Фенілетаноїдні глікозиди: метод розділення загальних глікозидів фенетилового спирту та його інгібуючий вплив на моноаміноксидазу-А

Контакти:joanna.jia@wecistanche.com

Виділення та ідентифікація фенілетаноїдних глікозидів з Aloysia Polystachya та їх активність як інгібіторів моноаміноксидази-А

Автори

Ana Maria S. Pereira1, Camila C. Guimarães1, Sarazete IV Pereira1, Eduardo J. Crevelin2, Gustavo HT Pinto1, Lucas JF Morel1, Bianca W. Bertoni1, Suzelei C. França1, Silvia H. Taleb-Contini1

Приналежності

1 Departamento de Biotecnologia em Plantas Medicinais, Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP), Ribeirão Preto, SP, Бразилія

2 Departamento de Química, Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Universidade de

Сан-Паулу (USP), Монте-Алегрі, Рібейран-Прету, SP, Бразилія

Ключові слова:aloysia polystachya, verbenaceae, антидепресивна активність, фенілетаноїди, інгібітори моноаміноксидази, актеозид

Анотація

Aloysia polystachya використовується як заспокійливий засіб і антидепресант корінним населенням Аргентини та Парагваю, але сполуки, пов’язані з цією діяльністю, не були визначені. Ми відокремили та ідентифікували основні складові гідроетанольного екстракту A. polystachya за допомогою ультраефективної рідинної хромато-мас-спектрометрії та підтвердили наявність актеозиду, ізоактеозиду, 6'-ацетилактеозиду та 4',4''',5, 5''-тетрагідрокси-6,6'',3'''-триметокси-[C7–O–C7'']-біфлавон за допомогою ЯМР-спектроскопії. Інгібіторна активність гідроетанольного екстракту та очищенняфенілетаноїдні глікозидипроти моноаміноксидази-А оцінювали за допомогою стандартного флуорометричного аналізу. Гідроетанольний екстракт пригнічував активність моноаміноксидази-А залежно від дози з IC50 9,2 мкг/мл, тоді як селективний інгібітор моноаміноксидази клоргілін показав IC50 0,06 мкг/мл ( 0,22 мкМ).Актеозидбув найсильнішим інгібітором моноаміноксидази-А (значення IC50 5 мкМ), тоді як ізоактеозид і 6'-ацетилактеозид показали значення IC50 близько 10 мкМ. Результати показали, що фенілетаноїди з гідроетанольного екстракту A. polystachya мають інгібуючу дію проти моноаміноксидази-А. Імовірно, механізм дії актеозидів є багатоцільовим, включаючи пригнічення запальних молекул і нейтралізацію реакцій окислення, а також інгібування моноаміноксидази-А.

вступ

Згідно з нещодавньою доповіддю Всесвітньої організації охорони здоров’я [1], понад 320 мільйонів людей (4,4 відсотка населення світу) страждають від депресії та тривожних розладів, при цьому приблизно 800 тисяч самогубств щорічно вчиняються через ці психічні розлади. . Хоча лікування синтетичними антидепресантами

доступний, багато пацієнтів страждають від таких побічних ефектів, як сухість у роті, запор, запаморочення, розмитість зору, підвищений апетит, збільшення ваги, безсоння та проблеми з нирками [2]. З цієї причини підходи з використанням комплементарної та нетрадиційної медицини, включаючи фітотерапію, використовуються для лікування кількох типів психічних розладів [3].

Cistanche deserticola має багато ефектів, натисніть тут, щоб дізнатися більше

Різноманітні доклінічні та клінічні дослідження надали докази на підтримку переваг лікарських засобів на основі рослин у лікуванні загальних та специфічних тривожних розладів [4, 5]. Особливий інтерес представляють дослідження анксіолітичних властивостей Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verbenaceae), ароматичного виду, що зустрічається переважно в Аргентині та Парагваї. Згідно з етнофармакологічними дослідженнями, місцеве населення використовує рослину, яка широко відома як буріто, як травний, седативний та антидепресивний тонік [6, 7]. Незважаючи на те, що анксіолітичні та антидепресивні властивості гідроетанольних екстрактів A. polystachya були підтверджені доклінічними дослідженнями [8–10], фітохімічні дослідження з метою ідентифікації сполук, пов’язаних із цією діяльністю, не проводились.

Раніше було показано, що антидепресивна дія деяких лікарських рослин, наприклад Hypericum perforatum L. (Hypericaceae) і Peganum harmala L. (Nitrariaceae), пов’язана з пригніченням моноаміноксидази-А (МАО-А) [11]. –13]. Сімейство МАО поширене в центральній і периферичній нервовій системах, і надмірна експресія цих ферментів сприяє окислювальному дезамінуванню моноамінів зі зниженням рівня нейромедіаторів серотоніну, норадреналіну та дофаміну, що призводить до виникнення психічних розладів. Такі процеси дезамінування також генерують такі речовини, як перекис водню, безкисневі радикали та альдегіди, які відповідають за окислювальний стрес клітин. МАО існують у двох основних ізоформах, які відрізняються розподілом, субстратною специфічністю та чутливістю до інгібіторів. Ізоформа МАО-А відіграє важливу роль у депресії та тривожних розладах, тоді як МАО-В бере участь у нейродегенеративних захворюваннях [13–17].

У світлі вищесказаного ми припустили, що анксіолітичні та антидепресивні властивості A. polystachya походять, принаймні частково, від присутності інгібіторів MAO-A. Щоб перевірити цю гіпотезу, ми визначили активні компоненти, присутні в гідроетанольному екстракті з листя A. polystachya, і оцінили вплив неочищеного екстракту та основних компонентів, виділених з нього, на активність МАО-А.

Результати і обговорення

Гідроетанольний екстракт з листя A. polystachya був підданий ультраефективній рідинній хроматографії-мас-спектрометрії (UPLC-MS), і отримана таким чином хроматограма попередньо наведена на ▶Рис. 1а. Основні компоненти екстракту були очищені за допомогою колонкової хроматографії та обернено-фазової високоефективної рідинної хроматографії (RP-HPLC) і ідентифіковані якактеозид(синвербаскозид), ізоактеозид, 6'-ацетилактеозид і 4',4''',5,5''-тетрагідрокси-6,6'',3''''-триметокси-[C7–O– C7'']-біфлавон шляхом порівняння їх 1H- і 13C-ЯМР, HSQC, HMBC (▶Таблиця 1S, 2S, Додаткова інформація) і даних MS (▶Мал. 1b-e) зі значеннями, наведеними в літературі [18 –20]. Концентраціяактеозиду гідроетанольному екстракті, як визначено за допомогою ВЕРХ, становив 108,65 ± 1,3 мкг/мг сухого екстракту. Це перший запис про компоненти екстрактів листя A. polystachya, хоча ефірну олію рослини було проаналізовано раніше та виявлено, що вона містить монотерпени карвон і лімонен як основні компоненти [21].

Неочищений гідроетанольний екстракт з листя A. polystachya пригнічував активність MAO-A залежно від дози (▶Рис. 2a) з IC50 9,2 мкг/мл, тоді як селективний інгібітор MAO клоргілін демонстрував IC5 0 0,06 мкг/мл (0,22 мкМ). Очищенийактеозидитакож виявляв інгібуючу дію щодо MAO-A (▶Рис. 2b), причому актеозид демонстрував найнижче значення IC50 5 мкМ (3,1 мкг/мл), за яким йшов ізоактеозид з IC50 10,1 мкМ (6,3 мкг/мл) і 6'- ацетилактеозид з IC50 9,5 мкМ (6,3 мкг/мл). Інгібування MAO-A призводить до відновлення рівнів серотоніну, норадреналіну, дофаміну та тираміну, які є ключовими нейромедіаторами в контролі тривоги та депресії [16]. Таким чином, наявність різноманітних інгібіторів МАО-А в листі A. polystachya пояснює, принаймні частково, раніше зареєстровану антидепресивну та анксіолітичну активність цього виду [8–10].

Використання багатокомпонентних рослинних сумішей може бути корисним при лікуванні захворювань складної етіології, таких як тривожність, депресія та інші неврологічні стани. В даний час використання фітопрепаратів при лікуванні захворювань нервової системи базується на парадигмі багатоцільово спрямованих лігандів,

тобто фармацевтичні препарати, які мають багатоцільову дію внаслідок присутності таких речовин, як поліфенольні речовини з протизапальними, антиоксидантними та інгібіторними властивостями МАО, які здатні надавати нейропротекторію [20, 22–25].

Однак варто зазначити, що полярний характер поліфенольних речовин може перешкоджати взаємодії з їх молекулярними мішенями. Тим не менш, клінічні дослідження продемонстрували, що контакт між поліфенолами та неполярними вторинними метаболітами, присутніми в екстрактах, може змінювати проникність клітинних мембран і полегшувати поглинання полярних сполук [23]. Таким чином, комплексні рослинні екстракти, що містять багатоцільові агенти, які взаємодіють зі своїми рецепторами плейотропним способом, створюють фармакологічний синергізм, який впливає на численні процеси, включаючи рух полярних метаболітів через клітинні мембрани. У цьому контексті Li et al. [26] використали модель рибки даніо, щоб продемонструвати цеактеозидміг проникати через гематоенцефалічний бар'єр, і припустив, що глікозид фенілетаноїд може мати потенційний терапевтичний ефект при хворобі Паркінсона.

Моноамінергічні нейротрансмітери є головними мішенями сучасних антидепресантів, оскільки їх дефіцит є причиною виснажливих симптомів депресії. Нещодавнє дослідження in vivo показало, що етанольні та водні екстракти Lippia citriodora (Verbenaceae) та їх основний компонентактеозидвиявляли анксіолітичну, снодійну та міорелаксуючу дію, і ці властивості частково пояснювали взаємодією з рецептором гамма-аміномасляної кислоти (GABAA) типу А [27].

Клінічні дослідження показали, що препарати зі здатністю блокувати запальні цитокіни, такі як TNF-, або інші компоненти запального сигнального шляху, наприклад, циклооксигеназу-2 (COX-2), ефективні для зниження депресивні симптоми у пацієнтів з ревматоїдним артритом, псоріазом і раком, а також у тих, хто страждає на серйозні психічні розлади [28]. У цьому контексті повідомляється, щоактеозидможе послабити виробництво та вивільнення запальних молекул, таких як оксид азоту (NO), TNF- та інтерлейкін 12 (IL-12) у макрофагах, стимульованих ліпополісахаридом/інтерфероном (LPS/IFN-) [29] , а також гістаміну та арахідонової кислоти в тучних клітинах RBL-2H3 [30]. На додачу,актеозидздатний знижувати рівні TNF-, IL-1, IL-8, IL-6 і NO, а також активувати каспазу-1, ядерний фактор каппа-B

(NF-κB), NO-синтази та білка-активатора-1 [31], індукованого IL-32 та/або LPS у TH-1 клітинах і макрофагах [32].

Деякі з цих медіаторів запалення, такі як IFN, IL-6, IL-8 та IL-1, були виявлені на аномальних рівнях як у периферичних, так і в посмертних зразках тканин від депресивних осіб , і були пов’язані з симптомами депресії [33]. Активація цих молекул психосоціальними стресовими факторами може сприяти значним функціональним змінам у мозку, що призводить до розвитку депресивної поведінки та інших психічних розладів. Наприклад, IFN, IL-1 і TNF- можуть підвищувати експресію та функцію рецепторних насосів серотоніну, норадреналіну та дофаміну, таким чином зменшуючи доступність цих нейромедіаторів у синаптичній щілині [28]. Крім того, IFN-, IL-6, TNF- та окислювальний стрес можуть активувати індолеамін-2,3-діоксигеназу (IDO), фермент, відповідальний за розпад триптофану, і, таким чином, зменшити концентрацію первинного попередника синтез серотоніну [34].

Актеозид, ізоактеозид і 6'-ацетилактеозид містять гідроксифенілетильний і кофеоїльний фрагменти, які, як відомо, пов’язані з антиоксидантними властивостями [35, 36], а сам актеозид виявляє значну антиоксидантну активність [37]. Дослідження показали, щоактеозидпригнічує агрегацію -амілоїдного пептиду (A) залежно від дози, функціонує як нейропротекторний агент і покращує пам'ять, і ці властивості пояснюються антиоксидантною активністю агента [38, 39]. Враховуючи, що численні багаті фенолами види з антиоксидантними властивостями використовуються для лікування неврологічних розладів [15], було припущено, що антидепресивний і анксіолітичний ефектифенілетаноїдні глікозидивиділені з A. polystachya також можуть бути результатом їхньої антиоксидантної активності. Це припущення підтвердили Xu et al. [40], який представив докази щодо зв’язку між підвищеним окислювальним стресом і депресією/тривогою.

На підставі вищезазначеного ми робимо висновок, що антидепресивні властивості гідроетанольного екстракту з листя A. polystachya та очищених фенілетаноїдів, виділених з нього, можна пояснити багатоцільовими механізмами дії, що включають інгібування MAO-A, зниження регуляції запальних молекул і нейтралізації реакцій окислення. Таким чином, наведені тут результати підтверджують нашу початкову гіпотезу про те, що анксіолітична та антидепресивна активність гідроетанольного екстракту A. polystachya є результатом, принаймні частково, інгібування MAO-A. Однак взаємозв'язок структура-діяльністьфенілетаноїдні глікозидивиявлені в цьому дослідженні, потребують додаткової уваги, щоб нові молекули могли бути розроблені для лікування конкретних неврологічних розладів.

Матеріали та методи

Рослинний матеріал

Листя A. polystachya були зібрані у Farmácia da Natureza da Terra de Ismael (Jardinópolis, SP, Бразилія) у січні 2016 року. Рослинний матеріал ідентифікувала доктор Лусія Россі (Instituto Botânico, São Paulo, SP, Brazil), і зразок ваучера було збережено в Гербарії лікарських рослин ЮНАЕРП з номером ваучера

HPM-1213.

HPM-1213. Дозвіл на оцінку біологічної активності екстрактів бразильських рослин надав Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis ​​(№ 02001.005074/ 2011-19).

Приготування гідроетанольного екстракту Aloysia polystachya

Листя (1000 г) сушили протягом 72 годин у духовці з циркуляцією повітря при 45 градусах, подрібнювали та пропускали через 40-сітчасте сито. Порошкоподібний матеріал замочували у воді:етанол (20:80; об’єм/об’єм) протягом 7 днів і потім фільтрували через фільтрувальний папір Whatman № 41. Фільтрат висушували на роторному випарнику та ліофілізували з отриманням

130,2 г сухого сирого екстракту, в результаті співвідношення екстракту препарату становить 7,6:1.

Розділення та ідентифікація складових за допомогою ультраефективної рідинної хроматографії-мас-спектрометрії

Хроматографічні аналізи проводили з використанням системи Waters Acquity UPLC H-Class, оснащеної детектором з діодною матрицею (DAD) і тандемного квадрупольного мас-спектрометра Waters Xevo TQ-S з джерелом Z-розпилення, що працює в режимі негативних іонів. Базові розчини, що містять 1.0 мг/мл екстракту або стандартиактеозид, ізоактеозид, 6'-ацетилактеозид і 4',4''',5,5''-тетрагідрокси-6,6'',3''''-триметокси-[C7–O–C7''] -флавон у метанолі LC-grade готували окремо, оброблюючи ультразвуком протягом 30 хв кожну, якщо необхідно, і фільтрували через 0.45 мкм фільтри Millipore (Merck Millipore). розчини розбавляли до 10 мкг/мл метанолом, і аліквоти (5 мкл) вводили в колонку Sigma-Aldrich Ascentis Express C18 (100 × 4,6 мм внутр.; розмір частинок 2,7 мкм). Рухома фаза складалася з води, що містила 0,1 відсотка мурашиної кислоти (розчинник А) і метанолу, що містив 0,1 відсотка мурашиної кислоти (розчинник В), що подавався зі швидкістю потоку 0,5 мл/хв відповідно до профілю елюювання: ізократичний з 3 відсотками В між 0 і 4 хвилини, потім лінійні градієнти від 3 до 60 відсотків B між 4 та 19 хвилинами та від 60 до 90 відсотків B між 19 та 23 хвилинами, і, нарешті, повернення до 3 відсотків B між 23 та 28 хвилинами. Ефлюент контролювався за допомогою DAD в діапазоні від 210 до 720 нм і за допомогою MS з оптимізованим джерелом і робочими параметрами, такими як: капілярна напруга-

вік 2,50 кВ, температура джерела Z-розпилення 150 градусів, температура десольватації (N2) 350 градусів, потік десольватованого газу 600 л/год і діапазон мас від m/z від 150 до 600 у режимі повного сканування.

Очищення ідентифікованих компонентів

Неочищений гідроетанольний екстракт (10 г) розчиняли у воді:етанол (50:50; об./об.) і послідовно розподіляли проти гексану, етилацетату та н-бутанолу. Фракцію бутанолу концентрували на роторному випарнику, а 3 г зразка фракціонованого екстракту наносили на скляну колонку (10 × 3 см зовнішнього вигляду), заповнену силікагелем C-18 RP (230-400 меш; Sigma). -Aldrich) і елююють водою, а потім послідовними сумішами вода:метанол (90:10, 50:50 і 10:90; об./об.). Субфракція, отримана шляхом елюювання водою:метанол (90:10; об’єм/об’єм), була додатково очищена за допомогою ВЕРХ з обертовою поверхнею за допомогою системи Shimadzu LC-20AP, з’єднаної з детектором SPD-20A UV/Vis і оснащений колонкою Phenomenex Luna® C-18 (внутрішній діаметр 250 × 10 мм; розмір частинок 5 мкм). Рухомою фазою була вода: метанол, починаючи з 90:10 (об./об.) і змінюючись до 30:70 (об./об.) за 100 хв, щоб отримати чотири відомі сполукиактеозид(750 мг), ізоактеозид (430 мг), 6'-ацетилактеозид (42 мг) і 4',4'',5,5''-тетрадрокси-6,6'',3'''' -триметокси-[C7–O–C7'']-флавон (13 мг). Швидкість потоку рухомої фази становила 1 мл/хв, об’єм ін’єкції – 500 мкл, хроматограму записували при 340 нм, УФ-спектри отримували в діапазоні від 240 до 400 нм. Ідентичність очищених компонентів була підтверджена їх спектрами 1H- (500 МГц) і 13C-ЯМР (125 МГц), записаними на спектрометрі Bruker model DPX 500, і порівнянням даних з даними, доступними в літературі [18, 19, 41]. Чистоту виділених сполук було підтверджено за допомогою UPLC-DAD-MS (▶Рис. 1b–d) та ЯМР (▶Рис. S1–S12, Додаткова інформація).

Кількісне визначення актеозиду за допомогою діодної матриці HPLCдетектор

цей розчин було проаналізовано на системі Shimadzu LC{{{{10}}}}APvp, з’єднаній із SPD-M10Avp DAD і оснащеною колонкою Phenomenex Luna C18 (250 × 4,6 мм). внутрішній діаметр, 5 мкм), захищений попередньою колонкою Phenomenex C18 (4,0 × 3,0 мм внутрішній діаметр, 5 мкм). Розділення проводили при кімнатній температурі (22 ± 1 градус) з використанням рухомої фази, що містить 0,1 відсотка оцтової кислоти у воді (розчинник А) і метанолі (розчинник В;

JT Baker HPLC grade) подається з постійною швидкістю потоку 1.0 мл/хв відповідно до програми: лінійний градієнт від 10 до 70 відсотків B між 0 та 32 хвилинами, від 70 до 10 відсоток B між 32 і 35 хвилинами, а кінцеве ізократне елюювання з 10 відсотками B між 35 і 40 хвилинами. Довжина хвилі виявлення була встановлена ​​на 330 нм.

Вміст актеозиду в екстракті оцінювали за допомогоюактеозид(Sigma-Aldrich; № CAS 61276-17-3) як зовнішній стандарт. Були приготовлені розчини, що містять 500, 250, 125, 62,5, 31,2 і 15,6 мкг/мл еталонного стандарту, і калібрувальні криві були побудовані шляхом аналізу ВЕРХ кожного розчину в трьох повторах [42 ]. Співвідношення площі піку стандартного актеозиду до відповідної концентрації аналіту було встановлено за допомогою лінійної регресії стандартних кривих (▶Рис. S13, Додаткова інформація). Аналітичні дані були перевірені щодо лінійності, прецизійності та точності відповідно до вказівок, виданих Agência Nacional de Vigilância Sanitária [42]. Межі виявлення (LoD) і кількісного визначення (LoQ) актеозиду становили 0,30 і 0,92 мкг/мл відповідно.

Тести інгібування моноаміноксидази-А

Рекомбінантний людський MAO-A, тирамін, клоргілін, ванілінова кислота, 4-аміноантипірин і пероксидаза хрону були придбані у Sigma-Aldrich. Аналіз інгібування MAO-A проводили з використанням 96-лункових планшетів за модифікованою версією методу, описаного López et al. [43]. Кожну лунку завантажували 50 мкл хромогенного розчину (0,8 мМ ванілінова кислота, 2,5 мМ 4-аміноантипірину та 4 Од/мл пероксидази хрону у фосфатному буфері при pH 7,6), 100 мкл 3 мМ тираміну та аліквоту 50- мкл неочищеного гідроетанольного екстракту або одного з очищених фенілетаноїдів, розчинених у метанолі. Нарешті, аліквоти 50 мкл 8 ОД/мл MAO-A додавали в кожну лунку, і планшет інкубували при 37 градусах протягом 30 хвилин, протягом якого кожні 5 хвилин реєстрували абсорбцію за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів. Клоргілін (більше або дорівнює 97 відсоткам GC; Sigma-Aldrich) і метанол були включені як позитивний і негативний контролі, відповідно, на кожній планшеті для аналізу.

Статистичний аналіз

Було проведено три незалежні оцінки інгібіторної активності MAO-A, а отримані дані проаналізовано за допомогою програмного забезпечення GraphPad Prism. Значення IC50 гідроетанольного екстракту, очищених фенілетаноїдів і позитивного контролю розраховували за допомогою нелінійної регресії, імітуючи графіки залежності логарифму (концентрації інгібітора) від нормалізованого відсотка інгібування.

Допоміжна інформація

Спектри ЯМР Н та 13Сактеозид, ізоактеозид, 6'-ацетилактеозид і 4',4''',5,5''-тетрагідрокси-6,6'',3''''-триметокси-[C7–O– C7''] -флавон і кореляційний аналіз HSQC/HMBC для трьох фенілетаноїдів доступний як Допоміжна інформація.

отримано 04.06.2018

переглянуто 19.10.2018

прийнято 24.10.2018

Бібліографія

DOI https://doi.org/10.1055/a-0787-1665

Planta Med Int Open 2019; 6: e1–e6

© Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · Нью-Йорк ISSN 2509-9264

Листування

Ана Марія С. Перейра

Departamento de Biotechnologia em Plantas Medicinais

Universidade de Ribeirão Preto Av. Costábile Romano 2201 14096-900 Ribeirânia

Рібейран-Прету, SP

Бразилія

Список літератури

[1] Всесвітня організація охорони здоров'я. Депресія та інші поширені психічні розлади: глобальні оцінки охорони здоров'я. Женева: ВООЗ; 2017 рік

[2] Фергюсон Дж.М. Антидепресанти СІЗЗС: побічні ефекти та переносимість. Prim Care Companion J Clin Psychiatry 2001; 3: 22–27

[3] ван дер Ватт Г, Логарн Дж, Янка А. Додаткова та альтернативна медицина в лікуванні тривоги та депресії. Curr Opin Psychiatry 2008; 21: 37–42

[4] Сарріс Дж., Макінтайр Е., Кемфілд Д.А. Ліки на рослинній основі для лікування тривожних розладів, частина 1: Огляд доклінічних досліджень. Препарати ЦНС 2013; 27: 207–219

[5] Сарріс Дж., Макінтайр Е., Кемфілд Д.А. Ліки на рослинній основі для лікування тривожних розладів, частина 2: Огляд клінічних досліджень із доклінічними доказами. Препарати ЦНС 2013; 27: 301–319

[6] Дель Вітто Л.А., Петенатті Е.М., Петенатті М.Є. Recursos herbolarios de San Luis (República Argentina). Primera parte: Plantas Nativas. Мультеквіна 1997; 6: 49–66

[7] González Y, Arrúa RD, Rojas GD, García MG. Etnofarmacobotánica foliar de "burrito", Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verben-aceae), культивована в Парагваї. Роясіана 2014; 13: 31–41

[8] Мора С, Діас-Веліс Г, Міллан Р, Лунгенштрасс Х, Кірос С, Кото-Моралес Т, Хелліон-Ібаррола МС. Анксіолітичні та антидепресивні ефекти водно-спиртового екстракту з Aloysia polystachya у щурів. Pharmacol Biochem Behav 2005; 82: 373–378

[9] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Tortoriello J, Fernández S, Wasowski C, Marder M, De Lima TCM, Mora S. The anxiolytic-like effects of Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verbenaceae) у мишей. J Ethnopharmacol 2006; 105: 400–408

[10] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Ferro EA, Alvarenga N, Tortoriello J, De Lima TCM, Mora S. The antidepressant-like effects of Aloysia polystachya (Griseb. ) Moldenke (Verbenaceae) у мишей. Фітомедицина 2008; 15: 478–483

[11] Herraiz T, González D, Ancín-Azpilicueta C, Arán VJ, Guillén H. -Карболінові алкалоїди в Peganum harmala та інгібування людської моноаміноксидази (MAO). Food Chem Toxicol 2010; 48: 839–845

[12] Herraiz T, Guillén H, Arán VJ, Salgado A. Ідентифікація, поява та активність алкалоїдів хіназоліну в Peganum harmala. Food Chem Toxicol 2017; 103: 261–269

[13] Herraiz T, Guillén H. Інгібування моноаміноксидази-A та пов'язана з ним антиоксидантна активність у рослинних екстрактах з потенційною антидепресивною дією. Bio-Med Res Int 2018; 1018: 4810394

[14] Carradori S, D'Ascenzio M, Chimenti P, Secci D, Bolasco A. Селективні інгібітори MAO-B: урок з натуральних продуктів. Mol Divers 2014; 18: 219–243

[15] Fajemiroye JO, Silva DM, Oliveira DR, Costa EA. Лікування тривоги та депресії: Лікарські рослини в ретроспективі. Fundam Clin Pharmacol 2016; 30: 198–215

[16] Фішар З. Ліки пов'язані з активністю моноаміноксидази. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry 2016; 69: 112–124

[17] Naoi M, Maruyama W, Shamoto-Nagai M. Моноаміноксидаза типу А та серотонін координовано беруть участь у депресивних розладах: від дисбалансу нейромедіаторів до порушення нейрогенезу. J Neural Transm 2017; 125: 53–66