Частина Ⅰ: можливе значення розчинного рецептора лютеїнізуючого гормону під час розвитку та дорослішання хлопчиків і чоловіків
Apr 06, 2023
Просте резюме
Репродуктивні гормони лютеїнізуючий гормон (ЛГ) і хоріонічний гонадотропін людини (ХГЛ), обидва агоністи рецептора лютеїнізуючого гормону (ЛХГГ), є важливими для чоловічого відтворення під час розвитку та дорослого життя. lHCGR експресується та стимулює вироблення тестостерону клітинами Лейдіга яєчка. У цьому дослідженні ми демонструємо, що розчинний LHCGR присутній у крові, сечі та спермі здорових хлопчиків і чоловіків, а також у пацієнтів з абераціями статевих хромосом. Ми показуємо, як циркулюючі рівні sLHCGR корелюють із пубертатним розвитком, функцією яєчок і якістю сперми, і демонструємо, що LHCGR вивільняється з фетальної тканини людини, яка не є гонадною. ХГЛ виділяється в сироватку через яєчка та інші органи, що свідчить про можливу екстрагонадну роль ЛГ або ХГЛ у хлопчиків і чоловіків.
Анотація
Лютеїнізуючий гормон (ЛГ) і хоріонічний гонадотропін людини (ХГЛ) є агоністами рецептора лютеїнізуючого гормону (ЛГГГ), який регулює чоловічу репродуктивну функцію. lHCGR може виділятися в рідини організму. Ми хотіли визначити, чи є розчинний LHCGR маркером функції гонад. Перехресні, поздовжні та інтервенційні дослідження були проведені на 195 здорових хлопчиках і чоловіках і 396 чоловіках з безпліддям, дефіцитом або синдромом Клайнфельтера (KS), щоб зв’язати LHCGR, виміряний у сироватці, спермі, сечі та артеріях печінки/нирок, із функцією статевих залоз. . lHCGR вимірювали in vitro та in vivo на моделях людської тестикулярної тканини та клітинних лініях, мишачих моделях ксенотрансплантата та результатах Вестерн-блоттингу людини, які показали, що фрагменти LHCGR були виявлені в сироватці крові та гонадних тканинах подібного розміру за допомогою трьох різних антитіл. Навіть після ксенотрансплантатів людини LHCGR-ELISA не виявив міжвидової перехресної реактивності або неспецифічних реакцій у мишачій сироватці. Навпаки, sLHCGR вивільнявся в культуральне середовище після культивування нирок плода людини та надниркових залоз. Сироватковий sLHCGR був значно нижчим у здорових хлопчиків у період статевого дозрівання (p=0.0001). У здорових чоловіків сироватковий sLHCGR негативно корелював із співвідношенням інгібін B/FSH (-0.004, p=0.027). У безплідних чоловіків sLHCGR сперми негативно корелював із сироватковим FSH (0,006, p=0.009), концентрацією сперми (-3.5, p=0.003) і загальною кількістю сперматозоїдів. ( -3.2, p=0.007). Ін’єкція hCG знижувала sLHCGR у сироватці крові та сечі здорових чоловіків (p <0,01). На закінчення, sLHCGR вивільняється в рідини організму і пов’язаний з пубертатним розвитком і функцією гонад. Циркулюючий sLHCGR у самців орхідей свідчить про те, що sLHCGR у сироватці крові може походити з негонадних тканин і може функціонувати в негонадних тканинах. (Клінічні випробування: NTC01411527, NCT01304927, NCT03418896).
Ключові слова
рецептор ЛГ; статеве дозрівання; розвиток; безпліддя;Переваги Cistanche; екстрагонадний вплив; гонадотропіни; нирка плода; надниркова залоза плода; TCAM2; NTera2
Натисніть тут, щоб купитиТрав'яний екстракт цистанхи
вступ
Лютеїнізуючий гормон (ЛГ) і хоріонічний гонадотропін людини (ХГЧ) обидва є агоністами рецептора лютеїнізуючого гормону (ЛГГГ), який є необхідним для чоловічого відтворення під час розвитку та дорослого життя [1]. ХГЧ є рецептором, пов’язаним з білком G, який, як відомо, експресується в клітинах Лейдіга, гранульованому лютеїні та мембранних клітинах і є потужним регулятором вироблення статевих стероїдів [1]. hCG є потужним і стійким агоністом, але він має фізіологічне значення лише під час внутрішньоутробного розвитку [2]. За винятком деяких типів раку зародкових клітин і раку підшлункової залози, hCG не виробляється в зрілому віці, хоча попередні дослідження виявили низьку пульсуючу секрецію hCG гіпофізом у дорослих чоловіків і жінок. hCG використовується для лікування жінок для індукції овуляції під час лікування фертильності, для чоловіків для стимуляції синтезу тестостерону та потенційного сперматогенезу у чоловіків з гіпогонадами або як діагностичний тест для ендогенного виробництва тестостерону [4]. Абляція мишачого рецептора LHGR (LHCGR) призводить до різкого зниження тестостерону та якості сперми [5], і кілька дослідницьких груп виявили мутації та SNP у LHCGR, демонструючи його важливість для репродуктивної функції людини [6-8].
Ген LHCGR розташований на хромосомі 2 і складається з 11 екзонів, з яких екзони 1-10 кодують позаклітинні структурні домени, а екзон 11 кодує 7 трансмембранних і внутрішньоклітинних структурних доменів [9]. Існує кілька ізоформ LHCGR, одна з яких, як вважають, секретується через відсутність трансмембранного якоря [10]. Інша можливість полягає в тому, що виділення LHCGR в рідини організму залежить від ферментативного розщеплення білків на клітинній мембрані, таких як ADAM, MMP та інших відомих розщеплених трансмембранних білків. Дійсно, було показано, що hCG специфічно підвищує регуляцію MMP-2 і MMP-9 [11,12], а кілька досліджень показали посттранскрипційну регуляцію LHCGR [13,14]. Розчинний LHCGR (LHC) вимірювався в жіночій сироватці та фолікулярній рідині за допомогою платформи ELISA [15,16]. Специфічність антитіл, що використовуються в аналізі ELISA, була перевірена шляхом експресії різних фрагментів LHCGR у клітинах CHO для локалізації епітопу та виявлення експресії в плаценті людини [15-17]. sLHCGR був виявлений у сироватці за допомогою LC-MS/MS [18]. сироваткові концентрації sLHCGR у жінок були пов’язані з лікуванням фертильності, прееклампсією, передчасними пологами та вагітністю у дітей із синдромом Дауна, які мають частоту імплантації [15,16], але на сьогоднішній день не підтверджені іншими дослідницькими групами. Наскільки нам відомо, sLHCGR ніколи не був описаний в рідинах організму здорових чоловіків, хлопчиків-підлітків, що розвиваються, або чоловіків з абераціями статевих хромосом. sLHCGR може функціонувати в чоловічому кровообігу як маркер функції гонад через високоафінний зв’язуючий транспорт або зміну активності ЛГ або ХГЛ.
Матеріали та методи
1. Когорти
Молоді люди із загального населення
У Данії всі здорові юнаки віком від 18 років повинні пройти медичний огляд, щоб визначити їх придатність до військової служби. З 1996 року близько 300 військовозобов'язаних, що представляють загальне населення, щороку проходили обстеження на якість сперми. Усі вони надали зразки сперми, заповнили анкету, пройшли ультразвукове дослідження яєчок і взяли зразки крові. Зразки сироватки та сперми з біобанку, а також ультразвукові оцінки та інформація про ІМТ та вік 148 чоловіків, опитаних у 2013 та 2014 роках, були включені в поточне дослідження (схвалення Комітету з етики: H-KF-289428).
Здорові хлопчики до та після статевого дозрівання
Copenhagen Adolescence Study — це комбіноване перехресне та лонгітюдне дослідження здорових данських дітей [20]. З випадково вибраних державних шкіл до участі було запрошено 6203 дітей. Загальна кількість учасників – 2020 дітей. Лонгітюдне спостереження за 209 дітьми (101 хлопчиком) проводилося кожні 6 місяців і включало фізикальний огляд, оцінку стадії статевого дозрівання за Таннером, а також зразки крові та сечі. Тридцять шість хлопчиків із лонгітюдним спостереженням були включені в це дослідження для оцінки sLHCGR під час статевого дозрівання (клінічне випробування: NTC01411527).
Безплідні чоловіки без серйозних супутніх захворювань
Copenhagen-Bone-Gonad Study — це когортне дослідження 307 безплідних чоловіків без важких супутніх захворювань, які відвідували нашу чоловічу клініку з 2011 по 2015 рік, включаючи загалом 1427 чоловіків [21,22]. Усі чоловіки були направлені до нашої клініки через низьку якість сперми та бажання мати батьківство. Усі вони пройшли фізичне обстеження, включаючи УЗД яєчок, узяли зразки крові та сперми. Спеціаліст отримав їх детальні історії хвороби. Дослідники спостерігали за чоловіками протягом 150 днів і приймали вітамін D або плацебо, як описано раніше. Усі дані, надані в цьому дослідженні, були отримані з початкового візиту до втручання, і всі включені змінні були попередньо визначені (клінічне випробування: NCT01304927).
Стандартизований Cistanche
Чоловіки та хлопчики з синдромом Клайнфельтера та пацієнти з анорхією
Ми ідентифікували 64 хлопчиків і чоловіків із синдромом Клайнфельтера (КС), 47 у постпубертатному періоді та 16 у препубертатному періоді, визначених відповідно до стадії за Таннером, у нашій чоловічій клініці. Ми мали точні хромосомні аберації, історію хвороби, статус початку статевого дозрівання та інформацію про сироватку, доступну для всіх. 7 хлопчиків пройшли довгострокове спостереження з регулярним клінічним обстеженням і забором крові до та під час початку статевого дозрівання.
Ми також включили 8 чоловіків із нормальною кількістю хромосом, у яких було видалено двостороннє яєчко через попередні захворювання: рак зародкових клітин яєчка (n=4), дифузний рак простати (n=1), двосторонній крипторхізм та педіатричну орхіектомію ( n=1), двостороння неоплазія зародкових клітин in situ (n=1) і поширений рак яєчка після видалення решти яєчок через травму (n=1).
Дорослі, які проходять вимірювання кровотоку в Splanchnicus
Ми включили трьох чоловіків і трьох жінок у постменопаузі з нормальною функцією печінки, які були госпіталізовані з підозрою на мезентеріальну ішемію та направлені на вимірювання вісцерального кровотоку, але не показали мезентеріальної ішемії. Одночасно відбирали зразки крові з печінки, нирок, стегнової вени та відповідної артерії (схвалення Комітету з етики: H.18048245)
Дослідження втручання: здорові чоловіки під впливом гонадотропіну хоріону людини
Одинадцять здорових чоловіків було залучено для участі в клінічному втручанні через оголошення датської Rigshospitalet. Добровольці отримували 5000 МО хоріонічного гонадотропіну людини, і їхнє максимальне вироблення ендогенного тестостерону вимірювалося шляхом порівняння базових зразків крові та сечі з контрольними зразками, зібраними через 8, 24 та 72 години після ін’єкції hCG (клінічне випробування: NCT03418896).
2. Миші, людська тканина та клітинні лінії
Два штами клітин раку яєчок людини NTera-2 і TCam-2, що представляють ембріональні карциному і семіному відповідно, використовували і культивували, як описано раніше [23].
Сироватки були зібрані у безпухлинних голих мишей (WT) і ксенотрансплантованих голих мишей TCam-2, які отримували вектор, LH або hCG відповідно (Інспекторат експериментів на тваринах, Копенгаген, Данія, номер ліцензії: 2012-15-2934-00051) .
Тканини людського плоду в першому триместрі були зібрані з донорських тканин жінок після планових абортів. Нирки плода та тканини надниркових залоз плода культивували в суспензійних крапельних моделях, як описано раніше, і середовище збирали для аналізу [24,25] (схвалення Комітету з етики: H-1-2012-007).
Зразки яєчок дорослих були отримані від чоловіків із раком яєчок після оваріектомії (схвалення комітету з етики: H{{0}}). Перитуморальну тканину, що містить незлоякісні ділянки, зберігали при - 80◦ C або фіксували протягом ночі при 4° C у формаліні або модифікованому фіксаторі Stieve (200 мл 37% формальдегіду, 40 мл оцтової кислоти в 1 л 0,05 М фосфату). буфер, pH 7,4).
3. Біохімічні аналізи
Виявлення загального sLHCGR у сироватці крові, спермі, сечі та різних культуральних середовищах було виконано в процесі перевірки за допомогою наборів ELISA від New Dutch Biomarker Catalyst Laboratory (NBCL) з використанням антитіла LHR029 проти LHCGR людини та вимірювання всіх з них неодноразово. аналіз ELISA мав межу виявлення 0,01 пмоль/мл і максимальний рівень 15,55. У шести чоловіків із загальної популяції з рівнями sLHCGR вище верхньої межі виявлення зразки розбавили та повторно виміряли, показавши рівні до 30 пмоль/мл. продуктивність платформи ELISA була детально описана раніше [15-17].
Цистанхе добавки
Ми також встановили два різних внутрішніх ELISA, налагоджені нашими лаборантами, а всі інші реагенти були надані компанією Origin Biomarkers Ltd, Великобританія, відповідно до їхньої запропонованої установки [26]. По-перше, циркулюючий sLHCGR, зв’язаний з hCG, був виявлений за допомогою сендвіч-наборів ELISA з антитілами 5A10C9 (ProMab) і am0{{20}}904pun ( OriGene), спрямовані проти LHCGR та hCG відповідно. По-друге, ми подібним чином використовували власний ELISA для визначення загальних артеріальних і венозних зразків печінки, нирок і нижніх кінцівок від шести дорослих sLHCGR, де ми використовували те саме антитіло LHR029 (NBCL Голландія) проти sLHCGR. Було протестовано два різних протоколи. Усі вимірювання sLHCGR, описані в цій статті, проводили за допомогою NBCL ELISA, за винятком комплексу hCG-sLHCGR та артеріальних/венозних зразків з органів, описаних вище. У здорових хлопчиків тестостерон аналізували за допомогою набору RIA з покриттям DPC (Diagnostic Products, Лос-Анджелес, Каліфорнія) з межею виявлення (LOD) 0,23 нмоль/л і CV 8,6 відсотка за допомогою імунофлуоресценції з роздільною здатністю за часом. (Delfia; Wallac, Турку, Фінляндія), межа виявлення становила 0,20 нмоль/л з CV 6,4 відсотка. У дорослих тестостерон і глобулін, що зв’язує статеві гормони (SHBG), аналізували хемілюмінесцентним імуноаналізом (Access, Beckman Coulter, США) з LOD 0,35 нмоль/л і 0,33 нмоль/л відповідно. Рівні ФСГ і ЛГ у сироватці крові та сечі вимірювали за допомогою імунофлюоресценції з роздільною здатністю за часом (Delfia; Wallac, Турку, Фінляндія) з межами виявлення 0,06 і 0,05 МО/л відповідно, а також CV і lt; обидва по 5 відсотків. Аналіз інгібіну B проводили за допомогою специфічного двостороннього імуноферментного аналізу (інгібін B genII, Beckman Coulter, США) CV <11 відсотків. Для AMH ми використовували імуноферментний аналіз Beckman Coulter (Immunotech, Beckman Coulter, Марсель, Франція) і CV <8 відсотків. Нарешті, IGF1 та IGF-BP3 були визначені за допомогою хемілюмінесцентного аналізу імунодіагностичної системи IDS-iSYS з CV 10 відсотків та 9 відсотків відповідно. Вільний естрадіол розраховували за допомогою константи Мазера, а вільний тестостерон (FT) розраховували за формулою Вермюлена [27,28].
Аналіз сперми
Здорові молоді чоловіки та безплідні дорослі учасники надали зразки сперми та отримали інформацію про тривалість утримання від еякуляції. Аналіз сперми проводили навчені спеціалісти, як описано раніше [19]. Об’єм сперми визначали шляхом зважування. Для оцінки життєздатності сперматозоїдів 10 мкл добре змішаної повторної сперми поміщали на предметні скла та досліджували під мікроскопом × 400x при температурі 37°C. Сперму класифікували як прогресуюча життєздатність (клас А плюс В за ВООЗ), непрогресуюча життєздатність (клас С) або неактивна (клас D). Використовували середнє значення двох оцінок життєздатності. Щоб оцінити концентрацію сперми, зразки розводили в дистильованому водному розчині 0,6 моль/л NaHCO3 і 0,4 відсотка (об’єм/об’єм) формальдегіду, а потім оцінювали за допомогою гемоцитометра Bürker-Türk і використовували середнє значення. Підраховували лише сперматозоїди з хвостиками. Нарешті, готували мазки та фарбували їх за допомогою Папаніколау, і морфологію сперми оцінювали строго відповідно до критеріїв [29].
Вестерн-блоттинг
Тканини яєчок людини гомогенізували в буфері для лізису, розбавляли в буфері для завантаження SDS, а потім нагрівали при 95 °C протягом 5 хв. Зразки завантажували на 4-20% збірних поліакриламідних гелів (BioRad, кат. № 456-8096) і запускали при 100 В протягом 1 години для розділення білків. Щоб виявити sLHCGR у сироватці, альбумін та IgG видаляли за допомогою набору для видалення альбуміну/IgG Pierce (Thermo Scientific, Waltham, MA, США, кат. № 89875) перед завантаженням зразків на гель. після гель-електрофорезу білки переносили на полівінілідендифторидні мембрани за допомогою вологого блоттера (BioRad). Мембрани закривали в трис-буферному фізіологічному розчині та 5% знежиреному сухому молоці на 1 годину, потім інкубували протягом ночі при 4°C з первинними антитілами та протягом 1 години при кімнатній температурі з вторинними антитілами. Мембрани промивали за допомогою посиленої хемілюмінесценції (Thermo Scientific Super Signal West Femto Maximum Sensitive Substrate, Cat # 34095) і фотодетектором із системою візуалізації chemiDoc MP (BioRad, Cat # 17001402). Для виявлення LHCGR у тканинах і сироватці використовували три різних антитіла: Aviva System Biology (OASG04237); NBCL Holland, те саме антитіло, що й у наборі для ELISA сироватки (LHR029) і Santa Cruz Biotechnology (Даллас, Техас, США, SC- 26341). -2 мікроглобулін використовувався як контроль навантаження.
Імуногістохімія
Імуногістохімію проводили, як описано раніше [25]. Коротко кажучи, зрізи фіксували модифікованим жорстким фіксатором, депарафінували та повторно гідратували. Екстракцію антигену проводили в автоклаві, що містить цитратний екстракційний буфер (10 мМ, pH 6.0). Ендогенну пероксидазу блокували 3% (об./об.) H2O2 в метанолі протягом 30 хв. Між кожним кроком зрізи промивали в TBS. Зрізи інкубували з 0,5% BSA сироватки коня протягом 30 хвилин, після чого інкубували протягом ночі з двома різними первинними антитілами протягом 1 години при кімнатній температурі (LHR029 для WB/ELISA, Santa Cruz Biotechnology SC- 25828). Зрізи інкубували з вторинними антитілами протягом 30 хвилин. Зображення візуалізували за допомогою аміноетилкарбазолу (AEC, Invitrogen, Life Technologies/Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, США). Негативні контролі були без первинних антитіл. Жоден з негативних контролів не забарвлювався. Контрафарбування проводили гематоксиліном Майєра, а кріплення проводили акватексом. Зрізи оцінювали на мікроскопі Nikon Microphot-FXA (Nikon Corporation, Мелвілл, Нью-Йорк, США). Остаточний аналіз проводили за допомогою програмного забезпечення NDPview версії 1.2.36 (Hamamatsu Photonics, місто Івата, Японія).
Екстракт цистанчі корисний для нирок
СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ
1. Дюфау М. Л. Рецептор лютеїнізуючого гормону. Annu. Rev. Physiol. 1998, 60, 461–496.
2. Рао, К. В. Диференціальні властивості хоріонічного гонадотропіну людини та зв’язування лютеїнізуючого гормону людини з плазматичними мембранами жовтого тіла великої рогатої худоби. Акта Ендокринол. 1979, 90, 696–710.
3. Оделл, В.Д.; Гріффін, Дж. Пульсуюча секреція хоріонічного гонадотропіну людини у здорових дорослих. Н. англ. J. Med. 1987, 317, 1688–1691.
4. Бенг, Аляска; Нордкап, Л.; Альмструп, К.; Пріскорн Л.; Петерсен, Дж. Х.; Раджперт-Де Мейтс, Е.; Андерссон, А.-М.; Юул, А.; Jørgensen, N. Dynamic GnRH, and hCG testing: Встановлення нових діагностичних референтних рівнів. Євро. J. Endocrinol. 2017, 176, 379–391.
5. Чжан Ф.П.; Поутанен, М.; Вілберц, Дж.; Huhtaniemi, I. Нормальний пренатальний, але затриманий постнатальний статевий розвиток мишей з нокаутом рецептора лютеїнізуючого гормону (LuRKO). мол. ендокринол. 2001, 15, 172–183.
6. Бруйстерс, М.; Крістін-Метр, С.; Верхоф-Пост, М.; Султан, Ч.; Оже, Дж.; Фожерон, І.; Лару, Л.; Лумброзо, С.; Теммен, АПН; Bouchard, P. Нова мутація рецептора ЛГ відповідає за чоловічий гіпогонадизм із субнормальною продукцією сперматозоїдів у пропозиті та безпліддя з регулярними циклами у хворої сестри. гудіння Репрод. 2008, 23, 1917–1923.
7. Латроніко, AC; Arnhold, IJP Інактиваційні мутації рецептора лютеїнізуючого гормону людини в обох статей. Сьомін. Репрод. Мед. 2012, 30, 382–386.
8. Сімоні, М.; Тюттельман, Ф.; Мішель, К.; Böckenfeld, Y.; Нішлаг, Е.; Gromoll, J. Поліморфізм гена рецептора лютеїнізуючого гормону/хоріонічного гонадотропіну: асоціація з неправильним опусканням яєчок і чоловічим безпліддям. Фармакогенет. Геном. 2008, 18, 193–200.
9. Асколі, М.; Фанеллі, Ф.; Сегалофф, Д.Л. Рецептор лютропіну/хоріогонадотропіну, перспектива 2002 року. Ендокр. 2002, 23, 141–174.
10. Тена-Семпере, М.; Чжан, Ф.П.; Huhtaniemi, I. Стійка експресія усіченої форми рецептора лютеїнізуючого гормону месенджера рибонуклеїнової кислоти в яєчках щурів після селективного руйнування клітин Лейдіга етиленметансульфонатом. Ендокринологія 1994, 135, 1018–1024.
11. Флур, Х.; Бішоф-Ісламі, Д.; Кренцер, С.; Ліхт, П.; Бішоф, П.; Zygmunt, M. Хоріонічний гонадотропін людини стимулює матриксні металопротеїнази-2 і -9 в цитотрофобластних клітинах і зменшує тканинний інгібітор металопротеїназ-1, -2 і -3 в децидуалізованих стромальні клітини ендометрію. Фертильний. Стерильний. 2008, 90, 1390–1395.
12. Ліхт, П.; Флур, Х.; Neuwinger, J.; Wallwiener, D.; Wildt, L. Чи хоріонічний гонадотропін людини безпосередньо бере участь у регуляції імплантації людини? мол. Стільниковий. ендокринол. 2007, 269, 85–92.
13. Лі Ю.-Х.; Го, X.; Гулаппа, Т.; Менон, Б.; Менон, KMJ SREBP відіграє регулюючу роль у експресії мРНК рецепторів LH/hCG у гранульозно-лютеїнових клітинах людини. Дж. Клін. ендокринол. Метаб. 2019 рік.
14. Менон, KMJ; Менон, Б.; Ван, Л.; Гулаппа, Т.; Харада, М. Молекулярна регуляція експресії рецепторів гонадотропіну: зв'язок з метаболізмом стеролів. мол. Стільниковий. ендокринол. 2010, 329, 26–32.
15. Чамберс А.Е.; Гріффін, К.; Найф, SA; Міллс, І.; Міллс, WE; Сингелакі, А.; Ніколаїдес, KH; Banerjee, S. Кількісний ELISA для сироваткового розчинного LHCGR і комплексу hCG-LHCGR: потенційна діагностика в скринінгу вагітності в першому триместрі на мертвонародження, синдром Дауна, передчасні пологи та прееклампсію. Репрод. Biol. ендокринол. 2012, 10, 113.
16. Чамберс А.Е.; Найіні, К.П.; Міллс, WE; Локвуд, GM; Banerjee, S. Circulating LH/hCG receptor (LHCGR) може ідентифікувати пацієнтів, які проходили ЕКЗ перед лікуванням і мають ризик розвитку СГЯ та поганої імплантації. Репрод. Biol. ендокринол. 2011, 9, 161.
17. Чамберс А.Е.; Стенлі, П.Ф.; Рандева, Х.; Banerjee, S. Мікровезикулами опосередковане вивільнення розчинного рецептора LH/hCG (LHCGR) з трансфікованих клітин і експлантів плаценти. Репрод. Biol. ендокринол. 2011, 9, 64.
18. Гао, Г.Дж.; Chen, YJ; Цзуо, Д.; Сяо, М.М.; Лі, Ю.; Го, Х.; Чжан, Н.; Chen, RB Кількісний протеомний аналіз для високопродуктивного скринінгу диференціальних глікопротеїнів у сироватці гепатоцелюлярної карциноми. Cancer Biol. Мед. 2015, 12, 246–254.
19. Пріскорн Л.; Нордкап, Л.; Бенг, Аляска; Краузе, М.; Холмбо, SA; Егеберг Пальме, DL; Крило, С.Б.; Mørup, N.; Карлсен, Е.; Йоенсен, ООН; та ін. Середня кількість сперматозоїдів залишається незмінною, незважаючи на зменшення кількості курців у матерів: результати великого перехресного дослідження з щорічними дослідженнями протягом 21 року. гудіння Репрод. 2018, 33, 998–1008.
20. Соренсен, К.; Аксглаеде, Л.; Петерсен, Дж. Х.; Juul, A. Останні зміни в термінах статевого дозрівання у здорових датських хлопчиків: асоціації з індексом маси тіла. Дж. Клін. ендокринол. Метаб. 2010, 95, 263–270.
21. Бломберг Дженсен, М.; Lawaetz, JG; Петерсен, Дж. Х.; Юул, А.; Jørgensen, N. Вплив добавок вітаміну D на якість сперми, репродуктивні гормони та живонароджуваність: рандомізоване клінічне дослідження. Дж. Клін. ендокринол. Метаб. 2018, 103, 870–881.
22. Бломберг Дженсен, М.; Гернер Лавець, Дж.; Андерссон, А.-М.; Петерсен, Дж. Х.; Нордкап, Л.; Бенг, Аляска; Екбом, П.; Йоенсен, ООН; Преторіус, Л.; Лундстрем, П.; та ін. Дефіцит вітаміну D і низький рівень іонізованого кальцію пов’язані з якістю сперми та рівнем статевих стероїдів у безплідних чоловіків. гудіння Репрод. 2016, 31, 1875–1885.
23. Лоренцен, М.; Нільсен, JE; Андреассен, CH; Юул, А.; Тофт, Б.Г.; Раджперт-Де Мейтс, Е.; Даугаард, Г.; Бломберг Дженсен, М. Рецептор лютеїнізуючого гормону експресується в пухлинах зародкових клітин яєчка: можливі наслідки для росту пухлини та прогнозу. Раки 2020, 12, 1358.
24. Елдруп, Е.; Тейлад, С.; Лоренцен, М.; Андреассен, CH; Poulsen, KH; Нільсен, JE; Гансен, Д.; Ель Фассі, Д.; Берг, Джо; Багі, П.; та ін. Гіперкальціємія після ін’єкцій косметичної олії: розгадка етіології, патогенезу та тяжкості. Дж. Кістяний копач. рез. 2020, 36, 322–333.
25. Йоргенсен, А.; Макдональд, Дж.; Нільсен, JE; Кілкойн, КР; Перлман, С.; Лундвалл, Л.; Langhoff Thuesen, L.; Юул Харе, К.; Фредеріксен, Х.; Андерссон, А.-М.; та ін. Вузлова передача сигналів регулює розвиток зародкових клітин і формування сім’яних канатиків у плодовому яєчку людини. Cell Rep. 2018, 25, 1924–1937.e4.
26. Чемберс, А.Е.; Fairbairn, C.; Gaudoin, M.; Міллс, В.; Ву, І.; Пандіан, Р.; Станчик, Ф.З.; Чунг, К.; Banerjee, S. Розчинний рецептор LH-HCG і естрадіол як предиктори вагітності та живонародження при ЕКЗ. Репрод. Біомед. Онлайн 2019, 38, 159–168.
27. Вермеулен, А.; Вердонк, Л.; Кауфман, Дж. М. Критична оцінка простих методів визначення вільного тестостерону в сироватці. Дж. Клін. ендокринол. Метаб. 1999, 84, 3666–3672.
28. Мейзер, Н. А. Новий метод електронної таблиці для розрахунку вільної сироваткової концентрації тестостерону, дигідротестостерону, естрадіолу, естрону та кортизолу: з ілюстративними прикладами для чоловіків і жінок. Стероїди 2009, 74, 512–519.
29. Менквелд, Р.; Стендер, Ф.С.; Kotze, TJ; Крюгер, Т.Ф.; van Zyl, JA Оцінка морфологічних характеристик сперматозоїдів людини за суворішими критеріями. гудіння Репрод. 1990, 5, 586–592.
Лі Джуел Мортенсен1, Метте Лоренцен1, Анне Йоргенсен2, Якоб Альбретсен2, Нільс Йоргенсен2,Сьорен Мьоллер3,4, Анна-Марія Андерссон2, Андерс Юул2,4і Мартін Бломберг Дженсен1,5
1. Група скелетної, мінеральної та гонадної ендокринології, Університетське відділення росту та репродукції, Rigshospitalet, 2100 Копенгаген, Данія; li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)
2. Департамент росту та репродукції та Міжнародний центр досліджень та навчання дослідників ендокринних порушень чоловічої репродукції та здоров’я дітей (EDMaRC), Rigshospitalet, Копенгагенський університет, Blegdamsvej 9, 2100 Копенгаген, Данія; Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA); Niels.Joergensen@regionh.dk (Нью-Джерсі); Анна-Maria.Andersson@regionh.dk (А.-МА); Anders.Juul@regionh.dk (AJ)
3. Центр функціональної та діагностичної візуалізації та досліджень, відділення клінічної фізіології та ядерної медицини 260, лікарня Відовре, 2650 Копенгаген, Данія; Soeren.Moeller@regionh.dk
4. Кафедра клінічної медицини, Факультет наук про здоров’я, Копенгагенський університет, 2200 Копенгаген, Данія
5. Відділ дослідження кісток і мінералів, Гарвардська школа стоматологічної медицини/Гарвардська медична школа, Бостон, Массачусетс 02115, США
