Екстракт клітин Jasminum Sambac як антиоксидантний підсилювач проти старіння шкіри. Частина 1

Анотація: Окислювальний стрес відіграє важливу роль у процесі старіння шкіри через утворення активних форм кисню та утворення кінцевих продуктів глікації (AGE). Таким чином, на ринку засобів для догляду за шкірою потрібні антиоксидантні інгредієнти, а використання молекул, отриманих із рослинних клітинних культур, надає унікальну можливість. У цій статті досліджено особливості гідроетанольного екстракту, отриманого з клітин Jasminum sambac (JasHEx). Антиоксидантні та анти-AGE властивості були досліджені за допомогою мультидисциплінарного підходу, що поєднує мас-спектрометричні та біоінформаційні експерименти in vitro та ex vivo. JasHEx містить похідні фенолової кислоти, лігнани та тритерпени, і було виявлено, що він знижує цитозольну продукцію активних форм кисню в кератиноцитах, які піддаються екзогенному стресу. Він також продемонстрував здатність зменшувати утворення AGE та збільшувати виробництво колагену типу I у позаклітинному матриксі. Дані показали, що антиоксидантні властивості JasHEx пов’язані з його активністю поглинання вільних радикалів і хелатування металів, а також активацією шляху Nrf2/ARE. Це може добре пояснити протизапальну активність JasHEx, пов'язану зі зниженням рівня NO в LPS-стимульованих макрофагах. Таким чином, JasHEx можна вважати потужним антиоксидантним прискорювачем проти старіння шкіри, спричиненого окислювальним стресом.

Глікозид цистанхи може також підвищувати активність СОД у тканинах серця та печінки та значно знижувати вміст ліпофусцину та МДА в кожній тканині, ефективно поглинаючи різні реактивні кисневі радикали (OH-, H₂O₂ тощо) та захищаючи від пошкодження ДНК, спричиненого ОН-радикалами. Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche мають потужну здатність поглинати вільні радикали, вищу відновну здатність, ніж вітамін С, покращують активність СОД у суспензії сперми, знижують вміст МДА та мають певний захисний ефект на функцію мембрани сперми. Полісахариди цистанхе можуть підвищувати активність SOD і GSH-Px в еритроцитах і легеневих тканинах експериментально старіючих мишей, викликаних D-галактозою, а також знижувати вміст MDA і колагену в легенях і плазмі і підвищувати вміст еластину, мають хороша очищувальна дія на DPPH, подовжує час гіпоксії у старіючих мишей, покращує активність СОД у сироватці та затримує фізіологічну дегенерацію легенів у експериментально старіючих мишей. Експерименти показали, що цистанша має хорошу антиоксидантну здатність до клітинної морфологічної дегенерації. і має потенціал бути лікарським засобом для запобігання та лікування хвороб старіння шкіри. У той же час ехінакозид у Cistanche має значну здатність поглинати вільні радикали DPPH і може поглинати активні форми кисню, запобігати індукованій вільними радикалами деградації колагену, а також має хороший ефект відновлення при пошкодженні аніонів вільних радикалів тиміну.

Натисніть «Де я можу купити цистанш».

【Додаткова інформація:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Ключові слова: старіння шкіри; активні форми кисню (АФК); кінцеві продукти прогресивного глікації (AGE); Гідроетанольний екстракт жасмину самбак (JasHEx); мас-спектрометрія; метаболоміка; Глобальна соціальна молекулярна мережа природних продуктів (GNPS); еритроїдний ядерний фактор 2-споріднений фактор 2 (Nrf2)

1. Введення

Генетичні внутрішні фактори та зовнішні агенти, такі як ультрафіолетове опромінення, інфрачервоне опромінення, ксенобіотики та забруднювачі навколишнього середовища, викликають утворення активних форм кисню (АФК). Вони утворюються шляхом активації дихального ланцюга мітохондрій, цитохрому р450 і НАДФН-оксидаз [1]. До АФК належать вільні радикали (супероксид-аніон, гідропероксил-радикал, алкокси-радикал, гідроксил-радикал) і нерадикальні молекули (пероксид водню, синглетний кисень) [2]. Коли антиоксидантні системи перевантажені, АФК накопичуються в клітинах і створюють так званий окислювальний стрес, який є головним фактором старіння шкіри [3].

Дійсно, окислювальний стрес викликає як пошкодження ДНК, так і окислення ліпідів і білків разом із запуском шляху мітоген-активованих протеїнкіназ (MAPK) (AKT, JNK, ERK і p38) [4]. Це, у свою чергу, сприяє експресії прозапальних цитокінів, факторів росту та адгезивних молекул через стимуляцію факторів транскрипції AP-1 та NF-κB. Крім того, активація шляху MAPK викликає зміни дермального матриксу шляхом зниження рівня колагену. Він прискорює розпад колагену шляхом модуляції експресії матриксних металопротеїназ (ММР) та їх тканинних інгібіторів ТІМП, а також зменшує синтез нового колагену шляхом блокування рецептора TGF-типу II/передачі сигналів Smad. На додаток до цього, окислювальний стрес змінює стан шкіри, порушуючи епідермальний градієнт кальцію, необхідний для цілісності та функції ороговілої оболонки, стимулюючи функцію сальних залоз і викликаючи дегенерацію меланоцитів [5].

Паралельно утворення модифікованих біомолекул, відомих як кінцеві продукти прогресуючого глікування (AGE), сприяє окислювальному стресу в клітинах і тканинах [6]. Розвиток цих біомаркерів старіння викликаний різними факторами навколишнього середовища, такими як сигаретний дим, високий рівень рафінованих і простих вуглеводів, їжа, приготована при високій температурі, і сидячий спосіб життя; AGE є стабільними та незворотними продуктами, що утворюються в результаті неферментативної реакції між відновлюючими цукрами та білками, нуклеїновими кислотами або ліпідами з подальшою перегрупуванням [7]. Дійсно, початковою точкою утворення AGE є реакція Майяра, в якій карбонільні групи відновлюючих цукрів реагують оборотно з вільними аміногрупами білків, нуклеїнових кислот або амінофосфоліпідів з утворенням основ Шиффа. Ці іміни спонтанно перетворюються на більш стабільний кетамін, що називається продуктами Амадорі. Вони виробляють реакційноздатні дикарбоніли (як гліоксаль або метилгліоксаль), які реагують з функціональними групами білків лізину та аргініну, утворюючи велику різноманітність AGEs [8,9]. Їх поділяють на різні групи залежно від їхньої здатності випромінювати флуоресценцію та утворювати зшивання.

Дія AGE опосередковується рецепторами для AGE (RAGE), які є трансмембранними білками, що належать до суперродини імуноглобулінів поверхневих молекул клітин типу I, експресуються в різних типах клітин, включаючи кератиноцити, фібробласти та макрофаги. Зв’язування AGEs/RAGEs збільшує виробництво ROS головним чином за рахунок активації NADPH оксидаз (NOXes) і мітохондріального дихального ланцюга, що призводить до окислювального стресу та всіх вищеописаних наслідків [6,8].

Крім того, білки позаклітинного матриксу (ECM), особливо колаген, дуже чутливі до глікації. Дійсно, рівні пентозидину структури AGE, отриманого з колагену, значно вищі у літніх людей, ніж у молодих [10]. Глікація колагену змінює не тільки механічні властивості самого колагену, який стає більш жорстким і крихким [11], але також властивості позаклітинного матриксу, впливаючи на поведінку резидентних клітин (ріст, диференціація, рухливість, експресія генів і відповідь на цитокіни) і взаємодія матрикс–клітина [12].

У цьому сценарії антиоксидантні інгредієнти користуються великим попитом у косметичній сфері для зменшення утворення AGE та пов’язаного з ним окисного каскаду: екстракти, отримані з виду Jasminum sambac, що належить до родини Oleaceae, цікаві своїми антиоксидантними властивостями та їх спільним використанням у народній медицині. ліки для лікування шкірних захворювань [13]. Однак рослинні екстракти мають кілька недоліків, таких як низька біологічна стійкість, потенційне забруднення пестицидами, добривами або патогенами, а також мінливість їх якісного та кількісного складу, що залежить від пори року та умов навколишнього середовища. Дійсною альтернативою рослинам, як джерелу біологічно активних косметичних інгредієнтів, є культури рослинних клітин, які мають ряд переваг: (i) висока стійкість процесу виробництва, оскільки не потрібні сільськогосподарські землі; (ii) безперервне постачання натуральних продуктів без географічної, сезонної та репродуктивної залежності рослин; (iii) відсутність ризиків зараження патогенами, забруднювачами навколишнього середовища та залишками агрохімікатів; (iv) стандартизовані умови вирощування, які дозволяють отримати вищі та більш відтворювані показники виходу біомаси та метаболіту; (v) висока універсальність, оскільки концентрацію сполук можна оптимізувати шляхом зміни умов культивування та (vi) простіші та менш трудомісткі протоколи екстракції, що зменшує потребу в агресивних розчинниках [14,15].

Тут досліджували гідроетанольний екстракт, отриманий з культур клітин жасміну самбак (JasHEx). Метою нашого дослідження є широка хімічна та біологічна характеристика JasHEx, зокрема вивчення його властивостей проти глікування та старіння. По-перше, передові підходи на основі мас-спектрометрії були використані для отримання детальної структурної характеристики екстракту. Потім були проведені експерименти in vitro та ex vivo, щоб підтвердити біологічну активність JasHEx як антиоксиданту.

2. Матеріали та методи

2.1. Культури тканин рослин і приготування екстракту

Сертифікований аравійський жасмин (Jasminum sambac) був отриманий з місцевого розплідника ("Ladre di Piante", Пістойя, регіон Тоскана, Італія). Листя жасміну самбак замочували в 70% етанолі (Sigma Aldrich, Сент-Луїс, Міссурі, США) протягом 1 хв і поверхнево стерилізували 1% (об./об.) комерційного відбілювача з додаванням Tween 2{{ 9}} (Sigma Aldrich, Сент-Луїс, Міссурі, США) протягом 8 хв, після чого тричі промивають у стерильній дистильованій воді. Потім листя вирізали на шматочки 0.5–1.0 см і культивували на повноцінному середовищі MS [16], що містить 3 відсотки (мас./об.) сахарози, 0 .2 мг/л 2,4D і 8 г/л фітоагар. Експланти щомісяця пересівали на свіже середовище протягом трьох місяців. Після отримання жовто-зеленого пухкого калюсу, який швидко зростає, рослинні клітини переносили в рідке середовище MS з додаванням 3% (мас./об.) сахарози та 0,2 мг/л 2,4D. Суспензію перемішували в гіраторному шейкері при 110 мкм і 27 ◦C у темній кліматичній кімнаті. Клітини, вирощені в темряві, щотижня збільшували з малих колб до великих, доки не було досягнуто рідких суспензійних культур приблизно 177 г/л. Приготування водно-етанольного екстракту культури клітин Jasminum sambac (JasHEx) проводили шляхом додавання 2000 мл розчину етанол/вода (90/10, об./об.) до 500 г клітин. Суміш гомогенізували протягом 3 хв при 1500 об/хв і 6 хв при 3800 об/хв за допомогою ножового млина Grindomix GM300 (Retsch GmbH, Haan, Німеччина). Отриману суспензію перемішували при 400 об/хв протягом 2 год при 25 ◦C, уникаючи впливу світла. Потім суспензію центрифугували при 6300 об/хв протягом 10 хв при 4 ◦C. Супернатант видаляли, фільтрували, а потім концентрували під вакуумом у роторному випарнику (IKA RV8, IKA-Werke GmbH & Co., Staufen, Німеччина), встановленому на 25 ◦C. Нарешті рН доводили до 7,0 за допомогою 10 N NaOH і потім сушили заморожуванням до отримання тонкого порошку.

2.2. UPLC–MS/MS аналіз для хімічної характеристики JasHEx

Була досягнута двофазна екстракція бутанол/вода. Фракцію бутанолу осушували та розморожували в метанолі (10 мг/мл) перед аналізом UPLC–MS/MS на класичному мас-спектрометрі Q-Exactive, обладнаному системою UltiMate™ 3000 UPLC (Thermo Scientific, Waltham, MA, США). ). Усі хроматографічні цикли проводили, як уже описано Ceccacci et al. [17].

2.3. Аналіз соціальних молекулярних мереж Global Natural Products

Для ідентифікації метаболітів було використано Global Natural Products Social Molecular Networking [18]. Усі ці сигнали MS і MSMS, не призначені GNPS, були ретельно вивчені та призначені відповідно до літератури. Необроблені файли були перетворені у формат mzXML за допомогою програмного забезпечення MS Converter General User Interface перед пошуком спектральної бібліотеки GNPS. Це було проведено з використанням допуску маси іонів-попередників 0.025 Да, допуску маси іонів фрагментів 0.02 Да, мінімально відповідних піків 2 і порогового значення 0,7. Результати були підтверджені вручну.

Попередню обробку даних здійснила Mzmine (версія 2.53, Softpedia, Бухарест, Румунія) [19], а також було виконано завдання молекулярної мережі на основі функцій (FBMN) [20], як повідомили Ceccacci та ін. [17]. Отримані мережеві файли було імпортовано в Cytoscape (версія 3.9.1, Національний інститут загальних медичних наук США (NIGMS), Бетесда, штат Меріленд, США) [21].

2.4. Кількісний аналіз лігнанів і тритерпенів

Для кількісного аналізу лігнанів використовували ті самі параметри UPLC, що були зазначені для якісних експериментів, тоді як для аналізу тритерпенів вони були покращені для розділення двох пар ізомерів, арджунолової/азіатської кислоти та олеанолової/урсолової кислоти. Аналіз проводили на класичному мас-спектрометрі Q-Exactive, як визначено раніше. Розділення проводили за допомогою Phenomenex Kinetex (Torrance, CA, USA) EVO C18 300 Å (150 × 2,1 мм, розмір частинок 5 мкм). Рухома фаза складалася з A (5 мМ водного розчину ацетату амонію, рН 9.00, відкоригованого гідроксидом амонію) і B (1{{40}}0% ацетонітрилу) з використанням градієнтне елюювання 13–28 відсотків B за 0–20 хвилин, 28–65 відсотків B за 20–24 хвилини, 65–75 відсотків B за 24–28 хвилин, 75–95 відсотків за 28–28,5 хвилин, 95 відсотків за 28,5 –32 хвилини, 95–13 відсотків на 32–32,1 хвилині та 13 відсотків на 32,1–44 хвилині. Швидкість потоку становила 0,450 мл/хв, а об’єм ін’єкції становив 5 мкл. Як для лігнанів, так і для тритерпенів дані були отримані за допомогою методу мас, описаного Ceccacci та ін. [17]. Ми придбали нортахелогенін (#LCA52174) у Biosynth Carbosynth, матаірезінол (#80497) і маслінієву кислоту (#83209) у PhytoLab GmbH & Co.KG, секоізоларицирезінол (#60372) і арджунолову кислоту (#SMB00119) у Sigma-Aldrich (Сент-Луїс). , Мічиган, США), азіатська кислота (#0027), олеанолова кислота (#0041 S) і урсолова кислота (#0037 S) від Extrasynthèse (Genay, Франція). Калібрувальні криві були отримані шляхом введення стандартів у концентрації від 0,05 до 25 мкМ для лігнанів і від 0,1 до 25/250 мкМ для тритерпенів. Межа виявлення (LOD) і межа кількісного визначення (LOQ) для стандартів були визначені на основі співвідношення сигнал/шум (S/N).

2.5. Культури клітин шкіри та експланти

Імморталізовані кератиноцити людини (HaCaT), придбані в Addexbio Technologies (Сан-Дієго, Каліфорнія, США), зберігалися в модифікованому середовищі Ігла Дульбекко (DMEM; Sigma Aldrich, Сент-Луїс, Міссурі, США), до якого додавали 10 відсотків фетальної бичачої сироватки. (FBS; Sigma Aldrich, Сент-Луїс, Миссурі, США) у 95-відсотковому повітрі, 5-відсотковому CO2 та зволоженій атмосфері при 37 ◦C. Дермальні фібробласти людини (HDF) зберігалися в модифікованому середовищі Ігла Дульбекко (DMEM; Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, USA) з додаванням 10 відсотків фетальної бичачої сироватки (FBS; Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, USA). ) у 95 відсотках повітря, 5 відсотках CO2 і зволоженій атмосфері при 37 ◦C. Шкірні експланти, отримані зі шкіри здорових жінок-донорів (віком 31 та 40 років) у хірургічному центрі Villa Cinzia (Неаполь, Італія), культивували в 24-трансвеллових планшетах у DMEM/FBS плюс антибіотики в умовах повітря-рідина при 37 ◦C у зволоженому повітрі 5% CO2. Усі донори дали письмову інформовану згоду на використання тканин шкіри відповідно до Гельсінської декларації.

2.6. Цитозольний аналіз АФК у H2O2-стресованих клітинах HaCaT

Для цього процесу 1,8 × 104 HaCaT були висіяні в 96-лункові планшети та вирощені протягом 20 годин. Потім клітини обробляли протягом 2 годин різними концентраціями JasHEx (0.0006%, 0,002% і 0,006% p/v) або 500 мкМ аскорбінової кислоти, використовуваної як позитивний контроль. Після цього їх промивали PBS (забуференим фосфатом фізіологічним розчином) та інкубували при 37 ◦C із 100 мкл/лунку розчину, що містив: 10 мМ Hepes, 1,3 мМ CaCl2, 1 мМ MgSO4, 5 мМ глюкози та 5 мкМ CM-H2DCFDA (5-(і-6)-хлорметил-20,70 -дихлордигідрофлуоресцеїну діацетат, Invitrogen). Через 45 хвилин проводили промивання PBS і вимірювали базову інтенсивність флуоресценції клітин при 535 нм (збудження 485 нм), використовуючи прилад EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Потім викликали окислювальний стрес шляхом додавання 450 мкМ H2O2, і через 30 хвилин вимірювали флуоресценцію зразків.

2.7. Імуноферментний аналіз (ELISA) для виявлення AGE в клітинах дермальних фібробластів людини (HDF) під впливом гліоксалю

Для цього кроку 1,5 × 104 HDF висівали в 96-лункові планшети та вирощували протягом 2 днів. Після промивання PBS клітини фіксували протягом 1{{10}} хв 100 мкл 4% формальдегіду в PBS. Згодом їх лікували JasHEx (0,0006% і 0,002% п/об) або позитивним контролем 1 мкМ аміногуанідину в присутності 0,5% гліоксалю при 50 ◦C протягом 1 тижня. Після інкубації їх обробляли для твердофазного імуноферментного аналізу (ELISA) з використанням специфічного антитіла проти AGE (Abcam ab23722).

2.8. Імуногістофлуоресцентний аналіз шкірних експлантатів під впливом метилгліоксалю для виявлення фібриліну-1

Експлантати шкіри були отримані від двох пацієнтів, 31 і 40 років. З кожної біопсії шкіри було створено три удари для кожного лікування, що відбувалося на межі повітря та рідини. У перший день штампи обробляли JasHEx (0.002% і 0,006% p/v) або позитивним контролем (1 мМ аміногуанідину), а через 24 години 500 мкМ метил- додали гліоксаль. Обробку оновлювали кожні два дні протягом семи днів. Наприкінці періоду пуансони обробляли для гістологічного аналізу, фіксували в 4-відсотковому розчині PFA, інкубували в 15-відсотковому розчині сахарози, потім у 30-відсотковому розчині сахарози та кріозберігали в суміші OCT (оптимальна температура різання) при -80 ◦C. . Кріозрізи 5 мкм отримували за допомогою кріостата CM1520 Leica (Leica Biosystems, Баффало, Іллінойс, США). Предметні скла з кріозрізами гідратували протягом 30 хвилин у PBS і поміщали в «блокуючий» розчин (6% BSA, 5% сироватки, 20 мМ MgCl2, 0,2% Tween) на 1 годину. Згодом їх інкубували з первинним антитілом проти фібриліну 1 (MA5-12770, Thermo Scientific, Waltham, MA, США). протягом 16 год при 4 ◦C. Предметні скла промивали PBS протягом 30 хвилин, а потім інкубували з вторинним антикролячим антитілом Alexa-Fluor 546 (A11035, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) протягом 1 години. Ядра фарбували DAPI (40, 6-5 діамідіно-2-феніліндол) 1 г/мл у PBS протягом 10 хв. Зображення були отримані за допомогою флуоресцентного мікроскопа та проаналізовані за допомогою програмного забезпечення ImageJ (версія 1.53a, Національний інститут охорони здоров’я, США).

2.9. Тест AlphaLISA для вимірювання вмісту C-пептиду проколагену типу I (PIP)

На цьому етапі 8 × 103 HDF висівали в 96-лунковий планшет і обробляли протягом 24 годин JasHEx (0.0006 відсотків, 0,002 відсотків, і 0,006% p/v) або з TGF- (2,5 нг/мл). Після обробки клітини обробляли згідно з інструкціями постачальника набору колагену alpha LISA hPIP (AL353HV, (PerkinElmer, Waltham, MA, USA)).

2.10. Аналіз активації транскрипції на основі люциферази Nrf2

Тут 6 × 103 клітин HaCaT у 96-планшет з лунками висівали та вирощували протягом 16 годин. Після цього їх піддавали аналізу активації транскрипції на основі люциферази Nrf2, використовуючи набір репортерів ARE BPS Bioscience (Сан-Дієго, Каліфорнія, США, №60514). Готовий до трансфекції репортерний вектор люциферази ARE (містить ген люциферази світлячка під контролем чутливих до ARE елементів, розташованих перед мінімальним промотором) разом із внутрішнім контролем (конститутивно експресуючий вектор люциферази Renilla) тимчасово котрансфікували в клітини HaCaT за допомогою Реагент для трансфекції гена HP ДНК X-TREME (Roche, Basilea, Швейцарія, № 6366244001). Після трансдукції протягом 24 годин клітини обробляли протягом 2 годин екстрактом (0,0006%, 0,002% і 0,006% p/v) або позитивним контролем ресвератролу (50 мкМ). Після цього їх піддали люциферазному аналізу за допомогою Dual-Glo Luciferase Assay System (Promega, Рим, Італія #E2920). Коротко, клітини інкубували з субстратом люциферази світлячка протягом 10 хвилин перед вимірюванням люмінесценції в 96-пристрої для зчитування планшетів (Victor Nivo, Waltham, MA, USA). Співвідношення люмінесценції від світляка та Renilla було розраховано для нормалізації та порівняння транскрипційної активності Nrf2.

2.11. Аналіз експресії генів SOD-1(NM_000454.5) та OH-1(NM_002133.3) у клітинах HaCaT

Для цього процесу 1,5 × 105 клітин HaCaT на лунку вирощували в 6-лункових планшетах протягом 16 годин та інкубували протягом 6 годин з екстрактом (0,002 відсотка та 0,006 відсотка p/v) або 50 мкМ ресвератролу як позитивний контроль. Наприкінці інкубації загальну РНК екстрагували за допомогою набору «GenElute™ Total RNA Purification» (від Sigma-Aldrich (Сент-Луїс, Мічиган, США) і обробляли ДНКазою I (Thermo Scientific, Waltham, MA, США) при 37 ◦C протягом 30 хв, щоб видалити забруднення геномної ДНК. 500 нг загальної РНК було ретро-транскрибовано за допомогою ферменту зворотної транскриптази (Thermo Scientific, Waltham, MA, США). Напівкількісну RT-PCR проводили з використанням пари універсальних праймери 18S праймер/конкурент (Invitrogen-Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) як внутрішні стандарти Продукти ПЛР розділяли на 1,5% агарозному гелі та переглядали за допомогою приладу iBright (Invitrogen Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). Для ампліфікації використовували наступні послідовності праймерів: HsSOD1Fw: GAAAGTAATGGACCAGTGAAGG; HsSOD1Rv: ATTGGGCGATCCCAATTACACC; OH-1Fw GAACTTTCAGAAGGGTCAGG; OH-1Rv GCTCAATGTTGAGCAGGAA.

2.12. Аналіз оксиду азоту в RAW, стимульованому LPS 264.7

Концентрацію NO визначали в мишачих макрофагах RAW 264.7, посіяних у концентрації 1,5 × 105 клітин/лунку в 96-лункові планшети протягом 24 годин і попередньо оброблених екстрактом ({{1 0}}.0006 відсотка, 0,002 відсотка та 0,006 відсотка p/v) або з 10 мкМ TPCK (позитивний контроль) протягом 2 годин перед інкубацією з 2 мкг/мл LPS протягом 18 годин. Кількість NO, перетвореного на нітрит, розраховували шляхом додавання реактиву Griess (розчин N-(1-нафтил)етилендіаміну та сульфанілової кислоти, Invitrogen-Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) і через 30 хв. оптичну густину вимірювали при 540 нм багатолунковим рідером (EnVision, PerkinElmer, Waltham, MA, USA)

3. Результати

3.1. Якісний і кількісний аналіз водно-етанольного екстракту культури клітин жасмину самбак (JasHEx)

Було проведено аналіз UPLC–MS/MS JasHEx і спектрометричні дані високої роздільної здатності були проаналізовані за допомогою глобальної соціальної молекулярної мережі природних продуктів (GNPS), веб-системи мас-спектрометрії, яка допомагає в анотації природних продуктів (NP) [18] . Зокрема, спектральна бібліотека GNPS була виконана для досягнення дереплікації онлайн. Хімічні види, не ідентифіковані GNPS, були призначені відповідно до літератури. Як показано на малюнках 1 і 2 і в таблиці 1, було ідентифіковано більше 50 сполук, що належать до кількох класів вторинних метаболітів, головним чином поліфенолів і терпенів. Дійсно, екстракт JasHEx містить похідні фенолової кислоти, лігнани (секоізоларицирезінол, нортрахелогенін і матаірезінол) і тритерпеноїди (арджунолова кислота, аспарагінова кислота, маслінова кислота, олеанолова кислота та урсолова кислота).

【Додаткова інформація:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】