Виснаження макрофагів зменшує патологію захворювання при гломерулонефриті, опосередкованому фактором Н-залежним імунним комплексом Ⅱ

3. Результати

Ми індукували CSS у мишей шляхом повторної імунізації апоферитином селезінки коня. У тварин виробляється активний антиапоферритин IgG гуморального імунітетувідповідь і відкладення IgG в клубочках. Наші попередні дослідження показали, що є підвищений Mϕінфільтрація в ниркаху цій установці.

3.1. Експресія генів макрофагів збільшується в FH-залежних ICGN нирках. Щоб оцінити присутність Mϕs у FH-залежних ICGN нирках, qRT-PCR проводили з маркерами макрофагів M2, CD204 (Mϕ-рецептор 1) і CD206 (Mϕ манозний рецептор 1) [21–24]. Експресія обох генів у нирках була значно посилена після лікування апоферитином у мишей FHKO (рис. 1), що вказує напідвищена присутність макрофагів у нирках.

НАТИСНІТЬ ТУТ, ЩОБ ОТРИМАТИ НАТУРАЛЬНИЙ ОРГАНІЧНИЙ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНШИ З 25% ЕХІНАКОЗИДУ ТА 9% АКТЕОЗИДУ ДЛЯ ФУНКЦІЇ НИРОК

Служба підтримки Wecistanche - найбільшого експортера cistanche в Китаї:

Електронна адреса:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Тел.:+86 15292862950

Зверніться в магазин, щоб дізнатися більше про технічні характеристики:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Зміни в часі лікування хлодронатом при інфільтрації ниркових макрофагів у мишей FHKO, які отримували апоферитин. Щоб визначити ефективний метод зниження Mϕs у FH-залежних ICGN, ми виснажили Mϕs у fh-/- мишей

Рисунок 3: Додаткові дані. Наведено профілі проточної цитометрії моноцитів F4/80+ від контрольних мишей і мишей, які отримували клодронат. F4/ 80+ клітини значно зменшуються, досягаючи менше ніж 10% при лікуванні клодронатом. Кожен момент часу n=6.

3.4. Вичерпання макрофагів зменшує кількість клубочків

Патологія при FH-опосередкованому ICGN. Наприкінці експерименту оцінювали відкладення імунних комплексів у нирках та гістопатологічні особливості ICGN. Імунофлуоресцентне фарбування на C3 та IgG виявило, що виснаження Mϕ не модулювало імунні комплекси в цій ситуації. Типове імунофлуоресцентне фарбування та гістопатологія показані на малюнку 5. Основною гістопатологічною ознакою була дифузна гіперклітинність клубочкових пучків у мишей fh-/- із CSS, яка була значно знижена при виснаженні Mϕs.

3.5. Макрофаги модулюють цитокіни в FH-залежних ICGN.

Одного разу Mϕsінфільтрувати ниркуі піддаються впливу запальних подразників, вони вивільняють цитокіни. За допомогою ELISA ми оцінили циркулюючі рівні TNF та IL-6 у плазмі крові та mCSF нирок у мишей FHKO, які отримували фізіологічний розчин, апоферитин або апоферитин і клодронат. Циркулюючі рівні IL-6 були дуже низькими у мишей дикого типу та збільшені у мишей FHKO та були знижені у мишей FHKO, які отримували клодронат (рис. 6). Рівень трьох цитокінів, TNF, IL-6 і mCSF, був значно підвищений у мишей, які отримували апоферитин, порівняно з контролем, який отримував фізіологічний розчин. Виснаження Mϕ клодронатом суттєво обмежувало зростання цитокінів у цій ситуації

3.6. Макрофаги модулюють профіброз

Молекули та ламінін у FH-залежних ICGN. Одного разурозвивається захворювання нирок, вони мають тенденцію стати фіброзними. Mϕ беруть участь у фіброзному процесі шляхом надмірного виробництва профіброзних молекул. ПЛР у реальному часі виявила збільшення експресії мРНК трансформуючого фактора росту бета1 (TGFbeta1) на 75%, зростання експресії металопротеїнази-9 (MMP9) на 100% і збільшення мРНК ламініну на 230%. Відповідно до експресії мРНК, експресія білка ламініну значно збільшується у мишей fh-/- із CSS, яка знижується за відсутності Mϕs (рис. 7).

4. Обговорення

Наші останні дослідження показали, що за відсутності СГ у мишей розвивається дифузнийпроліферативний гломерулонефрит(GN) з F4/80+ Mϕs навколо сайтів ІС [10]. Крім того, наші дослідження демонструють, що миші Cd11b−/− fh−/− мають загострені ознаки гломерулонефриту [26]. Враховуючи, що наявність посилених запальних макрофагів М1 та їх тривала активація може спричинити патологію тканин, а їх реполяризація у протизапальний фенотип допоможе у вирішенні патології захворювання, поточне дослідження було проведено для подальшого розуміння ролі Mϕs у fh -/- миші з ICGN. Збільшення присутності Mϕs у нирках і вирішення патології захворювання шляхом виснаження макрофагів під час FH-опосередкованої ICGN демонструють критичну роль Mϕs у цій ситуації, і, отже, вони можуть служити важливими терапевтичними мішенями в цій ситуації.

Рисунок 5: Виснаження Mϕs зменшує патологію клубочків у FH-залежному ICGN. Наведено репрезентативні зображення клубочків мишей, які отримували фізіологічний розчин (а), апоферитин (b) і апоферитин + клодронат, мишей з дефіцитом FH. На (A) зрізи пофарбовані C3 (зелений) і IgG (червоний), тоді як на (B) показані зрізи, пофарбовані PAS. Відкладення IgG, які збільшувалися під час лікування апоферитином, залишалися незмінними, тоді як клубочки виглядали ближче до норми при виснаженні макрофагів.

Відсутність FH призводить до збільшення продукції C5a. C5a зв’язується з C5aR1, передає сигнал Mos до нирки, де вони додають до запального середовища. Крім того, наші дослідження також продемонстрували, що в умовах надмірної генерації C5a інактивація C5a, здається, обмежує захворювання [10]. Активація Mos викликає їх поляризацію, але вони залишаються в стані континууму [27]. Наші результати в цьому дослідженні показують, що клубочкова хвороба при CSS була знижена у fh-/- мишей, у яких Mϕs були виснажені, порівняно з fh-/- мишами без виснаження макрофагів. Таким чином, усунення Mϕs алельованого ICGN у fh-/- мишей зменшує патологію захворювання. Однак Mϕs також необхідні для процесу відновлення, і оскільки Mϕs змінюють стани від про- до протизапальних станів і навпаки, це буде нашим майбутнім зусиллям зрозуміти, чи зміна ландшафту Mϕs без їх виснаження може змінити патологію захворювання.

Mϕ відіграють важливу роль у ініціації та підтримці фіброзу, а також беруть участь у придушенні, вирішенні та зворотному розвитку фіброзу [28]. Наші результати показують підвищену експресію маркерів CD204+ і CD206+ Mϕ, що свідчить про їхню підвищену присутність у цьому середовищі. Оскільки ці Mϕs є основним джерелом профіброзних молекул, наші результати, які демонструють збільшення TGF -1, а також MMP9, припускають, що ці Mϕs можуть прямо та опосередковано впливати на фіброзні процеси в FH-опосередкованому ICGN через різні механізми ( 1,3,8,44). TGF -1 може змінювати фіброз шляхом регуляції цитокінами. Крім того, TGF -1 модулює біосинтез і експресію C3 і фактора B у моноцитах [29], а зміна комплементу в імунних клітинах і клітинах нирок може сприяти фіброзу тканин [30]. Однак необхідно розшифрувати точні взаємодії між макрофагами та комплементом, задіяні механізми, їх ролі та компартменталізацію тканини [31]. Наші дослідження показали знижену експресію ламініну у мишей з виснаженням Mϕs порівняно з мишами з достатньою кількістю Mϕ. Щоб краще зрозуміти, як СГ регулює фіброзний процес, нам потрібно ідентифікувати конкретні підгрупи Mϕ, які присутні в опосередкованій СГ ICGN, і з’ясувати внески кожної популяції підгрупи. Ці дослідження важливі, оскільки додаткові терапевтичні засоби стали клінічною реальністю. Інгібітори були та продовжують розроблятися проти різних мішеней у каскаді комплементу, які блокуватимуть наступні етапи в шляху(ах) активації. В даний час одним з інгібіторів комплементу в клінічній практиці є анти-C5 антитіло Екулізумаб [32]. Тому виявлення патогенних компонентів комплементу в хворобі та доповнення до цього регуляцією популяції Mϕs не є тривіальним моментом.

Рисунок 7: Відкладення ламініну вFH-дефіцитні ниркиз ICGN зменшується через виснаження Mϕs. (a) qRT-PCR для TGFB, MMP9 та ламініну змРНК нироквиділено від мишей після 5 тижнів фізіологічного розчину та апоферитину та 3 тижнів клодронату. Вираз нормалізовано до GAPDH (n=6/група). (b) Репрезентативні мікрофотографії IF для фарбування ламініну в нирках тих самих груп мишей. ∗P < 0:01.

Підводячи підсумок, тут ми вивчали роль Mϕs у FH-залежній моделі ICGN. Результати також можуть бути застосовані в умовах нерегульованої активації комплементу імунними комплексами, такими як ті, що спостерігаються при різних захворюваннях, включаючи вовчаковий нефрит, IgA-нефропатію та мембранозну нефропатію. Ми показуємо важливість як регуляції комплементу FH, так і статусу Mϕs при захворюванні. Таким чином, фармакологічне націлювання на каскад комплементу та статус Mϕs при IC-опосередкованому ГН має потенційне клінічне значення.

Список літератури

[1] Т. Мійович, А. Зейтуні та І. Кольменья,"Аутоімунна сенсоневральна втрата слуху: взаємодія отології та ревматології," Ревматологія, вип. 52, вип. 5, стор. 780–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin та AP Robertson,"Холіноміметичний морантел як блокатор відкритих каналів Ascaris suum ACR-16 nAChR," Неврологія безхребетних, вип. 16, вип. 4, 2016.

[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath і FC Fer venza,"Захворювання нирок, викликане порушенням регуляції альтернативного шляху комплементу: етіологічний підхід," Журнал Американського товариства нефрології, вип. 26, вип. 12, стор. 2917– 2929, 2015. [4] RJ Quigg,"Комплемент і аутоімунні клубочкові захворювання," Сучасні напрямки в аутоімунітеті, вип. 7, стор. 165– 180, 2003. 

[5] MC Керролл,"Система комплементу в регуляції адаптивного імунітету," Імунологія природи, вип. 5, № 10, стор. 981– 986, 2004. [6] MV Carroll і RB Sim,"Доповнення в здоров'ї і хворобі," Розширені огляди доставки ліків, вип. 63, вип. 12, стор. 965–975, 2011. 

[7] М. Норіс і Г. Ремуцці,"Огляд активації та регуляції комплементу," Семінари з нефрології, вип. 33, вип. 6, стор. 479–492, 2013. 

[8] VP Ferreira, AP Herbert, C. Cortes et al.,"Зв’язування фактора Н з комплексом фізіологічних поліаніонів і C3b на клітинах порушується при атиповому гемолітичному уремічному синдромі," Журнал імунології, вип. 182, вип. 11, стор. 7009–7018, 2009.

[9] Дж. Дж. Александер, М. К. Пікерінг, М. Хаас, І. Осаве та Р. Дж. Квігг,"Фактор комплементу h обмежує відкладення імунних комплексів і запобігає інповураження та рубці в клубочках мишей із хронічною сироватковою хворобою," Журнал Американського товариства нефрології, вип. 16, вип. 1, стор. 52–57, 2005.

[10] Дж. Дж. Александер, Л. Чавес, А. Чанг і Р. Дж. Квігг,"Рецептор C5a відіграє ключову роль у гломерулонефриті імунного комплексу у факторі комплементу H-deфідревні миші," Нирка Інтернешнл, вип. 82, вип. 9, стор. 961–968, 2012. 

[11] CV Jakubzick, GJ Randolph і PM Henson,"Моноцит диФФеренціаційна та антигенпрезентуюча функції," Огляди природи. Імунологія, вип. 17, вип. 6, стор. 349–362, 2017. 

[12] Q. Cao, Y. Wang і DC Harris,"Гетерогенність макрофагів, фенотипи та роль у ниркахфіброз," Kidney International. Доповнення, вип. 4, № 1, стор. 16–19, 2014.

[13] Q. Cao, Y. Wang, XM Wang та ін.,"Ниркові мононуклеарні фагоцити F4/80+ CD11c+ демонструють фенотипові та функціональні характеристики макрофагів у здоровому стані та при адріаміциновій нефропатії," Журнал Американського товариства нефрології, вип. 26, вип. 2, стор. 349–363, 2015.