АНОТАЦІЯ

Цілі:Maclura pomifera (Rafin.) Schneider — широко поширений вид у всьому світі, який також часто культивують для декоративних цілей. Попередні дослідження показали, що плоди M. pomifera багаті пренільованими ізофлавоноїдами, демонструють значну біологічну активність і мають ймовірні переваги, особливо при місцевому застосуванні. Враховуючи, що фенольні сполуки є важливими джерелами для розробки косметичних продуктів проти старіння, у цьому дослідженні досліджували потенціал проти старіння 80-відсоткового метанольного екстракту M. pomifera (MPM) шляхом оцінки антиоксидантної та інгібуючої активності ферментів, що руйнують позаклітинний матрикс.

Глікозид цистанхи може також підвищувати активність СОД у тканинах серця та печінки та значно знижувати вміст ліпофусцину та МДА в кожній тканині, ефективно поглинаючи різні реактивні кисневі радикали (OH-, H₂O₂ тощо) та захищаючи від пошкодження ДНК, спричиненого ОН-радикалами. Фенілетаноїдні глікозиди Cistanche мають сильну здатність поглинати вільні радикали, вищу відновну здатність, ніж вітамін С, покращують активність СОД у суспензії сперми, знижують вміст МДА та мають певний захисний ефект на функцію мембрани сперми. Полісахариди цистанхе можуть підвищувати активність SOD і GSH-Px в еритроцитах і легеневих тканинах експериментально старіючих мишей, викликаних D-галактозою, а також знижувати вміст MDA і колагену в легенях і плазмі і підвищувати вміст еластину, мають хороша очищувальна дія на DPPH, подовжує час гіпоксії у старіючих мишей, покращує активність СОД у сироватці та затримує фізіологічну дегенерацію легенів у експериментально старіючих мишей. Експерименти показали, що цистанша має хорошу антиоксидантну здатність до клітинної морфологічної дегенерації. і має потенціал бути лікарським засобом для запобігання та лікування хвороб старіння шкіри. У той же час ехінакозид у Cistanche має значну здатність поглинати вільні радикали DPPH і має здатність поглинати активні форми кисню та запобігати індукованій вільними радикалами деградації колагену, а також має хороший ефект відновлення при пошкодженні аніонів вільних радикалів тиміну.

Натисніть на добавку Cistanche Tubulosa

【Додаткова інформація:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Матеріали та методи:Для цього дослідження було оцінено інгібуючий потенціал 80 відсотків MPM проти різних ферментів, пов’язаних із процесом старіння. Враховуючи однозначну роль окислювального стресу в старінні, також були використані тести на антиоксиданти in vitro. Крім того, за допомогою аналізу високоефективної тонкошарової хроматографії осаджин був визначений як основний біоактивний ізофлавоноїд зразка.

Результати:Результати механічно різних аналізів антиоксидантів показали значний антиоксидантний потенціал екстракту. Було досліджено потенціал інгібування МРМ щодо ферментів гіалуронідази, колагенази та еластази, які безпосередньо пов’язані з прискоренням процесу старіння, і результати показали, що МРМ явно пригнічує вищевказані ферменти. MPM мав унікальний вміст фенолів та флавоноїдів; 113,92 ± 2,26 мг еквівалента галової кислоти/г і 66,41 ± 0,74 мг QE/г відповідно. Коли розглядаються аналізи загальної антиоксидантної здатності, можна припустити, що MPM є перспективним засобом проти старіння.

Висновок:У результаті це дослідження показує, що екстракти плодів M. pomifera мають значний потенціал для запобігання старінню і можуть використовуватися для цієї мети.

Ключові слова:Maclura pomifera, анти-старіння, антиоксиданти, HPTLC, osajin

ВСТУП

Подібним чином усі органи, включно зі шкірою людини, зазнають різноманітних фізіологічних змін із віком.1 Існує два класи старіння: внутрішнє старіння контролюється генетикою, а зовнішнє старіння є природним результатом фізіологічних змін внаслідок шкідливого впливу факторів навколишнього середовища, таких як ультрафіолет (УФ). ) радіація, хімічні токсини та куріння.1,2 Деградація судинної та залозистої структури, втрата фіброзної тканини та зниження регенерації клітин є основними факторами старіння,3 які призводять до збільшення дегенерації тканин, зморшок та зменшення позаклітинного матриксу (ECM). ).4

Як найбільший орган, шкіра виконує кілька функцій, таких як захист, регуляція температури тіла та виявлення органів чуття.5 Шкіра складається з епідермісу, дерми та підшкірної клітковини та є першим бар’єром між тілом людини та зовнішнім середовищем. середовище.6,7 ECM є найбільшою одиницею дерми та підтримує ріст і еластичність, представляючи структурну основу.8 Колаген, еластин і фібронектин, які утворюються дермальними фібробластами, утворюють ECM і злиті з протеогліканами.5 Колаген є основний білок, який становить приблизно 25-35 відсотків від усього вмісту білка в організмі та міститься в позаклітинному просторі різних типів сполучних тканин тварин.3 Однією з основних причин старіння шкіри та утворення зморшок є зміна колагену структура.1 Еластин — це білок, який надає шкірі унікальну фізіологічну еластичність і присутній у кількох сполучних тканинах.6 Зволоження шкіри, а також підтримання шкіри гладкою, зволоженою та змащеною є важливими факторами, які запобігають старінню шкіри та основним глікозаміноглікан (GAG), гіалуронова кислота, відіграє життєво важливу роль у цій діяльності.8 Ці ключові компоненти розщеплюються ферментами гіалуронідаза, колагеназа та еластаза, що призводить до прискорення старіння шкіри. Крім того, вплив мікроорганізмів, забруднення, іонізуючого випромінювання, хімічних речовин і токсинів призводить до утворення активних форм кисню (АФК), і це шкідливі наслідки прискорюють старіння шкіри.9 АФК можуть ініціювати складні молекулярні шляхи, і в результаті колагеназа, еластаза , і активність гіалуронідази може підвищуватися, що призводить до помітного руйнування ECM і зміни текстури шкіри.10 Зі згаданих причин нові природні агенти, які знижують утворення АФК і пригнічують протеази, що розкладають ECM, можуть уповільнити процес старіння шкіри.11

Maclura pomifera (Rafin.) Schneider належить до Moraceae або сімейства тутових і також відома як апельсинове дерево, яке культивується майже по всьому світу.12 M. pomifera має кілька біологічних властивостей, таких як антибактеріальна, протигрибкова, противірусна, цитотоксична, протипухлинна, естрогенна, і протималярійний13 завдяки пренільованим ізофлавонам, тобто осаджину та поміферину, які вважаються основними метаболітами фруктів.14 У виробництві косметики проти старіння фенольні сполуки є важливими природними джерелами. Таким чином, існує зростаючий інтерес до вивчення багатих фенольними сполуками рослин, таких як M. pomifera для такої діяльності. Попередні дослідження показали, що ізофлавони маклюри підвищують рівні експресії колагену, еластину та фібриліну, порівнянні або перевищуючі еквівалентні концентрації ретинолу. Отже, можна припустити, що ізофлавони маклюри є потужними білковими стимуляторами ECM. Враховуючи ці дані, це дослідження спрямоване на дослідження потенціалу антистаріння 80-відсоткового метанольного екстракту M. pomifera (MPM) шляхом вивчення його потенціалу щодо антиоксидантної біоактивності та інгібування Ферменти, що розкладають ECM. Крім того, кількісний аналіз основного біологічно активного компонента екстракту, осаджина, вимірювали за допомогою високоефективної тонкошарової хроматографії (HPTLC), а також аналізи загального фенольного вмісту та загального вмісту флавоноїдів для більш точного розуміння фенольного профілю. Результати показують, що M. pomifera може бути цінним джерелом продуктів проти старіння.

МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

Хімікалії

Sigma Chemical Co. (Сент-Луїс, Миссурі, США) надала всі ферменти, хімічні речовини та зразки, використані в тестах. Якість усіх хімікатів була аналітичною.

Рослинний матеріал

Плоди M. pomifera були зібрані в Ушаку, Туреччина, у травні 2020 року. Доктор Хілал Бардакчі провів ботанічну процедуру ідентифікації зразків рослини. Зразок ваучера рослини було збережено в Університеті Аджибадем, гербарії фармацевтичного факультету (ACUPH 00002).

Приготування екстрактів

Фрукти розділити на дрібні шматочки і пропустити через блендер. Плоди (6,45 кг) мацерували 3125 мл 80% метанолу (MeOH) за допомогою струшувального пристрою протягом трьох днів при кімнатній температурі в темному місці. Мацерат фільтрували і цю процедуру повторювали двічі. Отримані фільтрати збирали разом і потім метанол випарювали на роторному випарнику. Неочищений метанольний екстракт ліофілізували (вихід становив 204,37 г, 3,16 відсотка) і зберігали при -20 градусах (MPM).

Процедура кількісного визначення основних біологічно активних сполук методом HPTLC

Усі використані хімікати та реагенти були аналітичного класу. Хлороформ (CHCl3) і етилацетат (EtOAc) були придбані у Sigma-Aldrich. Комерційно доступний стандарт осаджина було придбано в Sigma-Aldrich (SMB {{10}}0092). Аналіз HPTLC проводили на скляних пластинах HPTLC із силікагелем 60 F254 розміром 20 см × 10 см (Merck, Дармштадт, Німеччина). Вміст осаджину в MPM визначали за допомогою аналітичної системи CAMAG HPTLC. Мобільна фаза, використана в поточному дослідженні, була раніше описана Бозкуртом та ін.16 під час виділення активних компонентів M. pomifera. 10 мг/мл екстракту MeOH використовували як тестовий розчин для аналізу. Стандартний вихідний розчин (0,5 мг/мл) осаджину готували з використанням 2 мл ацетону. Робочий розчин із концентрацією стандартної сполуки 50 мкг/мл готували шляхом розведення ацетоном із вихідного розчину. Кожен зразок фільтрували через шприцевий фільтр 0,45 мкм. 10 мкл екстракту разом із щонайменше п’ятьма різними концентраціями стандартного розчину (3.3-4.7 мкл) наносили у вигляді смуг довжиною 8 мм на скляні пластини HPTLC із силікагелем 60 F254 з CAMAG Automatic Пробовідбірник ТШХ IV. Дослідження проводили в автоматичній камері проявлення CAMAG-2 (ADC- 2), а рухомою фазою був CHCl3:EtOAc [8:2 (об./об.)]. Камеру насичували протягом 10 хвилин, а пластину попередньо кондиціонували протягом 5 хвилин перед проявом. Вологість контролювали за допомогою ADC-2 за допомогою MgCl2 (33 відсотки RH) протягом 10 хв. Денситометричну оцінку проводили за допомогою CAMAG TLC Scanner IV у флуоресцентному режимі. Розмір щілини підтримувався на рівні 5 × 0,2 мм, мікро, а швидкість сканування була встановлена ​​на рівні 20 мм/с. Стандартний вміст було отримано шляхом порівняння площі під кривими робочих характеристик приймача (AUC) з калібрувальною кривою стандартів при 280 нм. Наявність стандартів в екстракті була забезпечена порівнянням обох факторів утримування (Rf) і накладених УФ-спектрів кожного екстракту та стандарту. Кількість осаджину визначали порівнянням інтенсивності дифузно відбитого світла від екстракту та фракцій зі стандартною сполукою.

Вміст осаджину в сирому рослинному екстракті вимірювали за допомогою ВЕРТСХ-денситометрії. Значення Rf стандарту osajin дорівнює 0.556. Наявність осаджину в досліджуваних зразках було підтверджено шляхом порівняння їхніх значень Rf і накладення їхніх УФ-спектрів (рис. 1). Кількісну оцінку проводили шляхом порівняння AUC зразків з калібрувальною кривою, отриманою з використанням стандартної сполуки осаджина. Функція калібрування була y=2.268*10-8x. Коефіцієнт кореляції (R) і коефіцієнт варіації функції калібрування становили 0.998 відсотків і 1.06 відсотків відповідно. Аналіз HPTLC показав, що MPM містить 0,22 відсотка (мас./мас.) осаджину. Результати дослідження HPTLC наведені в таблиці 1.

Аналіз фенольного профілю

Визначення загального фенольного вмісту

Аналіз проводили для оцінки загального вмісту фенолів у зразках за методом Фоліна-Чіокальтеу, який раніше використовувався Куртом-Целепом та іншими.17 20 мкл свіжорозведених розчинів зразків змішували з 75 мкл Na2CO3 (20 відсотків). ), і 100 мкл FCR (реагент Фоліна-Чокальтеу), розведений H2O (1:9). Після інкубації протягом 30 хвилин при 45 градусах абсорбцію сумішей зчитували спектрофотометрично при 765 нм. Результати виражали в мг еквівалентів галової кислоти (GAE) на г екстракту.

Визначення загального вмісту флавоноїдів

Вимірювання загального вмісту флавоноїдів у фракціях проводили згідно з методом, про який раніше повідомляли Bardakci та ін.18 Якщо коротко, свіжоприготований 1 М CH3 COONa та 10 відсотків AlCl3 змішували зі зразками. Потім проводили 30 хв інкубації сумішей при кімнатній температурі в темряві. Після процесу інкубації абсорбцію розраховували при 415 нм. Результати були представлені як мг еквівалента кверцетину (QE) в 1 г зразка.

Визначення антиоксидантної активності in vitro

2,2-дифеніл-1-пікрилгідразил (DPPH) тест активності поглинання радикалів

Для визначення активності поглинання радикалів DPPH було зроблено комбінацію свіжорозведених розчинів зразків (різні концентрації, приготовані з основного розчину 1 мг/мл) і метанольного розчину DPPH (100 мМ). Після інкубаційного інтервалу при кімнатній температурі протягом 45 хвилин абсорбцію зчитували при 517 нм. Бутилгідрокситолуол (BHT) використовували як еталонну сполуку для отримання калібрувальної кривої. Результати значень IC50 були вказані як мкг/мл.19

Тест на антиоксидантну дію заліза (FRAP).

Щоб отримати реагент FRAP, 25 мл 300 мМ ацетатного буфера (pH 3,6), 2,5 мл TPTZ [2,4,6-трис (2-піридил)-s-триазин] і 2,5 мл FeCl3 × 6H2 O (20 мМ) змішували. Після цього 10 мл зразка додавали до 260 мл реагенту FRAP і розбавляли до 300 мл дистильованою водою в 96-лунковому планшеті. Після інкубації протягом 30 хвилин при 37 градусах проводили вимірювання абсорбції при 593 нм. BHT використовували як еталонну сполуку. Розчин хлориду заліза (0,252 мМ) використовували для отримання стандартної кривої, а результати наводили як мМ FeSO4 в 1 г сухого екстракту.20

Тест на зниження антиоксидантної здатності міді (CUPRAC).

Тест CUPRAC оцінювали відповідно до методу, описаного раніше Бараком та ін.21. Рівні об’єми 10 мМ CuSO4, неокупраїну та амоній-ацетатного буфера (85 мл) змішували в 96-лунковому планшеті. Після цього до суміші додавали 51 мл дистильованої води та 43 мл розчинів зразків відповідно. Після інкубації протягом 20 хвилин вимірювали поглинання при 450 нм. Результати виражені в мг еквівалента аскорбінової кислоти в 1 г сухого екстракту.

Тест визначення загальної антиоксидантної здатності (TOAC).

Тест на загальну антиоксидантну здатність розраховували відповідно до методу фосфомолібдену, описаного раніше Бараком та ін.22 По-перше, для отримання розчину TOAC; Змішували 28 мМ одноосновний фосфат натрію, 4 мМ молібдат амонію та 600 мМ H2SO4. Потім 300 мкл розчину TOAC змішували з 30 мкл розчинів зразків у здоровому планшеті 96. Після періоду інкубації при 95 градусах протягом 90 хвилин абсорбція була зчитана при 695 нм. Аскорбінову кислоту використовували для отримання стандартної кривої, а результати розраховували як мг еквівалентів тролокса в 1 г сухого екстракту.

Інгібуюча активність ферментів, пов’язаних зі старінням шкіри

Антиколагеназна активність

Для вимірювання антиколагеназної активності MPM був приготовлений 50 мМ трициновий буферний розчин (pH: 7,5) (400 мМ NaCl і 10 мМ CaCl2). Clostridium histolyticum (ChC - EC. 3.4.23.3) використовували як джерело колагенази, яку розчиняли в 50 мМ трициновому буферному розчині для досягнення початкової концентрації 0,8 ОД/мл. Як субстрат використовували 2 мМ N-[3-(2-фурил)акрилоїл]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), розчиненого в трициновому буфері. Екстракти інкубували з ферментом колагеназою в буферному розчині протягом 15 хвилин перед додаванням субстрату для початку реакції. Кінцева реакційна суміш мала загальний об'єм 150 мкл; трициновий буфер, 0,8 мМ FALGPA, 0,1 одиниць ChC і 25 мкл MPM. Для порожніх результатів використовували воду. Після додавання субстрату вимірювання абсорбції було виконано негайно. Позитивний контроль проводили епігалокатехін галлат (EGCG).23

Антиеластазна активність

Оцінку MPM на антиеластазну активність проводили з використанням 0.2 мМ трис-HCl буферного розчину (pH: 8.0). Основний розчин еластази (PE, EC 3.4.21.36), отриманої з підшлункової залози свині, готували з дистильованою водою в концентрації 3,33 мг/мл. N-Сукциніл-Ala-Ala-p-нітроанілід (AAAPVN), який використовувався як субстрат, розчиняли в буферному розчині (1,6 мМ). Екстракт MPM інкубували з 1 мкг/мл PE протягом 15 хвилин при 37 градусах перед додаванням субстрату. Наприкінці 15-хвилинної попередньої інкубації до ферментної суміші, що містить 1 мг/мл рослинного екстракту, додавали 0.8 мМ субстрату AAAPVN і знову проводили інкубацію протягом 15 хвилин при 37°. При використанні 0.25 мг/мл EGCG як позитивного контролю цей досліджуваний зразок містить той самий об’єм EGCG замість MPM, і налаштування тесту було повторено. Після інкубаційного періоду вимірювання проводили в 4 різні моменти часу протягом від 5 до 30 хвилин за допомогою мікропланшетного спектрофотометра Thermo Scientific Multiskan SkyHigh при 365 нм збудження та 410 нм випромінювання.24, 25

Антигіалуронідазна активність

Антигіалуронідазна активність була здійснена шляхом модифікації методу, описаного Колайлі та ін.26 та Лі та ін.3. Спочатку комерційно придбану гіалуронідазу (EC 3.2.1.35, Sigma-Aldrich) розчиняли в 0. 02 М фосфатний буфер (pH: 3,5), що містить NaCl і бичачий сироватковий альбумін. Потім гіалуронову кислоту, відповідний субстрат для ферменту, готували в ацетатному буфері (0,1 М, рН: 3,5) і готували до використання. Суміш для аналізу, що складається з 20 мкл МРМ у концентрації 1 мг/мл, 10 мкл гіалуронідази та 60 мкл 0,1 М ацетатного буфера, попередньо інкубували протягом 20 хвилин при 37°. Після часу інкубації до суміші додавали 10 мкл гіалуронової кислоти та знову інкубували при 37 градусах протягом 20 хвилин. Наприкінці загального часу інкубації проводили вимірювання в різні моменти часу за допомогою мікропланшетного спектрофотометра Thermo Scientific Multiskan SkyHigh при 600 нм. Холоста група не містила ферментів в експериментальній установці, тоді як контрольна група не містила екстракту. Відсоток антигіалуронідазної активності розраховували за допомогою наступного рівняння:

Діяльність проти старіння (відсотки)= [(Аб контроль - Абс вибірка)/ Абс контроль] × 100

Статистичний аналіз

Експерименти з антиеластазною, антиколагеназною та антигіалуронідазною активністю, включені в це дослідження, повторювали тричі незалежно. Статистичну різницю аналізували за допомогою t-тесту програмного забезпечення GraphPad Prism 8 (p Менше або дорівнює 0,05).

РЕЗУЛЬТАТИ І ОБГОВОРЕННЯ

Визначення антивікового потенціалу

Еластин, колаген і гіалуронова кислота є відомими компонентами ECM, які відіграють ключову роль у молодості шкіри. Еластин є життєво важливим білком для підтримки еластичних властивостей шкіри, отже, зменшення еластину в ECM призводить до прискорення процесу старіння.27 Попередня література вказує на прямий зв’язок між утворенням зморшок і старінням шкіри зі зниженою кількістю еластину.28 Гіалуронова кислота є гідрофобною молекулою GAG, яка деполімеризується за допомогою гіалуронідази. Гіалуронова кислота має вирішальне значення для підтримки гладкості шкіри та стабільної вологості; отже, було показано, що надмірне руйнування призводить до висихання та зморшок на шкірі.29 Через процес старіння з часом зниження рівня колагену спричиняє витончення дерми, що вважається відмінною ознакою під час мікроскопічного дослідження.3{{23 }} Було точно зазначено, що уповільнення розпаду колагену за допомогою інгібіторів колагенази, як наслідок, уповільнює зморшки та старіння структури шкіри.5 Враховуючи цю інформацію, речовини, які інгібують еластазу, колагеназу та гіалуронідазу, мають значний потенціал для засобів проти старіння. Попередні дослідження показали, що різні ізофлавоноїди виявляють значну інгібіторну біоактивність щодо вищезгаданих ферментів. Addotey та ін.31 показали, що чотири різних ізофлавоноїди пригнічують гіалуронідазу до 61,2 відсотка. Кім та ін.32 показали, що виділений ізофлавоноїд із Glycyrrhiza uralensis Fisch., лікорицидин, має значну інгібіторну дію на еластазу. Значення IC50 для солодки було розраховано як 61,2 ± 4,2 мкМ, тоді як олеанолова кислота була розрахована як 131,4 ± 11,4 як контрольна сполука. Результати показали, що ізофлавоноїди можуть інгібувати ферменти еластази. У відповідності з вищезгаданим дослідженням Кім та ін.33 вивчали дев’ять різних пренільованих ізофлавоноїдів, надзвичайно пов’язаних структурами з осаджином, виділених із коренів Flemingia philippinensis Merr. & Рольф. Дослідники повідомили, що п’ять із пренільованих ізофлавонів мали потужну пригнічувальну дію проти еластази нейтрофілів, значення IC50 коливалися між 1.9-12.0 мкМ, тоді як значення IC50 для олеанолової кислоти становило 28,4 мкМ. В іншому дослідженні Ergene Öz et al. 34 досліджували in vitro інгібіторну активність п'яти ізофлавоноїдів, виділених з коренів Ononis spinoza L. проти гіалуронідази, колагенази та еластази. Повідомляється, що інгібуюча активність ізофлавонів на гіалуронідазу становить 22.{29}}.58 відсотків, тоді як при тій же концентрації дубильна кислота інгібує 88,32 відсотка. Результати інгібування колагенази були розраховані в межах 20.41- 28.49 відсотків, а інгібування еластази було виміряно як 20.47-46.88 відсотків. EGCG використовувався як еталон для обох аналізів, а інгібуюча активність при тій самій концентрації була виміряна як 41,18% і 84,64% відповідно. Інше дослідження вивчало місцеве лікування поміферином, безпосередньо виділеним з M. pomifera. 15 Поміферин — пренільований ізофлавоноїд, який можна знайти в плодах M. pomifera, і його молекулярна структура надзвичайно нагадує осаджин. Дослідники повідомили, що поміферин демонструє потужну активність стимуляції протеїну ECM шляхом збільшення колагену та еластину, що перевершує або еквівалентно контрольній сполукі, ретинолу. Усі згадані дослідження показали, що ізофлавони є помірними або потужними інгібіторами цих ферментів і мають значний потенціал як природні матеріали для запобігання старінню.

У цьому дослідженні in vitro була досліджена інгібіторна активність MPM щодо гіалуронідази, колагенази та еластази для визначення потенціалу проти старіння. Порівняльний аналіз був проведений для аналізу інгібування колагенази в дві точки часу, наприклад, 20 і 40 хв, як для MPM, так і для контрольної сполуки, EGCG. Результати показали, що активність інгібування колагенази зростала з часом. 1 мг/мл MPM показав 84,55 ± 1,99 відсотка інгібування, тоді як 25{{40}} мкг/мл EGCG продемонстрував 84,66 ± 1,83 відсотка після 20 хвилин інкубації. Інгібуюча біологічна активність посилювалася з часом, через 40 хв MPM і EGCG пригнічували колагеназу на 94,68 ± 2,42 відсотка та 94,98 ± 2,81 відсотка відповідно. Згідно з літературними даними, MPM демонстрував значну інгібіторну активність проти еластази. Результати вимірювали для чотирьох часових точок (5, 10, 20 і 30 хвилин) і продемонстрували приріст з часом (рис. 2). EGCG (250 мкг/мл) використовувався як еталон, і активність інгібування зростала в кожній точці часу (44,07 ± 0.00 відсотка, 52,19 ± 0.00 відсотка, 64,69 ± 0.{{41 }} відсотків і 86.21 ± 0.00 відсотків відповідно). Водночас MPM у концентрації 1 мг/мл продемонстрував більш високу активність підсилення та інгібування, яка зросла з 34,70 ± 0,57 відсотка до 97,40 ± 1,04 відсотка від 5 до 30 хвилин. Подібним чином, 1 мг/мл MPM значно пригнічував фермент гіалуронідазу після 40 хвилин інкубації. 83,91 ± 2,36 відсотка інгібування було виміряно через 40 хвилин, після цих 80 хвилин інкубації швидкість інгібування підвищилася до 97,19 ± 0,45 відсотка. Коли розглядалися всі аналізи інгібування ферментів, результати помітно продемонстрували, що MPM може бути цінним природним антивіковим агентом і може використовуватися у складі різних антивікових продуктів; таким чином, M. pomifera може отримати додаткове економічне значення.

Визначення антиоксидантного потенціалу

Численні екзогенні та ендогенні фактори призводять до старіння шкіри за допомогою різних механізмів. На більшість із цих факторів прямо чи опосередковано впливає утворення АФК у ВКМ шкіри.35 Оскільки шкіра покриває зовнішню частину нашого тіла, у повсякденному житті вона зазнає значної кількості УФ-випромінювання. Таким чином, більшість проблем зі шкірою, таких як сонячні опіки, гіперпігментація та канцерогенез шкіри, виникають або пов’язані з прямим впливом УФ-випромінювання. Подібним чином фотостаріння є додатковим наслідком його небезпечних властивостей.36 Крім того, ультрафіолетове світло генерує утворення АФК і, як наслідок, окислювальний стрес у тканинах шкіри, що є одним із найважливіших механізмів, що призводять до фотостаріння.37 Було висунуто гіпотезу, що оскільки надмірне Утворення АФК викликає передчасне старіння шкіри, агенти зі значною антиоксидантною здатністю можуть бути цінним засобом проти згубного впливу УФ-випромінювання. Відповідно, клінічні дослідження показують, що місцеве використання антиоксидантів має захисну дію на шкіру.38

Після взаємозв’язку між місцевим використанням антиоксидантів і уповільненням старіння шкіри, який добре встановлений у попередній літературі, дослідження in vitro антиоксидантного потенціалу MPM надає цінну інформацію про його потенціал проти старіння при місцевому застосуванні. Попередня література показала, що екстракти з великою кількістю ізофлавоноїдів можуть бути цінними антиоксидантами. У попередньому дослідженні багатий на ізофлавоноїди екстракт екстракту F. macrophylla зменшив пошкодження шкіри, спричинене ультрафіолетом B, очищаючи ROS.39 Santos і Silva4{{10}} показали, що пренільовані ізофлавоноїди мають важливий антиоксидантний потенціал завдяки їх флавоноїдний фрагмент і додатковий ефект пренілового бічного ланцюга. Антиоксидантний потенціал екстрактів та ізофлавоноїдів M. pomifera був оцінений у попередньому дослідженні. Результати показали, що водно-спиртовий екстракт і чистий осаджин показали значну активність у аналізах DPPH, FRAP і TOAC, хоча фракції поміферину та етилацетату показали більш високу активність.41 Для цього дослідження активність поглинання радикалів DPPH, аналізи FRAP, CUPRAC і TOAC були проведено для комплексного визначення антиоксидантного потенціалу МПМ in vitro (табл. 2). MPM продемонстрував значну активність поглинання радикалів DPPH, де значення IC50 було виміряно в 1998.86 ± {{20}}.02. Аналізи FRAP і TOAC також показали помітну активність відновлення металу, 0,191 ± 0,01 мМ FeSO4 /DE і 114,43 ± 0,02 AAE/г DE, відповідно. Ці висновки узгоджуються з попереднім дослідженням, опублікованим Орханом та ін.41 Наскільки нам відомо, вперше, наскільки нам відомо, було проведено аналіз CUPRAC на екстрактах плодів M. pomifera. Відповідно, MPM продемонстрував значну активність щодо відновлення міді в аналізі CUPRAC, де результати були виміряні як 73,928 ± 0,01 AAE/г DE. Коли розглядаються аналізи загальної антиоксидантної здатності, можна припустити, що MPM є перспективним засобом проти старіння.

Фенольний профіль і аналіз HPTLC

Ізофлавоноїди — це фенольні речовини, які відомі як компоненти рослин, відповідальні за різноманітні важливі біологічні дії, такі як антиоксидантна, протипухлинна та проти гінекологічних проблем.42 Попередні дослідження показали, що пренільовані ізофлавоноїди є основними фенольними сполуками в плодах M. pomifera.43 Численні дослідження виявили осажин. і поміферин як основні інгредієнти плодів M. pomifera, які в першу чергу відповідають за біологічну активність.12 Осаджин і поміферин є дуже схожими пренільованими ізофлавоноїдами, які відрізняються лише однією гідроксильною групою.44 Попередні звіти продемонстрували суперечливі результати щодо вмісту осаджину та поміферину. плодів M. pomifera. Картал та ін.45 розробили метод РХ-МС для визначення осаджину та поміферину в M. pomifera, які були зібрані в провінції Анкара в Туреччині. Результати показали, що вміст поміферину був трохи вищим, ніж вміст осаджину в різних частинах зразків фруктів. В іншому дослідженні зразки плодів M. pomifera були зібрані з різних регіонів Середнього Заходу та Півдня Сполучених Штатів, і вміст осаджину та поміферину вимірювали за допомогою нового методу аналізу ВЕРХ. Результати показали, що географічні відмінності призводять до значних змін кількості ізофлавоноїдів у зразках.46 Цао та ін.47 визначили вміст осаджину та поміферину у фруктах, зібраних з Канади, і виявили, що вміст поміферину був трохи вищим, ніж вміст осаджину. Навпаки, Hwang та ін.48 узагальнили кілька досліджень, які виявили, що кількість осаджину в різних екстрактах перевищує кількість поміферину. Можна стверджувати, що вміст осаджину та поміферину в плодах M. pomifera надзвичайно варіюється в залежності від географічних відмінностей і методів екстракції через їх однозначну хімічну структуру. Для цього дослідження вперше, наскільки нам відомо, було виміряно кількість MPM за допомогою аналізу HPTLC. Результати аналізу показали, що осаджин є переважаючим інгредієнтом MPM, який було зібрано з провінції Ушак, 0. 22% зразка складалися з осаджина (Таблиця 1). Крім того, для досягнення подальшої оцінки фенольного профілю MPM були проведені аналізи загального фенольного вмісту та загального вмісту флавоноїдів. Результати показали, що MPM мав помітний вміст фенолів і флавоноїдів, як показано нижче; 113,92 ± 2,26 мг GAE/г і 66,41 ± 0,74 мг QE/г відповідно. Результати оцінки фенольного профілю показали, що MPM може бути помітним кандидатом як новий природний засіб проти старіння.

ВИСНОВОК

Незважаючи на те, що дослідження, присвячені місцевому застосуванню плодів M. pomifera, відносно нові, увага до них зростає завдяки обнадійливим звітам. Таким чином, це дослідження мало на меті описати комплексну оцінку можливого потенціалу екстракту плодів M. pomifera проти старіння. Для визначення вмісту ізофлавоноїдів у плодах M. pomifera вперше, наскільки нам відомо, використовувався аналіз HPTLC разом із дослідженнями in vitro для визначення загального фенольного профілю. Результати показали, що осаджин є основним інгредієнтом зразків. Крім того, in vitro антиоксидантний потенціал екстракту оцінювали за допомогою чотирьох різних аналізів, і результати продемонстрували значний антиоксидантний потенціал MPM. Крім того, вимірювали інгібіторну активність щодо ферментів, які пов’язані з процесом старіння, і було видно, що MPM має помітну інгібуючу активність ферментів. На завершення це дослідження надає інформацію, яка може призвести до виробництва нових засобів догляду за шкірою.

Етика

Схвалення комітету з етики:Схвалення комітету з етики для дослідження не потрібне.

Інформовану згоду:Не Необхідно.

Експертна оцінка:Зовні рецензовано.

Авторські внески

Концепція: THB, TBŞ., HB, Дизайн: THB, İ.KC, EC, Збір або обробка даних: THB, İ.KC, HB, Аналіз або інтерпретація: THB, İ.KC, Пошук літератури: THB, TBŞ., Написання: THB, EC

Конфлікт інтересів:Автори не заявили про конфлікт інтересів.

Розкриття фінансової інформації:Це дослідження було підтримано Університетською комісією наукових проектів Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar (№: 2020/02/07).

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ

1. Hwang E, Park SY, Yin CS, Kim HT, Kim YM, Yi TH. Ефекти проти старіння суміші Panax ginseng і Crataegus pinnatifida у фібробластах шкіри людини та здоровій шкірі людини. J Ginseng Res. 2017;41:69-77.

2. Ganceviciene R, Liakou AI, Theodoridis A, Makrantonaki E, Zouboulis CC. Стратегії боротьби зі старінням шкіри. Дерматоендокрінол. 2012; 4: 308-319.

3. Lee H, Hong Y, Tran Q, Cho H, Kim M, Kim C, Kwon SH, Park S, Park J, Park J. New role for the ginsenoside RG3 in antiaging via mitochondria function in ultraviolet-irradiated human dermal фібробласти. J Ginseng Res. 2019;43:431-441.

4. Rouvrais C, Bacqueville D, Patrick B, Haure MJ, Duprat L, Coutanceau C, Castex-Rizzi N, Duplan H, Mengeaud V, Bessou-Touya S. Оцінка властивостей ретинальдегіду, глюкозиду дельта-токоферолу та гліцилгліцину проти старіння олеамідна комбінація. J Invest Dermatol. 2017; 137 (Додаток 2): S303.

5. Браво К., Альзате Ф., Осоріо Е. Плоди відібраних диких і культивованих рослин Анд як джерела потенційних сполук з антиоксидантною та антивіковою активністю. Ind Crops Prod. 2016;85:341-352.

6. Yepes A, Ochoa-Bautista D, Murillo-Arango W, Quintero-Saumeth J, Bravo K, Osorio E. Purple seeds маракуйї (Passiflora edulis f. edulis Sims) as a promising source of skin anti-aging agents: enzymatic , антиоксидантні та багаторівневі обчислювальні дослідження. Arab J Chem. 2021;14:102905.

7. Rittié L, Fisher GJ. Каскади сигналів, викликані УФ-світлом, і старіння шкіри. Aging Res Rev. 2002; 1: 705-720.

8. Duque L, Bravo K, Osorio E. Цілісний підхід проти старіння, застосований у вибраних культивованих лікарських рослинах: погляд на фотозахист шкіри за допомогою різних механізмів. Ind Crops Prod. 2017;97:431-439.

9. Manjia NJ, Njayou NF, Joshi A, Upadhyay K, Shirsath K, Devkar VR, Moundipa FP. Потенціал омолодження лікарських рослин у КамеруніHarungana madagascariensis Lam. і Psorospermum aurantiacum Engl. запобігти пошкодженню шкіри in vitro ультрафіолетом В. Eur J Integr Med. 2019;29:100925.

10. Pujimulyani D, Suryani CL, Setyowati A, Handayani RAS, Arumwardana S, Widowati W, Maruf A. Космецевтичний потенціал Curcuma mangga Val. екстракт у фібробластах BJ людини проти MMP1, MMP3 та MMP13. Геліон. 2020;6:e04921.

11. Stavropoulou MI, Stathopoulou K, Cheilari A, Benaki D, Gardikis K, Chinou I, Aligiannis N. ЯМР-профілювання метаболічного профілю грецьких зразків прополісу: порівняльна оцінка їх фітохімічних композицій та дослідження їх властивостей проти старіння та антиоксидантів. J Pharm Biomed Anal. 2021;194:113814.

12. Філіп С., Джарматі З., Лісічков К., Чанаді Дж., Янков Р.М. Виділення та характеристика екстрактів маклюри (Maclura pomifera), отриманих екстракцією надкритичною рідиною. Ind Crops Prod. 2015;76:995-1000.

13. Салоуа Ф., Еддін Н.І., Хеді З. Хімічний склад і профільні характеристики насіння апельсина Maclura pomifera (Rafin.) Schneider і олії з насіння. Ind Crops Prod. 2009;29:1-8.

14. Veselá D, Kubínová R, Muselik J, Zemlicka M, Suchý V. Антиоксидантна та EROD активність осаджина та поміферину. Фітотерапія. 2004;75:209-211.

15. Gruber JV, Holtz R, Sikkink SK, Tobin DJ. Дослідження in vitro та ex vivo місцевого лікування поміферином. Фітотерапія. 2014;94:164-171.

16. Бозкурт І., Ділек Е., Ерол Х.С., Чакір А., Хамзаоглу Е., Коч М., Келеш О.Н., Халічі М.Б. Дослідження впливу поміферину з Maclura pomifera на спричинену індометацином виразку шлунка: експериментальне дослідження на щурах. Med Chem Res. 2017; 26:2048-2056.

17. Kurt-Celep İ, Celep E, Akyüz S, İnan Y, Barak TH, Akaydın G, Telci D, Yesilada E. Hypericum Olympic L. відновлює пошкодження ДНК і запобігає активації MMP-9, індукованій УФВ на шкірі людини фібробласти. J Етнофармакол. 2020;246:112202.

18. Bardakci H, Cevik D, Barak TH, Gozet T, Kan Y, Kirmizibekmez H. Вторинні метаболіти, фітохімічна характеристика та антиоксидантна активність різних екстрактів Sideritis congesta PH Davis et Hub.- Mor. Biochem Syst Ecol. 2020;92:104120.

19. Celep E, Seven M, Akyüz S, İnan Y, Yesilada E. Вплив методу екстракції на інгібування ферментів, фенольний профіль та антиоксидантну здатність Sideritis trojan Bornm. Південноафриканець Джей Бот. 2019;121:360-365.

20. Bardakcı H, Barak TH, Özdemir K, Celep E. Вплив пивоварного матеріалу та різних добавок на поліфенольний склад та антиоксидантну біоактивність комерційної Tilia platyphyllos Scop. настої. J Res Pharm. 2020;24:133-141.

21. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yesilada E. Вплив травлення людини in vitro на біодоступність фенольного вмісту та антиоксидантну активність екстрактів фруктів Viburnum opulus L. (європейської журавлини). Ind Crops Prod. 2019;131:62-69.

22. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yeşilada E. In vitro моделювання травлення людини біодоступності та антиоксидантної активності фенолів із екстрактів фруктів Sambucus ebulus L. Food Biosci. 2020;37:100711.

23. Ersoy E, Eroglu Ozkan E, Boga M, Yilmaz MA, Mat A. Потенціал проти старіння та антитирозиназна активність трьох видів Hypericum з акцентом на фітохімічний склад за допомогою LC-MS/MS. Ind Crops Prod. 2019;141:111735.

24. Лі К.К., Кім Дж.Х., Чо Дж.Дж., Чой Дж.Д. інгібуючий вплив 150 рослинних екстрактів на активність еластази та їх протизапальну дію. Int J Cosmet Sci. 1999;21:71-82.

25. Itoh S, Yamaguchi M, Shigeyama K, Sakaguchi I. Потенціал проти старіння екстрактів з Chaenomeles sinensis. Косметика 2019;6:21.

26. Колайлі С, Джан З, Йилдіз О, Сахін Х, Караоглу С.А. Порівняльне дослідження антигіалуронідазних, антифризних, антиоксидантних, антимікробних та фізико-хімічних властивостей меду каштанового (Castanea sativa Mill.) різних сортів монофлори. J Enzyme Inhib Med Chem. 2016;31(Додаток 3):96-104.

27. Korkmaz B, Horwitz MS, Jenne DE, Gauthier F. Нейтрофільна еластаза, протеїназа 3 і катепсин G як терапевтичні мішені при захворюваннях людини. Pharmacol Rev. 2010; 62: 726-759.

28. Akazaki S, Nakagawa H, Kazama H, Osanai O, Kawai M, Takema Y, Imokawa G. Вікові зміни зморшок шкіри, оцінені за допомогою нового тривимірного морфометричного аналізу. Br J Dermatol. 2002;147:689- 695.

29. Barla F, Higashijima H, Funai S, Sugimoto K, Harada N, Yamaji R, Fujita T, Nakano Y, Inui H. Інгібуючий вплив алкілгалатів на гіалуронідазу та колагеназу. Biosci Biotechnol Biochem. 2019;73:2335-2337.

30. Chung JH, Kang S, Varani J, Lin J, Fisher GJ, Voorhees JJ. Знижена активність кінази, що регулюється позаклітинним сигналом, і посилена активована стресом кіназа MAP у старій шкірі людини in vivo. J Invest Dermatol. 2000;115:177-182.

31. Addotey JN, Lenger's I, Jose J, Gampe N, Béni S, Petereit F, Hensel A. Ізофлавоноїди з пригнічуючим ефектом на людську гіалуронідазу-1 та норнеолігнанний кліторієнолактон B з екстракту кореня Ononis spinosa L. Фітотерапія. 2018;130:169-174.

32. Кім К.Дж., Сюань Ш., Парк С.Н. Лікорицидин, ізофлавоноїд, виділений із Glycyrrhiza uralensis Fisher, запобігає фотостарінню дермальних фібробластів людини, викликане УФА. Int J Cosmet Sci. 2017;39:133-140.

33. Кім Дж. Й., Ван І., Уддін З., Сонг Ю. Х., Лі З. П., Дженіс Дж., Парк К. Х. Конкурентні ізофлавони, інгібітори еластази нейтрофілів з коренів Flemingia philippinensis. Bioorg Chem. 2018;78:249-257.

34. Ерген Оз Б, Салтан Ішкан Г, Купелі Аккол Е, Сунтар І, Бахадир Ачікара О. Ізофлавоноїди як ранозагоювальні засоби з Ononidis radix. J Етнофармакол. 2018; 211: 384-393.

35. Azevedo Martins TE, de Oliveira Pinto CAS, de Oliveira AC, Robles Velasco MV, Gorriti Guitiérrez AR, Cosquillo Rafael MF, Huamani Tarazona JP, Retuerto-Figueroa MG. Внесок місцевих антиоксидантів у підтримку здорової шкіри - огляд. Sci Pharm. 2020;88:27.

36. Крутман Дж., Шредер П. Роль мітохондрій у фотостарінні шкіри людини: дефектна модель електростанції. J Investig Dermatol Symp Proc. 2009;14:44-49.

37. Донг К.К., Дамагі Н., Пікарт С.Д., Маркова Н.Г., Обаяші К., Окано Ю., Масакі Х., Гретер-Бек С., Крутманн Дж., Смайлс К.А., Ярош Д.Б. Пошкодження ДНК, викликане ультрафіолетовим випромінюванням, ініціює вивільнення MMP-1 у шкірі людини. Exp Dermatol. 2008;17:1037-1044.

38. Oresajo C, Pillai S, Manco M, Yatskayer M, McDaniel D. Антиоксиданти та шкіра: розуміння складу та ефективності. Dermatol Ther. 2012;25:252-259.

39. Чан Х.М., Чіу Х.Х., Ляо С.Т., Чень Ю.Т., Чанг Х.К., Вен К.С. Багатий ізофлавоноїдами екстракт макрофіли флемінга пом'якшує пошкодження шкіри, спричинене УФ-променями, шляхом поглинання активних форм кисню та інгібування експресії MAP-кінази та MMP. Evid Based Complement Alternat Med. 2013;2013:696879.

40. Santos CMM, Silva AMS. Антиоксидантна активність пренілфлавоноїдів. Молекули. 2020; 25: 696.

41. Orhan IE, Sezer Senol F, Demirci B, Dvorska M, Smejkal K, Zemlicka M. Антиоксидантний потенціал деяких природних і напівсинтетичних похідних флавоноїдів і екстрактів з Maclura pomifera (Rafin.) Schneider (осейж апельсин) і його незамінні. масляний склад. Турецька J Biochem. 2016;41:403-411.

42. Křížová L, Dadáková K, Kašparovská J, Kašparovský T. Isoflavones. Молекули. 2019;24:1076.

43. Su Z, Wang P, Yuan W, Grant G, Li S. Фенольні речовини з плодів Maclura pomifera. Nat Prod Commun. 2017;12:1743-1745.

44. Оразбеков Ю., Ібрагім М.А., Момбеков С., Сріведав'ясасрі Р., Датхаєв У., Махатов Б., Чаурасія Н.Д., Теквані Б.Л., Росс С.А. Виділення та біологічна оцінка пренільованих флавоноїдів з Maclura pomifera. Evid Based Complement Alternat Med. 2018;2018:1370368.

45. Картал М, Абу-Асакер М, Дворська М, Орхан І, Землічка М. Метод LC-DAD-MS для аналізу поміферину та осаджину, основних ізофлавонів у Maclura pomifera (Rafin.) Schneider. Chromatographia 2009; 69: 325-329.

46. ​​Дарджі К., Мігліс С., Вордлоу А., Абурашед Е.А. Визначення рівнів ізофлавонів за допомогою високоякісної рідинної хроматографії (ВЕРХ) у апельсинах із Середнього Заходу та півдня Сполучених Штатів. J Agric Food Chem. 2013;61:6806-6811.

47. Tsao R, Yang R, Young JC. Антиоксидантні ізофлавони в апельсині, Maclura pomifera (Raf.) Schneid. J Agric Food Chem. 2003;51:6445-6451.

48. Hwang HS, Winkler-Moser JK, Tisserat B, Harry-O'kuru RE, Berhow MA, Liun SX. Антиоксидантна активність екстракту апельсина в соєвій олії та риб'ячому жирі під час зберігання. J Am Oil Chem Soc. 2021;98:73-87.

【Додаткова інформація:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】