Активація TLR9 індукує аберантне глікозилювання IgA через APRIL- та IL-6-опосередковані шляхи при нефропатії IgA

Контакти:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Юко Макіта1, Хітоші Судзукі1, Тошікі Кано1, Акіко Такахата1, Брюс А. Джуліан2,3, Ян Новак3 і Юсуке Судзукі1

КЛЮЧОВІ СЛОВА: КВІТЕНЬ; галактозодефіцитний IgA1; IgA нефропатія; IL-6; імунний комплекс

Галактозодефіцитний IgA1 (Gd-IgA1) відіграє вирішальну роль у розвиткуIgA нефропатія(IgAN). Однак патогенні механізми, що стимулюють виробництво Gd-IgA1, не були повністю з’ясовані. Відомо, що активація вродженого імунітету через Toll-подібний рецептор 9 (TLR9) бере участь у виробництві Gd-IgA1. Також відомо, що ліганд, що індукує проліферацію (APRIL) та IL-6, посилює синтез Gd-IgA1 в IgAN. На цьому фоні ми дослідили, як активація TLR9 у клітинах, що секретують IgA, призводить до надмірного виробництва нефритогенного IgA у схильних до IgAN ddY мишей і в клітинах, що секретують IgA1- людини. Ін'єкція CpG-олігонуклеотидів ліганду TLR9 збільшила продукцію аномально глікозильованих імунних комплексів IgA та IgG-IgA у мишей ddY, що, у свою чергу, посилилоураження нирок. Стимульовані CpG-олігонуклеотидами миші мали підвищені рівні APRIL у сироватці крові, що корелювало з рівнем аномально глікозильованих імунних комплексів IgA та IgG-IgA. В пробірці,Активація TLR9посилив виробництво нефритогенного IgA, а також APRIL та IL-6 у спленоцитах мишей ddY та в клітинах, що секретують IgA1- людини. Однак нокдаун siRNA APRIL повністю пригнічував надмірне виробництво Gd-IgA1, індуковане IL-6. Нейтралізація IL-6 зменшила індуковане CpG-олігонуклеотидом надвиробництво Gd-IgA1. Крім того, шляхи APRIL та IL-6 незалежно опосередковували TLR9-, що викликало надмірне виробництво Gd-IgA1. Таким чином, активація TLR9 підсилює синтез аномально глікозильованого IgA, який у мишачій моделі IgAN ще більше посилює пошкодження нирок. Таким чином, APRIL та IL-6 синергетично, а також незалежно посилюють синтез Gd-IgA1.

Заява про переклад

Специфічна терапія захворювання, спрямована на галактозодефіцитний IgA1, може стати майбутнім лікуваннямIgA нефропатія. Результати цього дослідження, яке продемонструвало участь ліганду, що індукує проліферацію (APRIL) та інтерлейкіну -6 (IL-6) у надлишковому виробленні аномально глікозильованого IgA, підтверджують обґрунтування цільової дії на APRIL та IL{ {3}} при нефропатії IgA (IgAN). Насправді нещодавнє дослідження продемонструвало позитивний вплив моноклонального антитіла проти APRIL на мишачий IgAN1, а клінічне дослідження нейтралізуючого антитіла APRIL наразі триває у пацієнтів з IgAN.

IgA-нефропатія (IgAN), найпоширеніший первинний гломерулонефрит,2 спричиняє термінальну стадію ниркової недостатності у 20-40% пацієнтів протягом 20 років після початку цього захворювання.3 Хоча патогенез IgAN ще належить повністю з’ясувати, епізодичні Макроскопічна гематурія, що супроводжується інфекцією верхніх дихальних шляхів, свідчить про те, що імунна система слизової відіграє важливу роль у клінічних проявах IgAN.4

Цистанхеtubulosaзапобігаєнирказахворювання, натисніть тут, щоб отримати зразок

Аберантне глікозилювання IgAзаймає центральне місце в патогенезі IgAN. Клубочковий IgA у пацієнтів з IgAN обмежений підкласом IgA1 і збагачений молекулами, які містять деякі шарнірні O-глікани з дефіцитом галактози (галактозодефіцитний IgA1 [Gd-IgA1]).5,6 Крім того, сироваткові рівні Gd -IgA1 та IgA1-міститьімунні комплекси(ICs) з Gd-IgA1-специфічними аутоантитілами підвищені у пацієнтів з IgAN.7-9 Однак механізми продукування Gd-IgA1 досі не повністю вивчені.

У цьому дослідженні ми використовували модель миші ddY, схильної до IgAN. У мишей ddY розвиваються ушкодження клубочків, які імітують людські з IgAN.10 Хоча миші не мають молекул IgA з O-гліканами, характерними для IgA1 людини, IgAN людини та ця схильна до IgAN мишача модель ddY мають деякі спільні особливості, характерні для захворювання, такі як підвищення рівня сироватки крові аномально глікозильованого IgA та IgG-IgA IC.6,11 Насправді аномальне глікозилювання IgA через дефіцит b1,4-галактозилювання N-гліканів індукує мишачий IgAN через підвищення рівня сироваткових високомолекулярних IgA та IgA-вмісні IC з їх подальшим відкладенням у нирках і ураженням клубочків. У мишей 12 ddY спостерігається протеїнурія та мезангіальний проліферативний гломерулонефрит із спільним відкладенням IgA та C3 у клубочках. Загальногеномне дослідження асоціації виявило локуси-кандидати, пов’язані з прогресуванням IgAN у мишей ddY.13 Ці локуси включають гени, функціонально схожі на гени, пов’язані з людським IgAN.14,15 Ці висновки свідчать про те, що IgAN у мишей ddY та у людей може бути порушений. принаймні частково тими ж генами сприйнятливості. Хоча молекулярні характеристики мишачого IgA та людського IgA1 відрізняються, аномально глікозильований IgA має тенденцію утворювати полімерні IgA та IgG-IgA IC, які згодом спричиняють прогресування ураження нирок у мишачій моделі ddY IgAN, а також у людському IgAN. Таким чином, модель мишей ddY має деякі спільні риси з людським IgAN і може бути корисним інструментом для аналізу різних патогенетичних особливостей IgAN.

Toll-подібні рецептори (TLR) є ключовими молекулами вродженої імунної системи і беруть участь у патогенезі IgAN.16–20 Екзогенні антигени, отримані з патогенів, активують сигнальний шлях TLR9-MyD88.21 Цей процес призводить до значно збільшив синтез запальних цитокінів, таких як інтерферон типу 1 та інтерлейкін-6 (IL-6).22 Нещодавно ми продемонстрували, що активація TLR9 посилюєтьсяураження нироку схильних до IgAN мишей ddY з підвищенням сироваткових рівнів IgA та IgG-IgA ICs.16 Крім того, специфічні поліморфізми TLR9 пов’язані з прогресуванням захворювання у пацієнтів з IgAN.16 Рівні сироваткового фактора некрозу пухлини-a та IL{{ 6}} підвищені у пацієнтів з IgAN.23 Крім того, IL-6 та IL-4 збільшують вироблення IgA1 і підкреслюють ступінь дефіциту галактози, збільшуючи синтез Gd-IgA1 IgA{{13} }секреції клітинних ліній пацієнтів з IgAN.24 Ці результати свідчать про те, що IL-6 може бути ключовим посередником цього процесу.24,25.

Ген члена надродини 13 ліганду фактора некрозу пухлини (TNFSF13) кодує ліганд, що індукує проліферацію (APRIL), який є центральним цитокіном для дозрівання та виживання В-клітин.26 APRIL має спільні сигнальні рецептори, важливі для розвитку В-клітин, з іншими Ліганд надродини TNF, фактор активації B-клітин (BAFF). BAFF також бере участь у афінному дозріванні В-клітин. Загальногеномне дослідження асоціації виявило TNFSF13 як один із генів-кандидатів, пов’язаних з IgAN.27 Дійсно, у пацієнтів з IgAN сироваткові рівні APRIL підвищені28, і ці рівні пов’язані з нирковим прогнозом.28

Для кращого розуміння механізмів, що лежать в основі перевиробництва аномально глікозильованого IgA через активацію TLR9 лігандом CpG-олігодезоксинуклеотидами (ODN), ми використали IgAN-схильні ddY миші та людські IgA1-секретуючі клітини.

РЕЗУЛЬТАТИ

Активація TLR9 посилила ураження нирок у мишей ddY через збільшення виробництва нефритогенного IgA

TLR9 може бути активований відповідними лігандами, такими як CpG-ODN. Щоб перевірити ефект активації TLR9 у мишачій моделі IgAN, ми використали ін’єкцію ліганду схильним до IgAN мишам ddY. Миші, яким вводили CpG-ODN, розвинули мезангіальну проліферацію та експансію позаклітинного матриксу (рис. 1а). Ниркові гістологічні показники на основі мезангіальної проліферації та розширення мезангіального матриксу у мишей, яким вводили CpG-ODN, були значно вищими, ніж у контрольних мишей (P < 0.01;="" рис.="" 1a).="" рівень="" альбуміну="" в="" сечі="" у="" мишей,="" яким="" вводили="" cpg-odn,="" був="" значно="" підвищений="" порівняно="" з="" рівнем="" у="" контрольних="" мишей="" (p="">< 0.{{20}}1;="" рис.="" 1а).="" лише="" у="" мишей,="" яким="" вводили="" cpg-odn,="" розвинулися="" мезангіальні="" відкладення="" iga,="" igg="" і="" комплементу="" c3="" (рис.="" 1b).="" миші,="" яким="" вводили="" cpg-odn,="" продемонстрували="" значно="" вищі="" рівні="" iga="" (p=""><0,01) та="" igg="" (p=""><0,01) у="" сироватці="" крові,="" ніж="" контрольні="" миші="" (рис.="" 1c).="" сироватковий="" iga="" від="" мишей,="" яким="" вводили="" cpg-odn="" мишей,="" мав="" нижчу="" реактивність="" з="" лектинами="" агглютиніну-i="" ricinus="" communis="" (rca-i)="" і="" sambucus="" nigra,="" ніж="" у="" контрольних="" мишей="" (рис.="" 1c),="" що="" вказує="" на="" нижчий="" вміст="" галактози="" та="" сіалової="" кислоти="" на="" n="" -глікани="" мишачого="" iga.="" крім="" того,="" сироватковий="" рівень="" igg-iga="" ic="" у="" мишей,="" яким="" вводили="" cpg-odn,="" був="" значно="" вищим,="" ніж="" у="" контрольних="" мишей="" (p=""><0,05; рис.="" 1c).="" ці="" висновки="" свідчать="" про="">Активація TLR9CpG-ODN призвело до надлишкової продукції аномально глікозильованого IgA та IgG-IgA IC, що призвело доімунокомплексвідкладення та ураження нирок.

В-клітини та дендритні клітини брали участь у відповідях CpG-ODN

Ми досліджували, які типи клітин беруть участь в індукції надмірного виробництва аномально глікозильованого IgA у відповідь на CpG-ODN. В-клітини та дендритні клітини (DC) були виділені із селезінок мишей ddY з використанням антитіл проти мишачих CD19 та CD11c за допомогою сортування клітин, активованих флуоресценцією FL, відповідно. Стимуляція CpG-ODN ізольованих В-клітин викликала надлишок IgA. Крім того, CpG-ODN значно збільшив продукцію IgA, коли B-клітини культивували спільно з DC (додатковий малюнок S1). Ці результати свідчать про те, що CpG-ODN безпосередньо активує B-клітини і що DCS додатково посилює виробництво IgA після активації TLR9.

Надмірна продукція APRIL посилює синтез аномально глікозильованих IgA та IgG-IgA IC.

Ми оцінили, чи брали участь APRIL та/або BAFF у синтезі нефритогенного IgA, індукованого активацією TLR9. Ін'єкція CpG-ODN мишам ddY значно підвищувала рівні APRIL і BAFF у сироватці крові (рис. 2а). Рівні експресії APRIL у спленоцитах корелювали з продукцією аномально глікозильованого IgA та утворенням IgG-IgA IC (рис. 2b). Рівні експресії BAFF у спленоцитах корелювали з продукуванням аномально глікозильованого IgA, але не з утворенням IgG-IgA IC (рис. 2b). Крім того, сироваткові рівні APRIL, але не BAFF, значно корелювали з підвищеними сироватковими рівнями аномально глікозильованого IgA та IgG-IgA IC у мишей, яким вводили CpG-ODN (рис. 2c). Ці дані свідчать про те, що як APRIL, так і BAFF можуть брати участь у виробленні аномально глікозильованого IgA, хоча APRIL може брати більшу участь у виробленні IgG-IgA IC.

Малюнок 1|CpG-олігодезоксинуклеотид (ODN) стимуляція виробництва нефритогенного IgA. Ін'єкція CpG-ODN підвищила рівень аномально глікозильованого IgA та IgG-IgA імунного комплексу (IC) і посилила ураження нирок у мишей ddY. (a) миші ddY до розвиткуIgA нефропатія(IgAN) внутрішньовенно вводили CpG-ODN тричі на тиждень протягом 12 тижнів. У гістологічному аналізі уражень клубочків миші, яким вводили CpG-ODN, показали проліферацію мезангіальних клітин і експансію позаклітинного матриксу. Права панель показує оцінку пошкоджень нирок за допомогою напівкількісної оцінки. Гістологічні показники нирок, оцінені за відсотковим вмістом клубочків із вищезгаданими ураженнями, показали, що ураження нирок у мишей, яким вводили CpG-ODN, посилювалося. Рівні альбуміну в сечі у мишей, яким вводили CpG-ODN, були значно підвищені порівняно з рівнем контрольних мишей. Смуги на нижніх панелях ¼ середнє значення ± SEM. (b) Імуногістохімічний аналіз гломерулярних відкладень IgA, IgG і C3. Лише миші, яким вводили CpG-ODN, розвинули мезангіальні відкладення IgA, IgG і C3. (c) Сироваткові рівні IgA, IgG та IgG-IgA IC були значно підвищені після лікування CpG-ODN протягом 12 тижнів. Сироватковий IgA у мишей, яким вводили CpG-ODN, продемонстрував значно нижчу реактивність з лектинами аглютиніну-I Ricinus communis (RCA-I) і аглютиніну Sambucus nigra (SNA), ніж IgA у контрольних мишей. Ці результати вказують на те, що ін'єкція CpG-ODN підвищила сироваткові рівні аномально глікозильованого IgA. Показано окремі точки. *P < 0.05,="" **p="">< 0,01.="" od,="" оптична="" щільність.="" щоб="" оптимізувати="" перегляд="" цього="" зображення,="" перегляньте="" онлайн-версію="" цієї="" статті="" на="">

Малюнок 2|Кореляція між надлишковою продукцією ліганду, що індукує проліферацію (APRIL), і аномально глікозильованим IgA у мишей, яким вводили CpG-олігодезоксинуклеотид (ODN). (a) Ін'єкція CpG-ODN мишам ddY підвищувала сироваткові рівні фактора активації B-клітин (BAFF) і APRIL. (b) Рівні експресії BAFF у цілих спленоцитах корелювали зі зниженою реактивністю з лектином аглютиніну-I (RCA-I) Ricinus communis, але не корелювали з утворенням імунного комплексу IgG-IgA (IC). Тим часом рівні експресії APRIL були пов'язані з продукуванням аномально глікозильованого IgA та утворенням IgG-IgA IC. (c) У мишей, яким вводили CpG-ODN, сироваткові рівні APRIL були пов’язані зі зниженою реактивністю IgA з лектином RCA-I та підвищеними рівнями IgG-IgA IC. Сироваткові рівні BAFF не корелювали з продукцією глікозильованого IgA та утворенням IgG-IgA IC. Стовпчики ¼ означають - SEM. *P < 0.05.="" od,="" оптична="">

IL-6 індукував виробництво аномально глікозильованого IgA

Сироваткові рівні IL{{0}} у мишей, яким вводили CpG-ODN, були значно вищими порівняно з контрольними мишами (P <0,05; рис.="" 3a).="" використовуючи="" спленоцити="" схильних="" до="" igan="" мишей="" ddy,="" ми="" перевірили,="" чи="" il-6="" опосередковує="" індуковану="" tlr9-="" клітинну="" активацію="" та="" надмірне="" виробництво="" аномально="" глікозильованого="" iga.="" стимуляція="" cpg-odn="" посилювала="" продукцію="" il-6="" спленоцитами="" in="" vitro.="" додавання="" il-6="" до="" культурального="" середовища="" спленоцитів="" збільшило="" продукцію="" iga.="" крім="" того,="" il-6="" посилював="" синтез="" аномально="" глікозильованого="" iga="" та="" утворення="" igg-iga="" ic="" і="" збільшував="" продукцію="" april="" (рис.="" 3a).="" il-6–нейтралізуючі="" антитіла="" знижували="" cpg-odn–="" індукований="" загальний="" iga,="" аномально="" глікозильоване="" утворення="" iga="" та="" утворення="" igg-iga="" ic="" (рис.="" 3b).="" ці="" результати="" вказують="" на="" те,="" що="" активація="" tlr9="" була="" опосередкована,="" принаймні="" частково,="" il-="" 6.="" крім="" того,="" інший="" шлях(и),="" опосередкований="" tlr9-,="" може="" бути="" залучений="" до="" виробництва="" аномально="" глікозильованого="">

цистанчеможна покращитиниркафункція

APRIL та IL-6 посилюють синтез Gd-IgA1 у клітинах, що секретують IgA1- людини

Крім того, ми перевірили, чи є APRIL та IL-6 спільними для основних медіаторів, які посилюють виробництво нефритогенного IgA в клітинах, що секретують IgA1- людини. Добавка CpG-ODN посилила збільшення IL-6, експресію APRIL, продукцію білка APRIL та продукцію IgA та Gd-IgA1 (рис. 4а). Стимуляція IL-6 та APRIL посилювала вироблення IgA та Gd-IgA1 (рис. 4b, c). Вплив стимуляції CpG-ODN на вироблення IgA та Gd-IgA1 був частково зменшений IL-6-нейтралізуючими антитілами (рис. 4d). Більше того, нокдаун APRIL, що заважає (si)РНК, також зменшує продукцію IgA та Gd-IgA1, спричинену стимуляцією IL-6 (рис. 4b), що вказує на те, що APRIL та IL-6 синергічно сприяють утворенню Gd -IgA1.

ДИСКУСІЯ

Мезангіальний IgA в IgAN людини виключає підклас IgA1, який демонструє аномальне O-глікозилювання. 29,30 Людський IgA1 має шарнірну область з O-гліканами, яка відсутня у мишачого IgA.6,31,32 Однак аномальне глікозилювання N-гліканів бере участь у патогенезі мишачої моделі IgAN у мишей ddY, з підвищення аномально глікозильованого IgA та IgA-вмісного IC.11,12 Аберантні модифікації вуглеводів IgA в O- або N-гліканах є характерними властивостями нефритогенного IgA-вмісного IC.

Декілька досліджень показали активацію TLR9 у прогресуванні IgAN.17–19 У цьому дослідженні ми показали, що активація TLR9 шляхом внутрішньовенної ін’єкції CpG-ODN мишам ddY посилює ушкодження нирок, що супроводжуються відкладеннями IgA та IgG у клубочках, ймовірно тому, що підвищення сироваткових рівнів аномально глікозильованого IgA та IgG-IgA IC. Крім того, ми показали, що активація TLR9 бере участь у синтезі Gd-IgA1 у людських IgA1-секретуючих клітинних лініях.

Малюнок 3|Вплив CpG-олігодезоксинуклеотиду (ODN) та інтерлейкіну (IL) -6 на культивовані спленоцити мишей ddY. (a) Сироваткові рівні IL-6 у мишей, яким вводили CpG-ODN, були значно вищими порівняно з контрольними мишами. Стимуляція CpG-ODN збільшила продукцію IL-6 спленоцитів мишей ddY у культурі. Інкубація спленоцитів мишей ddY з рекомбінантним IL-6 збільшила продукцію загального IgA та аномально глікозильованого IgA, що призвело до утворення імунного комплексу IgG-IgA (IC). Рекомбінантний IL-6 збільшив надлишкову продукцію ліганду, що індукує проліферацію (APRIL). (b) Спленоцити в культурі стимулювали CpG-ODN у присутності або за відсутності IL-6–нейтралізуючого антитіла. Антитіла до IL-6 зменшували продукцію загального IgA та аномально глікозильованого IgA і, отже, зменшували утворення IgG-IgA IC, індукованого CpG-ODN. Стовпчики ¼ середнього значення ± SEM. * P < 0.05,="" **p="">< 0,01.="" od,="" оптична="" щільність;="" pbs,="" забуферений="" фосфатом="" фізіологічний="" розчин;="" rca-i,="" ricinus="" communis="" agglutinin-i;="" sna,="" агглютинін="" sambucus="">

Малюнок 4|Вплив добавки CpG-олігодезоксинуклеотиду (ODN) або ліганду, що індукує проліферацію (APRIL), на лінії клітин, що секретують IgA1- людини, на IgA1, галактозодефіцитний IgA1 (Gd-IgA1) та інтерлейкін (IL){{ 9}} виробництво. (a) Добавка CpG-ODN посилила виробництво IL-6. CpG-ODN посилював експресію гена APRIL. Вестерн-блот аналіз продемонстрував, що CpG-ODN підвищує рівень білка APRIL. Результати оцінювали денситометрично. Стимуляція CpG-ODN індукувала продукцію IgA та Gd-IgA1. (b) Нокдаун малої інтерферуючої РНК (siRNA) APRIL зменшив індуковане IL-6 надмірне виробництво IgA та Gd-IgA1. (c) Клітини, що продукують IgA{{2{{30}}}}, стимульовані рекомбінантним APRIL, продукували більше IgA та Gd-IgA1. (d) Клітини, що секретують IgA1-, інкубували з антитілом проти IL-6 після стимуляції CpG-ODN. Посилене виробництво IgA та Gd-IgA1, індуковане CpG-ODN, було знижено антитілами проти IL-6 і нокдауном siRNA APRIL. Стовпчики ¼ середнього значення ± SEM. *P <0,05, **p=""><0,01. gadph,="" гліцеральдегід-3-фосфатдегідрогеназа;="" pbs,="" забуферений="" фосфатом="" фізіологічний="">

Ми оцінили механізм, за допомогою якого активація TLR9 опосередковує посилене виробництво аномально глікозильованого IgA. BAFF і APRIL відомі своєю роллю у виживанні та диференціації B-клітин. McCarthy et al.33 продемонстрували, що у трансгенних мишей із надлишковою експресією BAFF розвиваються мезангіальні відкладення IgA з ушкодженням нирок і порушеннями сечовипускання.33 Нещодавно ми продемонстрували, що експресія гена APRIL підвищена в тонзилярних зародкових центрах пацієнтів із IgAN. Крім того, надмірна експресія APRIL у мигдаликових зародкових центрах корелювала з рівнями Gd-IgA1 у сироватці крові та тяжкістю захворювання у пацієнтів з IgAN.34 Ці результати свідчать про те, що як BAFF, так і APRIL можуть брати участь у патогенезі IgAN. Однак зв'язок між BAFF/APRIL та активацією TLR9 неясна. У цьому дослідженні активація TLR9 збільшила експресію гена та рівень APRIL у сироватці крові. Рівні сироваткового аномально глікозильованого IgA корелювали з рівнями експресії BAFF і APRIL в спленоцитах. Однак сироваткові рівні IgG-IgA IC корелювали з рівнями експресії APRIL, але не BAFF. Крім того, сироваткові рівні APRIL були пов’язані з надлишковим виробництвом аномально глікозильованих IgA та IgG-IgA IC у TLR{12}}активованих мишей. У клітинах, що секретують IgA1-, активація TLR9 також викликала надмірне виробництво Gd-IgA1 через APRIL. Ці результати свідчать про те, що APRIL відіграє важливу роль у TLR9-індукованому надлишку нефритогенного IgA та утворенні IgG-IgA IC.

Слід уточнити відповідь за типом клітин для визначення ролі B- і T-клітин і DC. У цьому дослідженні ми оцінили роль В-клітин і плазмоцитоїдних ДК. TLR9 експресується DC, В-клітинами та макрофагами, але не Т-клітинами.35–37 Внесок BAFF/APRIL у Т-клітинно-незалежну відповідь антитіл відомий.38,39 Тут ми перевірили, чи може активація TLR9 посилити синтез аномально глікозильований IgA та утворення IgG-IgA IC через APRIL незалежним від Т-клітин способом. Ми також використали клоновані клітинні лінії, що секретують IgA1-, і показали, що активація TLR9 посилює виробництво Gd-IgA1 через APRIL та IL-6, що свідчить про те, що цей процес не залежить від Т-клітин. Крім того, ми оцінили роль В-клітин і DC. Ми показали, що CpG-ODN, специфічний для B-клітин і DC, збільшує виробництво аномально глікозильованого IgA в цілих спленоцитах. Крім того, ми досліджували, чи може стимуляція CpG-ODN in vitro посилити вироблення IgA. Стимуляція CpG-ODN ізольованих В-клітин викликала надлишок IgA. Крім того, CpG-ODN значно збільшив продукцію IgA, коли B-клітини культивували спільно з DC (додатковий малюнок S1). Ці результати свідчать про те, що активація CpG-ODN призводить до більшоїПродукція IgA та аберрантне глікозилюванняопосередковується TLR9 незалежним від Т-клітин способом.

Відомо, що IL-6 посилює проліферацію клітин, що продукують імуноглобулін, і кінцеву диференціацію плазматичних клітин.40–42 Крім того, IL-6 також може бути первинним цитокіном-кандидатом для диференціації Т-фолікулярних хелперних клітин .43,44 Т-фолікулярні хелперні клітини необхідні для дозрівання спорідненості В-клітин, рекомбінації перемикання класів і генерації В-клітин пам’яті та плазматичних клітин у зародковому центрі.43,44 У моделі миші з вовчаком, IL-6 дефіцит перешкоджав диференціюванню Т-фолікулярних хелперних клітин і розширенню В-клітин зародкового центру, що призводило до зниження виробництва аутоантитіл.45 Це дослідження з’ясувало, що активація TLR9 за допомогою CpG-ODN посилює виробництво IL-6 у спленоцитах мишачого IgAN. IL-6 індукував надмірне виробництво аномально глікозильованого IgA та IgG-IgA IC у мишачій моделі IgAN. У людських клітинах, що секретують IgA1-, ми підтвердили, що IL-6 посилює вироблення Gd-IgA1.24 Наші результати свідчать про те, що IL-6 може бути однією з основних молекул, що індукують надмірне вироблення нефритогенного IgA опосередкований активацією TLR9.

APRIL відіграє важливу роль у перемиканні класів IgA та диференціації плазмоцитоїдів.46,47 IL-6 сприяє кінцевій диференціації В-клітин до плазматичних клітин, що секретують IgA.41,42 Це дослідження продемонструвало, що IL{{7} } стимуляція викликала вироблення APRIL. Потім ми припустили, що існує зв’язок між APRIL та IL-6, опосередкований активацією TLR9, що індукує виробництво аномально глікозильованого IgA. Ми виявили, що IL-6-нейтралізуюче антитіло не повністю блокує CpG-ODN-індуковане надлишкове виробництво Gd-IgA1 і що нокдаун siRNA APRIL зменшує надлишок Gd-IgA1, індукований IL-6. Ці дані свідчать про те, що APRIL та IL-6 синергічно сприяють виробленню Gd-IgA1 за допомогою активації TLR9. Крім того, і IL-6-нейтралізуюче антитіло, і нокдаун siRNA APRIL зменшили вироблення IgA та Gd-IgA1 більше, ніж IL-6-нейтралізуюче антитіло. Таким чином, шлях активації TLR9 включає синергічні ефекти IL-6 і APRIL на виробництво антитіл і глікозилювання (рис. 5). Нещодавні дослідження також показали, що IL-6 у поєднанні з APRIL індукує утворення та виживання плазматичних клітин.48,49 Проте потрібні майбутні дослідження, щоб уточнити міжклітинні сигнальні шляхи між APRIL та IL-6 у вироблення нефритогенного IgA.

цистанчедляниркаінфекція

На закінчення,Активація TLR9посилення ураження нирок у мишачій моделі IgAN шляхом посилення продукції аномально глікозильованого IgA та утворення IgG-IgA IC. У цьому процесі гіперпродукція APRIL та IL-6, викликана активацією TLR9, посилювала продукцію нефритогенного IgA. Крім того, у цьому дослідженні було з’ясовано, що APRIL та IL-6 функціонують як синергетично, так і незалежно, продукуючи аномально глікозильований IgA. Ці знахідки можуть інформувати про майбутні розробки нових терапевтичних підходів до IgAN.

Малюнок 5|Синергічна роль між Toll-подібним рецептором 9 (TLR9), лігандом, що індукує проліферацію (APRIL), та інтерлейкіном (IL)-6 у IgA-продукуючих клітинах при IgA-нефропатії (IgAN). Активація TLR9 індукує вироблення APRIL та IL-6, що призводить до

надмірне виробництво аномально глікозильованого IgA. APRIL та IL-6 діють синергетично, сприяючи утворенню аномально глікозильованого IgA. Крім того, що APRIL індукує виробництво IL-6, як повідомлялося раніше, IL-6 також може підвищувати синтез APRIL. Крім того, APRIL та IL-6 незалежно сприяють виробленню аномально глікозильованого IgA. NF-kB, ядерний фактор-kB.

МЕТОДИ

Тварини та експериментальні протоколи

IgAN-схильна миша ddY є відомою моделлю спонтанного IgAN із змінною частотою та ступенем ушкодження клубочків, що імітує IgAN людини. Мишей ddY 10 поділяють на 3 групи на основі проявуураження нирок: миші з раннім або пізнім початком і миші в стані спокою. Захворювання з раннім початком у мишей ddY проявляється протеїнурією та клубочковими відкладеннями IgA після 20-тижневого віку.13 Тому ми використовували мишей ddY у віці до 18 тижнів, щоб оцінити, чи посилює активація TLR9 IgAN у цій моделі. Загалом 30 самок мишей ddY (SLC Japan, Shizuoka, Japan) утримувалися в тваринницькому приміщенні Університету Джунтендо, Токіо, Японія. Мишей годували звичайною їжею (Oriental Yeast Co., Токіо, Японія) і водою ad libitum і містили в спеціальному приміщенні, вільному від патогенів. Експериментальний протокол був схвалений Комітетом з етичної перевірки експериментів на тваринах медичного факультету Університету Джунтендо. У віці 6 тижнів мишей випадковим чином розділили на 2 групи. Одна група отримувала CpG-ODN внутрішньовенно 3 рази на тиждень протягом 12 тижнів; другій групі (контроль) вводили не-CpG-ODN. CpG-ODN і не-CpG-ODN були хімічно синтезовані (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Канагава, Японія). Послідовності ODN є TCGTCGTT TTCGGCGCGCGCCG або TGCTGCTTTTGGGGGGCCCCCC (50/30) для CpG або не-CpG ODN відповідно.

Визначення IgA, IgG, IgG-IgA IC та аномально глікозильованого IgA в мишачій сироватці

Зразки крові відбирали з щічної вени. Сироватковий IgA, IgG та IgG-IgA IC вимірювали за допомогою сендвіч-зв’язаного імуноферментного аналізу (ELISA; Bethyl Laboratories, Монтгомері, Техас), використовуючи модифікований метод, заснований на нашому попередньому звіті.50 Лектин-зв’язувальні аналізи були використовується для доступу до глікоформи IgA. Біотинільований лектин RCA-I (Vector Laboratories, Burlingame, CA) і лектин кори Sambucus nigra (Vector Laboratories), які розпізнають галактозу та сіалову кислоту, приєднану до галактози (переважно у зв’язку a2,6), відповідно, використовувалися в цьому аналізі.51 Розведені сироватки додавали по 100 нг IgA на лунку. Планшети для мікротитрування, вкриті 1 мг/мл козячого антимишачого IgA (100 мл/лунку) для кількісного визначення сироваткового IgA, інкубували з цими зразками, а потім додавали біотинільований аглютинін Sambucus nigra або RCA-I. Застосовували кон’югат авідин–пероксидаза хрону (ExtrAvidin; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Рівні сироваткового аномально глікозильованого зв’язаного IgA виражали в одиницях (1 одиниця як оптична густина 1,0, виміряна при 490 нм). Рівні APRIL і BAFF у сироватці вимірювали за допомогою набору APRIL ELISA для миші (MyBioSource, Сан-Дієго, Каліфорнія) і мишачого набору BAFF ELISA (R&D Systems, Міннеаполіс, Міннесота), відповідно до протоколів виробника.

Аналіз Gd-IgA1, що виробляється клітинами, що секретують IgA1- людини

Сендвіч-ELISA для Gd-IgA1 був створений з використанням Gd-IgA1-специфічного антитіла (IBL, Японія).52 Gd-IgA1-специфічне антитіло (7,5 мг/мл), розведене у фосфатно-сольовому буферному розчині, наносили на ELISA-планшет протягом 18 годин при кімнатній температурі. Зразки наносили та інкубували протягом 2 годин при кімнатній температурі. Планшети промивали та інкубували протягом 2 годин при кімнатній температурі з розведеним 1:1000- мишачим моноклональним моноклональним антитілом до IgA1 a1-ланцюга, кон’югованим пероксидазою хрону (Southern Biotech, Birmingham, AL). Після промивання пластини проявляли розчином о-фенілендіаміну SIG-MAFAST (Sigma-Aldrich), і реакцію зупиняли додаванням 1 М сірчаної кислоти (Wako, Osaka, Japan). Рівні Gd-IgA1 екстраполювали за допомогою стандартної кривої (4-підгонка логістичної кривої параметрів) оптичної густини при 490 нм і виражали в одиницях. Ферментативно генерований Gd-IgA1 з IgA152 плазми людини був серійно розведений (1,37–1000 нг/мл) для отримання стандартної кривої. У цьому дослідженні 1 одиниця визначалася як 1 нг/мл стандартного Gd-IgA1.52

Оцінка ураження нирок у мишей ddY

ниркиwere removed after perfusion with normal saline solution. Renal tissue specimens for microscopic examination were fixed in 20% formaldehyde, embedded in paraffin, cut into 3-mm-thick sections, and then stained with periodic acid–Schiff. Specimens were quantitatively analyzed to determine the percentage of glomeruli with segmental and global sclerosis and/or mesangial cell proliferation and/or increase in the mesangial matrix. Each section was scored semiquantitatively for percentages of glomeruli with aforementioned lesions (0, 0%; 1, 1% to 24%; 2, 25% to 49%; and 3, >50 відсотків з 20 клубочків).13,53,54 Загальний максимальний бал для кожного розділу становив 9. Ниркові зразки для імунофлюоресценції занурювали в суміш з оптимальною температурою різання (Sakura Finetek Japan Co., Токіо, Японія) і зберігали при –80 градусах Зразки нарізали на зрізи завтовшки 3- мм, фіксували ацетоном при –20 градусах протягом 5 хвилин, промивали сольовим розчином із фосфатним буфером, блокували блокуючим агентом (DS Pharma Biomedical Co., Осака, Японія) при кімнатній температурі протягом 30 хвилин, а потім інкубували при кімнатній температурі протягом 2 годин з наступними первинними антитілами: козячий анти-мишачий IgA, Alexa-кон’югований козячий анти-мишачий IgG і щурячий анти-C3 (Bethyl Laboratories). Після ще 3 промивань забуференим фосфатом сольовим розчином, предметні скла монтували за допомогою монтажного середовища (Dako, Токіо, Японія). Зразки аналізували та знімали за допомогою конфокальної лазерної мікроскопії (Olympus Corporation, Токіо, Японія).

Кількісна полімеразна ланцюгова реакція в реальному часі

РНК із клітин селезінки екстрагували за допомогою розчину Torizol (Invitrogen, Токіо, Японія) і очищали за допомогою RNeasy Mini Kit (74106; Qiagen, Valencia, CA). Кількісну полімеразну ланцюгову реакцію в режимі реального часу проводили за допомогою системи полімеразної ланцюгової реакції Applied Biosystems 7500 Real-Time з використанням SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Токіо, Японія) і специфічних праймерів: прямого праймера TLR9 миші TCTCCCAACATGGTTCTCCGTCG, зворотного праймера TGCAGTCCAGGCCATGA; мишачий MyD88 прямий праймер GCACCTGTGTCTGGTCCATT, зворотний праймер CTGTTGGA CACCTGGAGACA; і прямий праймер CATTGTGGAAG GGCTCATGA гена господарювання гліцеральдегід-3-фосфатдегідрогенази, зворотний праймер TCTTCTGGGTGGCAGTGATG. Умови ампліфікації були наступними: попередній нагрів при 95 градусах протягом 20 секунд, а потім 40 циклів денатурації при 95 градусах протягом 3 секунд, і відпал і подовження при 60 градусах протягом 30 секунд. Для праймера APRIL, Hs00601664_g1, Mm03809849-s1 і BAFF, Mm01168134-m1, було придбано специфічні для Homo sapiens аналізи експресії генів TaqMan (Life Technologies, Карлсбад, Каліфорнія). . Умови циклу полімеразної ланцюгової реакції TaqMan були наступними: попередній нагрів при 95 градусах протягом 20 секунд, а потім 40 циклів денатурації при 95 градусах протягом 3 секунд, і відпал і подовження при 60 градусах протягом 30 секунд

Дослідження in vitro зі спленоцитами мишей ddY

Спленоцити культивували в середовищі Roswell Park Memorial Institute–1640, доповненому 20% фетальної телячої сироватки, 100 мг/мл стрептоміцину та 100 ОД/мл пеніциліну. Еритроцити лізували в буфері для лізування еритроцитів (R7757; Sigma-Aldrich) при кімнатній температурі протягом 1 хвилини з подальшим промиванням у середовищі Roswell Park Memorial Institute–1640.50 Клітинні культури зберігали у зволоженому інкубаторі при 37 градусах з 5 відсотків CO2. CpG-ODN класу C (TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG) використовували як ліганд TLR9. Рекомбінантний IL-6, анти-IL-6 антитіло та контроль ізотипу IgG1 щурів були отримані від R&D Systems. Клітини культивували із середніми або рекомендованими концентраціями CpG-ODN, 10 нг/мл рекомбінантного IL-6 і 100 нг/мл антитіл проти IL6. IgA, аномально глікозильований IgA, IgG-IgA IC та APRIL, що виробляються спленоцитами, вимірювали за допомогою ELISA після 72-годинної інкубації in vitro.

Дослідження in vitro з клітинними лініями1-секреції IgA людини

В-клітини крові здорової людини увічнювали вірусом Епштейна-Барра, субклонували для отримання клітинних ліній, що секретують IgA1-, і культивували, як описано.9 Крім того, ми підтвердили експресію рецепторів для APRIL/BAFF та IL -6. Клітини культивували в середовищі Roswell Park Memorial Institute–1640, доповненому 20 відсотками фетальної телячої сироватки, стрептоміцином і пеніциліном у зволоженому інкубаторі при 37 градусах і 5 відсотках CO2. CpG-ODN класу B (TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT) використовували як ліганд TLR9. Рекомбінантний IL-6, рекомбінантний APRIL, анти-IL-6 антитіло та козяче контрольне антитіло IgG були отримані від R&D Systems. Клітини культивували із середніми або рекомендованими концентраціями CpG-ODN, 50 нг/мл рекомбінантного IL-6, 40 нг/мл рекомбінантного APRIL та 100 нг/мл анти-IL-6 антитіл протягом 72 годин

Вестерн-блот

Супернатанти від клітин, що секретують IgA1-, відокремлювали за допомогою електрофорезу в додецилсульфаті натрію та поліакриламідному гелі у відновлювальних умовах із використанням 5–15-відсоткового градієнтного гелю. Гелі переносили на полівінілідендифторидні мембрани та інкубували з антитілами, специфічними для APRIL (Abcam Inc., Cambridge, MA) і гліцеральдегід-3-фосфатдегідрогенази (Abcam Inc). Блоти візуалізували за допомогою хемілюмінесценції з використанням розширеної хемілюмінесценції (GE Healthcare, Токіо, Японія) і детектора люмінесценції (Konica Minolta Healthcare, Токіо, Японія). Результати оцінювали денситометрично.

КВІТЕНЬ нокдаун siRNA

Клітини, що секретують IgA1- людини, культивували в 24-лункових культуральних планшетах і трансфікували APRIL-специфічною siRNA (GS8741, Qiagen) або нецільовим контролем siRNA (GS10673, Qiagen), використовуючи протокол трансфекції згідно з інструкціями виробника . Після інкубації протягом 24 годин клітини інкубували з 50 нг/мл рекомбінантного IL-6 (R&D Systems) протягом 72 годин. Після інкубації клітини та супернатанти збирали для вимірювання IgA та Gd-IgA1.

Статистичний аналіз

Кореляцію між різними параметрами аналізували за допомогою дисперсійного аналізу. Дані були виражені як середнє ± стандартне відхилення або середнє значення. Значення P < {{0}}.05="" вважалися="" статистично="" значущими.="" усі="" статистичні="" аналізи="" проводили="" за="" допомогою="" graphpad="" prism="" версії="" 6.0="" для="" windows="" (graphpad="" software,="" san="" diego,="">

цистанчедляниркасимптоми захворювання

РОЗКРИТТЯ

Усі автори заявили про відсутність конкуруючих інтересів.

ПОДЯКА

Це дослідження було частково підтримано грантом JSPS KAKENHI № 18K08252 та Проектом практичних досліджень ниркових захворювань Японського агентства медичних досліджень і розвитку AMED. JN та BAJ були частково підтримані грантами Національного інституту охорони здоров’я DK078244 та DK082753. Ми дякуємо пані Терумі Шибата за її чудову технічну допомогу. Ми також дякуємо пані Такако Ікегамі та пані Томомі Ікеда (Відділ молекулярних і біохімічних досліджень, Вища медична школа Університету Джунтендо) і пані Тамамі Саканіші (Відділ клітинної біології, Вища медична школа Університету Джунтендо) за їх чудову технічну допомогу .

ДОДАТКОВИЙ МАТЕРІАЛ

Додатковий файл (PDF)

Малюнок S1. Активовані CpG-олігодезоксинуклеотидом (ODN) В-клітини та дендритні клітини (DC) додатково підсилюють вироблення IgA. В-клітини та DC були виділені з селезінки мишей ddY. Стимуляція CpG-ODN збільшила продукцію IgA в ізольованих В-клітинах. Це збільшення було додатково посилено шляхом спільного культивування В-клітин з DC. *P < 0.05.="" детальні="" методи="" наведено="" в="" додаткових="" методах.="" додаткові="">

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ

1. Myette JR, Kano T, Suzuki H та ін. Антитіло, націлене на ліганд, що індукує проліферацію (APRIL), є безпечним і ефективним засобом лікування нефропатії IgA мишей. Kidney Int. 2019;96:104–116.

2. Леві М., Бергер Дж. Всесвітня перспектива нефропатії IgA. Am J Kidney Dis. 1988;12:340-347.

3. D'Amico G. Найпоширеніший гломерулонефрит у світі: нефропатія IgA. QJ Med. 1987;64:709-727.

4. Feehally J, Beattie TJ, Brenchley PE та ін. Послідовне дослідження системи IgA при рецидивній IgA-нефропатії. Kidney Int. 1986;30:924-931.

5. Wyatt RJ, Julian BA. IgA нефропатія. N Engl J Med. 2013;368:2402-2414.

6. Сузукі Х., Ясутаке Дж., Макіта Ю. та ін. IgA-нефропатія та IgA-васкуліт із нефритом мають спільну особливість, пов’язану з галактозодефіцитним IgA1--орієнтованим патогенезом. Kidney Int. 2018;93:700-705.

7. Glassock RJ. Аналіз активності антитіл при нефропатії IgA. J Clin Invest. 2009;119:1450-1452.

8. Moldoveanu Z, Wyatt RJ, Lee JY та ін. Пацієнти з IgA-нефропатією мають підвищений галактозодефіцитний рівень IgA1 у сироватці крові. Kidney Int. 2007;71: 1148–1154.

9. Suzuki H, Moldoveanu Z, Hall S та ін. IgA1-секретуючі клітинні лінії пацієнтів з нефропатією IgA продукують аномально глікозильований IgA1. J Clin Invest. 2008;118:629-639.

10. Imai H, Nakamoto Y, Asakura K та ін. Спонтанне клубочкове відкладення IgA у мишей ddY: тваринна модель нефриту IgA. Kidney Int. 1985; 27: 756-761.

11. Оказакі К., Судзукі Ю., Оцудзі М. та ін. Розробка моделі IgA-нефропатії з раннім початком. J Am Soc Nephrol. 2012; 23: 1364-1374.

12. Nishie T, Miyaishi O, Azuma H та ін. Розвиток нефропатії, подібної до імуноглобуліну А, у мишей із дефіцитом бета-1,4-галактозилтрансферази-I. Am J Pathol. 2007;170:447-456.

13. Сузукі Х, Сузукі Ю, Яманака Т та ін. Повногеномне сканування в новій моделі нефропатії IgA ідентифікує локус сприйнятливості на мишачій хромосомі 10 у ділянці, синтетичній людському IGAN1 на хромосомі 6q22-23. J Am Soc Nephrol. 2005; 16: 1289–1299.

14. Takei T, Iida A, Nitta K та ін. Асоціація між однонуклеотидними поліморфізмами в генах селектину та нефропатією імуноглобуліну А. Am J Hum Genet. 2002;70:781-786.

15. Gharavi AG, Yan Y, Scolari F, et al. IgA-нефропатія, найпоширеніша причина гломерулонефриту, пов’язана з 6q22-23. Нат Генет. 2000;26:354-357.

16. Сузукі Х, Сузукі Ю, Наріта І та ін. Toll-подібний рецептор 9 впливає на тяжкість IgA-нефропатії. J Am Soc Nephrol. 2008; 19: 2384–2395.

17. Nakata J, Suzuki Y, Suzuki H та ін. Зміни нефритогенного сироваткового галактозодефіцитного IgA1 при IgA-нефропатії після тонзилектомії та стероїдної терапії. PLoS One. 2014;9:e89707.

18. Сато Д., Сузукі Ю., Кано Т. та ін. Тонзилярна експресія TLR9 та ефективність тонзилектомії з пульсовою терапією стероїдами у пацієнтів з нефропатією IgA. Трансплантація нефролу. 2012;27:1090-1097.

19. Коппо Р., Камілла Р., Аморе А та ін. Експресія Toll-подібного рецептора 4 посилюється в циркулюючих мононуклеарних клітинах пацієнтів з нефропатією імуноглобуліну А. Clin Exp Immunol. 2010;159:73-81.

20. Maiguma M, Suzuki Y, Suzuki H та ін. Дієтичний цинк є ключовим модифікатором навколишнього середовища у прогресуванні нефропатії IgA. PLoS One. 2014; 9: e90558.

21. Kawai T, Akira S. Передача сигналів до NF-kappaB Toll-подібними рецепторами. Тенденції Mol Med. 2007;13:460-469.

22. Kuwata H, Matsumoto M, Atarashi K та ін. IkappaBNS пригнічує індукцію підгрупи Toll-подібних рецептор-залежних генів і обмежує запалення. Імунітет. 2006;24:41-51.

23. Rostoker G, Rymer JC, Barnard G та ін. Дисбаланс сироваткових прозапальних цитокінів та їх розчинних рецепторів: передбачувана роль у прогресуванні ідіопатичної нефропатії IgA (IgAN) та пурпурного нефриту Геноха Шенлейна та потенційна мішень імуноглобулінотерапії? Clin Exp Immunol. 1998;114:468-476.

24. Сузукі Х, Раска М, Ямада К та ін. Цитокіни змінюють O-глікозилювання IgA1 шляхом порушення регуляції ферментів C1GalT1 і ST6GalNAc-II. J Biol Chem. 2014; 289: 5330-5339.

25. Yamada K, Huang ZQ, Raska M та ін. Інгібування передачі сигналів STAT3 зменшує вироблення аутоантигену IgA1 при нефропатії IgA. Kidney Int Rep. 2017; 2: 1194–1207.

26. Шнайдер П, Маккей Ф, Штайнер В та ін. BAFF, новий ліганд сімейства факторів некрозу пухлин, стимулює ріст В-клітин. J Exp Med. 1999; 189: 1747–1756.

27. Кирилюк К., Лі Ю., Сколарі Ф. та ін. Відкриття нових локусів ризику IgA-нефропатії вказує на наявність генів, залучених до імунітету проти кишкових патогенів. Нат Генет. 2014;46:1187-1196.

28. Han SS, Yang SH, Choi M та ін. Роль члена надродини TNF 13 у прогресуванні нефропатії IgA. J Am Soc Nephrol. 2016;27:3430-3439.

29. Hiki Y, Odani H, Takahashi M та ін. Мас-спектрометрія підтверджує глікозилювання під-О клубочкового IgA1 при нефропатії IgA. Kidney Int. 2001; 59: 1077–1085.

30. Allen AC, Bailey EM, Brenchley PE та ін. Мезангіальний IgA1 при IgA-нефропатії демонструє аномальне O-глікозилювання: спостереження у трьох пацієнтів. Kidney Int. 2001;60:969-973.

31. Hiki Y. O-зв'язані олігосахариди шарнірної області IgA1: роль її аберантної структури у виникненні та/або прогресуванні нефропатії IgA. Clin Exp Nephrol. 2009;13:415-423.

32. Mestecky J, Tomana M, Moldoveanu Z, et al. Роль аберрантного глікозилювання молекул IgA1 у патогенезі IgA-нефропатії. Нирки Blood Press Res. 2008;31:29-37.

33. McCarthy DD, Kujawa J, Wilson C та ін. У мишей із надмірною експресією BAFF розвивається залежна від комменсальної флори IgA-асоційована нефропатія. J Clin Invest. 2011; 121: 3991-4002.

34. Муто М, Манфруа Б, Сузукі Х та ін. Стимуляція Toll-подібного рецептора 9 індукує аномальну експресію ліганду, що індукує проліферацію, В-клітинами зародкового центру мигдалин при нефропатії IgA. J Am Soc Nephrol. 2017; 28: 1227-1238.

35. Latz E, Schoenemeyer A, Visintin A та ін. TLR9 подає сигнал після транслокації з ER на CpG ДНК у лізосомі. Nat Immunol. 2004;5:190-198.

36. Hornung V, Rothenfusser S, Britsch S та ін. Кількісна експресія мРНК toll-подібного рецептора 1-10 в клітинних підмножинах мононуклеарних клітин периферичної крові людини та чутливість до олігодезоксинуклеотидів CpG. J Immunol. 2002;168:4531-4537.

37. Kadowaki N, Ho S, Antonenko S та ін. Підгрупи попередників дендритних клітин людини експресують різні toll-подібні рецептори та реагують на різні мікробні антигени. J Exp Med. 2001;194:863–869.

38. He B, Xu W, Santini PA та ін. Кишкові бактерії викликають незалежне від Т-клітин імуноглобулін А(2) перемикання класу імуноглобуліну A(2), індукуючи секрецію епітеліальними клітинами цитокіну APRIL. Імунітет. 2007; 26: 812-826.

39 Маккей Ф., Шнайдер П. Злом коду BAFF. Nat Rev Immunol. 2009; 9: 491–502.

40. Kunimoto DY, Nordan RP, Strober W. IL-6 є потужним кофактором IL-1 у синтезі IgM та IL-5 у синтезі IgA. J Immunol. 1989;143:2230-2235.

41. Beagley KW, Eldridge JH, Lee F, et al. Синтез інтерлейкінів та IgA. Людський і мишачий інтерлейкін 6 індукує високу швидкість секреції IgA в IgA-коммітованих В-клітинах. J Exp Med. 1989; 169: 2133-2148.

42. Ramsay AJ, Husband AJ, Ramshaw IA, et al. Роль інтерлейкіну-6 у відповіді антитіл IgA слизової оболонки in vivo. Наука. 1994;264:561-563.

43. Нурієва RI, Chung Y, Martinez GJ та ін. Bcl6 опосередковує розвиток Т-фолікулярних хелперних клітин. Наука. 2009;325:1001-1005.

44. Похолек AC, Hansen K, Hernandez SG та ін. In vivo регуляція розвитку Bcl6 і Т-фолікулярних хелперних клітин. J Immunol. 2010; 185: 313–326.

45. Jain S, Park G, Sproule TJ та ін. Інтерлейкін 6 прискорює смертність, сприяючи прогресуванню захворювання, подібного до системного червоного вовчака, у мишей BXSB.Yaa. PLoS One. 2016;11:e0153059.

46. ​​Літинський М.Б., Нарделлі Б., Гільберт Д.М. та ін. DC індукують CD40-незалежне перемикання класу імуноглобулінів через BLyS і APRIL. Nat Immunol. 2002;3:822-829.

47. Castigli E, Wilson SA, Scott S та ін. TACI і BAFF-R опосередковують перемикання ізотипу в В-клітинах. J Exp Med. 2005;201:35-39.

48. Jourdan M, Chen M, Robert N та ін. IL-6 підтримує генерацію довгоживучих плазматичних клітин людини в поєднанні з APRIL або факторами, розчинними в стромальних клітинах. Лейкемія. 2014; 28: 1647-1656.

49. Chu VT, Fröhlich A, Steinhauser G та ін. Еозинофіли необхідні для підтримки плазматичних клітин у кістковому мозку. Nat Immunol. 2011;12: 151–159.

50. Сузукі Х, Сузукі Ю, Айзава М та ін. Поляризація Th1 при IgA-нефропатії мишей, спрямована клітинами кісткового мозку. Kidney Int. 2007;72: 319–327.

51. Чінталачаруву С.Р., Емансипатор С.Н. Глікозилювання IgA, що виробляється мишачими В-клітинами, змінюється цитокінами Th2. J Immunol. 1997;159:2327-2333.

52. Ясутаке Дж, Сузукі Ю, Сузукі Х та ін. Новий лектин-незалежний підхід до виявлення галактозодефіцитного IgA1 при нефропатії IgA. Трансплантація нефролу. 2015;30:1315-1321.

53. Katafuchi R, Kiyoshi Y, Oh Y та ін. Гломерулярний бал як прогностичний показник при нефропатії IgA: його корисність і обмеження. Клін Нефрол. 1998;49:1–8.

54. Балларді Ф.В., Робертс І.С. Контрольоване проспективне дослідження преднізолону та цитотоксичних засобів при прогресуючій нефропатії IgA. J Am Soc Nephrol. 2002;13: 142–148.