Як цистанхе запобігає захворюванням печінки

Контакти:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Анотація

Дослідити попередню характеристику, антиоксидантну та гепатопротекторну активність полісахаридів с.Cistanche deserticola (CDPs), шляхом послідовної мембранної фільтрації (мікрофільтрації, ультрафільтрації та нанофільтрації) отримано три полісахаридні фракції CDP-A, CDP-B та CDP-C. Були проаналізовані молекулярні маси, склад моносахаридів, чистота та ІЧ-спектри трьох фракцій. Результати показали, що CDP-C містив більшу частку галактуронової кислоти (GalUA), ніж CDP-B і CDP-A. Антиоксидантну активність також проаналізували, і результати показали, що CDP-C має найвищу активність. Таким чином, гепатопротекторну активність CDP-C вивчали далі. Дослідження in vitro CDP-C сприяв життєздатності клітин HepG2. Дослідження in vivo CDP-C зменшує зміни, спричинені алкоголем, включаючи серологічні індекси (аланінтрансаміназа, кисла фосфатаза, -глутамілтранспептидаза та тригліцериди) та показники печінки (супероксиддисмутаза, малоновий діальдегід, глутатіон-S-трансфераза та тригліцериди) у моделі тварини. Виражений мікровезикулярний стеатоз і легкий некроз у гістопатології печінки модельних тварин також були послаблені введенням CDP-C. Ці результати показали, що CDP-C володів гепатопротекторною активністю проти хронічного ураження печінки, викликаного алкоголем. Основним механізмом може бути те, що CDP-C може зменшувати вміст MDA і TG і модулювати активність відповідного ферменту. Ця властивість може бути пов’язана з GalUA в CDP-C.

Ключове слово: Cistanche deserticola; полісахариди; Попередні характеристики; антиоксидантний; Гепатопротекторна активність.

цистанчеbienfaitsdeserticola

1. Введення

Цистанхе є багаторічним голопаразитом і поширений в основному в пустельному районі північно-західного Китаю [1, 2]. Стебло видів Cistanche (Orobanchaceae) вперше було зареєстровано в китайській Materia Medica Шен Нонга. Цистанхею здавна використовували як традиційний фітопрепарат для лікування ниркової недостатності, імпотенції, старечого запору, хворобливості та слабкості попереку та колін, недостатності крові [3, 4]. Фармакологічні дослідження показали, що цистанхея має протизапальну дію [5, 6], антиостеопорозну дію [7, 8], седативну дію [9], противтомну дію [10], нейропротекторну дію [11]. Крім того, полісахариди Cistanche deserticola (CDPs) мають антигіперглікемічний та гіполіпідемічний ефект [12], імунологічну активність [13], проліфераційний вплив на лімфоцити [14].

Алкоголь, напій, що вживається в усьому світі, та харчова добавка спричиняють майже 2,5 мільйона смертей щороку у світі [15, 16]. Ці смерті в основному пов’язані із захворюваннями печінки, спричиненими зловживанням алкоголем [17, 18]. Індуковане алкоголем захворювання печінки є складним багатоетапним хронічним прогресуванням, яке зазвичай розвивається від алкогольного стеатозу до алкогольного гепатиту і, нарешті, до алкогольного цирозу [19]. Таким чином, визначення активних натуральних продуктів для споживачів алкоголю для запобігання або уповільнення прогресування алкогольного ураження печінки на ранній стадії є корисною стратегією лікування.

Cistanche deserticola YC Ma і Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight є двома лікарськими видами, зареєстрованими в китайській фармакопеї [3]. У багатьох роботах з’ясовано гепатопротекторну активність C. tubulosa [20-24] і C. deserticola [25, 26]. Але ці гепатопротекторні дослідження завжди були спрямовані на гостре ураження печінки, викликане чотирихлористим вуглецем (CCl4) або D-галактозаміном і ліпополісахаридом, але не турбувалися про хронічне ураження печінки, пов’язане з зловживанням алкоголем. Крім того, ці звіти були в основному зосереджені на механізмі фенілетаноїдних глікозидів (PhG), а не на CDP. Таким чином, у цьому дослідженні були досліджені попередні характеристики CDP та їх антиоксидантної активності (in vitro). Крім того, була створена модель пошкодження печінки мишей ICR, індукованого уайт-спіритом, для вивчення гепатопротекторної активності CDP проти хронічного пошкодження печінки, індукованого алкоголем.

цистанче і екстракт трави Тонгкат Алі

2. Матеріали та методи

2.1. Матеріали

Стебла C. deserticola були зібрані з Алашанської ліги, Внутрішня Монголія Китаю,і ідентифікований професором Сяодуном Ваном (Відділ інженерії біопереробки, Інститут інженерії процесів, Академія наук Китаю, Пекін, КНР).

Диметилсульфоксид (DMSO), 2, 2-азино-біс (3-етилбензтіазолін-6-сульфокислота) (ABTS), 3-(4, 5-диметилтіазол{ {8}}іл)-2, 5-дифенілтетразолію бромід (MTT) і 1, 1-дифеніл-2-пікрилгідразил (DPPH) були придбані у Sigma Chemical Co. (Сент-Луїс, Міссурі, США). Модифіковане середовище Ігла Дульбекко (DMEM) і фетальну бичачу сироватку (FBS) придбали у Invitrogen, Inc. Уайт-спірит Er Guo-tou придбали у Beijing Red Star Co., LTD. Біциклол був придбаний у Beijing Union Pharmaceutical Factory. Водні розчини готували з надчистої води з системи очищення води Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA). Усі інші реактиви були аналітичної якості.

2.2. Екстракція CDP та фракційна фільтрація

Неочищені CDP були отримані відповідно до раніше описаного методу нашої групи [27] з невеликими модифікаціями. Коротко, порошок (40 меш) C. deserticola (50 кг) екстрагували ультразвуком (40 кГц і 6 кВт) 1000 л водного розчину етанолу (50 відсотків, об’єм/об’єм) при 60 ◦C протягом 120 хвилин. Полісахариди відокремлювали від екстракту за допомогою макропористої смоли (HPD 300). Розчин полісахариду концентрували при зниженому тиску, депротеїнізували за допомогою методу Севага [28], а ліофілізований продукт назвали неочищеним CDP.

Потім 50 г неочищених CDP розчинили в 2,5 л надчистої води та послідовно розділили за допомогою мікрофільтрації, ультрафільтрації та нанофільтрації (номінальна молекулярна маса відсікання становила 300 кДа, 10 кДа та 200 Да. Ефективна мембрана площа становила 0,625 м2). Залишений розчин мікрофільтрації був ліофілізований і названий CDP-A. Прониклий розчин мікрофільтрації фільтрували за допомогою ультрафільтрації, тоді як утриманий розчин ліофілізували та називали CDP-B. Прониклий розчин ультрафільтрації фільтрували за допомогою нанофільтрації, утриманий розчин ліофілізували та називали CDP-C.

2.3. Попередні характеристики CDP

Молекулярні розміри CDP були оцінені відповідно до раніше описаного методунаша група [29]. Композиції моносахаридів аналізували за методом, описаним P. Zhang та ін. [30]. Чистоту визначали фенолсульфатно-кислотним методом [31]. Вміст білка визначали за методом, згаданим Бредфордом і Майєю Козарскі [32, 33]. Спектри FT-IR CDP були зняті за допомогою інфрачервоного спектрометра з перетворенням Фур’є (FT/IR-660 Plus, JASCO) в діапазоні 400~4000 см-1.

2.4. Антиоксидантна діяльність

Вплив CDP на гідроксил, супероксид-аніон, DPPH і ABTS радикали оцінювали відповідно до методів, описаних Саном [34], Вангом [35], Япом [36] і Фатіхою [37] відповідно.

еректильна дисфункція cistancheдлянирка

2.5. Гепатопротекторна активність CDP-C in vitro

На підставі результатів антиоксидантного аналізу для дослідження гепатопротекторної активності було обрано CDP-C. Клітини HepG2 (придбані в Китайському центрі колекції типових культур, Пекін, Китай) культивували в DMEM, що містила термоінактивовану FBS (10 відсотків), стрептоміцин (0,1 мкг/мл), пеніцилін (100 МО/мл) і незамінні амінокислоти. Клітини інкубували у зволоженій атмосфері 5 відсотків CO2 при 37 градусах, збирали на фазі експоненціального росту, висівали в 96-лункові планшети (4×104 клітин на лунку, 100 мкл) і інкубували протягом 24 год. Клітини негативної групи обробляли спиртом (кінцева концентрація становила 3,5 відсотка, об’єм/об’єм), тоді як неактивну групу обробляли водою. Клітини позитивної групи обробляли спиртом і біциклолом (кінцева концентрація становила 200мкг/мл). Клітини чотирьох тестових груп обробляли спиртом і CDP-C (кінцева концентрація CDP-C становила 0,11, 0,3333, 1,00 і 3,00 мг/мл). Усі клітини культивували ще 48 год.

Життєздатність клітин HepG2 визначали методом МТТ-аналізу, згаданим J. Tong та ін. [38] з невеликими модифікаціями. Коротко, МТТ (5 мг/мл, 20 мкл на лунку) додавали в планшети з 96-лунками з клітинним посівом і клітини інкубували протягом 4 годин. Розчини видаляли і додавали ДМСО (150 мкл/лунку). Оптичне поглинання кожної лунки вимірювали при 492 нм за допомогою 96-зчитувача планшетів для лунок (Thermo Scientific, Америка). Життєздатність клітин розраховували за формулою:

Життєздатність клітин (відсотки)=(A зразок - порожній) ×100/ (A наївний - порожній)

Де A зразок — абсорбція експериментальної групи; Наївною була абсорбція контрольної групи без зразка; Пустою була абсорбція культурального середовища без зразка та посіву клітин.

2.6. Гепатопротекторна активність CDP-C in vivo

2.6.1. Тварини

Були використані дорослі самки мишей ICR (22-25 г, придбані в Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. Номер ліцензії на тварин 11400700128). Тварин містили в кімнаті з контрольованим навколишнім середовищем із кормом і водою ad libitum (відносна вологість становила 40-60 відсотків, 22-26 градуси), вентиляція повітря 12-18 разів/год та умови світлового опромінення був 12-годинний цикл світло/темрява 150-300 люкс. Мишей акліматизували до кімнатних умов тварин протягом 7 днів перед дослідами. Усі процедури із залученням тварин під час експериментів проводились у суворій відповідності до правил використання лабораторних тварин, прийнятих і оприлюднених Національним інститутом охорони здоров’я США.

2.6.2. Експериментальний дизайн

Мишей ICR випадковим чином розділили на шість груп (група, яка не отримувала лікування, група негативного контролю, група позитивного контролю та три тестові групи) з 10 тваринами в кожній групі. Наївній групі перорально вводили дистильовану воду. Групі негативного контролю перорально вводили алкоголь (уайт-спірит Er Guo-tou, 56 відсотків, 6 мл/кг). Групі позитивного контролю перорально вводили біциклол (300 мг/кг) і через 5 годин алкоголь. Трьом тестовим групам перорально вводили CDP-C у дозах 200, 600, 1800 мг/кг і через 5 годин алкоголь. Усім мишам вводили протягом 31 дня поспіль.

2.6.3. Визначення серологічних показників

Приблизно через 4 години після останнього прийому алкоголю з очниці відбирали кров і центрифугували при 3000 g протягом 15 хвилин. Після відділення сироватки за допомогою діагностичних наборів визначали активність ферментів аланін-трансамінази (ALT), кислої фосфатази (ACP), -глутамілтранспептидази (-GTP) і тригліцеридів (TG).
2.6.4. Визначення печінкових показників

Після збору крові всіх мишей стратили. Печінка кожної миші була негайно вирізана, промита фізіологічним розчином. З лівої частки відділено шматочок печінкової тканини. Потім тканину подрібнювали та гомогенізували водним розчином хлориду калію (1,15 відсотка, мас./об.) у скляному гомогенізаторі (Potter Elvehjem Teflon) протягом 60 секунд, щоб отримати гомогенат печінки (10 відсотків мас./об.). За допомогою діагностичних наборів вимірювали активність ферментів супероксиддисмутази (СОД), малонового діальдегіду (МДА), глутатіон-S-трансферази (ГСТ), а також вміст тригліцеридів (ТГ).

2.6.5. Гістопатологічні дослідження

Залишкову частину печінки фіксували у фіксаторі Буена протягом 24 годин, після зневоднення за допомогою водного розчину етанолу (50-100 відсотків, об’єм/об’єм) тканину печінки очищали в ксилолі та заливали парафіном. Печінкові зрізи (5 мм) фарбували алюмогематоксиліном та еозином (HE). Зображення зрізів печінки та гістопатологічних змін були отримані за допомогою світлового мікроскопа (Nikon-DS-L1-5M).

2.7. Статистичний аналіз

Дані були виражені як середнє значення ± стандартна помилка середнього значення (SEM) з трьох (аналіз хімічного складу та аналіз антиоксидантів), п’яти (життєздатність клітин) або десяти (дослідження in vivo) незалежних експериментів. Статистичну значущість відмінностей між групами аналізували за допомогою одностороннього дисперсійного аналізу (ANOVA) з наступним тестом множинного діапазону Стьюдента-Ньюмана-Кеулса з використанням програмного забезпечення SPSS 19.0. У всіх аналізах с<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Результати та їх обговорення

3.1. Характеристика CDP

Як показано на фіг. 1A, CDP-A містить дві групи з молекулярною масою 4000 кДа і 3946 кДа. Молекулярні маси CDP-B і CDP-C становлять 2400 кДа і 1300 кДа. Композиції моносахаридів показано на фіг. 1B. CDP-A, CDP-B і CDP-C містять шість незамінних моносахаридів у різних співвідношеннях, включаючи маннозу (Man), рамнозу (Rha), галактуронову кислоту (GalUA), глюкозу (Glc), галактозу (Gal) і арабінозу ( Ара). Крім згаданих вище шести моносахаридів, ксилоза (Xyl) також міститься в CDP-C. Крім того, CDP-C містить більшу частку GalUA, ніж дві інші фракції.

Чистота та вміст білка в CDP наведені в таблиці 1. Таблиця 1 показує, що CDP-A має найвищу чистоту, яка становить 75,57 відсотка, тоді як чистота CDP-B і CDP-C становить 74,72 відсотка та 68,92 відсотка відповідно. Вміст білка в CDP-A, CDP-B і CDP-C становить 1,27%, 1,24% і 1,05% відповідно.

Таблиця 1.Чистота та вміст білка в CDP. Дані є середніми ± SEM трьох повторів.

Спектри FT-IR вуглеводів використовуються для визначення їх структурних особливостей і зазвичай використовуються для якісного аналізу органічних функціональних груп, особливо для OH, CO та C=O [39]. Спектри FT-IR CDPs показані на рис. 1C. Кожен спектр демонструє сильний і широкий пік розтягування близько 3293 см−1 для валентної вібрації OH, а також слабкий пік поглинання при 2939 см−1 для валентної вібрації CH. Смуга поглинання при 1650 см−1 спричинена асиметричними валентними коливаннями C=O. Широка смуга поглинання при 1418 см−1 пояснюється деформуючим коливанням зв'язку CH. Кожен окремий полісахарид має певну смугу в області 1000-1200 см−1, у якій переважає вібрація кільця, яка перекривається вібрацією розтягування бічних груп (C-OH) і вібрацією глікозидної смуги (COC). Поглинання при 1036 см−1 вказує на піранозну форму цукру. Оптична щільність майже 829 см−1 свідчить про зв'язок -глікозидів у молекулярній структурі CDP. Як показано на рис. 1 C, смуга поглинання CDP-C при 1650 см−1 сильніша, ніж CDP-A та CDP-B, що означає, що вміст C=O у CDP-C перевищує у CDP-A та CDP-B. Цей результат узгоджується з результатами на рис. 1 A, які показують, що частка GalUA у CDP-C більша, ніж у CDP-A та CDP-B.

3.2. Антиоксидантна активність CDP

3.2.1. Аналіз гідроксильних радикалів

Серед активних форм кисню гідроксильний радикал є найбільш реакційноздатним і викликає серйозне пошкодження сусідніх біомолекул [40]. Для гідроксильного радикалу існує два типи механізмів антиоксидантного захисту: один полягає в поглинанні вже утвореного гідроксильного радикалу, а інший полягає в придушенні утворення гідроксильного радикалу. Для останнього гідроксильний радикал утворюється в результаті реакції комплексу Fe (II) з пероксидом водню. Антиоксидантна активність CDP може зв’язуватися з іонами металів, які не реагують з H2O2 і не утворюють гідроксильний радикал, але утворюють хелат з CDP і утворюють комплекс металу. Металокомплекс не може далі реагувати з H2O2 з утворенням гідроксильного радикалу [41-43]. Таким чином, CDP демонструють ефекти поглинання гідроксильних радикалів.

На рис. 2 A показано здатність CDP до поглинання гідроксильного радикалу в залежності від концентрації. Швидкість поглинання CDP-A, CDP-B і CDP-C становить 29,56 відсотка, 33,44 відсотка і 38,22 відсотка відповідно. CDP-C демонструє вищу активність поглинання гідроксильних радикалів. Враховуючи, що CDP-C містить більшу частку GalUA, ніж CDP-A та CDP-B, антиоксиданти CDP можуть бути пов’язані не лише зі здатністю лігувати іони металу, але й із вмістом GalUA, Ara та Gal [{{15 }}].

3.2.2. Аналіз аніон-радикалів супероксиду

Супероксидний аніон-радикал є токсичною формою, яка утворюється в результаті численних біологічних і фотохімічних реакцій і, таким чином, викликає пошкодження тканин [47]. Хоча супероксидний аніон є відносно слабким окислювачем, він відіграє важливу роль в утворенні інших сильніших реакційноздатних окислювальних форм, таких як синглетний кисень і гідроксильний радикал [48]. На рис. 2 B показано співвідношення між концентраціями та здатністю поглинання CDP на супероксидних аніон-радикалах. Зі збільшенням концентрації CDP-C демонструє вищу здатність поглинати, ніж CDP-B і CDP-A.

3.2.3. DPPH радикальний аналіз

DPPH, одна зі стабільних азотоцентрованих сполук, яка має вільний від протонів радикал з характерним поглинанням при 517 нм, значно зменшується під впливом поглиначів протонних радикалів, тому він широко використовується для оцінки активності антиоксидантів поглинання вільних радикалів. Загальноприйнято, що вільні радикали DPPH поглинаються антиоксидантами завдяки їх здатності донорувати водень. Антиоксиданти переносять або електрони, або атоми водню до радикала DPPH і утворюють DPPH-H, який є нерадикальним утворенням [49].

Загальний ефект поглинання DPPH для всіх зразків було перевірено, і результати показані на рис. 2 C. Здатності поглинання CDP на радикалах DPPH залежать від концентрації. Коли концентрація збільшується від 1.0 до 5.0 мг/мл, очищувальна здатність CDP-C зростає з 52,5% до 58,7%, що вище, ніж у CDP-B (з 34,2% до 56,8%). відсотка) і CDP-A (з 12,5 відсотка до 52,8 відсотка). Ефект поглинання DPPH CDP-C може бути пов’язаний з карбонільними групами в GalUA.

3.2.4. ABTS радикальний аналіз

Аналіз радикалів ABTS часто використовується для вимірювання загальної антиоксидантної сили потужного антиоксиданту досліджуваних зразків [50]. Ефекти поглинання ABTS для всіх зразків показані на рис. 2 D. Здатності CDP поглинати радикали ABTS залежать від дози. IC50 для CDP-A, CDP-B і CDP-C становить приблизно 4,0 мг/мл, 2,5 мг/мл і 1,2 мг/мл відповідно. Результати показують, що CDP мають активність поглинання ABTS.

Таким чином, антиоксидантна активність CDP-C була вищою, ніж CDP-A і CDP-B. Повідомлялося, що деякі фармакологічні дії полісахаридів були пов’язані з його GalUA [51]. У цьому експерименті частка GalUA в CDP-C була більшою, ніж у CDP-A і CDP-B, CDP-C був обраний для дослідження гепатопротекторного ефекту проти хронічних захворювань печінки, спричинених алкоголем.

3.3. Вплив CDP-C на життєздатність клітин HepG2

Вимірювання життєздатності клітин є поширеним способом оцінки ефективності природних ліків [52]. На підставі результатів того, що CDP-C має найвищу антиоксидантну активність, було оцінено вплив CDP-C на життєздатність клітин HepG2. Результати показані на рис. 3. Помітне зниження життєздатності клітин HepG2 викликане лікуванням алкоголем. Але CDP-C може значно підвищити показники виживання порівняно з негативною групою. Як показано на рис. 3, життєздатність клітин не демонструє точної залежності від концентрації з CDP-C. Навпаки, коли концентрація CDP-C досягає 3.00 мг/мл, життєздатність клітин HepG2 різко знижується. Причиною зниження життєздатності клітин може бути те, що низька концентрація CDP-C була корисною для виживання клітин HepG2. Однак, коли концентрація полісахаридів у культуральному середовищі була достатньо високою, щоб змінити мікрооточення клітин, життєздатність клітин HepG2 пригнічувалася.

3.4. Фармакологічні ефекти CDP-C

3.4.1. Вплив CDP-C на серологічні показники

На зловживання алкоголем припадає майже 4 відсотки всіх показників смертності, що стало серйозною соціальною проблемою у світі. В організмі людини алкоголь метаболізується в печінці після всмоктування через слизову оболонку шлунка та тонкої кишки [53-55]. Алкогольні захворювання печінки зазвичай виникають після років зловживання алкоголем [56]. Зазвичай патологічні стани, такі як ожиріння печінки, гепатит, фіброз і цироз [57], або навіть ракові захворювання, такі як гепатоцелюлярна карцинома та рак товстої кишки [58], спостерігаються при розладах печінки, пов’язаних із вживанням алкоголю. Тому алкоголь є типовим гепатоксиком і широко використовується в наукових дослідженнях як індуктор ураження печінки [59]. Враховуючи, що захворювання печінки, викликані алкоголем, часто спричинені алкогольними напоями та харчовими добавками, а не промисловим етанолом, тому у цьому дослідженні для встановлення моделі пошкодження печінки у мишей ICR використовувався уайт-спірит Er Guo-tou. Біциклол є поширеним агентом, який використовується для лікування хронічного ураження печінки, тому його використовували для встановлення моделі позитивного контролю.

Клітини печінки містять більш високі концентрації АЛТ у цитоплазмі та мітохондріях. Через різні пошкодження печінкових клітин витік цитозолю спричинить підвищення АЛТ у сироватці крові. Таким чином, підвищення АЛТ є індикатором клітинного витоку та функціональних розладів печінки [60]. Тому рівень АЛТ у сироватці зазвичай встановлюється як індикатор для оцінки стану печінки [61]. З подібних причин -GTP, ACP і TG також використовуються як індикатори для оцінки стану здоров'я печінки [62].

У даному дослідженні оцінку гепатопротекторної активності ЦДП-С проводили за визначенням рівнів АЛТ, АЦФ, -ГТФ і ТГ. Результати показані на рис. 4 A, B, C і D. Чотири індикатори сироватки крові різко підвищилися під час лікування алкоголем у негативній групі. Але CDP-C може послабити ці зміни, спричинені прийомом алкоголю. Однак не всі серологічні показники CDP-C залежать від дози. На рис. 4 A і B CDP-C у низькій концентрації має значний вплив на відновлення ALT і ACP, але ефект CDP-C у найвищій концентрації не був значущим. Фактично, багато натуральних продуктів корисні для здоров’я в низьких дозах, але шкідливі для здоров’я у великих дозах [60]. Причина може полягати в тому, що надмірне вживання полісахаридів впливає на нормальний метаболізм організмів, так якнегативно впливати на здоров'я організму. Однак детальний механізм потребує подальших досліджень.

3.4.2. Вплив CDP-C на печінкові показники

Організми, що піддаються окислювальному стресу, зазвичай розвинули антиоксидантний захисний механізм, а СОД є типовою антиоксидантною системою на основі ферментів [63]. СОД каталізує дисмутацію супероксид-аніону в O2 і H2O2 [64]. GST, розчинний білок, розташований у цитозолі, також відіграє важливу роль у детоксикації печінки. З причин, зазначених вище, SOD і GST стають індикаторами гепатотоксичності, спричиненої алкоголем. МДА і ТГ у печінці також використовуються як індикатори гепатотоксичності [65].

У цьому дослідженні вплив CDP-C на функцію печінки показано на рис. 5. На малюнках A, B, C і D показано вплив CDP-C на SOD, MDA, GST і TG відповідно. Ці чотири фотографії показують, що миші, які отримували алкоголь, помітно знижують рівні SOD і GST і підвищують рівні MDA і TG, але CDP-C, очевидно, може послабити цю зміну. Подібно до явищ, описаних у розділі 3.4.1, показники печінки також не залежали від дози CDP-C. Причина цього може бути схожа на механізм, проілюстрований у розділі 3.4.1. У попередніх дослідженнях повідомлялося, що вплив полісахаридів на СОД і каталазу може бути пов’язаний з індукцією експресії генів СОД і каталази [66]. Проте ще необхідні подальші дослідження, щоб з’ясувати гепатопротекторний механізм CDP-C і зв’язок між його структурою та функцією.

3.5. Гістопатологічні ефекти CDP-C на мишах, індукованих алкоголем

На підставі гістопатологічних спостережень на зрізах печінки група пацієнтів, які не отримували лікування, продемонструвала нормальну клітинну архітектуру з чіткими печінковими клітинами та відсутність гістологічних аномалій (рис. 6 A). Для порівняння, прийом алкоголю викликав серйозне пошкодження печінки у мишей негативної групи. Зрізи печінки показали відкладення жиру в гепатоцитах, некроз і набряк гепатоцитів, утворення вакуолі в клітинах, а клітинні межі також зникли (рис. 6 B). Зрізи печінки мишей, яким вводили біциклол (рис. 6 C) з різними дозами CDP-C (рис. 6 DF), продемонстрували очевидне відновлення тих спотворень, які з’явилися в групі негативного контролю. Ці результати підтвердили, що алкоголь викликав певний ступінь спотворення в гепатоцитах групи негативного контролю. Однак CDP-C відновив ці зміни.

Прийнято вважати, що гепатопротекторна дія полісахаридів пов’язана з їхньою антиоксидантною активністю [67, 68]. Було доведено, що високий вміст уронової кислоти є корисним для антиоксидантної дії полісахаридів [44, 45]. Було підтверджено, що полісахариди, багаті Gal і Ara, мають більш високий антиоксидантний ефект [46]. Однак великомолекулярним полісахаридам важко проникнути безпосередньо в епітеліальні клітини кишечника. Для CDP-C (з молекулярною масою 1300 кДа) непросто потрапити в організм безпосередньо та відіграти гепатозахисну роль. Опубліковані звіти показали, що молекулярні маси полісахаридів зменшилися після шлункового та кишкового травлення [69]. Таким чином, ми припустили, що CDP-C може розкладатися на полісахариди з низькою молекулярною масою та поглинатися епітеліальними клітинами кишечника. Відновлювальні кінці полісахаридів можуть бути збільшені за рахунок розриву глікозидних зв’язків [69, 70]. Згідно з моносахаридним складом CDP-C, ці деградовані полісахариди з низькою молекулярною масою повинні містити GalUA, Ara та Gal. Таким чином, ці полісахариди з низькою молекулярною масою, які мають відновні кінці та містять GalUA, Ara та Gal, можуть відігравати роль захисту печінки в організмі. Однак детальний механізм потребує подальших досліджень.

4. Висновки

Відповідно до аналізів моносахаридного складу та спектрів ІЧ-Фур’є, усі три фракції CDP містили Man, Rha, GalUA, Glc, Gal та Ara. CDP-C містив велику частку GalUA. CDP-C мав найвищу антиоксидантну активність. Результати досліджень in vitro та vivo продемонстрували, що CDP-C має гепатопротекторну дію проти хронічного ураження печінки, спричиненого алкоголем. Основний механізм був пов’язаний з модулюванням відносної активності ферментів, зниженням MDA і TG у печінці. Фізіологічна активність CDP-C може бути пов’язана з GalUA. Ці висновки дають змогу по-новому зрозуміти фармакологічні цілі C. deserticola у профілактиці алкогольної хвороби печінки.

Цистанхея трав'яназахищаєпечінкаіпокращує імунітет.

Для отримання додаткової інформації натисніть тут.