPPH·] — масова концентрація DPPH · у певний момент процесу поглинання вільних радикалів [DPPH·]:. Є початковою масовою концентрацією DPPH·. Відповідно до кількості доданих антиоксидантів і залишкової швидкості [DPPH ·] будується крива взаємозв’язку між ними, і рівняння регресії може бути отримано за допомогою аналізу лінійної регресії. Відповідно до рівняння регресії можна розрахувати дозу антиоксиданту, коли залишкова швидкість [DPPH ·] становить 50 відсотків. Половинне гальмування. Відповідно до кривої поглинання [DPPH·] вільних радикалів різних концентрацій зразків або стандартів обчисліть кількість EC зразка, коли початкова масова концентрація [DPPH·] зменшується до 50 відсотків (стаціонарний стан). Чим менший EC, тим сильніша здатність поглинати вільні радикали". Випробуйте 3 рази паралельно.

цистанче

2 Результати та аналіз

2.1 Визначення загального вмісту поліфенолів у зразку При визначенні загального вмісту поліфенолів загальний вміст поліфенолів уехінакозидє найвищим, який становить 753,95 мг галової кислоти/г. Далі йдуть ергостероїдні глікозиди, ізоергостероїдні глікозиди та сирі екстрактиЦистанхе, які становили 468,3, 356,14 і 14,73 мг галової кислоти/г відповідно.

2.2 Визначення антиоксидантної активності проби

2.2.1 Результати визначення методом PCL-ACW. У тесті на антиоксиданти PCL-ACW антиоксидантна здатність 1txgЦистанхелікарський матеріал еквівалентний антиоксидантній здатності 15,68 нмоль L-аскорбінової кислоти; 1 гехінакозидеквівалентна антиоксидантній здатності 14,03 нмоль аскорбінової кислоти Активність: 1 txgергостерозидеквівалентно 11,44 нмоль антиоксидантної здатності аскорбінової кислоти; 11 г ізомергостерозиду еквівалентний антиоксидантній активності 8,24 нмоль аскорбінової кислоти.

2.2.2 Результати вимірювань методом DPPH. З таблиці 1 видно, що він очищений. Порядок здатності вільних радикалів такийергостерозид, ехінакозид, ізоергозид і неочищений екстрактЦистанхе, серед яких ergo сторона іехінакозидмають в основному однакову антиоксидантну здатність у тесті DPPH. З цього видно. Оскільки для вимірювання зразків використовуються різні системи тестування антиоксидантів in vitro, механізм дії антиоксидантів відрізняється, і результати можуть бути суперечливими. Це також було перевірено в тесті. Тому для подальшої перевірки необхідно вибрати інші системи антиоксидантного аналізу.

ехінакозія

посилання

[1] Ян Цуйпін, Су Вейвей. Прогрес дослідження м’ясного супу[J]·Chinese Medicinal Materials, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Лей Лі, Сонг Чжіхонг, Ту Пенфей Прогрес дослідження хімічних компонентів рослин Cistanche[J].Chinese Herbal Medicine, 2003,34(5):473 -476.

[3] ХІРОМІ КОБАЯШІ, ХІРОКО КАРАСАВА ДЖОСІО МІЯСЕ. Дослідження складових Cistanchis Herba. ПРИВІТ. Виділення та структури нових фенілпропаноїдних глікозидів, цистанозидів А та В[ J]. Chem. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4] ЛІ ЛІ, РОНГ ЦАО, РЕЙМОНД ЯН та ін. Виділення та очищення фенілетаноїдних глікозидів зCistanche deserticolaметодом високошвидкісної протиточної хроматографії [ J ]. Харчова хімія, 2008, 1(^:702-710.

[5] LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ та ін. Виділення та очищення актециду та ізоактеозиду з Plantago psyllium L. за допомогою високошвидкісної протиточної хроматографії [J]. Journal of Chromatography A, 2005, 1063: 161-169.

[6] РАВН Х, НІШІБЕ С, САСАХАРА М та ін. Фенольні сполуки Plantago Asiatica[ J]. Фітохімія, 1990, 29: 3627-3631.

[7] TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Phenolic glycosides from Diseased roots of Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Фітохімія, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya та ін. Загальні глікозиди Cistanche cistanche in Vitro поглинають вільні радикали та захисно впливають на пошкодження ДНК, викликане OH [J]. Китайський фармацевтичний журнал, 2001, 36(1): 29-31.

[9]XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y та ін. Гепатопротекторна активність фенілетаноїдів зCistanche deserticola[J ]. Planta Med, 1998, 64:120.

[10]ШАПОВАЛ Е.С., ВІНТЕР ДЕ ВАРГАС MR, ЧАВЕС К.Г. та ін. Протизапальна та антиноцицептивна активність екстрактів і виділених сполук із Stachytarpheta cayeunensis [J]. J Ethnopharmacol, 1998, 60: 53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL та ін. Захист фенілпропаноїдних глікозидів з Pedicularies проти окисного гемолізу in vitro [J]. Planta Med, 1993, 59:315-317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX та ін. Антиоксидантна активність фенілетаноїдних глікозидів з раку Brandisia [J]. Етнофармакологія, 2000, 71:483-486.

[13]XIONG Q, KADOTA S, TANI T та ін. Антиоксидантна дія фенілетаноїду зCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996, 19: 1580-1585.

[14] TSAO R, YANG R, XIE S та ін. Які поліфенольні сполуки сприяють загальній антиоксидантній активності яблука? [J]. J Agric Food Chem, 2005, 53: 4989-4995.

[15] ПОПОВ І.Н., ЛЕВІН Г. Гіотохемілюмінесцентне виявлення антирадикальної активності: U. тестування неферментних водорозчинних антиоксидантів [J]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16]BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Використання вільнорадикального методу для оцінки антиоксидантної активності [J]. Lebensm Wiss Technol, 1995, 28:25-30.

[17] Лі Чуньян, Сюй Шіїн, Ван Чжан. Метод DPPH для визначення здатності проантоціанідинів виноградних кісточок поглинати вільні радикали [J]. Journal of Food and Biotechnology, 2006, 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V та ін. Оцінка антиоксидантної активності різними методами in vitro [J ]. Free Radical Research, 2002, 36 (2): 177-187.