Відмінності в складі та медичній ефективності сирих продуктів і продуктів, оброблених парою, з Cistanches Herba Ⅱ
Sep 10, 2024
2.3.3 Визначення маси тіла та температури тіла
Щурів годували адаптивно протягом 1 тижня, реєстрували як 0 день, і реєстрували масу тіла та ректальну температуру; після ін’єкції гідрокортизону натрію сукцинату безперервно вводили протягом 14 днів, це було зареєстровано як 14 день, і реєструвалися маса тіла та ректальна температура; після успішного моделювання лікування препаратом проводили за схемою дозування протягом 30 днів, записували як 44 день, реєстрували масу тіла та ректальну температуру.
2.3.4 Виявлення частоти спонтанної активності
Кількість активностей щурів протягом 5 хвилин реєстрували за допомогою багатофункціонального реєстратора спонтанної активності щурів. Щурів поміщали в прилад спонтанної активності, перші 3 хвилини були періодом адаптації, а кількість спонтанних дій щурів підраховували самописцем за останні 5 хвилин. У кімнаті має бути тихо, температура в приміщенні має підтримуватися на рівні 18-22 градусів, а вологість – 45%-65%. Кількість спонтанних дій на 0, 14 і 44 дні була зареєстрована відповідно.
2.3.5 Виявлення сироваткового індексу
Після анестезії щурів відбирали кров із черевної аорти, поміщали в коагуляційну пробірку та центрифугували при 2 000 об/хв протягом 15 хв, щоб виявити вміст T, E2, CREA та BUN у сироватка.
ВИСОКОЯКІСНА ЦИСТАНКА ПРИ ЗАХВОРЮВАННЯХ НИРОК
Служба підтримки Wecistanche
Електронна адреса:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Тел.:+86 15292862950
2.3.6 Розрахунок органного індексу
Після анестезії щурів і збору крові видаляли нирки, яєчка, придаток яєчка, сім’яні пухирці та передміхурову залозу, витирали насухо фільтрувальним папером і негайно зважували масу. Індекс органу розраховували на основі маси щура.
Індекс органу=маса органу/маса тіла
2.3.7 Виявлення тканин
Після видалення яєчок щура масу зважили та негайно помістили в холодильник із температурою -80 градусів для заморожування. Перед вимірюванням їх виймали, розморожували і додавали попередньо охолоджений фізіологічний розчин, щоб отримати гомогенат тканини в умовах крижаної бані, і готували 10% гомогенат тканини. Гомогенат негайно центрифугували при 5,000 об/хв протягом 10 хв, а супернатант брали для використання. Відповідно до вимог набору для визначення вмісту СОД у тканині яєчка використовували гідроксиламіновий метод, а для визначення вмісту МДА у тканині яєчка – метод ТБА.
Рис. 2 Діаграма повного іонного струму цистанхея Herba та тушкованого у вині Cistanches Herba в режимі негативних іонів
3 Результати
3.1 Відмінності в складі цистанхи пустерної до і після обробки
3.1.1 Діаграма повного потоку іонів
У цьому дослідженні детектор мас-спектрометра використовував режим негативних іонів джерела електророзпилюваної іонізації (ESI−). На рисунку 2 показана діаграма загального іонного потоку сирої цистанчі десертної та тушкованих продуктів у режимі негативних іонів. Видно, що склад зразків цистанки пустерної дуже складний, і існують очевидні відмінності між сирою цистанкою пустерною та тушкованими продуктами. Крім того, шляхом пошуку в існуючій базі даних і консультації з відповідною літературою щодо елементного складу та відповідності сполук було ідентифіковано загалом 45 сполук, як показано в таблиці 3.
Таблиця 3 Ідентифіковані сполуки у зразках Cistanches Herba
3.1.2 Результати PCA
Діаграми PCA сирої цистанки десертної та продуктів, тушкованих на вині, показані на рисунку 3, які можна кластеризувати окремо. Можна визначити, що повинні бути відмінності в складі Cistanche deserticola до і після обробки.
3.1.3 Результати OPLS-DA
Після обробки OPLS-DA діаграма S-Plot показана на малюнку 4. Два кінці S-подібної кривої на малюнку представляють характерні маркери з найбільшим внеском у кожній групі. Аналізуючи дані фрагментних іонів зі значеннями VIP більше 1 на обох кінцях S-подібної кривої та порівнюючи з контролем, було ідентифіковано чотири диференціальних компоненти: ехінакозид (tR=8.39 хв, m/z 785. 250 9), вербаскозид (tR=11.51 хв, m/z
623.198 1), ізовербаскозид (tR=13.38 хв, m/z623.198 1) і тубулозид B (tR=18.41 хв, m/z 665. 208 7).
ВИСОКОЯКІСНИЙ ЛІКЕР ЦИСТАНША ПРИ ЗАХВОРЮВАННЯХ НИРОК
3.2 Результати експериментів на тваринах
3.2.1 Спостереження за загальним станом
Після моделювання щури показали низку симптомів, таких як любов до тепла та страх холоду, згортання та вигинання спини, млявість, тьмяне та брудне волосся, холодні кінцівки, зниження апетиту, зменшення маси тіла та прозора сеча. Після введення вищевказані симптоми в кожній групі значно покращилися.
3.2.2 Зміни в раціоні та довільній активності щурів після моделювання
Після безперервної ін’єкції гідрокортизону натрію сукцинату протягом 14 днів вимірювали масу тіла, кількість довільних дій протягом 5 хвилин, а також споживання їжі, споживання води та виділення сечі щурам у кожній групі, щоб визначити, чи модель ниркового дефіциту ян гідрокортизону було успішно встановлено. Результати наведено в таблиці 4. Як показано в таблиці 4, після 14 днів застосування гідрокортизону, порівняно з нормальною групою, у всіх групах спостерігалося зниження маси тіла, зменшення споживання їжі, збільшення споживання води, збільшення виділення сечі та зниження довільної активності, і були значні відмінності (P < 0.05). Відповідно до опису деяких синдромів ниркової недостатності Ян у термінології клінічної діагностики та лікування традиційної китайської медицини: «страх холоду та холодних кінцівок, особливо нижче талії та колін, блідий або темний колір обличчя, прозоре та тривале сечовипускання, часте сечовипускання ніч, блідий язик з білим нальотом, слабкий пульс тощо». У поєднанні зі спостереженням за загальним станом після моделювання симптоми після моделювання узгоджувалися з описом дефіциту нирок Ян, що вказує на успішне моделювання.
| немає | З'єднання | т/хв | Режим іонізації | Молекулярна формула | Теоретичне значення (m/z) | Експериментальне значення (m/z) | Помилка (×10⁻⁶) | Інформація про фрагмент (m/z) |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Виноградний цукор | 0.79 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 179.055 | 179.055 | 0.20 | 97, 89 |
| 2 | Виноградний танін | 0.81 | [M–H] | C₁₅H₁₄O₈ | 331.139 | 331.139 | 1.53 | 295, 313, 311 |
| 3 | сорбіт | 0.88 | [M–H] | C₁₂H₂₂O₁₁ | 341.108 | 341.108 | 1.50 | 179, 161, 143, 131 |
| 4 | Половина молочного цукру | 1.10 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 181.071 | 181.071 | 2.68 | 163, 101 |
| 5 | Поживна речовина рослинного походження C | 1.20 | [M–H] | C₂₈H₄₃O₁₂ | 561.197 | 561.197 | -0.01 | 543, 461, 399 |
| 6 | Сосновий цукор | 1.21 | [M–H] | C₁₆H₂₀O₈ | 341.123 | 341.124 | 1.63 | 179, 161, 143, 131, 119 |
| 7 | Бурштинова кислота | 1.52 | [M–H] | C₄H₄O₄ | 117.018 | 117.019 | 3.40 | 99, 73 |
| 8 | Поживна речовина рослинного походження B | 2.04 | [M–H] | C₂₈H₃₃O₁₃ | 577.192 | 577.192 | -0.03 | 297, 208, 183, 178, 171, 153 |
| 9 | Флавоноїди чаю | 2.20 | [M–H] | C₇H₆O₆N₂ | 164.071 | 164.072 | 1.00 | 103 |
| 10 | Екстракт пекінської груші | 3.73 | [M–H] | C₁₄H₁₂O₁₁ | 373.113 | 373.115 | 5.48 | 355, 327, 297 |
| 11 | Екстракт ягід годжі | 4.28 | [M–H] | C₂₀H₂₄O₁₈ | 461.169 | 461.169 | 0.00 | 485, 293, 215, 197, 167 |
| 12 | Екстракт листя ананаса | 4.74 | [M–H] | C₁₁H₁₂O₇ | 487.145 | 487.146 | 0.88 | 389, 179 |
| 13 | Екстракт квітів гібіскуса | 4.63 | [M–H] | C₂₄H₂₈O₁₀ | 537.197 | 537.197 | 0.00 | 501, 415, 375, 357 |
| 14 | 8- -Гідроксилактон | 5.27 | [M–H] | C₁₂H₂₀O₈ | 241.096 | 241.097 | 0.04 | 213, 189 |
| 15 | Кореневище діоскореєве | 6.10 | [M–H] | C₁₈H₂₄O₈ | 361.115 | 361.113 | 2.20 | 309, 163, 137 |
| 16 | Екстракт солониці | 6.82 | [M–H] | C₁₅H₂₁O₁₀ | 327.108 | 327.109 | 1.00 | 307, 195 |
| 17 | Бджолиний пилок | 7.20 | [M–H] | C₁₄H₂₈O₈ | 437.472 | 437.472 | 0.00 | 393, 373, 355 |
| 18 | -Каротин | 7.53 | [M–H] | C₂₉H₄₆O₁₆ | 629.192 | 629.192 | 0.00 | 617, 479, 459, 315, 221 |
| 19 | Фіолетовий солодкий картопля | 7.70 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 20 | Екстракт пекінської груші | 8.02 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 21 | Екстракт цвіту персика | 8.09 | [M–H] | C₂₈H₄₀O₁₂ | 561.197 | 561.197 | 0.00 | 543, 461, 399 |
| 22 | Екстракт женьшеню | 10.39 | [M–H] | C₈H₁₈O₈ | 799.266 | 799.266 | 0.03 | 417, 439, 543, 561 |
| 23 | Екстракт чаю улун | 10.63 | [M–H] | C₂₄H₃₄O₁₆ | 539.149 | 539.149 | 0.10 | 637, 621, 471, 473 |
| 24 | Екстракт листя лотоса | 11.51 | [M–H] | C₂₇H₃₄O₁₂ | 549.197 | 549.197 | 0.00 | 197, 153, 135 |
| 25 | Екстракт волохатої квітки | 11.51 | [M–H] | C₂₉H₄₈O₁₆ | 623.197 | 623.196 | -0.21 | 387, 531 |
| 26 | Екстракт пагонів бамбука | 11.51 | [M–H] | C₃₇H₄₈O₂₁ | 827.261 | 827.259 | -1.92 | 461, 315, 135, 297, 161 |
| 27 | Екстракт хризантеми | 11.60 | [M–H] | C₂₁H₃₀O₉ | 429.118 | 429.118 | 0.00 | 663, 625, 413 |
| 28 | 6-Ацетил флавон | 12.32 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₆ | 345.118 | 345.119 | 0.02 | 301, 281 |
| 29 | Екстракт фруктів Лонган | 13.41 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₈ | 417.154 | 417.159 | -0.11 | 165, 119, 327, 129, 27 |
Рис. 3 Діаграма аналізу основних компонентів Cistanches Herba (1) і тушкованих у вині Cistanches Herba (2)
Рис. 4 S-діаграма Cistanches Herba та тушкованих у вині Cistanches Herba
Таблиця 4 Зміни в раціоні та вегетативній активності щурів після моделювання (xs ± , n=10)
| Група | Вага тіла (г) | Споживання їжі за 24 години (г) | Споживання води за 24 години (мл) | Об’єм сечі за 24 години (мл) | Підрахунок спонтанної активності протягом 5 хвилин |
|---|---|---|---|---|---|
| нормальний | 285.14 ± 9.26 | 15.81 ± 2.19 | 20.86 ± 3.59 | 11.09 ± 2.57 | 100.4 ± 14.7 |
| Модель | 226.67 ± 12.14* | 11.92 ± 3.69* | 32.53 ± 4.65* | 15.58 ± 6.38* | 72.7 ± 11.6* |
| PR | 222.89 ± 9.87* | 10.65 ± 4.20* | 31.54 ± 3.55* | 19.36 ± 5.20* | 68.9 ± 18.0* |
| PW | 219.16 ± 10.75* | 12.37 ± 3.42* | 29.11 ± 4.78* | 16.01 ± 3.96* | 62.8 ± 14.9* |
| JK | 230.02 ± 7.95* | 10.22 ± 2.26* | 34.57 ± 5.36* | 19.13 ± 7.57* | 69.3 ± 11.3* |
Примітки:
Порівняння з нормальною групою: *P < 0.05.
*P < 0.05 проти нормальної групи.
Таблиця 5 Зміни маси тіла щурів під час циклу дозування (xs ±, n=10)
| Група | Вага тіла (г) | 0 d | 14 d | 44 d |
|---|---|---|---|---|
| нормальний | 192.12 ± 5.48 | 285.14 ± 9.26 | 430.02 ± 6.14 | |
| Модель | 187.24 ± 4.56* | 226.67 ± 12.14* | 328.33 ± 14.77* | |
| PR | 185.07 ± 5.11 | 222.89 ± 9.87* | 345.25 ± 8.22*# | |
| PW | 183.48 ± 6.44 | 219.16 ± 10.75* | 362.17 ± 7.82*#Δ | |
| JK | 194.13 ± 5.90 | 230.02 ± 7.95* | 356.94 ± 7.47*# |
Примітки:
*P < 0.05 проти нормальної групи.
*P＜{{0}}.05 проти нормальної групи; #P<0,05 проти групи моделей; △P<0,05 проти PR-групи. Те саме, що нижче.
3.2.3 Зміни маси тіла щурів
На підставі зміни маси тіла три рази на 0, 14 і 44 дні було проаналізовано вплив внутрішньом’язової ін’єкції гідрокортизону натрію сукцинату на масу тіла щурів і відновлення маси тіла щурів після медикаментозного лікування. Результати наведені в таблиці 5.
З таблиці 5 видно, що після 1 тижня адаптивного годування маса тіла щурів зросла і була відносно збалансованою. Маса тіла щурів була (200±20) г. Не було істотної різниці між групами, що вказує на те, що середовище годування та умови харчування підходять для виживання щурів. Після 14 днів введення гідрокортизону, порівняно з нормальною групою, збільшення маси тіла щурів у модельній групі та кожній групі лікування було зменшено, і була значна різниця (P<0.05). The body weight of the rats in the normal group was
3.2.4 Зміна температури тіла щурів
На основі триразових змін температури тіла на 0, 14 і 44 дні було проаналізовано вплив внутрішньом’язової ін’єкції гідрокортизону натрію сукцинату на температуру тіла щурів і відновлення температури тіла щурів після медикаментозного втручання. . Результати наведені в таблиці 6.
3.2.5 Зміни в спонтанній діяльності щурів
Базуючись на змінах кількості спонтанних активностей протягом 3 днів на 0, 14 і 44 дні, вплив внутрішньом’язової ін’єкції гідрокортизону натрію сукцинату на кількість спонтанних активностей у щурів і відновлення кількості спонтанних активностей активності щурів після медикаментозного втручання. Результати див. Таблицю 7.
З таблиці 7 видно, що через 14 днів після ін’єкції гідрокортизону, порівняно з нормальною групою, кількість спонтанних дій протягом 5 хвилин у кожній групі значно зменшилася, і була значна різниця (P<0.05). One month after administration, compared with the model group, the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group increased (P<0.05); compared with the normal group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group; Compared with the JK group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities among the Cistanche deserticola administration groups. It shows that Cistanche deserticola extract can increase the number of spontaneous activities in rats with kidney-yang deficiency, and after 30 days of treatment, the number of spontaneous activities is close to that of normal rats.
3.2.6 Індекс органу
Після 30 днів безперервного введення щурів голодували протягом 12 годин і забивали. Вимірювали якість органів. Вплив індукованої гідрокортизоном моделі дефіциту нирок ян на органи щурів і введення різних екстрактів Cistanche deserticola спостерігали на рівні органів. Відновлення органів щурів після прийому препарату. Після введення гідрокортизону маса тіла щурів сильно змінювалася, а також істотно змінювалася маса органів. Цей експеримент використовував індекс органу як індикатор для розгляду
Вплив на органи спостерігався до і після прийому. Результати наведені в таблиці 8.
З таблиці 8 видно, що порівняно з нормальною групою після внутрішньом’язової ін’єкції гідрокортизону натрію сукцинату щурам показники органів нирок, яєчок, придатка яєчка та передміхурової залози в модельній групі зменшилися (P<0.05), indicating that hydrocortisone-induced The kidney-yang deficiency model in rats will cause changes in the indexes of the kidneys, testicles, epididymis and prostate, but has little effect on the seminal vesicles.
Загалом, порівняно з модельною групою, індекси органів у кожній групі введення були покращені, що вказує на те, що сирий Cistanche deserticola, вино Cistanche deserticola та таблетки Jingui Shenqi можуть полегшити зниження індексу органів у моделі дефіциту нирок-ян.
З точки зору кожного органу, порівняно з модельною групою, група вина Cistanche deserticola може значно збільшити індекс органу нирки (P<0.05). Comparing different drug administration groups, the wine Cistanche deserticola group is better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). ; From the perspective of testicular index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the testis (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group has a significant advantage over the raw Cistanche deserticola group. (P < 0.05); from the perspective of epididymal index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the epididymis (P < 0.05); from the perspective of seminal vesicle index, compared with the model group , the wine Cistanche deserticola group can significantly improve the organ index of the seminal vesicles (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group is significantly better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05); from the perspective of the prostate, compared with the model group In comparison, the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group could significantly increase the prostate organ index (P<0.05).
3.2.7 Визначення показників функції нирок
BUN і CREA відображають функцію нирок. CREA у сироватці є кінцевим продуктом азотовмісної органічної речовини, а BUN у сироватці є основним кінцевим продуктом білкового метаболізму. Обидва вони в основному виводяться шляхом клубочкової фільтрації [10-11]. При порушенні функції нирок знижується функція клубочкової фільтрації, а концентрація обох підвищується. Рівні BUN і CREA в крові відображають стан функції нирок: чим вищий їх рівень, тим серйозніше пошкодження функції нирок. У цьому експерименті було виявлено вміст BUN і CREA в сироватці крові щурів, щоб оцінити вплив кожної групи введення на функцію нирок у щурів із індукованим гідрокортизоном дефіцитом нирок Ян.
Як видно з таблиці 9, порівняно з нормальною групою вміст BUN і CREA у модельній групі був підвищений, і була значна різниця (P<0.05), indicating that hydrocortisone caused kidney damage to rats. Compared with the model group, the wine Cistanche deserticola and raw Cistanche deserticola groups can reduce the content of CREA (P<0.05), thereby alleviating kidney damage to a certain extent.
3.2.8 Виявлення індикатора статевих гормонів
Нирки є основою вродженості та відіграють важливу роль у рості, розвитку та життєвих процесах людини. Традиційна китайська медицина вважає, що нирки керують розмноженням, а зв’язок між нирками та репродуктивною системою дуже тісний. Все більше і більше дослідників виявили, що пацієнти з дефіцитом нирок-ян мають значні зміни в гіпоталамо-гіпофізарно-гонадній осі, що часто супроводжується симптомами зниження статевих гормонів, таких як Т і Е2 [12]. У цьому експерименті вимірювали вміст Т і Е2 у сироватці крові, щоб визначити вплив кожної групи введення на статеві гормони у щурів із індукованим гідрокортизоном дефіцитом нирок-ян.
Як видно з таблиці 10, порівняно з нормальною групою вміст Т і Е2 в модельній групі знизився (P<0.05), indicating that hydrocortisone can cause a decrease in rat sex hormone levels. Compared with the model group, each administration group was able to significantly increase the levels of T and E2 in serum (P<0.05) and improve the decrease in sex hormones induced by hydrocortisone. Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group was better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). Generally speaking, wine Cistanche deserticola has obvious performance in increasing T and E2 in the serum of rats with kidney yang deficiency, which is consistent with literature reports that phenylethanol glycosides, the main components of wine Cistanche deserticola, have hormone-like effects [13].
3.2.9 Визначення антиоксидантного індексу
SOD є антиоксидантом, який відображає здатність організму поглинати вільні радикали, тоді як MDA є кінцевим продуктом реакції окисного стресу і може відображати ступінь окисного пошкодження організму. У цьому експерименті вимірювали вміст SOD і MDA в яєчках, щоб визначити антиоксидантну активність кожної групи введення проти моделі дефіциту нирок Ян, викликаного гідрокортизоном.
Як видно з табл. 11, порівняно з нормальною групою вміст СОД в модельній групі знизився (P<0.05). After 1 month of administration, compared with the model group, the SOD content in the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group increased. Compared with the normal group, the MDA content in the model group increased (P<0.05), indicating that the testicular tissue of rats with kidney-yang deficiency induced by hydrocortisone was oxidatively damaged. After being given Cistanche deserticola extract or Jingui Shenqi Pill positive medicine, each administration group was able to significantly reduce the content of MDA in testicular tissue and alleviate the oxidative damage caused by hydrocortisone. Taken together, both raw Cistanche deserticola and wine Cistanche deserticola can improve the body's ability to resist oxidative damage and alleviate oxidative damage caused by hydrocortisone.
(1) Групування: щури мали вільний доступ до води та дієти. Після 1 тижня адаптивного годування їх випадковим чином розділили на 5 груп (Таблиця 2), по 10 щурів у кожній групі, а саме звичайну групу, модельну групу, сиру групу Cistanche deserticola (PR), групу Cistanche deserticola, тушковану у вині (PW). , і позитивний контроль Jinkui Shenqi Pill group (JK). (2) Моделювання: за винятком нормальної групи, іншим чотирьом групам вводили внутрішньом’язову ін’єкцію гідрокортизону натрію сукцинату в дозі 20 мг/кг протягом 14 днів поспіль. Нормальній групі вводили таку саму дозу фізіологічного розчину. За загальним станом щурів у кожній групі спостерігали, щоб визначити, чи є у них такі симптоми, як страх холоду, перевага тепла, холодні кінцівки, прозора та довга сеча, згорнута та вигнута спина, тьмяне та брудне волосся та психічна депресія. Одночасно вимірювали масу тіла, кількість спонтанних активностей, споживання їжі, споживання води, виділення сечі та інші показники щурів у кожній групі.
