Інтервенційне дослідження глікозидів фенілетилового спирту в Cistanche на тваринній моделі перименопаузального синдрому Ⅱ

Експеримент 1 Отримання фенілетаноїд глікозиду Cistanche 1 Джерело лікарських матеріалів

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, номер партії: 20130501.

2 реагенти

95% етанол (медичний); Макропориста адсорбційна смола AB-8, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, номер партії: 20130618.

Референтна речовина ехінакозид, надана Китайським інститутом контролю за фармацевтичними та біологічними продуктами, номер партії: 111670-200503.3

СКІЛЬКИ ЧАСУ ДІЄ CISTANCHE?

Спосіб приготування

Було зроблено посилання на літературний метод [19] і проводився під керівництвом професора Feng Suxiang з відділу аналізу ліків Хенанського коледжу традиційної китайської медицини.Цистанку подрібнитиу грубий порошок, додайте 10-кратну кількість 70% етанолу до кипіння та двічі екстрагуйте, 1,5 години кожен раз, об’єднайте два спиртові екстракти, концентруйте при зниженому тиску, доки не зникне запах спирту, і диспергуйте розчином зразка є дистильована вода (концентрація 0,5 г лікарської речовини/мл). Пропустіть через смолу AB-8 (колонка препарат: смола 1:10), завантажте зразок у потік і дайте йому постояти протягом 5 годин, поки він повністю не адсорбується. Спочатку промийте дистильованою водою в 10 разів більше об’єму колонки, злийте воду, а потім використовуйте 10-кратний об’єм колонки. Використовуйте 10% етанол для видалення домішок і, нарешті, елюйте 60% етанолом, у 7 разів більшим за об’єм колонки. Зберіть елюат і випарюйте насухо, щоб отримати порошок. 4 Вибір довжини хвилі вимірювання

Точно відміряйте {{0}}.5 мл розчину порівняння, додайте 1 мл 5% розчину нітриту натрію, добре струсіть і залиште на 6 хвилин; додати 1 мл 10% розчину нітрату алюмінію, добре збовтати і залишити на 6 хвилин; додайте 10 мл 10% розчину гідроксиду натрію, розведіть водою до 25 мл, добре струсіть і дайте постояти 18 хв, щоб служити розчином порівняння. 0,5 млЦистанхе фенілетанол глікозидрозчин готують так само, як досліджуваний розчин. Використовуйте паралельний зразок без додавання еталонної речовини та досліджуйте розчин як порожній, а також готуйте порожній розчин таким же чином. На ультрафіолетовому спектрофотометрі виконайте сканування повної довжини хвилі трьох вищезгаданих розчинів у діапазоні довжин хвиль 200-800 нм. Як контрольна речовина, так і досліджуваний розчин мають максимальні піки поглинання при 507 нм, тому 507 нм визначається як довжина хвилі поглинання.

Після прояву забарвлення зразка фенілетанол глікозиду Cistanche + прояву забарвлення еталонної речовини Echinacea tangerine (накладене порівняння), див. Малюнок 1.

Рисунок 1 Після прояву кольору зразка фенілетаноїдного глікозиду Cistanche + після прояву кольору еталонної субстанції ехінацеї мандаринового апельсина Рисунок 5 Метод виявлення вмісту

Точно відміряйте 1 мл досліджуваного розчину, додайте 1 мл 5% розчину нітриту натрію, добре струсіть і дайте постояти 6 хв; додати 1 мл 10% розчину нітрату алюмінію, добре збовтати і залишити на 6 хв; додайте 10% гідроксиду натрію. Розчин становить 10 мл, розведіть водою до 25 мл, добре струсіть і дайте постояти 18 хвилин. Використовуйте паралельний зразок без додавання розчину зразка як порожній і готуйте порожній розчин таким же чином. Виміряно за допомогою УФ спектрофотометра при 507 нм. 6 Методичний огляд

6.1 Приготування розчину порівняння та розчину проби

Приготування еталонного розчину: точно зважте 3.06 мг еталонного стандарту ехінакозиду, висушеного до постійної маси, помістіть його в мірну колбу на 25 мл, додайте 70% розчин для розчинення та розведіть до мітки, добре струсіть і відкладіть. Стандартна концентрація становить 0,1224 мг/мл.

Приготування розчину зразка: Точне зважування 5 мгФенілетаноїдний глікозид цистанхе екстрактв мірну колбу на 10 мл, розчинити її 70% етанолом і довести до об’єму.

6.2 Підготовка стандартної кривої

Точно намалювати {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0 , 6,0 мл розчину порівняння, забарвлюють і розводять до об’єму згідно з методом, наведеним у 4.2, і вимірюють значення абсорбції при 507 нм. Використовуючи залежність концентрації від поглинання для побудови кривої регресії, рівняння регресії має такий вигляд: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994), а лінійний діапазон дорівнює 4.{{ 23}},4 мкг/мл.

6.3 Випробування на точність

Візьміть розчин зразка та виміряйте його шість разів паралельно відповідно до пункту «Метод визначення вмісту». Обчисліть відносне стандартне відхилення абсорбції. Поглинання становлять {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0,297 відповідно. Середня абсорбція=0.298, RSD=0.330% (n =6).

6.4 Перевірка стабільності

Візьміть відповідну кількість розчину зразка та відповідно до пункту «Метод визначення вмісту» виміряйте значення абсорбції за {{0}}, 15, 30, 50 , і через 60 хвилин після того, як розчин повністю забарвиться, і обчисліть відносне стандартне відхилення. Поглинання 0.304, 0,303, 0,300 і 0,296 відповідно. , 0,295, 0,295, середнє поглинання=0.299, RSD=1.362% (n=5).

6.5 Перевірка повторюваності

Візьміть зразок, приготуйте 6 розчинів зразка відповідно до пункту «Приготування розчину зразка», виміряйте значення абсорбції відповідно до пункту «Метод визначення вмісту» та обчисліть вміст. Вміст 65,2%, 65,6%, 66,7%, 67,2% і 66,5% відповідно. , 65,8%, середній вміст 66,2%, RSD=1.142% (n=6).

6.6 Тест на відновлення зразка

Точно наберіть 0.5 мл розчину зразка з відомим вмістом, загалом 9 частин, і додайте 200, 250 і 300 мкл стандартного розчину відповідно. Виміряйте та обчисліть швидкість відновлення та відносне стандартне відхилення фенілетанол глікозиду Cistanche. Рівень відновлення становить 101,45% і 99,26% відповідно. , 98,94%, 101,83%, 99,05%, 99,47%, 98,72%, 99,17%, 100,64%, середній рівень відновлення становить 99,84%, RSD=1.164% (n=9).

7 Визначення змісту зразка

Таблиця 1 Результати визначення вмісту фенілетаноїд глікозиду в Cistanche