SLC37A2, споріднена з фосфором молекула збільшує кількість клітин гладких м’язів у кальцифікованій аорті Ⅱ

Результати

Пошук молекул-кандидатів уфосфат-індукований кальцинованийAoSMC. Щоб знайти молекули, експресія яких посилюється в кальцифікованих AoSMC, було проведено мікроматричний аналіз ДНК приблизно 26 000 генів з використанням кальцинованої AoSMC і некальцинованої мРНК AoSMC. На малюнку 1 показано HeatMap різних генів, експресованих між AoSMC, не культивованими з 2,6 мМ, і тими, що культивувалися з 2,6 мМ P протягом 12 днів. Загалом 3066 генів збільшилися більш ніж у два рази на культивованих AoSMC порівняно з некультивованими. Гени з підвищеною експресією були молекулами, пов’язаними з утворенням остеобластів, такими як остеопонтин, періостін, остеобласт-специфічний фактор (POSTN), Wnt3, інтерлейкін-6 (IL-6) іфактор росту фібробластів23 (FGF23), а також кілька молекул у суперсімействі SLC (Таблиця 1). Серед цих молекул ми зосередилися на SLC37A2, для якої кількість мРНК збільшилася приблизно в 3,1 рази на AoSMC, культивованому з 2,6 мМ P протягом 12 днів, порівняно з AoSMC, не культивованим з 2,6 мM P. Повідомлялося, що SLC37A2 пов’язаний з регуляцією P, але його детальна функція невідома. запалення на експресії SLC37A2.Кальцифікація судинПовідомлялося, що це сприяє запаленню, тому ми перевірили, чи впливає на мРНК SLC37A2 запальна відповідь. Через 24 години після лікування ЛПС IL-6 значно збільшився порівняно з AoSMC без лікування ЛПС (рис. 2A). Ці результати також спостерігалися через 72 години після лікування LPS. Не було істотних відмінностей між групами в експресії мРНК SLC37A2 (рис. 2B).

НАТИСНІТЬ ТУТ, ЩОБ ОТРИМАТИ НАТУРАЛЬНИЙ ОРГАНІЧНИЙ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНШИ З 25% ЕХІНАКОЗИДУ ТА 9% АКТЕОЗИДУ ДЛЯ ФУНКЦІЇ НИРОК

Служба підтримки Wecistanche - найбільшого експортера cistanche в Китаї:

Електронна адреса:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Тел.:+86 15292862950

Зверніться в магазин, щоб дізнатися більше про технічні характеристики:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Експресія SLC37A2 у фосфат-індукованих кальцифікованих AoSMC. Щоб визначити, чи бере участь SLC37A2 у кальцифікації, ми перевірили експресію мРНК SLC37A2 на некальцифікованих і кальцифікованих AoSMC (рис. 3). Кальцифікація спостерігалася в AoSMC, культивованих з 2,6 мМ P протягом 6 днів, і більш прогресивна кальцифікація спостерігалася в AoSMC, культивованих з 2,6 мМ P протягом 12 днів (рис. 3A). МРНК Runx2 значно збільшилася на кальцифікованих AoSMC порівняно з некальцинованими AoSMC (рис. 3B). МРНК SLC37A2 значно почала збільшуватися на 3-й день у кальцифікованих AoSMC, а на 9 день кальцифіковані AoSMC значно збільшилися приблизно вдвічі порівняно з некальцинованими AoSMC (рис. 3C). Експресія білка SLC37A2 значно зросла приблизно вдвічі на 6 день у кальцифікованих AoSMC порівняно з некальцинованими AoSMC (рис. 3D).

Експресія SLC37A2 у модельних щурів ХХН.

Щоб виявити, чи бере участь SLC37A2 у кальцифікації судин in vivo, ми дослідили експресію мРНК SLC37A2 на судинах щурів із ХХН, індукованим аденіном. Щурів із ХХН, індукованим аденіном, створювали згідно з протоколом, показаним на фіг. 4A. Таблиця 2 показує масу тіла та біохімічні дані в день умертвіння. Маса тілаХХН, індукована аденіному щурів було значно нижчим порівняно з щурами без ХХН. Порівняно з групою без ХХН, групи з ХХН мали вищі рівні P і Cr у плазмі крові та нижчі рівні Ca в плазмі та 24-годинну екскрецію P, Ca і Cr із сечею. Крім того, ці результати були більш помітними в групі ХХН-НР, як видно з попередніх досліджень.37,39) Таким чином, функція нирок знизилася в групі ХХН, особливо в групі ХХН-НР. Ми досліджували експресію мРНК в судинах аорти щурів із ХХН (рис. 4). Хоча не було суттєвих відмінностей у експресії мРНК Runx2, транскрипційного фактора, який переміщується на ранній стадії механізму кальцифікації судин, між групами (рис. 4B) експресія мРНК остеопонтину значно зросла в групі ХХН-ГП порівняно з групою без CKD група таГрупа CKD-LP(Рис. 4C). Експресія мРНК SLC37A2 також була значно збільшена в групі CK D-HP порівняно з групою без ХХН і групою CKD-LP (рис. 4D). Оскільки у цих щурів були великі індивідуальні відмінності, ми дослідили кореляцію між остеопонтином і мРНК SLC37A2 і виявили значну кореляцію між цими молекулами (рис. 4E). Гістологічне дослідження торакоабдомінальної аорти виявило медіальний кальцифікат лише в аорті групи CKD-HP (рис. 5A). Щоб дослідити місце експресії SLC37A2 на аорті, ми провели імунне фарбування аорти CKD-HPrats. SLC37A2 сильно експресувався в області, декальцифікація судинвідбулося (рис. 5B).

Рис. 1. Теплова карта по-різному експресованих генів між AoSMC, некультивованими з 2,6 мМ Ф, і AoSMC, культивованими з 2,6 мМ Ф. Червоний колір представляє гени з високим рівнем сигналу, а зелений — гени з низьким рівнем сигналу. Гладком’язові клітини аорти AOSMC. Дивіться малюнок в онлайн версії.

Обговорення

Ми досліджували молекули-кандидати, пов'язані з P, які беруть участь у кальцифікації судин. Наші результати показали, що SLC37A2 є однією з молекул, які збільшуютьсякальцифікація судинin vitro та in vivo.

Сімейство SLC37 належить до надродини SLC і включає білки: SLC37A 1-440) Сімейство SLC37 містить трансмембранні білки в мембрані ендоплазматичного ретикулуму та має послідовність, гомологічну бактеріальному органофосфатфосфатному антипортеру. (41) SLC37A4 більш відомий яктранспортер глюкозо6-фосфату.(2-44 Однак є кілька повідомлень про SLC37A2, і деталі його функції не повністю зрозумілі. SLC37A2, також відомий як SPX2, рясно експресується в мишачих макрофагах, селезінці, тимусі та білій жировій тканині (WAT ) мишачих моделей із генетичним ожирінням і остеокластоподібних клітин, отриманих із клітин Raw264.7. (45.6) Білок SLC37A2 транспортує глюкозо-6-фосфатний і фосфатний/фосфатний обміни. (4) Нещодавні звіти показали зв’язок SLC37A2 із захворюванням тварин. (47-49) Дефект SLC37A2 викликаєчерепно-нижньощелепна остеопатія(CMO), самообмежуюча проліферативна хвороба кісток у порід тер’єрів. (47) У молочної худоби гомозиготна мутація SLC37A2 є відповідальною за смерть ембріона. (8.9) Крім того. SLC37A2 вважається мішенню для цільових генів вітаміну D. (так) Також розглядався потенціал гена-мішені рецептора фосфору-Ser294 прогестерону в прогресуванні раку молочної залози (1). Повідомлялося, що запалення може як викликати, так і посилювати кальцифікацію судин. (2s26) Крім того. SLC37A2 рясно експресується в макрофагах і WAT, на які впливає інфільтрація макрофагів. (s) Отже. ми вважали, що SLC37A2 може бути молекулою, що експресується під час запалення. Однак наші результати не показали збільшення експресії SLC37A2 в AoSMC, що піддається запальній відповіді, на цю молекулу, схоже, не впливає безпосередньо запальна стимуляція. SLC37A2 може брати участь у кальцифікації судин через механізм, відмінний від запалення.

Повідомлялося, що SLC37A2 діє як P-зчепленийантипортер. (41) Крім того, повідомлялося, що SLC37A2 є геном-мішенню для вітаміну D, а ген SLC37A2 містить головний сайт зв’язування рецепторів вітаміну (ss2). Систематично корельовані зміни в експресії генів SLC37A2 і циркулюючих форм вітаміну D. було виявлено в мононуклеарних клітинах периферичної крові людини. (50) Рецептори вітаміну D зв’язуються з 1a, 25-дигідроксивітаміном D, який є метаболітом вітаміну D, і регулюють експресію генів. lo, 25-дигідроксивітамін D, бере участь у всмоктуванні Ca і P у кишечнику, мобілізації Ca в кістках і реабсорбції Cain у нирках. (3) Є повідомлення про те, що у щурів на моделі ХХН, спричиненої аденіном, сироватковий рівень la, 25-дигідроксивітаміну D був значно вищим у щурів, які споживали дієту з високим вмістом фосфору, з розвиненою кальцифікацією судин, порівняно з щурами з низьким вмістом вітаміну D. -p дієта.39) SLC37A2 може бути пов’язаний з регуляцією P через вітамін D. Необхідні подальші дослідження, щоб з’ясувати, що вітамін D впливає на експресію SLC37A2 in vitro та vivo.

Було показано, що механізм кальцифікації судин подібний до механізму формування кісток. Дефіцит SLC37A2, викликаний CMO, клінічно можна порівняти з інфантильним кортикальним гіперостозом у людини, також відомим як хвороба Коффі.7 Крім того, є повідомлення, що SLC37A2 експресується в кістковому мозку та остеокластах.o Hytone та ін. (7 висунули гіпотезу, що дисфункція SLC37A2 може спричинити дисбаланс у функції остеобластного та остеокластного формування кісток і, як наслідок, призвести до гіперостозу.

Runx2 є важливим фактором транскрипції для кальцифікації судин. Також повідомляється, що Runx2 є транскрипційним фактором диференціювання остеобластів, який експресується в епітеліальних клітинах молочної залози, що розвиваються. (s435) Runx2, здається, необхідний для регуляції цільових генів прогестерону фосфор-Ser294, які пов’язані з прогресуванням раку молочної залози. SLC37A2 вважається кандидатом на цільовий ген рецептора прогестерону фосфор-Ser294. (s1) Таким чином, вважається, що Runx2 може регулювати SLC37A2. У цьому дослідженні експресія мРНК SLC37A2 в аорті щурів CkD корелювала з мРНК остеопонтину, яка націлена на ген Runx2.