Дослідження впливу імунітету на мишей

Щоб дізнатися більше інформації, будь ласка, зв'яжітьсяdavid.wan@wecistanche.com

Двоє з тридцяти чоловіківDBA/2NCrl(D2N) мишей, використаних як контрольний штам при аналізі фонових данихDBA/2N-MDXмишей з аномальними результатами, що вказують на інфекцію. Випадок 1: 4-тижневий самець миші D2N показав ураження білого нальоту в лівій нирці (без клінічних симптомів), і було проведено патологічне дослідження нирки. В канальцях та інтерстиції лівої нирки спостерігалася запальна клітинна інфільтрація, головним чином нейтрофілів, у лівому сегменті нирки виявлено золотистий стафілокок (S.aureus). Тому дане ураження лівої нирки було діагностовано як гнійнетубулоінтерстиціальнийнефрит, викликаний інфекцією S. aureus. Випадок 2: ліва кривошия зі втратою ваги була виявлена ​​у 9-тижневого віку самця миші D2N. При гістологічному дослідженні виявлено ексудативне запалення навколо глоткового отвору євстахієвих труб, гнійне запалення обох середніх вух і лівого внутрішнього вуха з утворенням абсцесу та скупчень у вигляді грампозитивних мікроколоній. Золотистий стадіон був ідентифікований з культур мазків обох зовнішніх слухових проходів. У результаті цей випадок кривошії був спричинений S. aureus – гнійний середній отит та Інтернет. S. aureus добре відомий як умовно-патогенний мікроорганізм, здатний часто викликати гнійні захворювання у імунокомпетентних лабораторних тварин. Однак, наскільки нам відомо, про цей випадок інфекції S. aureus, представленої кривошею у миші D2N, не повідомляється.

Натисніть тут, щоб дізнатися більше про Cistanche

Метицилін-резистентний ізолят Staphylococcus aureus (MRSA) виявлено в лабораторних мишах у Центрі досліджень лабораторних тварин Медичного коледжу національної оборони в 2018 році таMRSAізоляти були виділені з мишей також в інших приміщеннях для мишей після цього. Для цих ізолятів MRSA було проведено молекулярне типування, таке як типування мультилокусної послідовності (MLST), типування протеїну A(spa) Staphylococcus aureus, типування SCCmec і типування коагулази для визначення їхніх генотипів. Усі ізоляти виявили ідентичні генотипи (ST1, spa t1784, SCCmec тип IV і коагулаза типу VII), що свідчить про те, що ізоляти були ідентичними клонами. До появи MRSA у 2018 році на цьому закладі не виділяли ізолятів з такими генотипами, передбачалося, що клон MRSA був завезений на заклад через людину або лабораторних тварин. STl1 — це перший позалікарняний MRSA, виявлений у дітей у Сполучених Штатах, однак наразі ST1 виявляють у людей і тварин у всьому світі. У Японії штами ST1 і SCCmec типу IV були виділені від людей і кішок, що свідчить про те, що ST1 передається між людьми і тваринами. Штам MRSA з цими генотипами, а також із spa tl784 був виділений у людей. Наразі відмінність між лікарняним MRSA, позалікарняним MRSA та MRSA, пов’язаним із худобою, більш неоднозначна. Ці результати свідчать про те, що миші можуть діяти як резервуари MRSA.

У нещодавній імунотерапії раку активність таких молекул, як PD-1, пригнічується, щоб підвищити активність імунних клітин проти раку. Незважаючи на високий терапевтичний ефект, відомі випадки, коли при імунотерапії раку розвивається аутоімунне захворювання. Тут ми створили систему, яка може руйнувати PD-1 у певний час у культивованих клітинах і мишах за допомогоюСистема дегрону СМАШ. Злитий білок PD-1-SMASh у клітинах Jurkat і CD3 плюс спленоцитах знизився на 1 день після введення асунапревіру (ASV) або гразопревіру (GRV), які є інгібіторами протеази NS3/4A. Ріст клітин аденокарциноми MC-38, інокульованих мишам PD-1-cherry-SMASh knockin (KI) з ASV, був пригнічений порівняно з мишами дикого типу (WT) і мишами KI, які не отримували лікування. Крім того, миші WT, яким трансплантували клітини кісткового мозку KI після опромінення летальним випромінюванням, могли відторгати клітини MC-38 з GRV. Миші KI виглядали здоровими і не виявляли ознак аутоімунного захворювання. Ми припускаємо, що використання системи дегрону в живих організмах сприятиме не тільки різноманітним біологічним дослідженням, але й лікуванню захворювань.

Прогестерон (P4) виділяється з плаценти для підтримки вагітності та функціонує як імунний регулятор. Глюкокортикоїди - це іншеімунорегуляторнийстероїд для регулювання запалення. У цьому дослідженні мононуклеарні клітини периферичної крові людини (PBMC) трансплантували мишам NOG для індукування реакції трансплантат проти хазяїна (GVHD) і використовували для порівняння ефектів P4 і кортизолу (COR). PBMC стимулювали в присутності різних концентрацій P4 або COR, і клітини аналізували за допомогою проточної цитометрії (FCM). АліквотиPBMCsтрансплантували мишам NOG, і P4 або COR вводили мишам двічі на тиждень. Через 28 днів проводили ФКМ та імуногістохімічний аналіз. У результаті висока концентрація P4 інгібувала активацію Т-клітин in vitro, тоді як інгібування не тривало після видалення. Пригнічення активації Т-клітин було меншим при лікуванні COR порівняно з P4, а виснаження Т-клітин було більш помітним. P4-миші, яким вводили, мали більше спленоцитів, особливо CD8 Т-клітин, порівняно з контрольними мишами. Проте нижча експресія CD25, менша інфільтрація людських Т-клітин у легені та печінку та меншаGVHDспостерігалися симптоми. З іншого боку, кількість спленоцитів, особливо Т-клітин, у мишей, яким вводили COR, була значно нижчою, а активовані/виснажені клітини були у великій кількості. Ці результати свідчать про те, що P4 віддає перевагу підтримці Т-клітин порівняно з COR in vitro.

Helicobacter hepaticus і Helicobacter bills відомі як патогени, які викликають гепатит і коліт у мишей. Існування кількох позитивних випадків все ще підтверджується щорічно в експериментальних тваринницьких закладах в Японії. Найкраще використовувати вміст сліпої кишки або свіжий кал як зразок для ПЛР-тестування на H. hepaticus і H. bilis.

Останнім часом різні виробники випускають реагенти для транспортування та зберігання ДНК і РНК. Очікується, що ці реагенти дозволять усунути проблеми з транспортуванням зразків, які використовуються для ПЛР-тестів. Таким чином, у цьому дослідженні корисність реагенту для зберігання нуклеїнової кислоти перевіряли шляхом проведення ПЛР-тесту на Helicobacter з використанням вмісту сліпої кишки, збереженого за допомогою реагенту для збереження нуклеїнової кислоти. У результаті у зразках, які зберігалися протягом 7 днів із використанням консервуючого розчину, можна було виявити Helicobacter на тому ж рівні, що й у свіжому зразку. З вищесказаного було зроблено припущення, що в ПЛР-тесті на Helicobacter, навіть якщо транспортування займає кілька днів, можна провести тест з високою точністю, транспортуючи зразок, занурений у реагент для зберігання нуклеїнової кислоти, охолодженим літаком.

Раніше ми розробили мутантні штами E.coli зі значно покращеною адгезією до твердих поверхонь in vitro шляхом модифікації генів, які реагують на поживне голодування. Щоб оцінити взаємодію між цими штамами E. coli (AEE) із посиленою адгезією та кишковим середовищем in vivo, ми оцінили їх здатність до колонізації кишкового тракту шляхом інокуляції мишей.

Перед оціночним експериментом ми трансформували AEE плазмідою, що експресує люциферазу, для візуалізації in vivo. як були перорально щеплені голодуючим мишам і збирали кал кожні кілька днів. Кількість живихAEEоцінювали шляхом вимірювання КУО із зібраного калу.

У результаті, порівняно з контрольним штамом, AEE були більш поширені у фекаліях протягом більше одного тижня, що вказує на посилення колонізації в кишковому тракті. Спостерігаючи за локалізацією люмінесценції люциферази за допомогою неінвазивної візуалізації за допомогою IVIS, було також виявлено, що AEE мають тенденцію до колонізації в сліпій та товстій кишці.

[Мета] В даний час [Pasteurella]pneumotropicaбув перекласифікований як новий рід Rodentibacter. З них R.pneumotropicus і R.Healy є основними мішенями для мікробіологічного моніторингу гризунів. Ми виділили ряд Rodentibacter sp. які не можна ідентифікувати як види гризунів. У цьому дослідженні ми вивчаємо характеристики Rodentibacter sp. ізолювати, зосереджуючись на вірулентності бактерій. [Методи] Rodentibacter sp. які були виділені з трахеї щура, були використані для дослідження. Секвенування чорного генома було виконано на секвенаторі наступного покоління, а потім були передбачені гени, асоційовані з вірулентністю. В експериментах на тваринах мишей Rag2 використовували для Rodentibacter sp. інфекція.|Результати| За допомогою проекту секвенування геному унікальний ген, що кодує токсин RTX, був ідентифікований у Rodentibacter sp. Білкова послідовність токсину RTX була більш гомологічна послідовності, що виробляється Enterobacteriaceae, ніж Pasteurellaceae. В експерименті на тваринах майже у всіх інфікованих мишей Rag 2 була підтверджена смертельна пневмонія або септицемія. Хоча ізолят не вдалося ідентифікувати як R. pneumotropicus і R. heylii, цей близькоспоріднений вид може бути летальним для тварин із ослабленим імунітетом у присутності факторів вірулентності, таких як токсин RTX.

У Програмі розвитку базових технологій NBRP (2018-2019) ми секвенували геноми мишачих умовно-патогенних бактерій і виконалиRNAseqнайпростіших у мишей, щоб розробити аналізи ПЛР для цих організмів. Ми використали ці результати для аналізу Rodentibacter spp. та найпростіших у щурів у співпраці з Кіотським університетом (NBRP Rat). Тут ми повідомляємо результати тестування зразків щурів. [Методи] Послідовності гена 16S рРНК розміром приблизно 1,5 кб зчитували за допомогою ПЛР для шести щурячих ізолятів Rodentibacter spp., а проектну послідовність геному одного ізоляту (№25) визначали за допомогою Illumina HiSeq 2500. ПЛР вмісту сліпої кишки щурів було визначено виконано на основі результатів RNAseq найпростіших мишей. [Результати] Послідовності генів 16S рРНК усіх ізолятів були ідентичними, і вони були ідентифіковані як Rodentibacter Ratti за допомогою аналізу OTU. Повторне секвенування ізоляту №25 також показало, що цей штам був R. Ratti. ПЛР для мишачих найпростіших дала позитивні результати для амеби щурів. На трихомонади позитивних результатів не отриманоПЛРна зразках щурів. [Обговорення] Щурячі ізоляти Rodentibacter spp. розглянутими в цьому звіті були всі R. Ratti. Важливо знати про наявність R. Ratti при проведенні тестів на Rodentibacter на щурах. Деякі зразки фекалій щурів показали позитивний результат ПЛР на мишачу амебу. Це перший крок у розвитку ПЛР для виявлення найпростіших у щурів.

Rodentibacter Pasteurella pneumotropica є умовно-патогенною бактерією, яка викликає респіраторні захворювання у мишей і щурів. Раніше вони були класифіковані в роду Pasteurella, і кілька штамів були попередньо запропоновані як біотипи. У 2017 році вони були реорганізовані в рід Rodentibacter. Штами MaM і MaR були виділені від мишей і щурів відповідно приблизно в 1980-х роках. У цьому дослідженні ми визначили послідовності геномів обох штамів і порівняли їх із послідовностями роду Rodentibacter, матеріали та методи. Штами MaM і MaR були отримані від Національного інституту інфекційних захворювань (NIAID).

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Фуміо Іке). Обидва штами вирощували в рідкій культурі для виділення геномної ДНК, а геномні послідовності визначали за допомогою Illumina Hiseq 2500 і PacBio Sequel. [Результати] На основі послідовності гена 16S рРНК штам MaM ідентифікували як R.pneumotropicus, а штам MaR. як Р. Ратті. Крім того, була визначена повна послідовність геному (2 213 961 bp) штаму MaR (кількість оперонів рРНК становила 6, а кількість генів оцінювалася як 2063). [Обговорення1 Штами MaM і MaR використовувалися як стандарти для ідентифікації Pasteurella pneumotropica в Японії. З цього аналізу ми визначили види обох штамів наступним чином: штам MaM — R.pneumotropicus, а штам MaR — R.ratti. Примітно, що ці результати показують, що R. Ratti можна виділити від щурів у Японії.

Clostridium pili for me (CP) сприйнятливий до інфекцій у різних лабораторних тварин, включаючи щурів і мишей, і проявляє безсимптомну інфекцію, за винятком тварин з ослабленим імунітетом. Це вважається основною диференційною діагностикою для утримання тваринницьких приміщень і, як відомо, впливає на експериментальні дані досліджень на тваринах. Для діагностики ХП зазвичай використовують серодіагностику (ІФА, ІФА) та ПЛР, оскільки виділення ХП на штучному живильному середовищі утруднене. Проте існування неспецифічного антитіла, що вказує на перехресну реакцію з ХП за допомогою серодіагностики, повідомляється та часто розпізнається в подібних випадках у наших установах. Крім того, метод ПЛР має обмеження як надійний діагностичний метод з періодичним моніторингом, оскільки ЦП не виявляється у калі після підвищення титру антитіл. Нещодавно ми перевірили інший підхід, щомісяця зберігаючи фекалії тварин. За більш надійну діагностику за безперервно збереженим калом ми прийняли ПЛР-тест на ХП, не підданий впливу антитіл. У цьому звіті ми показуємо нещодавній випадок. (неспецифічні антитіла), щоб провести перевірку потоку, що розвивається в нашій компанії.