Оптимізація процесу знебарвлення та антиоксидантна активність екстракту полісахариду Cistanche Deserticola за допомогою методології поверхні відповіді

Анотація:

 

Завдання:Для оптимізації процесу знебарвлення полісахаридів Cistanche Deserticola та вивчити їх антиоксидантну активність.

Досліджено методи, що використовують активоване вуглець як знебарвлюючого засобу, впливають 4 фактори, включаючи дозу активованого вуглецю, температуру знебарвлення, час знебарвлення та рН на швидкість знебарвлення та швидкість відновлення полісахариду. На основі одного факторів експериментів, процес деколоризації екстракту полісахариду Cistanche Deserticola PolysaCharide був оптимізований за допомогою методології поверхні відповіді. Використовуючи метод оцінки антиоксидантної активності in vitro, здатність до очищення вільних радикалів 1, 1- дифеніл -2- picrylhydrazine (dpph), загальна здатність до зменшення, здатність до очищення гідроксильних радиків та 2,2'-азино BIS (3- етилбензотіазол - 6- сульфонова кислота) Діамонієва сіль (ABTS) катіонна здатність до очищення полісахаридів від Cistanche Deserticola. Результати Оптимальні умови процесу знебарвлення для екстракту полісахаридів з Cistanche Deserticola були такими: Активна дозування вуглецю 20%, температура знебарвлення 37 градусів, час декороризації 49 хв, рН 5,03. У цих оптимальних умовах швидкість деколозірації та швидкість відновлення полісахариду становили відповідно 62,66% та 96,16%. Після знебарвлення можливості очищення радикалів DPPH та гідроксильних вільних радикалів значно збільшувались, тоді як можливості відбиття аніонних радикалів ABTS значно зменшувалися. Висновок Процес знебарвлення легко працювати з хорошими наслідками знебарвлення та швидкості відновлення полісахариду. Він має важливу цінність застосування та забезпечує основу для пізніших досліджень та розробки полісахариду Cistanche Deserticola.

Ключові слова: Cistanche DeserticolaПолісахарид; знебарвлення; методологія поверхні відповіді; антиоксидантна активність

ЦистаншЕфекти Deserticola

 

1.2.3 Вимірювання швидкості відновлення полісахариду

Підготовка стандартної кривої:
Були використаний метод фенол-сульфурової кислоти. Приблизно 0. 0 5 0 0 г стандарту глюкози (сушили до постійної ваги при 105 градусах) було точно зважено і розбавлений до 50 мл об'ємної колби для підготовки запасу. Потім 1,0 мл розчину запасу точно вимірювали та розбавляли до 10 мл в об'ємній колбі для отримання стандартного розчину 0,1 мг/мл. Стандартні розчини 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 та 100 мкл глюкози були точно виміряні в 1,5 мл труб центрифуги. До кожної трубки додавали дистильовану воду, щоб скласти загальний об'єм 100 мкл. Ще 1,5 мл центрифугної трубки, що містить 100 мкл дистильованої води, використовували як порожній контрольний розчин. До кожної трубки додавали 100 мкл 5% розчину фенолу, ретельно змішували, а потім швидко додавали 500 мкл концентрованої сірчаної кислоти. Трубки виходять протягом 3 хвилин і залишали 35 хвилин. Потім 200 мкл реакційного розчину переносили в пластину свердловини 96-, а поглинання вимірювали при 490 нм за допомогою автоматичного зчитувача мікропланшетів. Стандартна крива була побудована з абсорбцією (y) як вертикальної осі та концентрації глюкози (x, UG/мл) як горизонтальна вісь. Отримане стандартне рівняння кривої було:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

Вимірювання вмісту полісахариду:
Аликвота 100 мкл розведеноїCistanche deserticolaЕкстракт полісахариду точно вимірювали в 1,5 мл центрифуг -трубки. Значення поглинання визначали за допомогою описаного вище методу, і концентрацію полісахариду обчислювали за допомогою стандартної кривої.

Вимірювання швидкості відновлення полісахариду:
Маса полісахаридів уCistanche deserticolaЕкстракт до і після знебарвлення вимірювали за допомогою методу вище. Швидкість відновлення полісахариду обчислювали за допомогою рівняння (2):

Швидкість відновлення полісахариду (%)
= (maftermbefore) × 100%\ ліворуч (\ frac {m _ \ text {після}} {m _ \ tex
Де:

mbeforem _ \ text {перед} mbefore і mafterm _ \ text {після} mafter - це масиCistanche deserticolaПолісахариди до та після знебарвлення відповідно (g).

 

 

1.2.4 Однофакторна експериментальна конструкція

Вплив чотирьох факторів, що активована вуглецем, температура знебарвлення, час знебарвлення та рН на швидкості знебарвлення та швидкість відновлення полісахаридуCistanche deserticolaЕкстракт полісахариду досліджували.

Вплив дози активованого вуглецю:
Фіксований час знебарвлення за 30 хвилин, температура знебарвлення при 50 градусах та рН - 5,03 (вимірюване значення вибірки). Було вивчено вплив дози активованої вуглецю на швидкість знебарвлення та швидкість відновлення полісахариду.

Вплив температури знебарвлення:
Фіксована дозування вуглецю на 20% (M: M), час знебарвлення за 30 хвилин, а рН - 5,03. Було вивчено вплив температури знебарвлення на швидкість знебарвлення та швидкість відновлення полісахариду.

Вплив часу знебарвлення:
Фіксована дозування вуглецю на 20%, температура знебарвлення при 50 градусах та рН - 5,03. Вплив часу знебарвлення на швидкість знебарвлення та швидкість відновлення полісахариду.

Ефект pH:
Фіксована дозування вуглецю на 20% (м: м), температура знебарвлення на 50 градусів та час знебарвлення за 30 хвилин. Вплив рН на швидкість знебарвлення та швидкість відновлення полісахариду.

 

1.2.5 Експериментальна конструкція оптимізації поверхні відповіді

На основі оптимальних діапазонів стану, ідентифікованих в однофакторних експериментах, метод експериментальної конструкції Box-Behnken був використаний для проведення чотирифакторної, трирівневої конструкції для умов знебарвленняCistanche deserticolaПолісахаридний екстракт. Коефіцієнт знебарвлення та швидкість відновлення полісахариду використовувались як показники оцінки. Параметри проектування показані в таблиці 1.

1.2.6 Визначення антиоксидантної активностіCistanche deserticolaПолісахариди

(1) ВизначенняCistanche deserticolaЗдатність до радикального очищення полісахаридів DPPH

На основі методу Kan Jintao et al. [21] з незначними модифікаціями, 0. (1, {{1 0}} дифеніл -2- picrylhydrazine) та 1,1 мл дистильованої води. Суміш давали реагувати в темряві при 37 градусах протягом 30 хвилин. Поглинання реакційного розчину вимірювали при 517 нм, а швидкість очищення радикалів DPPH 1,0 мг/мл полісахаридів до та після знебарвлення обчислювали за допомогою рівняння (3):

Швидкість очищення радикальних DPPH (%)

{{{0}} [1− (a1−a2) a 0] × 100%= \ ліворуч [1 - \ frac {A _1 - a _2)} {a _0} \ \ rowile 100 \%= [1−A0 (A1 −A2)] × 100%

Де:

A1A _1 A1 - поглинання пробірки зразка,

A2A _2 A2 - поглинання, коли безводний етанол замінює розчин DPPH,

A {{0}} A _0 A0 - поглинання, коли дистильована вода замінює зразок.

 

(2) Визначення загальної зменшення потужностіCistanche deserticolaПолісахариди

Посилаючись на метод Lu Xue et al. [22], 1. 0 мг/мл полісахаридів до та після принесення декороризації. До пластини, що зменшує антиоксидантну силу, що зменшує антиоксидантну потужність (50 мкл FRAP (іонного іона, що зменшує іон), додавали до 96- свердловини, ретельно змішувались і давали реагувати на 37 градусів протягом 5 хвилин. Поглинання вимірювали при 593 нм, а загальна зменшувальна потужність полісахаридів виражала з точки зору концентрації стандартного розчину FESO4.

(3) Визначення здатності до очищення гідроксильних радикалівCistanche deserticolaПолісахариди

Дотримуючись методу, описаного в літературі [23], та інструкції набору аналізу на очищення гідроксильних радикалів, 1. 0 мг/мл полісахаридів до та після знебарвлення. Дистильовану воду використовували для заміни перекису водню для поглинання контрольної групи (Acontrola _ \ text {Control} Acontrol), а дистильовану воду використовували для заміни зразка для порожньої поглинання групи (Ablanka _ \ text {blank} ablank). Значення поглинання вимірювали при 550 нм, а швидкість очищення гідроксильних радикалів обчислювали за допомогою рівняння (4):

Швидкість очищення гідроксильних радикалів (%)

=[(Acontrol−Asample)(Acontrol−Ablank)]×100%= \left[ \frac{(A_\text{control} - A_\text{sample})}{(A_\text{control} - A _ \ text {blank})} \ right] \ times 100 \%= [(acontrol - ablank) (acontrol −asample)] × 100%

Де:

Asamplea _ \ text {sample} aSample - це поглинання групи зразків,

Acontrola _ \ text {control} acontrol - це поглинання контрольної групи,

Ablanka _ \ text {blank} ablank - це поглинання порожньої групи.

 

(4) Визначення здатності до радикального очищення ABTCistanche deserticolaПолісахариди

Відповідно до методу, описаного в літературі [24], та інструкціях набору аналізу на радикальне відбиття ABTS, 1. 0 мг/мл полісахаридів до та після знебарвлення. Зразок 10 мкл змішували з 20 мкл робочого розчину реагенту чотири та 170 мкл робочого розчину ABTS, ретельно змішаний і давали реагувати в темряві при кімнатній температурі протягом 6 хвилин. Деіонізована вода використовувалася як порожній контроль. Поглинання вимірювали при 405 нм, а швидкість від очищення радикалів ABTS розраховували за допомогою рівняння (5):

Катіони радикальної швидкості відбиття (%)

= [(bblank - bblake) bblank] × 100%= \ ліворуч [\ frac {(b _ \ text {blank} - b _ \ tex 100 \%= [bblank (bblank −baskle)] × 100%

Де:

Bblankb _ \ text {blank} bblank - це поглинання реакції між розчином дистильованої води та ABTS,

Bsampleb _ \ text {sample} bsample - це абсорбція реакції між зразком і розчином ABTS.

 

1.3 Обробка даних

Для аналізу даних було використано програмне забезпечення Sigmaplot 12.5, а експерт з дизайну 8. 0. 6 Програмне забезпечення було використано для аналізу даних.