Контактна особа:jerry.he@wecistanche.com

Ана Мерино‑Рібас1,2,3,4 · Рікардо Араухо4 · Йоана Банку1,2 · Фредзія Гратероль1,2 · Андреа Вергара5 · Марк Ногера‑Хуліан5 · Роджер Паредес5 · Хорді Бонал2 · Бенедіта Сампайо‑Майя4,6

Отримано: 23 червня 2021 р. / прийнято: 8 грудня 2021 р

© Автор(и) 2021

Цистанхея може покращити роботу нирок

Анотація

Мета Доведено, що мікробіом кишечника змінюється у пацієнтів із хронічною формоюнирказахворювання. Це сприяє хронічному запаленню та підвищує серцево-судинний ризик і смертність, особливо у тих, хто проходить гемодіаліз. Фосфатзв'язуючі речовини можуть потенційно викликати зміни в їх мікробіомі. Це дослідження мало на меті порівняти зміни в мікробіомі кишечника пацієнтів на гемодіалізі, які отримували ацетат кальцію, з тими, хто отримував оксигідроксид сахарного заліза.

Методи. Дванадцять пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі, отримували ацетат кальцію або оксигідроксид сахарного заліза протягом 5 місяців. Зразки крові (для біохімічного аналізу) і зразки калу (для аналізу мікробіомів) збирали на початку лікування, через 4, 12 і 20 тижнів після початку лікування. Екстрагували фекальну ДНК і сконструювали бібліотеку секвенування 16S рРНК, націлену на гіперваріабельні області V3 і V4.

Результати Що стосується клінічних змінних і лабораторних параметрів, не спостерігалося статистично значущих відмінностей між групами ацетату кальцію або оксигідроксиду сахарного заліза. Аналізуючи зразки калу, ми виявили, що всі пацієнти були різними (p=0.001) між собою, і ці відмінності зберігалися протягом 20 тижнів лікування. Кластеризуючий аналіз у мікробних профілях згрупував зразки того самого пацієнта незалежно від лікування та стадії захворювання.

лікування.

Висновок. Ці результати свідчать про те, що 5-місячне лікування ацетатом кальцію або оксигідроксидом сахарного заліза не змінило початкове розмаїття чи базовий бактеріальний склад у пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі, а також про високу варіабельність профілю кишкової мікробіоми, виявленої серед цих пацієнтів.

Ключові слова Мікробіом кишечника · Хронічна хвороба нирок · Гемодіаліз · Фосфатзв'язуючі речовини · Оксигідроксид сахарного заліза ·

Ацетат кальцію

вступ

Хронічнийниркахвороба (ХХН) є всесвітньою проблемою громадської охорони здоров’я, поширеність якої зростає, несе високий економічний тягар і підвищує рівень захворюваності та смертності [1].

У хворих на ХХН важливу роль відіграє серцево-судинна патологія. Ці пацієнти мають підвищений ризик розвитку серцево-судинних захворювань (ССЗ) і рівень смертності від серцево-судинних захворювань у 30 разів вищий, ніж у загальній популяції [2]. Окрім традиційних серцево-судинних факторів ризику, які здебільшого частіше переважають у пацієнтів із ХХН, ніж у загальній популяції, взаємозв’язок між ХХН та ССЗ можна пояснити наявністю кісткових і мінеральних розладів, статусом гідратації та запаленням. які розвивають наші пацієнти.

У звичайних умовах запалення є захисною і фізіологічною реакцією на різноманітні шкідливі подразники. Однак при деяких виснажливих розладах, таких як ХХН, запалення стає шкідливим і стійким [3]. Загальновідомо, що ХХН супроводжується стійким запальним статусом [4, 5]. Запалення, ймовірно, є наслідком багатофакторної етіології та взаємодіє з декількома факторами, які виникають при накопиченні уремічних токсинів, і було описано як предиктор серцево-судинної та загальної смертності [6]. Крім того, зростає кількість доказів, які підтверджують наявність дисфункції кишкового бар’єру та змін у складі кишкової мікробіоти при ХХН, що зазвичай називають кишковим дисбактеріозом [7–9]. Цей дисбіотичний стан одночасно генерує токсичні побічні продукти та сприяє хронічному статусу окисного стресу та запалення у цих пацієнтів [10–12].

Декілька факторів сприяють мікробному дисбактеріозу кишечника у пацієнтів із пізньою ХХН. Накопичення сечовини в рідинах організму та її дифузія до шлунково-кишкового тракту призводять до розмноження бактерій, що володіють уреазою. Крім того, гідроліз сечовини генерує продукти, які руйнують щільне з’єднання епітелію, тим самим полегшуючи транслокацію ендотоксину та мікробних фрагментів у системний кровотік [7, 8, 10, 13–15]. Дієтичні рекомендації при ХХН, включаючи обмежене споживання калію, фосфату, натрію та білків, призводять до низького споживання ферментованих вуглеводів, що може призвести до розширення протеолітичних видів і збільшення утворення бактеріальних токсинів [12, 13, 16]. Крім того, пацієнти з ХХН зазвичай асоціюються з іншими супутніми захворюваннями, такими як діабет, аутоімунні захворювання та гіпертонія. Усі ці супутні захворювання самі по собі призводять до змін кишкової мікробіоти [17, 18].

Дуже важливим фактором, який сприяє дисбактеріозу, є лікарські препарати. Загальновідомо, що пацієнти з пізньою стадією ХХН зазвичай отримують різні медикаменти. Було продемонстровано, що добавки заліза або антибіотики, які часто застосовуються нашими пацієнтами, змінюють мікробіом кишечника [19–21]. Проте вплив на кишковий мікробіом інших широко використовуваних препаратів у пацієнтів із ХХН залишається невідомим.

Більшість пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі, схильні до гіперфосфатемії, і для корекції цього стану їм потрібні високі дози різних типів фосфатзв’язуючих речовин. Фосфатні зв’язувальні речовини можна класифікувати як кальцієві та некальцієві фосфатні зв’язувальні речовини. Було описано, що обидві групи фосфатзв’язуючих агентів можуть потенційно викликати зміни в складі мікробіому [22–25].

Нещодавно для лікування гіперфосфатемії у пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі, було схвалено нові фосфатзв’язуючі агенти без кальцію. Деякі з цих нових агентів, такі як оксигідроксид сахарного заліза (SFO) і цитрат заліза, містять залізо у своїх композиціях. Вважається, що, враховуючи критичну роль заліза в мікробному зростанні та вірулентності, велике навантаження залізом, що вводиться разом із цими препаратами, може змінити мікробіом кишечника [26, 27]. Тим не менш, досі є мало доказів про вплив цих нових зв’язувачів фосфату на мікробіом кишечника [25].

Враховуючи важливість зміненого мікробіому кишечника у пацієнтів із ХХН та його внесок у їх запальний стан, а також відсутність інформації про вплив на мікробіом кишечника цих широко використовуваних сьогодні ліків, ми вирішили відслідковувати та порівнювати зміни в мікробіомі кишечника пацієнтів, які проходять гемодіаліз і приймають SFO або ацетат кальцію (CA) на основі фосфату, що зв’язує фосфати.

Матеріали та методи

вербування

Дванадцять пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі в німецькій лікарні Universitari Trias i Pujol, були запрошені взяти участь у нашому дослідженні з 5-місячним спостереженням. Усі суб’єкти були набрані з відділення гемодіалізу німецької лікарні Trias i Pujol у Бадалоні, Іспанія. Усі пацієнти були віком старше 18 років і перебували на гемодіалізі щонайменше 1 рік (4 години, 3 сеанси на тиждень). Це дослідження було схвалено Комітетом з етики клінічних досліджень лікарні Університету Німеччини Trias i Pujol (PI-16-169, NCT5551048) і відповідало принципам, викладеним у Гельсінській декларації. Усі учасники були набрані добровільно після отримання детальної інформації щодо протоколу дослідження. Письмова інформована згода була отримана від усіх пацієнтів.

Критерії виключення включали нездатність дати інформовану згоду, захворювання шлунково-кишкового тракту в анамнезі, госпіталізацію та прийом антибіотиків протягом останніх 3 місяців.

Відповідна клінічна та демографічна інформація була зібрана для кожної особи на початку дослідження. Зібрані клінічні характеристики: стать, вік, етіологія ХХН, високий кров’яний тиск, цукровий діабет, дисліпідемія, серцево-судинні захворювання (захворювання периферичних судин, ішемічна кардіоміопатія або інсульт) і рак.

Ми також зібрали інформацію щодо їхнього судинного доступу та їхнього попереднього лікування фосфатзв’язуючими на початку дослідження (дев’ятьох отримували ацетат кальцію, один отримував карбонат кальцію, а двоє раніше не отримували лікування від гіперфосфатемії).

Ми розділили пацієнтів на дві групи та змінили їхнє лікування гіперфосфатемії: 5 пацієнтів було поміщено в групу СА (4 продовжували терапію КА та 1 пацієнт змінив терапію карбонатом кальцію), а 7 були переведені на SFO (5 змінили терапію КА та 2 початок фосфатзв’язуючого лікування).

Колекція зразків

Зразки фекалій були зібрані у 12 пацієнтів на гемодіалізі, які отримували фосфатзв’язуючі препарати, 5 у групі CA та 7 у групі SFO. Ми також збираємо зразки крові під час планових перевірок, які проводяться в нашому відділенні гемодіалізу. Зразки (зразки крові та фекалій) збирали протягом 5-місячного спостереження: на початку лікування, через 4, 12 і 20 тижнів після початку лікування.

У зразках крові аналізували такі показники: гемоглобін, феритин, індекс насичення трансферину, кальцій, фосфат, паратгормон, С-реактивний білок, швидкість осідання, альбумін.

Виділення ДНК, створення бібліотеки та секвенування

Фекальну ДНК екстрагували за допомогою Powersoil DNA Isolation Kit MoBio, і створили бібліотеку секвенування 16S рРНК, націлену на гіперваріабельні області V3 і V4.

Секвенування проводили на платформі MiSeq (2 × 300). Побудова таблиці OTU, таксономічне призначення та описовий і статистичний аналізи були виконані за допомогою R версії 3.4.2. і різні пакети (DADA 2, vega, ggplot, phyloseq) і база даних рРНК Greengenes.

Дані та статистичний аналіз

Primer v7 (PRIMER-e, Окленд, Нова Зеландія) використовувався для розрахунку індексів різноманітності, аналізу відсотків подібності (SIMPER) і багатовимірного аналізу, головним чином аналізу подібності (ANOSIM), одностороннього аналізу та пермутаційного багатовимірного аналізу дисперсії ( PERMANOVA; використання даних, перетворених за квадратним коренем, подібності Брея-Кертіса та 4999 перестановок залишків за зменшеною моделлю), що використовується для перевірки значущості бета-різноманітності. Для цих аналізів використовувався відсоток даних OTU на зразок, а потім дані, перетворені в квадратний корінь, матриці подібності типів даних подібності, використання подібностей Брея–Кертіса, додавання фіктивного значення та тестування 4999 перестановок. STAMP використовувався для аналізу таксономічних профілів серед груп зразків і розрахунку статистичних відмінностей [28].

Для статистичної обробки клінічних даних використовувалося програмне забезпечення статистичного аналізу Statistical Package for Social Sciences (SPSS) 26.0 для MAC OS. Категориальні змінні були описані через відносні частоти (відсотки), тоді як безперервні змінні були описані з використанням середнього ± стандартного відхилення (SD). У відповідних випадках ми застосували тест на незалежність хі-квадрат для аналізу гіпотез щодо категоріальних змінних і t-критерій Стьюдента щодо неперервних змінних. Рівень 0.05 вважався значним.

Результати

Основні клінічні параметри не відрізнялися між пацієнтами, віднесеними до груп CA або SFO на початковому етапі (табл. 1). Ми спостерігали, що в групі СА спостерігалося підвищення, але не статистично значуще, в анамнезі артеріальної гіпертензії, дисліпідемії, захворювань периферичних судин, інсульту, ішемічної кардіоміопатії, ніж у групі СФО. Пацієнти, віднесені до групи SFO, продемонстрували більшу частоту використання катетера як судинного доступу, але також статистично незначущу.

На початковому етапі жоден пацієнт не отримував лікування SFO, деякі отримували CA в обох групах лікування, а 2 пацієнти в групі SFO не отримували лікування, що зв’язує фосфат. У цей момент ми не виявили статистично значущих відмінностей щодо лабораторних параметрів, таких як гемоглобін, феритин, індекс насичення трансферину, кальцій, фосфат, паратиреоїдний гормон, С-реактивний білок, швидкість осідання та альбумін (табл. 2). Загалом ми спостерігали в групі SFO на початковому рівні вищі індекси насичення трансферину та нижчі значення С-реактивного білка, ніж у групі CA, але ці відмінності не були статистично значущими. Ми також відзначили у пацієнтів, віднесених до групи СА, підвищену тенденцію до гіперфосфатемії на початку дослідження, але це також не було статистично значущим.

У таблиці 2 ми представляємо еволюцію лабораторних параметрів у різні моменти часу. Ми виявили, що в групі CA 20-тижневий рівень кальцію був вищим, ніж у групі SFO зі статистичною значущістю (p=0.02). Швидкість седиментації була збільшена в групі CA на 12-му тижні лікування порівняно з групою SFO, з

Таблиця 1. Клінічна характеристика пацієнтів, які отримували ацетат кальцію (CA) або оксигідроксид сахарного заліза (SFO) як фосфатзв’язуючий агент

Значення є середніми значеннями ± SD або відносними частотами (відсотки). Не виявлено статистичних відмінностей між CA та SFO

Таблиця 2. Лабораторні клінічні дані пацієнтів, які отримували ацетат кальцію (CA) або оксигідроксид сахарного заліза (SFO) як фосфатзв’язуючий агент

Значення є середніми ± SD. *Значення в SFO суттєво відрізняються від CA

статистична значущість (p {{0}}.04). Крім того, статистично значуще зниження альбуміну спостерігалося в групі SFO на 20-тижневому лікуванні, якщо порівнювати його з групою CA (p < 0,01).="" рівні="" феритину="" в="" обох="" групах="" на="" початковому="" рівні="" та="" після="" 20="" тижнів="" лікування="" були="" високими="" в="" обох="" групах,="" і="" обидві="" групи="" отримали="" нормальний="" рівень="" фосфату="" на="" 20="" тижні="" лікування="" без="" статистично="" значущих="" відмінностей.="" рівні="" індексів="" насичення="" трансферину,="" паратгормону,="" с-реактивного="" білка,="" швидкості="" седиментації="" та="" альбуміну="" через="" 20="" тижнів="" лікування="" були="" подібними="" в="" обох="">

Зразки всіх часових точок (вихідний рівень, тиждень 4, тиждень 12 і тиждень 20) були зібрані у восьми із загальних дванадцяти осіб, загалом у 38 зразках калу та крові. З початкової групи з 12 пацієнтів пацієнт 7 (група SFO) вибув, оскільки він був направлений до іншої лікарні через клінічні причини, і ми більше не могли контролювати всі змінні, що стосуються дослідження, пацієнт 3 (група SFO) отримавниркатрансплантація перед збором 20-тижневих зразків, пацієнт 9 (група SFO) помер до 12-тижневого збору зразків, і ми могли отримати лише якісні зразки мікробіома кишечника з 12-го та 20-го тижнів на пацієнта 8 (група SFO).

Набір із 38 зразків фекалій показав понад 2 мільйони зчитувань, потім класифікованих за допомогою бази даних Greengenes. Велику кількість ASV (33 734) було знайдено серед протестованих зразків і класифіковано як належать до царства бактерій. Різноманітність Шеннона вимірювали в кожному зразку, і група з 38 зразків показала значення різноманітності Шеннона в діапазоні від 6,2 до 7,7.

Цікаво, що ми виявили, що всі пацієнти були дуже різними між собою (p=0.001), якщо порівнювати одного пацієнта з іншим пацієнтом на початковому етапі (рис. 1A). Ці відмінності серед пацієнтів зберігалися протягом 20 тижнів лікування; не було суттєвих відмінностей (p > 0,05), коли зразки були згруповані за тижнем лікування (базова лінія, 4, 12 або 20 тижнів). Важливо відзначити, що кишковий мікробіом був стабільним протягом 20 тижнів дослідження у пацієнтів, які отримували КА до дослідження та підтримували терапію в рамках протоколу дослідження, а також у пацієнтів, які змінили фосфатзв’язуючі терапевтичні засоби (після відсутності лікування , CA або карбонат кальцію до CA або SFO).

Коли ми порівнювали мікробні профілі пацієнтів, які отримували СА, та СФО, враховуючи всі часові точки, ми виявили статистичні відмінності (рис. 1B); і ці відмінності були підтверджені ANOSIM (p=0.002) і PERMANOVA (p=0.001). Цей статистичний аналіз проводився незалежно від відмінностей, що спостерігалися на початку дослідження.

Було вивчено бактеріальні спільноти, і Bacteroidetes і Firmicutes були найпоширенішими типами, знайденими у зразках фекалій, за ними йшли Proteobacteria, Actinobacteria та Verrucomicrobia. Шукаючи більш конкретні композиційні відмінності, ми порівняли кілька таксономічних рівнів серед цих зразків. При аналізі бактеріальний

Рис. 1 Аналіз основних координат (PCO) профілів мікробіома для кількох пацієнтів. B Головний координаційний аналіз (PCO) профілів мікробіома для медикаментозного лікування (ацетат кальцію проти оксигідроксиду сахарного заліза)

склад на рівні роду, Bacteroides був найпоширенішим в обох групах пацієнтів, незалежно від того, чи отримували вони лікування CA або SFO (рис. 2). Мікробні профілі були дуже різними серед пацієнтів, і, знову ж таки, кластеризаційний аналіз згрупував зразки того самого пацієнта незалежно від лікування та стадії лікування (вихідний рівень, 4, 12 або 20 тижнів).

Коли ми розглядаємо всі часові точки (всі пацієнти та всі тижні), можна виявити статистичні відмінності (p < 0,05)="" для="" мікробних="" спільнот="" під="" час="" порівняння="" зразків="" для="" кількох="" змінних,="" включаючи="" стать,="" ішемічна="" кардіоміопатія,="" використання="" катетера="" як="" судинного="" доступу="" або="" вік="" (пацієнти="" розподілені="" на="" три="" групи:="" до="" 45="" років,="" 61–69="" років,="" старше="" 71="" року).="" такі="" статистичні="" відмінності="" не="" можна="" було="" спостерігати,="" коли="" кожен="" етап="" лікування="" (вихідний="" рівень,="" 4,="" 12="" або="" 20="" тижнів)="" розглядався="" окремо;="" отже,="" не="" спостерігалося="" відмінностей="" для="" змінних="" статі,="" віку,="" ішемічної="" кардіоміопатії,="" використання="" катетера="" та="" медикаментозного="" лікування="" (ca="" проти="">

Обговорення

Це перше дослідження, яке порівнює зміни в мікробіомі кишечника пацієнтів на гемодіалізі, які приймають КА, і СФО. У нашому дослідженні не було суттєвих відмінностей у бактеріальному складі кишкового мікробіому між цими різними фосфатзв’язуючими агентами. Хоча ми виявили різні профілі мікробіомів під час порівняння обох груп лікування, цей різний профіль був присутній уже на початковому рівні, і тривале лікування не змінило це різноманіття в жодній із двох груп. Отже, суттєвих змін немає

Рис. 2 Аналіз кластеризації та профілі мікробіомів (на рівні роду) для зразків, розглянутих у цьому дослідженні

спостерігалися протягом різних часових проміжків (вихідний рівень, тиждень 4, тиждень 12, тиждень 20) у суб’єктів гемодіалізу з кишковою мікробіомою, які отримували CA, порівняно з тими, хто отримував SFO.

Мікробіом кишечника наших пацієнтів відповідає попереднім звітам, де домінують Bacteroidetes і Firmicutes phyla, будучи Actinobacteria, Proteobacteria та Verrucomicrobia у другій лінії колонізації [29]. Як уже детально обговорювалося раніше, пацієнти з ХХН мають численні внутрішні чинники, які сприяють дисбактеріозу кишечника, окрім фармакологічної терапії, а саме: уповільнений кишковий транзит, змінена травна здатність, метаболічний ацидоз, набряк кишкової стінки та один із найважливіших, високий кишковий синдром. наявність уремічних токсинів. У порівнянні зі здоровими контрольними пацієнтами, у пацієнтів, які проходять гемодіаліз, спостерігається підвищена чисельність Bacteroidetes [30], що також підтверджує результати нашого дослідження.

Існує мало доказів про вплив фосфатзв’язуючих речовин на мікробіом кишечника [25]. Досліджень, які б оцінювали вплив фосфатзв’язуючих речовин на основі кальцію, включаючи ЦА, на мікробіом кишечника пацієнтів із ХХН, аналізуючи зразки фекалій, відсутні [31]. Траутветтер та ін. [32] спостерігали підвищення загального вмісту коротколанцюгових жирних кислот у фекаліях і більшу відносну кількість представників роду Clostridium XVIII у здорових людей, які приймали карбонат кальцію. Наварро-Гонсалес та ін. [22] проаналізували зразки сироватки крові пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі, у яких брали або севеламер, що зв’язує фосфати, не на основі кальцію, або зв’язуючий вміст фосфатів на основі кальцію, і дійшли висновку, що лікування севеламером було пов’язане зі значним зниженням рівня високочутливого С-реактивного білка, IL. -6, концентрації ендотоксину в сироватці крові та розчинного CD14 незалежні предиктори смертності пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі.

SFO є фосфатним зв’язувачем на основі заліза, і дані свідчать про те, що залізо, що міститься в з’єднанні, може змінити кишкову мікробіоту, оскільки деякі кишкові бактерії використовують залізо для збільшення відносної кількості [26, 33, 34]. Крім того, було показано, що збільшення кількості заліза, що досягає товстої кишки, може сприяти вірулентності деяких патогенних бактерій і прозапальному середовищу [20, 35]. Але, незважаючи на ці докази, наше дослідження показує, що лікування SFO у пацієнтів на гемодіалізі, здається, не змінює мікробіом кишечника, ані лікування CA.

Лінг Лау та ін. [27], порівняли фекальний мікробіом та уремічні токсини в зразках сироватки щурів із ХХН (які пройшли 5/6 нефректомії) та нормальних щурів, випадково розподілених на звичайну дієту або дієту, що містить 4% цитрату заліза протягом 6 тижнів. Вони помітили, що щури з ХХН мали нижчу відносну кількість деяких Firmicutes і Lactobacillus і меншу різноманітність кишкових мікробів порівняно зі звичайними щурами, але вони також описали, що лікування цитратом заліза у щурів із ХХН збільшило різноманітність бактерій майже до рівнів, що спостерігалися у контрольних щурів, і що це лікування не збільшував уремічних токсинів. У недавньому дослідженні Wu et al. [36] порівняли мікробіом кишечника пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі, які отримували карбонат кальцію або цитрат заліза. Вони спостерігали значне збільшення мікробної різноманітності в групі, яка отримувала цитрат заліза, зі збільшенням кількості Bacteroidetes і зменшенням кількості Firmicutes.

Наскільки нам відомо, існує лише одне дослідження на людях щодо впливу SFO на мікробіом кишечника. Ігучі та ін. [37], порівняли 3-місячні зміни в мікробіомі кишківника та уремічних токсинів у пацієнтів на гемодіалізі, які отримували будь-яке лікування SFO, і відсутність лікування гіперфосфатемії. Вони також не виявили змін у мікробіомі кишечника у пацієнтів, які отримували SFO протягом усього часу. Таким чином, наше дослідження підтверджує цю довгострокову стабільність кишкового мікробіому у пацієнтів на гемодіалізі, які отримували SFO протягом 5 місяців.

Ще один важливий момент для обговорення полягає в тому, що в нашому дослідженні ми спостерігали відмінності в мікробіомі кишечника пацієнтів на гемодіалізі порівняно з віком або статтю, але ми не виявили відмінностей, порівнюючи їх за групою лікування (CA проти SFO). Відповідно, деякі зміни були продемонстровані в мікробіомі кишечника внаслідок старіння [38]. Пацієнти похилого віку, особливо з високим рівнем слабкості, демонструють відносні частки переважаючих Bacteroidetes, меншу мікробну різноманітність та зменшення Bifdobacteria, Bacteroides/Prevotella, Lactobacillus та Clostridium cluster IV порівняно з молодими особами, які демонструють більшу мікробну різноманітність. і вищі пропорції Firmicutes, серед інших [39, 40]. Також зростає кількість доказів того, що в мікробіомі кишечника відбуваються зміни, якщо порівнювати жінок і чоловіків [41, 42]. У нашому дослідженні спостерігалися деякі відмінності в мікробіомі кишечника залежно від статі та віку, але відмінності, виявлені серед кожного пацієнта, були набагато виразнішими.

Щодо результатів лабораторних досліджень, як і очікувалося, пацієнти, які отримували фосфатну зв’язуючу речовину на основі кальцію, мали вищі рівні кальцію, ніж ті, які отримували SFO. Ми спостерігали, хоча це не було статистично значущим, підвищення рівнів запальних параметрів, таких як швидкість осідання, С-реактивний білок і феритин у групі CA порівняно з групою SFO; такий плейотропний ефект на зменшення запалення був описаний для деяких зв’язуючих фосфатів, відмінних від зв’язуючих на основі кальцію [43].

Важливо враховувати, що наше дослідження має деякі обмеження. З одного боку, розмір вибірки пацієнтів невеликий, тому важко зробити переконливі висновки, особливо щодо впливу проаналізованих клінічних і біохімічних змінних. Щоб підтвердити наші результати, потрібне більш масштабне дослідження із збільшенням кількості пацієнтів. З іншого боку, наші пацієнти мають різне походження, мають характерні супутні захворювання, які можуть впливати на мікробіом кишечника. Таким чином, наше дослідження попереджає про високу варіабельність профілів кишкового мікробіому пацієнтів, які отримують фосфатзв’язувальні речовини. Такі відмінності обмежують будь-які додаткові висновки та відмінності, виявлені серед пацієнтів, які отримували різні фосфатзв’язувальні речовини.

Як ми повідомляли, щоб визначити, чи може конкретна клінічна змінна впливати на цей диференційований профіль мікробіома, ми проаналізували основні клінічні параметри на початковому етапі наших пацієнтів і не виявили статистично значущих відмінностей між обома групами лікування. Пацієнти 5 і 6 були трохи не в порядку, і можна стверджувати, що пацієнт 5 отримував ванкоміцин і тобраміцин протягом 3 тижнів, тоді як пацієнт 6 мав хронічну діарею з неодноразово негативними культурами та можливим пов’язаним синдромом виснаження.

У нашому дослідженні ми не спостерігали жодних змін у мікробіомі кишечника наших пацієнтів, які перебувають на гемодіалізі, після 20 тижнів лікування, незалежно від зв’язуючого фосфату. На даний момент, обираючи фосфатзв’язувальний засіб, ми повинні покладатися на його вплив на зниження рівня фосфату в сироватці крові, навантаження таблеток, зв’язок із прогресуванням кальцифікації судин, побічні ефекти або шлунково-кишкову толерантність [44–47]; хоча вплив цих зв’язувачів фосфатів на мікробіом кишечника очікувався та все ще залишається можливим, наразі немає доказів того, що цей аспект повинен впливати на наш підхід до лікування гіперфосфатемії.

На завершення наше дослідження виявило, що 5-місячне лікування КА або СФО не змінило початкове розмаїття чи базовий бактеріальний склад у пацієнтів на гемодіалізі, але попереджає про високу варіабельність профілів мікробіому кишечника пацієнтів із ХХН.

Подяка Не застосовується.

Авторські внески IB, FG та JB задумали та зробили внесок у дизайн дослідження; AMR, IB та FG сприяли включенню пацієнтів та клінічному веденню; AMR, IB та FG. брав участь у відборі зразків та зборі даних, AV, MNJ., RP брали участь у виділенні фекальної ДНК та секвенуванні 16S рРНК; RA, AV, MNJ, RP і BSM зробили внесок у побудову таблиці OTU, таксономічного призначення та даних і статистичного аналізу; AMR, RA, IB, FG, BSM зробили внесок у написання рукопису та забезпечили критичні зміни рукопису. Автори мали повний доступ до даних, а автор-кореспондент ніс останню відповідальність за подання рукопису для публікації.

Фінансування Це дослідження фінансувалося регіональними фондами FEDER — Fundo Europeu de Desenvolvimento через COMPETE 2020 — Операційна програма конкурентоспроможності та інтернаціоналізації (POCI), Португалія 2020, а також португальськими фондами через FCT/ MCTES у рамках проекту MicroMOB «POCI{ {2}} FEDER-029777 / PTDC/MEC-MCI/29777/2017".

Доступність даних Набори даних, використані та/або проаналізовані під час поточного дослідження, доступні у відповідного автора за розумним запитом.

Доступність коду Не застосовується.

Декларації

Конфлікт інтересів AMR, RA, IB, FG, AV, MNJ, RP, JB, BSM не мають конфлікту інтересів, про який слід декларувати.

Етичне схвалення Це дослідження було схвалено Комітетом з етики клінічних досліджень німецької лікарні Trias i Pujol (PI-16–169, NCT5551048) і відповідало принципам, викладеним у Гельсінкській декларації.

Згода на участь Усі учасники були набрані добровільно після отримання детальної інформації щодо протоколу дослідження. Письмова інформована згода була отримана від усіх пацієнтів.

Згода на публікацію Не застосовується.

Відкритий доступ. Ця стаття поширюється за ліцензією Creative Commons Attribution 4.0 International License, яка дозволяє використовувати, обмінюватися, адаптувати, розповсюджувати та відтворювати на будь-якому носії чи у будь-якому форматі за умови, що ви вказуєте автора оригіналу ( s) і джерело, надайте посилання на ліцензію Creative Commons і вкажіть, чи були внесені зміни. Зображення або інші сторонні матеріали в цій статті включені до ліцензії Creative Commons статті, якщо інше не зазначено в кредитній лінії до матеріалу. Якщо матеріал не включено до ліцензії Creative Commons статті, а ваше передбачуване використання не дозволено законодавчими нормами або перевищує дозволене використання, вам потрібно буде отримати дозвіл безпосередньо від власника авторських прав. Щоб переглянути копію цієї ліцензії, відвідайте http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.