Контакти:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Натисніть тут, щоб перейти до частини 2

Цистанхея має дуже хороший нейропротекторний ефект

Габріель Гонсалес 1,2, Їрі Грц 1, Козімо Вальтер Д'Акунто 1, Петр Кановськ2 і Мирослав Стрнад 1,2,*

1. Лабораторія регуляторів росту, Інститут експериментальної ботаніки Чеської академії наук,

та факультет природничих наук, Університет Палацького, Šlechtitel ˚u 27, CZ-78371 Olomouc, Чеська Республіка;

Gonzalez.gabriel@seznam.cz (GG); jiri.gruz@upol.cz (JG); waldacun@gmail.com (CWD)

2. Відділення неврології, Університетська лікарня Оломоуца та Факультет медицини та стоматології,

Palacký University Olomouc, CZ-775 20 Оломоуц, Чеська Республіка; Petr.Kanovsky@fnol.cz

* Листування: miroslav.strnad@upol.cz; Тел.: плюс 420-585-634-850

Анотація: Цитокінінице фітогормони на основі аденіну, які регулюють ключові процеси в рослинах, такі як поділ і диференціація клітин, ріст коренів і пагонів, верхівкове домінування, розгалуження і проростання насіння. У попередніх дослідженнях вони також продемонстрували захисну дію проти нейродегенеративних захворювань людини. Щоб розширити знання про захист (захисну діяльність), яку вони пропонують, ми дослідили діяльність природицитокінінипроти токсичності, спричиненої сальсолінолом (SAL) (aхвороба Паркінсонамодель) і смерть, спричинену глутаматом (Glu).нейрон-подібні дофамінергічні клітини SH-SY5Y. Ми виявили, що кінетин-3-глюкозид, цис-зеатин рибозид і N6-ізопентеніладенозин були активними в моделі PD, індукованої SAL. Крім того, транс-, цис-зеатин і кінетин разом із хелатором заліза дефероксаміном (DFO) та інгібітором некроптозу некростатином 1 (NEC-1) значно знижували рівень загибелі клітин у Glu-індукованій моделі. Аналізи лактатдегідрогенази показали, щоцитокінінинадається нижченейропротекторнийактивності, ніж DFO та NEC-1. Крім того, вони знижували апоптотичну активність каспази-3/7 менш сильно, ніж DFO. Однак,цитокінінимав дуже подібний вплив на утворення супероксидних радикалів, як DFO та NEC-1. Загалом вони показали захисну активність у моделі, індукованій SALпаркінсонічнанейроннийзагибель клітин і Glu-індукована модель окисного пошкодження головним чином шляхом зменшення окисного стресу.

Ключові слова: цитокінін; фітогормон; нейропротекція; нейроноподібні клітини SH-SY5Y; цитотоксичність; сальсолінол; глутамат; окислювальний стрес; хвороба Паркінсона

рослина цистанкапро вплив наНейропротекція

1. Введення

хвороба Паркінсона(PD) є другим найпоширенішим нейродегенеративним захворюванням, пов’язаним з моторикою, і очікується, що кількість діагностованих випадків у всьому світі зросте з 6 мільйонів у 2015 році до понад 12 мільйонів до 2040 року [1]. Він характеризується руховими симптомами, пов’язаними зі специфічною дегенерацією та втратою приблизно 30–70 відсотків дофамінергічного (DA)нейронівв substantia nigra pars compacta та їх проекціях на striatum [2,3]. Деякі з багатьох відомих молекулярних ознак БП включають посилення окислювального та нітрозативного стресу, мітохондріальну дисфункцію [4–7], ексайтотоксичність [8], дисфункцію системи убіквітин/протеасома [9] та нейрозапалення [10]. Сучасні методи лікування мають різні несприятливі побічні ефекти та пропонують лише полегшення симптомів [11], тому докладаються інтенсивні зусилля для розробки препаратів з ефективним лікувальним ефектом при дегенеруючому ДА.нейронів. Ресурси, які можуть допомогти таким зусиллям, включають природні сполуки, які, як правило, мають менше побічних ефектів. Серед іншого, речовини з гінкго білоба (гінкгетин, гінкголід, білобалід), женьшеню (гінзенозиди) і флавоноїди (байкалеїн, кемпферол, рутин і лютеолін) продемонстрували широку захисну дію в декількох моделях in vitro (включаючи лінію клітин нейробластоми людини SH). -SY5Y) та in vivo моделі БП, індукованого 1,1'-диметил-4,4'-біпіридинію дихлоридом (паракватом), 1-метил- 4-фенілом-1, 2,3,6-тетрагідропіридин (MPTP), 1-метил-4-фенілпіридиній (MPP плюс) і 6-гідроксидопамін (6-OHDA) [12].

Представлене тут дослідження було зосереджено на ефектах класу природних фітогормонів, які називаютьсяцитокініни(ЦК), а також їх метаболіти, які є добре відомими регуляторами клітинного поділу, росту, диференціювання та старіння листків рослин [13]. Структурно CK є похідними аденіну, заміщеними в положенні N6- пренільним (ізопентеніловим) або ароматичним бічним ланцюгом. Природні форми включають 6-(E)-4-гідрокси-3-метилбут-2-еніламінопурин (трансзеатин, tZ), його 6-(Z)-ізомер ( цис-зеатин, cZ), N6-ізопентеніладенін (iP), 6-бензиламінопурин (BAP), 6-фурфуриламінопурин (кінетин, K) і орто-, мета-, і пара-гідроксильовані або метоксиловані похідні BAP, які називаються тополінами (oT, mT, pT, MeoT, MemT, MepT). Різноманітні 9-рибозиди, 9-нуклеотиди, а також 7-, 9 та О-глюкозиди цих форм також часто зустрічаються, як показано в таблиці 1. Окрім їх рідної ролі в рослин, ЦК показали потужну антиоксидантну активність щодо активних форм кисню (АФК), що забезпечує захист у кількох моделях стресу in vitro розладів, пов’язаних зі старінням [14].

Таблиця 1. Конструкціїцитокініниі агенти позитивного контролю.

Зокрема, повідомляється, що ЦК мають цитопротекторну активність у таких моделях, як загибель клітин фібробластів людини, спричинена H2O2- [15], і індукований D-галактозою глікоксидативний стрес в астроцитах щурів [16]. Що ще важливіше, у цьому контексті вони показалинейропротекторнийефекти в моделях, пов’язаних із нейродегенеративними захворюваннями, такими як сімейний БП, інгібітор протеасоми MG 132-індукована або H2O2-індукована токсичність у клітинах SH-SY5Y [17], Glu-індуковане окисне пошкодження гіпокампа миші HT22нейроннийклітини [18] та клітинна модель PC12 хвороби Хантінгтона [19]. Інші дослідження показують, що захисна діяльність ЦК включає як пряму [20,21], так і непряму [15,16,22] модуляцію клітинних окисно-відновних систем. На додаток до характерної антиоксидантної активності ЦК, як повідомляється, вони мають регуляторний вплив на мітохондрії, що посилюєнейроннийжиттєздатність [17]. Крім того, K може стабілізувати потенціал мітохондріальної мембрани та збільшити виробництво АТФ, тим самим пом’якшуючи Glu-індуковану смерть клітин HT22 [18]. Однак, незважаючи на висновки щодо їх ефектів у кількох моделях, є обмежені знання про захисну активність СК у найбільш поширеній (спорадичній) формі БП.

Щоб усунути прогалину в знаннях, описану вище, ми систематично оцінювали вплив природних КК та їх метаболітів у двох моделях in vitro: індукованій сальсолінолом (SAL) модель БП та глутаматною (Glu) індукованою моделлю окисного пошкодження внейрон-подібні клітини SH-SY5Y. Цю лінію використовували через її дофамінергічний фенотип, чутливість до дофамінергічних токсинів, таких як SAL, і зручне формування відносно стабільних популяцій диференційованихнейроннийклітини зі зниженою швидкістю проліферації після 48-годинного впливу 10 мкМ повністю транс-ретиноєвої кислоти (ATRA) [23–25].

нейрон-подібні клітини піддавалися впливу ендо/екзотоксину SAL, щоб імітувати патологію PD через дисфункцію клітинної окисно-відновної системи: виснаження глутатіону (GSH) та інгібування активності антиоксидантного ферменту (Cu/Zn супероксиддисмутази та каталази) та мітохондріальної комплексів (I і II), що призводить до апоптозу і некрозу [26]. В іншій моделі Glu викликає потенційно смертельні окислювальні пошкодження шляхом руйнування окисно-відновної системи. Обидві моделі клітинної лінії SH-SY5Y раніше використовувалися в дослідженнях нейропротекції [26,27].

Було перевірено цитопротекторну та/або антиоксидантну активність, пов’язану з дегенеративними розладами K, iP, BAP, iPR, tZR та їх вільних основ, і (як зазначено вище) було виявлено, що деякі CK мають захисну активність унейроннийклітини. Однак раніше опубліковані дослідження не вивчали структурунейропротекторнийспіввідношення активності (SAR) природних КК (табл. 1). Тому це дослідження було проведено для вивченнянейропротекторний(анти-паркінсонічна) активності майже всіх відомих природних ЦК у вибраних моделях нейродегенерації, індукованих SAL та Glu. Спочатку ми оцінили здатність поглинання кисневих радикалів (ORAC) і (у тестах на безпеку) цитотоксичність кожного CK.нейрон-подібні клітини SH-SY5Y. Потім ми оцінили нейропротекторну дію сполук і вплив на рівні окислювального стресу, вимірявши продукцію супероксиду (O2.) (дігідроетидій, аналіз DHE) і активності апоптотичної каспази-3,7. Результати надають перші систематичні вказівки на взаємозв’язки між природними структурами ЦК інейропротекторнийдіяльності.

Цистанхея трав'янамає дуже добренейропротекторнийефект

2. Результати та їх обговорення

2.1. Здатність до поглинання кисневих радикалів цитокінінів (ORAC)

Оскільки нейродегенеративні захворювання пов’язані з підвищеним окисним стресом, антиоксидантна активність відіграє ключову роль у захистінейроннийклітини. Для оцінки біологічного потенціалу ЦК у цьому відношенні антиоксидантну здатність визначали за допомогою ORAC, який зазвичай використовується для визначення антиоксидантної здатності речовин [28]. Антиоксидантну здатність виражали в еквівалентах Trolox (TE), що визначає ефективність (від меншої до більшої) сполук, ніж Trolox, на еквімолярній основі. Результати, наведені в таблиці 1, показують, що тополіни (oT, mT і pT) та їх рибозиди (oTR, mTR, pTR) мають високу антиоксидантну активність, яка, ймовірно, тісно пов’язана з багатою електронами системою їх C{{ 3}}гідроксибензил амінозамісник. Незважаючи на високі значення ORAC, тополіни не мали високихнейропротекторнийдіяльність. Однак кілька гетероароматичних ЦК, включаючи K (N6-фурфуриламінопурин) і неароматичний цис-зеатин-O-глюкозид (cZOG), який містить 4-гідрокси-3-метилбут{{7} }ен-1-іл)амінозамісника, також показали високу антиоксидантну здатність (табл. 2). Інші метаболіти КК, включаючи кінетин-3-глюкозид (K3G), кінетин рибозид 5<-monophosphate (kmp),="" kinetin-9-glucoside="" (k9g),="" and="" trans-zeatin=""><- monophosphate="" (tzmp)—had="" moderate="" antioxidant="" activity.="" all="" the="" others="" had="" detectable="" capacity="" except="" bap.="" these="" results="" confirm="" previous="" findings="" that="" ip,="" pt,="" k="" can="" act="" as="" direct="" radical="" scavengers,="" but="" conflict="" with="" the="" previously="" reported="" activity="" of="" bap="" in="" the="" orac="" test="" [20,21].="" to="" conclude,="" these="" compounds="" have="" potential="" in="" the="" treatment="" of="" neurodegenerative="" diseases="" associated="" with="" increased="" oxidative="" stress="">

переваги стебла цистанчінапроти хвороби Альцгеймера

2.2. Диференціація клітин SH-SY5Y

Для вивчення CKs'нейропротекторнийклітини нейробластоми SH-SY5Y (вибрані з уже описаних причин [23]) були диференційовані шляхом впливу 10 мкМ ATRA протягом 48 годин, як описано раніше [23, 24]. Потім їх пофарбували за допомогою набору для фарбування мембран, щоб дослідити морфологічні відмінності між недиференційованими та диференційованими клітинами. Як показано на малюнку 1A,нейрон-подібні диференційовані клітини росли менш щільно, були більш подовженими та продукували більше нейритів (позначено жовтими стрілками на малюнку), ніж недиференційовані клітини. Ці морфологічні зміни, пов’язані з диференціюванням, спостерігалися раніше навіть після більш короткого впливу (24 години) на ATRA [24,30]. Що ще важливіше, кількість нейритів різко зростає до рівня, коли вони можуть створити мережу нейритів. З цієї причини життєздатність клітин вимірювали для порівняння швидкості проліферації недиференційованих і диференційованих клітин SH-SY5Y. За максимальну швидкість проліферації приймали життєздатність недиференційованого SH-SY5Y. Результати представлені в

На малюнку 1B показано, що швидкість проліферації (оцінена за допомогою аналізу життєздатності Calcein AM) SH-SY5Y була знижена на 23 відсотки після 48-годинної обробки ATRA.

Рисунок 1. (A) Флуоресцентні мікрофотографії клітин SH-SY5Y з мембранами, пофарбованими за допомогою набору Neurite outgrowth (Invitrogen™): контрольні, недиференційовані клітини (піддані фіктивному лікувальному розчину:<0.1% dmso);="" cells="" differentiated="" by="" exposure="" to="" 10="" um="" all-trans="" retinoic="" acid="" (atra)="" for="" 48="" h.="" bars="50" um.="" (b)="" proliferation="" rates="" of="" undifferentiated="" and="" differentiated="" sh-sy5y="" cells:="" numbers="" of="" viable="" cells="" after="" 48="" h="" exposure="" to=""><0.1% dmso="" and="" 10="" um="" atra,="" respectively.="" data="" were="" obtained="" from="" five="" independent="" experiments="" with="" triplicate="" cultures:="" asterisks="" show="" the="" significance="" of="" differences="" in="" numbers="" of="" viable="" cells="" (as="" percentages="" of="" numbers="" of="" undifferentiated="" cells)="" between="" the="" cultures:="" *="" p="" <="">

Таблиця 2. Поглинальна здатність кисневих радикалів (ORAC) тестованихцитокініни(CK), виражені як еквіваленти тролокса (TE) на еквімолярній основі. Назви, абревіатури та структури CK представлені на малюнку 1.

2.3. Цитотоксичність цитокінінів щодо нейроноподібних клітин SH-SY5Y

У випробуваннях потенційної цитотоксичності CKs за допомогою аналізу життєздатності Calcein AM [31] більшість показали низьку токсичність щодонейрон-подібні клітини SH-SY5Y. Зниження життєздатності нижче 90 відсотків розглядалося як поріг нейротоксичного ефекту. Єдиними двома винятками були KR (11,9 відсотка) і pTR (10,5 відсотка), згідно з попередніми висновками, що деякіцитокінінметаболіти, зокрема рибозиди, можуть мати цитотоксичну дію [32]. Інші рибозиди, такі як cZR, iPR, oTR, mTR, не викликали помітного зниженнянейрон-подібна життєздатність клітин SH-SY5Y (табл. 3). DFO [33,34] і NEC-1 [35,36], які використовувалися як позитивні контролі в нашій моделі in vitro, також були доведені іншими дослідженнями на клітинах SH-SY5Y як нетоксичні. На завершення, в основному похідні KR і pTR показали нижчу життєздатність, ніж 90 відсотків, і тому вважалися менш цікавими для подальшої оцінки в обох in vitro моделях нейродегенерації.

Таблиця 3. Життєздатність клітиннейрон-подібні клітини SH-SY5Y після впливуцитокінінипротягом 24 год. Життєздатність виражається у відсотках контролю ДМСО.

2.4. Ідентифікація нейропротекторних цитокінінів у SAL-індукованій моделі БП

Для цих тестів,нейроннийКлітини SH-SY5Y диференціювали протягом 48 год, потім спільно обробляли 500 мкМ SAL і кожною CK у трьох концентраціях (0,1, 1, 10 мкМ). Як показано пунктирною лінією на малюнку 2A, застосування нейротоксину SAL у концентрації 500 мкМ зменшило життєздатність диференційованих клітин SH-SY5Y, згідно з аналізом Calcein AM, на 30 відсотків. N-ацетилцистеїн (NAC) використовувався як позитивний контроль у цих тестах через його раніше зареєстрований нейропротекторний ефект у тій же клітинній моделі SH-SY5Y in vitro [37]. Концентрації 10, 100 і 1000 мкМ NAC використовували для індукції часткового або майже повного відновлення в моделі SAL. NAC зміг збільшити життєздатність клітин при концентрації 100 мкМ і 1 мМ, що відповідає 83,39 ± 1,74 відсотка і 89,21 ± 2,89 відсотка відповідно. Захисна активність NAC при 100 мкМ (позначена пунктирною лінією на малюнку 2A) використовувалася як поріг ефективності для вибору CK для подальших тестів. Відповідно до цієї установки, біологічно значуща нейрозахисна активність спостерігалася з K3G при 10 мкМ (81,84 ± 2,36 відсотка), cZR при 0,1 мкМ (81,14 ± 2,30 відсотка) і 1 мкМ (81,53 ± 2,24 відсотка) та iPR при 1 uM (82,43 ± 2,51 відсотка). Таким чином, iPR і cZR були ефективними нейропротекторами при нижчих мікро- або субмікромолярних концентраціях, ніж NAC. TheцитокінінСкринінг також показав, що багато інших метаболітів можуть помірно підвищувати життєздатність диференційованих клітин SH-SY5Y, які зазнали впливу SAL. Однак деякі перевірені СК (включаючи tZR, tZMP, mT, mTR, pT і pTR) мали дуже незначний захисний ефект.

Малюнок 2. (A)Нейропротекторнийдіяльністьцитокініниі N-ацетилцистеїн (NAC) у SAL-індукованій моделі PD onнейрон-подібні клітини SH-SY5Y. Пунктирна лінія показує поріг ефекту NAC, при якомуцитокінінибули відібрані для подальшого тестування; потім пунктирна лінія підраховує кількість живих клітин у аналізі Calcein AM після обробки клітин 500 мкМ SAL; здорові контрольні клітини (CTR, DMSO < 0,1="" відсотка).="" три="" примірники="" принаймні="" через="" три="" окремі="" дні.="" (b)="" нормалізована="" смерть="" клітин="" sh-sy5y="" після="" фарбування="" йодидом="" пропідію.="" три="" примірники="" щонайменше="" за="" п’ять="" незалежних="" днів.="" *="" p="" порівняно="" з="" носієм="" із="" 500="" мкм="" sal,="" #="" p="" порівняно="" з="" транспортним="" засобом="" без="" 500="" мкм="">

Щоб підтвердити найактивнішу природну активність CKs проти PD, загальні показники загибелі клітин кількісно оцінювали за допомогою фарбування йодидом пропідію (PI), який (на відміну від тестів на життєздатність на основі клітинного метаболізму) позначає лише клітини з порушеною цілісністю мембрани, клітини, що вмирають. , і вже мертві клітини [38]. Результати були нормалізовані відносно рівня загибелі клітин після лікування лише SAL (встановлено як 100 відсотків). Як показано на малюнку 2B, речовина позитивного контролю NAC значно знижувала рівень загибелі клітин як при 100, так і при 1000 мкМ (до 77,3 ± 2,21 відсотка та 77,5 ± 4,44 відсотка відповідно). Загалом NAC виявився aнейропротекторнийагент з активністю, порівнянною з активністю, зареєстрованою в інших дослідженнях залежно від дози (в діапазоні 50–500 мкМ) для клітин SH-SY5Y [37]. Аналіз PI також показав, що CK cZR, K3G та iPR мають захисну активність, особливо cZR, що знижує рівень загибелі клітин до 71,6 ± 5,08 відсотків при 0,1 мкМ. На відміну від cZR, K3G мав зворотні дозозалежні ефекти з максимальною активністю при 10 мкМ (зменшуючи рівень загибелі клітин до 75,0 ± 3,69 відсотка), а активність NPR досягала піку при 1 мкМ (знижуючи швидкість до 73,9 ± 4,99 відсотка). Взяті разом, як показано на малюнку 2, CK забезпечили порівняннянейропротекторнийактивність до 100 мкМ NAC відповідно до аналізів як на життєздатність, так і на цитотоксичність. Крім того, ефективні концентрації CK, таких як cZR та iPR, були набагато нижчими, ніж концентрації NAC, у субмікромолярному та мікромолярному діапазонах. Попередні спостереження, отримані після подвійного фарбування PI та аннексином V/PI, показують, що калій може зменшувати апоптоз [39], тому ми також досліджували вплив CK та NAC на окислювальний стрес та активацію каспази-3,7 (добре відомий маркер апоптозу).

2.5. Цитокініни зменшують утворення супероксидних радикалів, викликане SAL

Окислювальний стрес (OS) є ключовим патологічним фактором кількох нейродегенеративних захворювань, і SAL (при > 100 мкМ) і тетрагідроізохіноліни є потужними індукторами OS [26,40]. Таким чином, ми також вимірювали утворення супероксиду (АФК і важливого маркера ОС) у присутності SAL з вибраними CK або NAC і без них. Щоб переконатися, що SAL спричинив достатнє пошкодження ОС у клітинах SH-SY5Y для виявлення відповідей, клітини піддавали дії 500 мкМ SAL протягом 24 годин, як у попередній роботі [37] та відповідно до наведених вище результатів. Потім клітини фарбували дигідроетидієм (DHE) для виявлення утворення супероксидних радикалів [41, 42]. Як можна побачити на малюнку 3A, клітини візуально спостерігали після мічення DHE (що забезпечує сигнали червоної флуоресценції після реакції з супероксидом). SAL викликав явне підвищення флуоресценції DHE порівняно з рівнями в контрольних клітинах і клітинах, оброблених NAC. Крім того, три CK (cZR, K3G та iPR) мали схожі візуальні ефекти з NAC (100 мкМ) на флуоресценцію DHE. Крім того, спектрофотометрична кількісна оцінка щодо рівнів, виявлених у клітинах, оброблених лише SAL (встановлених як 100 відсотків), відповідала мікроскопічним спостереженням. Як показано на малюнку 3B, нормалізований рівень супероксиду в здорових контрольних клітинах (CTR) становив менше 39 відсотків, а позитивна контрольна речовина NAC забезпечувала помірне або повне зниження індукованого SAL виробництва ROS при 100 і 1000 мкМ (до 76,3). ± 4,33 і 44,3 ± 5,12 відсотка), що свідчить про те, що виснаження глутатіону (GSH) відіграє ключову роль у моделі [26]. Цікаво, що SAL викликав різке зниження вмісту GSH у клітинах SH-SY5Y, що супроводжувалося підвищенням OS, до рівнів, подібних до тих, що спостерігалися раніше в дослідженні, яке також зафіксувало опосередковані NAC ефекти на життєздатність клітин, загибель клітин і вміст глутатіону [43] . Представлені тут результати показують, що NAC також знижує утворення супероксидних радикалів до базових рівнів (тобто рівнів у контролі, обробленому ДМСО). Рибозиди CK були протестовані в активних концентраціях (0,1–1 мкМ) разом із K3G і значно знизили вміст супероксидних радикалів у клітинах до наступних рівнів (порівняно з вмістом клітин, оброблених лише SAL): cZR 80,34 ± 5,99 відсотка при 0,1 мкМ ; K3G 77,1 ± 4,89 відсотка при 10 мкМ; iPR 79,2 ± 5,91 відсотка при 1 мкМ, що можна порівняти з ефектами 100 мкМ NAC. У сукупності ортогональні демонстрації переконливо вказують на те, що потужна анти-OS активність відіграє ключову роль у захисних ефектах NAC і CK у моделі PD, індукованої SAL. Кореляція між покращенням загальної життєдіяльності та нейропротекцією також була відзначена іншими авторами [29], і кілька досліджень виявили, що калій і BAP можуть безпосередньо покращувати активність загальної життєдіяльності [44] шляхом утворення комплексів з іонами Cu2 плюс, що призводить до супероксиддисмутази- подібна діяльність [45,46]. Проте КК також описано як непрямі антиоксиданти з ефектами, опосередкованими індукцією шляху антиоксидантної відповіді (iPR) зв’язаного з ядерним фактором еритроїдного 2-фактора 2 (NRF2) [22] або часткового відновлення активності глутатіонпероксидази та СОД ( К) [16]. Крім того, повідомляється, що К. маєнейропротекторнийактивності проти ушкодження OS, індукованого H2O2 у клітинах SH-SY5Y [17]. Обидва типи повідомленої анти-ROS активності СК можуть потенційно пояснити вплив cZR, K3G та iPR на зменшення супероксидних радикалів у моделі PD клітин SH-SY5Y, індукованої SAL [47–50].

Малюнок 3. (A) Мікрофотографії, що демонструють окислювальний стрес, викликаний SAL, і активність, що знижує окислювальний стресцитокініниу людини диференційованийнейрон-подібні клітини SH-SY5Y, візуалізовані за допомогою флуоресцентної мікроскопії після мічення дигідроетидієм (DHE). Бари=50 um. На зображеннях показано клітини, оброблені розчином ДМСО (контроль), 500 мкМ сальсолінолу (SAL) окремо та комбінації 500 мкМ SAL і 1000 мкМ NAC (плюс NAC), 0,1 мкМ cZR (плюс cZR); 10 мкМ K3G (плюс K3G), 1 мкМ iPR (плюс iPR) протягом 24 годин перед фарбуванням DHE. (B) SAL-індуковане утворення супероксидного радикалу тацитокінінабо захисну активність N-ацетилцистеїну (NAC). На графіку показано кількісне визначення клітин, пофарбованих DHE, за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів Infinite M200 Pro (Tecan, Австрія). Три примірники щонайменше за п’ять незалежних днів. * P порівняно з носієм із 500 мкМ SAL, # P порівняно з транспортним засобом без 500 мкМ SAL.