Дослідження покращення впливу екстракту фенілетаноїдних глікозидів з Rouchongrong (Cistanche Deserticola) на метаболізм ліпідів у печінці ApoE - / - мишей з дієтою з високим вмістом жиру на основі регуляції експресії ACOX1 - CPT2

РЕФЕРАТ Мета:Щоб дослідитиефекти екстракту фенілетаноїдних глікозидіввідCistanche deserticola(PGCD) на метаболізм ліпідів у печінці ApoE-/- мишей, індукований дієтою з високим вмістом жиру. Методи: 70 самців ApoE-/- мишей, яких годували дієтою з високим вмістом жирів, розділили на 5 груп, модельну (MOD) групу, групу позитивного контролю. Миші отримували аторвастатин [20 мг/(кг·д)] + езетиміб [20 мг/(кг) ·d)](A + E), групи PGCD з низькою, середньою та високою дозамиPGCD[250, 500, 1000 мг/(кг·д)]; ще 14 самців мишей C57BL/6J з дієтою achow були встановлені як група нормального контролю (CON). На 12 вихідних згідно з інструкцією визначали вміст ТГ та активності АЛТ, АСТ у сироватці крові та тканині печінки. Свіжу тканину печінки гомогенізували та визначали вміст синтази жирних кислот (FAS), довголанцюгової ацил-КоА-дегідрогенази (LCAD) і глутатіонпероксидази (GSH-Px),супероксиддисмутаза (СОД)активності перевіряли методом ІФА, а вміст малонового діальдегіду (МДА) та перекису ліпідів (ПОЛ) визначали методом кід. Експресії мРНК ацил-коензим А-оксидази 1 (ACOX1) і карнітинпальмітоілтрансферази 2 (CPT2) були виявлені за допомогою експериментів RT-PCR.

НАТИСНІТЬ ТУТ, ЩОБ ДІЗНАТИСЯ 80%ФЕНІЛЕТАНОЇДНІ ГЛІКОЗИДИНАТУРАЛЬНИЙ ОРГАНІЧНИЙ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНШИ

Служба підтримки Wecistanche - найбільшого експортера cistanche в Китаї:

Електронна адреса:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Тел.:+86 15292862950

Зверніться в магазин, щоб дізнатися більше про технічні характеристики:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Результати:На відміну від модельної групи,три дози PGCD знижували рівень ТГу печінці та сироватці залежно від дози, а також знизив активність АЛТ та АСТ у сироватці. Три дози PGCD знижували вміст FAS залежно від дози і значно підвищували вміст LCAD у печінці.PGCD просуваєтьсяактивності GSH - Px, SOD і значно знизив вміст MDA і ПОЛ в печінці. Експерименти RT-PCR показали, що PGCD підвищив рівні мРНК ACOX1 і CPT2 у тканині печінки.

Висновок:PGCD може покращити метаболізм ліпідів і реакцію на окислювальний стрес, а також зменшити відкладення ліпідів у тканині печінки шляхом регулювання експресії мРНК ACOX1 і CPT2.

Ключові слова:Екстракт фенілетаноїдних глікозидів з Cistanche deserticola; ACOX1; CPT2;ліпідний обмін;окислювальний стрес; ApoE- / - миші

Неалкогольна жирова хвороба печінки(НАЖХП) є одним із найпоширеніших захворювань печінки у світі з поширеністю майже 30% у загальній популяції. Жирова хвороба печінки в Китаї щорічно зростає на 0,594% [1]. Виникнення та розвиток НАЖХП тісно пов’язані з надмірним споживанням калорій організму. Дієта з високим вмістом жирів призводить до надмірного накопичення жиру в печінці та індукує НАЖХП[2], а початковим кроком у її патогенезі є відкладення триацилгліцерину (ТГ) у клітинах печінки[2]3. На сьогоднішній день не існує специфічних терапевтичних препаратів, спрямованих на патогенез НАЖХП. Важливим завданням для дослідників став пошук безпечних ефективних препаратів із чіткими механізмами профілактики та лікування НАЖХП. Cistanche deserticola YC Ma — паразитична рослина з роду Cistanche родини Orobanchaceae. Його основний компонент, фенілетаноїдні глікозиди, має функції підвищення імунної функції організму, запобігає старінню, радіації, має антиоксидантну та гепатопротекторну дію, а також інші ефекти [4-5]. Це дослідження має на меті провести попереднє дослідження механізмуФенілетаноїдні глікозиди з Cistanche deserticola(PGCD) у покращенні ліпідного обміну.

1 Експериментальні матеріали

1.1 Експериментальні препарати

М'ясисті стебла Cistanche deserticola (вміст вологи 8,5%) були придбані у Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; фенілетаноїдні глікозиди (основні компоненти вербаскозид і ехінацеазид) еталонні речовини (чистота обох > 98%) були придбані у Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.; Аторвастатин: Pfizer Shanghai; Езетиміб: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Піддослідні тварини

Самці мишей C57BL/6J і мишей ApoE-/- віком від 6 до 8 тижнів, маса тіла (20 ± 2) г, придбані в Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., номер ліцензії: SCXK (Su) 2016-0010 , 12 год / 12 год світловий цикл, температура (22 ± 1) градус, вологість 50% ~ 60%, вільне споживання їжі та води. Перед експериментом мишей годували стандартною дієтою протягом 1 тижня для адаптації. Весь догляд за тваринами та експерименти відповідають положенням Комітету з етики експериментальних тварин Першого медичного університету Шаньдуна (номер етики: W202107080303).

1.3 Експериментальна реагентів

Корми високої жирності: Харлан Теклад; Набори TG, ALT, AST: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; Комплекти FAS, LCAD: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; Комплект GSH-Px: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; Набори SOD, MDA, LPO, BCA: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Тризол набір: Invitrogen, Carlsbad, CA; Праймери ACOX1 і CPT2: розроблено Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 експериментальних прилади Hei - VAP Expert Rotary Evaporator: Німеччина

Гейдольф; Багатофункціональний рідер мікропланшетів Varioskan LUX: ThermoFisher; FD8508 вакуумна сублімаційна сушарка: Ilshin, Південна Корея; Гомогенізатор F6/10: Shanghai Fluoroco; Високоефективний рідинний хроматограф Agilent1260, спектрофотометр Cary 3500 UV: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT - прилад для ПЛР: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Маса тіла та печінковий індекс

Наприкінці 12-го тижня мишей голодували та зважували. Мишей анестезували пентобарбіталом натрію і умертвляли. Печінку збирали для розрахунку печінкового індексу.

2.3.2 Виявлення сироваткового індикатора

Візьміть сироватку та визначте активності сироваткової аспартатамінотрансферази (AST) і аланінамінотрансферази (ALT) у послідовності відповідно до роботи набору; BCA визначає вміст білка в сироватці крові та виявляє вміст ТГ.

2.3.3 Виявлення факторів ліпідного обміну в тканині печінки

В умовах 4 градусів зважте відповідну кількість свіжої печінки та гомогенізуйте її в PBS, центрифугуйте (радіус центрифуги 7,5 см, 3 000 об/хв) гомогенат протягом 1 хв, візьміть супернатант і виміряйте вміст білка в тканини печінки за BCA. Вміст ТГ в тканині, метод ІФА для визначення вмісту синтази жирних кислот (FAS) і довголанцюгової ацил-КоА дегідрогенази (LCAD) в тканині печінки.

2.3.4 Виявлення факторів окислення, пов'язаних з тканиною печінки

За умов 4 градусів зважте відповідну кількість свіжої печінки та гомогенізуйте її в PBS, відцентрифугуйте гомогенат (радіус центрифугування 7,5 см, 3 000 об/хв) протягом 15 хв, візьміть супернатант і виміряйте вміст білка в тканини печінки з BCA. Дотримуйтеся реагентів. Інструкції на коробці виявляють активність супероксиддисмутази (SOD) і глутатіонпероксидази (GSH-Px), а також одночасно визначають рівні малонового діальдегіду (MDA) і пероксиду ліпідів (LPO).

2. 3. 5 ОТ-ПЛР детекція

Експресія мРНК ACOX1/CPT2 у тканині печінки: Візьміть відповідну кількість свіжої тканини печінки, використовуйте набір Trizol для вилучення загальної мРНК тканини печінки, використовуйте зворотну транскриптазу MuLV для синтезу кДНК і використовуйте кДНК як матрицю для виконання кількісного дослідження флуоресценції в реальному часі ПЛР (Qpcr) виявлення. , умови реакції були: попередня денатурація при 95 градусах протягом 2 хвилин; денатурація при 95 градусах протягом 10 секунд, відпал: 60 градусів протягом 30 секунд, розширення при 72 градусах протягом 35 секунд, 34 цикли і, нарешті, розширення при 72 градусах протягом 5 хвилин, і кількісне визначення в реальному часі за допомогою автоматичного аналізатора. Експресія мРНК ACOX1 і CPT2. Програмне забезпечення Rotor-gene Q. 1.7 (Qiagen) використовували для аналізу даних, а метод 2-△△Ct використовували для підрахунку відносних рівнів мРНК і GAPDH. Кожну групу дослідів проводили паралельно > 3 разів. Послідовності праймерів такі: GAPDH, вище: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', нижче: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, вгору: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' вниз за течією: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, вище за течією: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' за течією: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Статистичні методи

Для аналізу даних використовувалося статистичне програмне забезпечення SPSS 20.0. Дані вимірювань виражали як (x ± s). Для порівняння між групами використовували односторонній дисперсійний аналіз. Р <0,05 вважали статистично значущою різницею.