ЧАСТИНА 1. Ліпосома фенілетанол глікозиду пригнічує індуковану PDGF активацію HSC через регуляцію сигнального шляху FAK/PI3K/Akt

Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye і Tao Liu 1,*

1 Департамент токсикології, Школа громадської охорони здоров’я, Сіньцзянський медичний університет, Синьцзян-Уйгурський автономний район, вулиця Сіньї № 393, Урумчі 830011, Китай

2 Ключова лабораторія уйгурської медицини, Інститут Materia Medica Сіньцзяна, Синьцзян-Уйгурський автономний район, район Тяньшань, Сіньхуа Південна дорога № 140, Урумчі 830004, Китай

Для отримання додаткової інформації звертайтеся до:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola має багато ефектів, натисніть тут, щоб дізнатися більше

Анотація: Цистанка трубчастаце традиційний китайський фітопрепарат, який широко використовується для регулювання імунітетуфенілетаноїдні глікозиди(CPhGs) є одними з основних компонентів, відповідальних за цю діяльність. Однак на застосування CPhGs негативно впливає їх погана абсорбція та низьке пероральне використання. Цільова доставка ліків – важливий напрямок розвитку фармацевтики. Попередні дослідження показали, що CPhG можуть блокувати проведення сигнальних шляхів у TGF-p1/smad та пригнічувати активацію зірчастих клітин печінки (HSC). Метою цього дослідження було оцінити дію ліпосом CPhG на фіброз печінки шляхом пригнічення активації HSC, сприяння апоптозу, блокування клітинного циклу, пригнічення провідності сигнальних шляхів у кіназі фокальної адгезії (FAK)/фосфатидилінозитол-3- кінази (PI3K)/протеїнкінази B (Akt), і визначення їх гепатопротекторної активності in vitro. Дослідження вивільнення in vitro показали, що ліпосоми CPhG мають ефект тривалого вивільнення порівняно з лікарськими CPhG. Проліферація HSC була інгібована після обробки ліпосомами CPhG (29,45, 14,72, 7,36 мкг/мл), зі значеннями IC50 42,54 мкг/мл у аналізі MTT. Різні концентрації ліпосом CPhG можуть пригнічувати проліферацію HSC, сприяти апоптозу та блокувати клітинний цикл. Метод MTT показав очевидне інгібування проліферації HSC після лікування ліпосомами CPhG і рекомбінантним фактором росту BB (rrPDGF-BB), отриманим із тромбоцитів щурів. Рівні колагену-1, інгібітора металопептидази 1 (TIMP-1), актину гладких м’язів (a-SMA) і фосфорильованого PI3K/Akt були знижені, а також матриксної металопротеїнази-1 (MMP{ {23}}) була активована шляхом попередньої обробки різними концентраціями ліпосом CPhG. Крім того, 29,45 мкг/мл ліпосом CPhG може зменшити експресію білка FAK і фосфорильованого білка PI3K і Akt нижче за FAK через надмірну експресію гена FAK. Цей експеримент свідчить про те, що ліпосоми CPhG можуть пригнічувати активацію HSC шляхом інгібування FAK, а потім зменшуючи експресію фосфорильованого Akt/PI3K, тим самим надаючи нове уявлення про застосування CPhG для лікування фіброзу печінки.

Ключові слова: фенілетаноїдні глікозидиліпосома; зірчасті клітини печінки; проліферація; апоптоз; клітинний цикл; FAK/PI3K/Akt,

Такі фактори, як TGF-p1, алкоголь, токсини та стеатоз, можуть призвести до активації HSC. PDGF також може призводити до активації HSC [4]. Наразі терапевтичні стратегії, спрямовані на ГСК для запобігання фіброзу печінки, включають інгібування активації, проліферації та клітинного циклу ГСК, а також стимуляцію апоптозу ГСК [5].

Цистанка трубчаста(родина Orobanchaceae), паразитична рослина, широко вирощується в південному регіоні Сіньцзян у Китаї.C. tubulosaбуло показано, що представляє різні дії, включаючи підвищення імунітету організму, підвищення витривалості організму, живлення нирок, лікування імпотенції та підвищення інтелекту;

1. Введення

він також має антиоксидантні та антивікові властивості [6]. Ця рослина містить фенілетаноїдні глікозиди (ФГГ), іридоїди та полісахариди, серед яких ФГГ є одними з основних активних біоактивних видів [7]. У попередньому дослідженні ми виявили, що CPhG можуть блокувати провідність сигнальних шляхів у TGF-p1/smad, пригнічувати активацію HSCs і проявляти превентивний вплив на індукований сироватковим альбуміном бичачий фіброз печінки у щурів [7,8]. Однак CPhGs мають хорошу розчинність у воді та погану розчинність у ліпідах і на них впливають зовнішні фактори, такі як кислотність і ферменти розкладання, які знижують стабільність та ефективність CPhGs [9]. Після внутрішньошлункового введення CPhG нестабільні в шлунково-кишковому тракті щурів, і може легко відбутися гідроліз глікозидних зв'язків. Пероральна біодоступність щурів становила лише 0.83 відсотка, тому важко визначити його терапевтичну роль [10]. Таким чином, ми повинні знайти безпечний, ефективний, тривалий і цільовий антифіброзний препарат для HSC, щоб покращити їхню терапевтичну ефективність. Системи доставки ліків на основі наночастинок забезпечують альтернативну стратегію подолання цих недоліків завдяки своїм перевагам, включаючи високу здатність завантажувати ліки та тривалий кровообіг [11]. Вони мають сильну спорідненість з печінкою і можуть безпосередньо доставляти ліки в клітини шляхом ендоцитозу та злиття. Немодифіковані ліпосоми в основному розподіляються в тканинах або органах, утворених ретикулоендотеліальною системою (RES), і мають функцію пасивного націлювання на печінку [12]. Таким чином, ліпосоми CPhG були виготовлені шляхом мембранної дисперсії та вторинної інкапсуляції для забезпечення антифіброзного ефекту. У цьому дослідженні ми мали на меті дослідити вплив ліпосом CPhG на проліферацію HSC, апоптоз і клітинний цикл, а також його механізми.

2. Результати

2.1. Фізичні властивості ліпосоми CPhG

Фізичні властивості готових ліпосом CPhG були такими: розмір частинок становив (216,7 ± 3,47) нм, дзета-потенціал становив (-55,6 ± 1,3) мВ. Як показано на малюнку 1, частинки були круглими, покриті рівномірною товщиною на поверхні, а розподіл розмірів частинок був рівномірним. Завантаження лікарського засобу та ефективність інкапсуляції ліпосом CPhG становили (3,71 ± 0.32) відсотка та (38,46 ± 7,85) відсотка.

2.2. Вивільнення in vitro з CPhG ліпосом і CPhG

Розрахована кумулятивна швидкість вивільнення була розрахована та нанесена на графік як функція часу для ліпосом CPhG та CPhG (рис. 2). У цьому дослідженні; Швидкість вивільнення CPhG через 12 годин нормалізувалася до 100 відсотків, тоді як швидкість вивільнення CPhG ліпосом була близькою до 100 відсотків через 24 години, і швидкість вивільнення CPhG збільшувалася з часом. Дані були проаналізовані за допомогою різних моделей підгонки для механізмів контрольованого вивільнення, включаючи рівняння нульового порядку, першого порядку та рівняння Хігучі. Зібрані рівняння та коефіцієнти кореляції для трьох моделей випуску наведено в таблиці 1.

Найкраще підходить модель для CPhG та ліпосом CPhG – це рівняння Хігучі та рівняння першого порядку. Дослідження вивільнення ліпосом CPhG in vitro не виявило ефекту вибуху. Для розрахунку параметрів розчинення Т50 (розчинення 50 відсотків) була обрана найкраща функція розподілу. Результати показують, що середній час утримання ліпосом CPhG довший, ніж у CPhG, а T50 ліпосом CPhG становить 9,39 години. Порівняно з 1,69 год для CPhG, ліпосоми CPhG демонструють очевидний ефект уповільненого вивільнення (табл. 2).

Ми спочатку досліджували цитотоксичну дію ліпосом CPhG на HSC за допомогою аналізу MTT in vitro. HSC піддавалися впливу різних концентрацій ліпосом CPhG, що варіювалися від 0 до 117,79 мкг/мл протягом 24 годин. Ліпосоми CPhG знижували життєздатність HSC залежно від дози, і їх значення IC50 становило 42,535 (eg/mL). Вплив ліпосом CPhG (29,45, 14,72 та 7,36 μg/mL) на клітини на 24, 48 і 72 години показано на малюнку 3. Після обробки ліпосомами CPhG проліферація HSC значно пригнічувалася в різні моменти часу (малюнок 3).

Вивільнення лактатдегідрогенази (ЛДГ) ГСК було виявлено через 24 години після обробки різними концентраціями ліпосоми CPhG. Результати наведені в таблиці 3. HSC, оброблені ліпосомами CPhG, не мали значного впливу на вивільнення LDH.

2.4. Ліпосоми CPhG індукують апоптоз HSC і зупиняють клітинний цикл

HSC піддавалися впливу ліпосом CPhG (29,45, 14,72, 7,36 мкг/мл) протягом 24 годин, і було проведено подвійне фарбування аннексином-V-FITC/PE для виявлення апоптозу за допомогою проточної цитометрії, як показано на малюнку 4a. Загальний апоптоз клітин статистично збільшився порівняно з контрольною групою (p < 0.05).="" після="" 24="" годин="" лікування="" hsc="" для="" кожної="" групи="" доз="" ліпосоми="" cphg="" (29,45="" мкг/мл)="" могли="" індукувати="" пізній="" апоптоз="" hsc,="" і="" відсоток="" пізніх="" апоптотичних="" клітин="" був="" вищим,="" ніж="" ранній="" апоптоз.="" частка="" ранніх="" апоптичних="" клітин="" була="" набагато="" вищою,="" ніж="" пізніх="" апоптичних="" клітин="" у="" групах,="" які="" отримували="" ліпосоми="" cphg="" (14,72="" та="" 7,36="" |^г/мл).="" ці="" результати="" чітко="" вказують="" на="" те,="" що="" ліпосоми="" cphg="" індукують="" апоптоз="" гепатоцитів,="" особливо="" на="" пізніх="" стадіях="" hsc.="" крім="" того,="" загальний="" апоптоз="" зростав="" із="" дозуванням="" ліпосом="" cphg.="" ці="" результати="" свідчать="" про="" те,="" що="" ліпосоми="" cphg="" можуть="" пригнічувати="" активацію="" hsc="" і="" фіброз="" печінки="" шляхом="" індукування="" апоптозу="">

Щоб визначити вплив ліпосом CPhG на клітинний цикл HSC, HSC обробляли ліпосомами CPhG у концентраціях 29,45, 14,72 і 7,36 昭/мл протягом 24 годин і аналізували за допомогою проточної цитометрії (рис. 4b). Результати показали, що частка клітин у фазі G0/G1 була значно збільшена (p < {{10}}.05),="" тоді="" як="" відсоток="" клітин="" у="" фазі="" s="" був="" значно="" більшим.="" знижений="" (p="">< 0,05).="" крім="" того,="" частка="" клітин="" у="" фазі="" g2/m="" була="" значно="" знижена="" порівняно="" з="" контрольною="" групою=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5. Дослідження механізму(ів) дії ліпосом C PhG in vitro

2.5.1. Ліпосоми CPhG інгібують проліферацію HSC шляхом стимуляції rrPDGF-BB

Для подальшого дослідження впливу ліпосом CPhG на проліферацію, стимульовану rrPDGF-BB HSC, було проведено аналіз MTT для вимірювання життєздатності HSC, які були оброблені заданими концентраціями ліпосом CPhG протягом 24, 48 та 72 годин ( малюнок 5).

Після 24 годин лікування HSC, стимульованими rrPDGF-BB і 29,45, 14,721 і 7,36 мкм/мл ліпосом CPhG, рівень виживання клітин у кожній групі доз становив 67,5 відсотка, 75,3 відсотка і 89,2 відсотка відповідно. Через 48 годин рівень виживання в клітинах становив 49,2 відсотка, 58,6 відсотка та 73,5 відсотка відповідно
кожної групи доз. Через 72 години лікування показники виживання клітин у кожній групі доз становили 45,3 відсотка, 59,2 відсотка та 79,2 відсотка відповідно. Результати показали, що ліпосоми CPhG мали значний інгібуючий ефект на HSC, стимульовані rrPDGF-BB, і цей інгібуючий ефект ставав більш очевидним зі збільшенням дози. Припускають, що інгібуюча дія ліпосом CPhG на HSC сприяє антипроліфераційній активності CPhGliposomo.

2.5.2. Ліпосоми CPhG інгібують активацію HSC in vitro

HSC у просторі Діссе виробляють такі компоненти ECM, як колаген -1, (s-SMA та колаген III. Інші фактори, які регулюють розвиток ECM, такі як MMP та TIMP, також виробляються HSC [5]. Для подальшого дослідження механізмів, індукованих rrPDGF-BB у HSC, ми оцінили експресію білків, пов’язаних з ECM, зокрема колагену -1, Cosma, колагену III, MMP-1 і TIMP{{8} }. На малюнку 6а показано, що групи ліпосом CPhG (29,45, 14,72, 7.36 4г/мл) можуть знижувати рівні експресії мРНК колагену-1, a-SMA та TIMP{{18} } і підвищують рівень експресії мРНК MMP-1 більше, ніж група rrPDGF-BB.

Рисунок 6. Вплив ліпосом CPhG на експресію колагену-1, a-SMA, TIMP-1 і MMP-1 у HSC. (a ) Експресія мРНК колагену-1, a-SMA, TIMP-1 і MMP-1 у HSC (тест RT-PCR). (b) Експресія білка колагену {{10}} і a-SMA. А — контрольна група; B, група лікування rrPDGF-BB; C, група лікування rrPDGF-BB плюс ліпосома CPhG 29,45 г/мл; D, rrPDGF-BB плюс ліпосома CPhG 14,72 (_ мкг/мл оброблена група; E, rrPDGF-BB плюс ліпосома CPhG 7.3 6 卩г/мл оброблена група d; дані виражені як середнє 土 SD. ** p < 0.01,="" значно="" відрізняється="" порівняно="" з="" групою="" hsc,="" активованих="" rrpdgf-bb.="" #="" p="">< 0,05,="" значно="" відрізняється="" від="" порівняння="" з="" контрольною="" групою.="" 6-актин="" використовувався="" як="" засіб="" внутрішнього="">

Ліпосоми CPhG також підвищували рівні мРНК MMP-1. Рівні a-SMA та колагену -1 були високо виражені в HSC, активованих rrPDGF-BB. Навпаки, ліпосоми CPhG знижували рівні a-SMA та колагену-1 (Рис.6b). Особливо при високій концентрації (29,45 мкг/мл) ліпосома CPhG знижувала підвищену експресію колагену-1 та a-SMA через rrPDGF-BB.

2.53 Ліпосоми CPhG інгібують сигнальний шлях PI3K/Akt

PI3K/Akt є важливим шляхом передачі сигналу, опосередкованим рецепторами тирозинкінази. Сигнальний шлях PI3K/Akt діє як датчик у відповідь на позаклітинні стимули та опосередковує клітинні сигнали, таким чином відіграючи вирішальну роль у клітинному апоптозі та проліферації, впливаючи на активність ефекторних молекул, що знаходяться нижче за течією [13]. Щоб перевірити, чи бере участь шлях PI3K/Akt в антипроліфераційних ефектах ліпосом CPhG на HSC, рівень експресії та фосфорилювання PI3K/Akt досліджували за допомогою Вестерн-блот аналізу. Результати показали, що рівні p-PI3K і p-Akt послідовно знижувалися в HSC після 24 годин лікування ліпосомами CPhG, що вказує на те, що антипроліфераційні ефекти ліпосом CPhG проти HSC пов’язані з дезактивацією шляху PI3K/Akt , як показано на малюнку 7.

2.5.4. Лііпосоми CPhG можуть знижувати експресію білків шляху PI3K/Akt у HSC опосередкованої rrPDGF-BB плазміди надмірної експресії FAK

FAK є критично важливим геном, який регулює сигнальний шлях PI3K/Akt. Активований FAK може фосфорилювати PI3K, що далі призводить до фосфорилювання Akt. FAK опосередковує передачу сигналу рецептора тирозин-протеїнкінази, інтегрину та інших шляхів до клітин, які є з’єднанням і центром кількох внутрішньоклітинних шляхів під час активації HSC. Тому ми спекулювали

що ліпосоми CPhG можуть пригнічувати активність сигнального шляху PI3K/Akt, порушуючи активацію FAK. Згодом ми підтвердили цю гіпотезу, продемонструвавши надекспресію гена FAK.

(pEX{{0}}NC) плюс CPhG ліпосоми 29,45 Лг/мл у групі значно зменшилися (p <0,01).

естерн-блотінг зі специфічними первинними антитілами. ** p < 0.01,="" значно="" відрізняється="">

rrPDGF-BB стимуляція плюс pEX-3-FAK група. плюс p < 0.05,="" що="" значно="" відрізняється="" від="" групи,="" яка="" отримувала="" rrpdgf-bb.="" &="" p=""><0,01, значно="" відрізняється="" від="" стимуляції="">

плюс група pEX-3-NC. -актин використовували як внутрішній контроль.

cistanche може бути протираковим

3. Обговорення

Було показано, що CPhG мають різноманітну біологічну активність, включаючи протизапальну [14,15], антиостеопорозну дію [16,17], седативну дію [18], дію проти втоми [19], нейропротекторну дію [ 20], та гепатопротекторну активність [21,22]. Ян та ін. виявлено, що екстракт зC. tubulosaможе значно сповільнити розвиток експериментального хімічного фіброзу печінки шляхом пригнічення синтезу колагену та зниження окисного стресу [22]. Однак ефективність CPhGs як

Термозахисні засоби обмежені їхньою поганою проникністю та низькою біодоступністю [23]. Тому необхідно розширити застосування CPhG, розробивши ефективну систему доставки, щоб подолати ці недоліки.

В останні роки як дослідження ліків, так і клінічні дослідження підтвердили, що використання наночастинок як носіїв ліків може підвищити ефективність ліків in vivo. Ліпосоми є одними з найважливіших наночастинок [24].

Ліпосоми можна використовувати як носії ліків для успішної доставки протизапальних препаратів, протипухлинних препаратів, антибіотиків, протигрибкових препаратів та інших різних категорій ліків [25]. Ліпосоми також можуть покращувати стабільність ліків, підвищувати розчинність ліків і сприяти біосумісності [26]. З іншого боку, дослідження показали, що система доставки ліків із твердих наночастинок (у діапазоні 10-1000 нм) може концентрувати 80 відсотків дози ліків у печінці, дозволяючи лікам проникати клітини печінки [27]. Jing Zhu та ін. виявили, що ліпосоми галаніну мають хорошу дію на печінку [28]. Таким чином, ефект пасивного прицілювання нанокитайських ліків можна використовувати для лікування захворювань печінки чи інших захворювань. Розмір частинок ліпосом CPhG, отриманих у цьому дослідженні, які мають певний ступінь націлювання на печінку, становить (216,7 ± 3,47) нм. Поведінка вивільнення ліків є важливою властивістю систем доставки наноліків. Оскільки CPhG добре розчиняються у воді, буферний розчин PBS (pH=6.0) використовується як середовище для вивільнення. З кривої вивільнення можна побачити, що до 2 годин відсоток вивільнення ліпосом CPhG становив менше 40 відсотків, раптового вивільнення не відбулося, і спостерігався певний ефект тривалого вивільнення порівняно з вивільненням CPhG. З підігнаного рівняння кривої вивільнення вивільнення ліпосом CPhG у фосфатному буферному розчині при рН=6.0 узгоджується з рівнянням Хігучі.

цистанчеможеантиапоптоз

При хронічних захворюваннях печінки безперервна активація ГСК призводить до фіброзу печінки [29]. Таким чином, інгібування активації, проліферації та клітинного циклу ГСК або індукція апоптозу ГСК може бути новою відправною точкою для цільової терапії фіброзу печінки [30-33]. Багато досліджень виявили, що апоптоз є ключем до зворотного розвитку фіброзу печінки шляхом сприяння апоптозу [34]. Розвиток фіброзу печінки залежить від активації HSCs, які можуть мати потенціал для інгібування активації HSC та індукувати апоптоз для запобігання або лікування фіброзу печінки [35,36]. ЛДГ є ферментом у клітинному цитозолі, який виділяється в культуральне середовище при пошкодженні клітинної мембрани. З цих причин ми провели in vitro дослідження показників життєздатності клітин, вмісту ЛДГ у клітинах, а також апоптозу та клітинного циклу ГСК, які зазнали впливу ліпосом CPhG. Результати показали, що ліпосоми CPhG сильно пригнічують життєздатність і проліферацію HSC і збільшують відсоток апоптичних клітин залежно від концентрації. Крім того, результати клітинного циклу показують, що ліпосоми CPhG можуть індукувати зупинку клітинного циклу у фазі G1. Результати показують, що ключем до ліпосом CPhG для запобігання та лікування фіброзу печінки є регуляція клітинної проліферації, апоптозу та клітинного циклу. Порівняно з холостою контрольною групою вміст ЛДГ у кожній групі має тенденцію до поступового збільшення. Однак істотної різниці (p > 0.05) не було, що вказує на те, що хоча активність HSC, на які впливають ліпосоми CPhG, знижується, більшість клітинних мембран залишаються недоторканими. Інгібування проліферації ГСК ліпосомами CPhG не пов’язане з токсичністю препаратів для клітин.

PDGF є найбільш критичним фактором, що впливає на проліферацію HSC. PDGF-рецептори (PDGF-Ra і -p) належать до сімейства рецепторів тирозинкінази. PDGF-AA зв’язується виключно з PDGF-Ra, тоді як ланцюги PDGF-B зв’язуються та димеризуються як з PDGF-Ra, так і з -p [37]. Після зв’язування ліганду з PDGF-R рецептори димеризуються, що згодом призводить до фосфорилювання внутрішнього залишку тирозину та до активації кількох низхідних сигнальних шляхів, зрештою індукуючи проліферацію та міграцію активованих HSC. Цей процес призводить до надмірного виробництва та відкладення колагену та інших ECM, тим самим сприяючи розвитку та прогресуванню фіброзу печінки [38]. Брайткопф та ін. показали, що надмірна експресія PDGF-BB у печінці призводить до проліферації HSC і фіброзу печінки [39]. У нашому дослідженні ми використовували rrPDGF-BB як стимулятор для активації HSC, і кожна дозована група ліпосом CPhG могла пригнічувати проліферацію HSC і демонструвати очевидний зв’язок доза-ефект. Припускають, що інгібуюча дія ліпосом CPhG на HSC сприяє антипроліфераційній активності ліпосом CPhG.

Активація HSC пов'язана з багатьма змінами в моделях експресії генів у клітинах. Зокрема, зміни в експресії генів колагену -1 та a-SMA найбільше корелюють із властивостями фіброзу активованих HSC [40]. MMPs є цинк-залежними ендопептидазами, які відіграють важливу роль у деградації всіх компонентів білка ECM у фізіологічних та патологічних умовах. MMPs і TIMPs опосередковують синтез і деградацію ECM відповідно. MMP можуть сприяти деградації ECM. Крихкий баланс між ММП і ТІМП визначає виникнення фіброзу печінки [29]. Порівняно з групою rrPDGF-BB експресія TIMP-1, a-SMA та колагену-1 у групах ліпосом CPhG значно зросла, тоді як експресія MMP-9 знизилася. Лікування ліпосомами CPhG помітно змінило аномальну експресію, індуковану rrPDGF-BB у HSC. Ці дані вказують на те, що ліпосоми CPhG, можливо, пригнічують утворення ECM, відновлюючи баланс між MMP і TIMP, таким чином збільшуючи рівні MMP-1 і знижуючи експресію TIMP-1, a-SMA та колаген-1 і потенційно сприяють деградації позаклітинного матриксу.

ФАК є різновидом вогнищево-спайкового комплексу. PDGF також може активувати FAK шляхом взаємодії з білком ECM через інтегрин [41]. Фокальний адгезивний комплекс забезпечує прямий датчик цілісності позаклітинного середовища. Активація FAK призводить до активації PI3K. Показано, що PI3K бере участь у проліферації кількох типів клітин [42]. Його вирішальну роль у HSCs було показано через використання PI3K-специфічних інгібіторів LY294002 і вортманніну для блокування PDGF-індукованого мітогенезу та хемотаксису без впливу на автофосфорилювання рецептора PDGF [43]. PI3K рекрутується в дімеризовані фосфорильовані рецептори PDGF, які активують протеїнкіназу С (PKC), Akt і кінази p70S6 (p70S6K) [44]. Повідомлялося, що домінантно-негативний FAK (Ad-FAKCD) використовувався для блокування активності FAK та інгібування активації PI3K, індукованої проліферацією PDGF і HSC після лікування PDGF [45]. Тому ми припустили, що шлях FAK/PI3K/Akt є можливою мішенню для ліпосом CPhG.

Наші результати демонструють, що порівняно зі стимуляцією rrPDGF-BB плюс X-3-FAK групи, рівні експресії білка FAK, фосфорильованого PI3K і фосфорильованого Akt знижувалися при стимуляції rrPDGF-BB плюс X-3-FAK плюс ліпосома CPhG 29,45 Lg/mL група. Ці результати показують, що обробка ліпосомами CPhG 29,45 мкг/мл може зменшити експресію білка FAK і фосфорильованих білків PI3K і Akt, розташованих нижче FAK.

З поглибленням досліджень хімії та фармакології традиційних китайських ліків було знайдено та підтверджено все більше активних інгредієнтів традиційних китайських ліків. Паклітаксел, артемізинін та інші препарати широко визнані як препарати першої лінії для лікування супутніх захворювань у всьому світі. Однак, у той же час, було виявлено, що хоча in vitro фармакологічний ефект багатьох китайських медичних інгредієнтів є дуже сильним, вони мають погану розчинність у воді, короткий період напіввиведення, низьку стабільність, низьку біодоступність, токсичні побічні ефекти та багато інші проблеми, які серйозно обмежують їх медичне та клінічне застосування. Наносистема доставки ліків — це нова система доставки ліків із великим потенціалом для розвитку та є гарячою точкою сучасних фармацевтичних досліджень. Його застосування в дослідженнях і розробці нових форм традиційної китайської медицини не тільки покращує традиційні форми китайської медицини, але й певною мірою покращує лікувальний ефект традиційної китайської медицини та підвищує стабільність ліків in vivo. Крім того, немодифіковані ліпосоми здебільшого поглинаються РЕЗ залежно від розміру їх частинок, властивостей поверхні та інших факторів. Вони також пасивно націлені на печінку. Щоб підвищити ефективність націлювання на печінку звичайних ліпосом, концентрація цільової тканини може бути збільшена шляхом підключення специфічних лігандів або специфічних функціональних груп.

Тому в майбутніх дослідженнях ми повинні приділяти важливе значення фізичним і хімічним властивостям вилучення та очищення CPhG, таким як розчинність, стабільність, кислотність і лужність, а також вивченню біофармацевтики та фармакокінетики. Ми повинні розробити унікальну теорію дизайну рецептури, технологічну платформу приготування та метод оцінки якості для CPhG, а також розробити різноманітні системи завантаження нанопрепаратів для CPhG, щоб забезпечити якнайповніше використання CPhG. Повне використання цих переваг буде напрямом наших майбутніх досліджень.