Визначення п'яти компонентів у Rehmannia Glutinosa та встановлення відбитків HPLC

Анотація:Методика визначення вмісту п'яти компонентів вРехманія клейкова (Rehmannia glutinosa)., а самереманнозід D, леонурин,ехінакозид,цистанхезид Аівербаскозид, і було створено відбиток високоефективної рідинної хроматографії (HPLC) Rehmannia glutinosa, щоб забезпечити наукову основу для контролю якості Rehmannia glutinosa. Використовували колонку Shiseido CAPCELL PAK C18 з ацетонітрилом-0.1% розчином мурашиної кислоти в якості рухомої фази, градієнтним елююванням, температурою колонки 30 градуси, визначенням змінної довжини хвилі та швидкістю потоку 1,0 мл/хв. ВЕРХ-відбиток Rehmannia glutinosa був проаналізований "Хроматографічна система оцінки схожості відбитків пальців китайської медицини (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), RSD тесту на точність, тесту на повторюваність і тесту на стабільність становив 0,12%~1,58%, а середня швидкість відновлення зразка становила 96,5% ~98,6%; встановлений відбиток Rehmannia glutinosa ВЕРХ виявив 23 загальні піки, а подібність між зразком Rehmannia glutinosa та контрольним відбитком склала 0.904~0,950. Результати свідчать про те, що встановлений метод визначення вмісту та ВЕРХ-відбиток придатні для оцінки якості Rehmannia glutinosa та ідентифікації сирої Rehmannia glutinosa та вареної Rehmannia glutinosa з високою точністю та хорошою відтворюваністю, а також можуть забезпечити технічну підтримку для контролю якості Лікарські речовини Rehmannia glutinosa.

Ключові слова:Rehmannia glutinosa; визначення змісту; відбиток пальця; оцінка якості

НОВА ТРАВА ЦИСТАНЧЕ СЕХІНАКОЗИД,СИСТАНЧЕЗІД АІВЕРБАСКОЗИД

Рехманія клейкова (Rehmannia glutinosa).це свіжа або висушена коренева бульба рослини Scrophulariaceae Rehmannia glutinosa Libosch. Через різні методи обробки її в основному поділяють на свіжу реманію, сиру реманію та варену реманію [1-2]. Основними виробничими районами є Хенань, Шаньсі, Шеньсі тощо. Серед них сирий rehmannia glutinosa має ефект очищення від тепла та охолодження крові, живлення інь та сприяння виробленню рідини, і в основному використовується для лікування тепла в крові, теплих токсинів і плям тощо; варена rehmannia glutinosa живить кров та інь, відновлює есенцію та відновлює кістковий мозок, і в основному використовується для лікування дефіциту крові, хлорозу тощо. Серцебиття, неспокій тощо.[1-2]. Вони мають різні властивості та смак, але обидва належать до меридіанів печінки та нирок. Rehmannia glutinosa містить складні хімічні компоненти, в основному включаючи іридоїди, іонони, фенілетанолглікозиди, флавоноїди тощо [3-5].

Після обробки Rehmannia glutinosa різними методами обробки типи, вміст і пропорції хімічних компонентів у кожному обробленому продукті значно відрізняються, що призводить до значних відмінностей у його фармакологічній активності [6-10]. відповідно до

Пов’язані дослідження[11-12] показують, що в процесі переходу Rehmannia glutinosa з «сирого» на «варений» вміст хімічних компонентів, таких як каталпол, пустирник, стахіоза та амінокислоти, значно зменшився, а вміст фруктози, 5-гідроксиметилфурфуролу та ін. Значно збільшено вміст , ізоребаскозиду та ін. В даний час контроль якості сирої та вареної реманії клейкої в основному використовує вміст каталполу та реманіазиду D як оціночних показників. Показники системи оцінки відносно однорідні, що ускладнює комплексний контроль якості реманії клейкої. Крім того, дослідження показали, що вміст rehmannia glutinosa D змінюється до і після обробки. Він невеликий і має погану специфічність для характеристики змін складу після обробки та ступеня обробки [12-13].

Тому, щоб більш повно оцінити якість Rehmannia glutinosa, це дослідження встановило взаємозв’язок між rehmanniaside D та Yimu у Rehmannia glutinosa.

Методи визначення вмісту п’яти загальних компонентів, включаючи глюкозид, ехінацеазид, цистанхеозид А та вербаскозид, а також встановлений відбиток ВЕРХ Rehmannia glutinosa для аналізу вмісту основних компонентів у Rehmannia glutinosa з різних виробничих зон до та після обробки, з метою надання інформації для контролю якості Rehmannia glutinosa. Технічна підтримка.

Прилади, реактиви та досліджувані препарати

високоефективний рідинний хроматограф Agilent 1260 (детектор — діодна матриця); електронні аналітичні ваги зі змінним діапазоном (METTLER TOLEDO); цифровий ультразвуковий очисник (Шанхайська фабрика ультразвукових інструментів, KH-500DE). Метанол (Sinopharm Group) аналітичної якості; ацетонітрил (Merck) хроматографічний клас; вода - це бутильована вода Watsons. Еталонна речовина Rehmannia glutinosa D (номер партії RFSD8401909016, чистота 98,0%), еталонна речовина глікозиду левуруса (номер партії RFS-Y22002208010, чистота 98,0%) та еталонна речовина цистанхезид А (серія номер RFS-R05002009014, чистота 96,0%) усі були придбані у Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; ехінакозид (номер партії 111670-201907, чистота 91,8%) і вербаскозид (номер партії 11530-201914, чистота 95,2%) були придбані в Інститутах інспекції харчових продуктів і ліків Китаю. Зразки Rehmannia (SX1~SX4, HN1 і HN2) були зібрані з різних виробничих зон (див. Таблицю 1), з яких SX4 і HN2 були пропарені SX1 і HN1 відповідно, а SX2 і SX3 були зібрані з тієї самої виробничої зони. Усі зразки були ідентифіковані як автентичні Сонг Піншунь, головним практикуючим лікарем китайської медицини Інституту контролю за наркотиками провінції Ганьсу.

Таблиця 1 Інформація про зразки сперми Rehmanniae

2.1 Умови хроматографії

Використовували колонку Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 мм × 4,6 мм, 5 мкм), як рухому фазу А використовували ацетонітрил, а як рухому фазу В – 0,1% розчин мурашиної кислоти. Умови градієнтного елюювання: 0-3 min, 1%A; 3-9 хв, 1%A→5%A; 9-24 хв, 5%A→35%A; 24-35 хв, 35%A→65%A; 35-40 хв, 65%A→90%A. Виявлення змінної довжини хвилі (0-24 хв, 203 нм; 24-40 хв, 330 нм). Об’єм ін’єкції становив 15 мкл розчину порівняння та 20 мкл розчину зразка.

2.2 Приготування розчину

2.2.1 Приготування розчину порівняння

Візьміть відповідні кількості п’яти зазначених вище еталонних речовин, додайте 70% метанолу, щоб приготувати змішаний еталонний розчин з масовою концентрацією 0,4 мг/мл.

2.2.2 Приготування досліджуваного розчину

Зважте приблизно 1.0 г порошку Rehmannia (пропущеного через сито № 2), точно зважте, помістіть у закриту конічну колбу, акуратно додайте 25 мл 70% метанолу, закрийте, зважте, обробіть ультразвуком (потужність 300 W, частота 50 кГц) протягом 30 хв, дають охолонути до кімнатної температури, знову зважують, доповнюють втрачену масу 70% метанолом, фільтрують і беруть фільтрат до отримання.

2.3 Методичне дослідження

2.3.1 Дослідження специфічності

Візьміть змішаний еталонний розчин під «2.2.1» і тестовий розчин (зразок SX1) під «2.2.2», введіть і виміряйте відповідно до хроматографічних умов під «2.1». Результати показують, що хроматограма зразка Rehmannia представляє хроматографічний пік з таким же часом утримування, що й еталонні стандарти Rehmannia glutinosa D, Leonurin, Echinacoside, Cistanche deserticola A та Verbascoside (див. Малюнок 1), що вказує на те, що цей метод має сильну ефективність. специфіка.

2.3.2 Дослідження лінійної залежності

Додайте 70% метанолу до змішаного еталонного розчину, розведіть у 5 разів, 10 разів, 25 разів, 50 разів, 100 разів і 250 разів відповідно, введіть і виміряйте відповідно до хроматографічних умов під «2.1». Стандартні криві були накреслені з масовою концентрацією кожного еталонного зразка як горизонтальною віссю (x) і відповідною площею хроматографічного піку як вертикальною віссю (y). Результати наведені в таблиці 2, вказуючи на те, що кожен компонент має хорошу лінійну залежність у відповідному діапазоні масової концентрації.

1.реманіозид D; 2. леонурид; 3. ехінакозид; 4. кастанозид А;5. актеозид

Рисунок 1 Хроматограми дослідження специфічності

Таблиця 2 Лінійний зв’язок 5 компонентів сперми Rehmanniae

2.3.3 Прецизійне дослідження

Візьміть досліджуваний розчин (зразок SX1) під «2.2.2» і виконайте ін’єкційний тест відповідно до хроматографічних умов під «2.1». Введіть зразок 6 разів безперервно, зафіксуйте площу піку кожного компонента та обчисліть площу піку RSD rehmannia glutinosa D, глікозиду пустирника, глікозиду ехінацеї, глікозиду цистанхи та вербаскозиду в досліджуваному зразку, щоб дорівнювати 0. 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48% і 0.82% відповідно, що вказує на хорошу точність приладу.

2.3.4 Дослідження повторюваності

Шість зразків одного і того ж зразка кореня Rehmannia (SX1) готували паралельно згідно з методом у «2.2.2», вводили та визначали відповідно до хроматографічних умов у «2.1». RSDs вмісту глікозиду кореня реманії D, глікозиду пустирника, глікозиду ехінацеї, глікозиду цистанхи А та вербаскозиду в шести зразках становили 0,46%, 0,69%, 1,42%, {{ 12}}.48% і 1.58% відповідно, що вказує на хорошу повторюваність методу.

2.3.5 Дослідження стабільності

Візьміть досліджуваний розчин (зразок SX1) під «2.2.2», введіть і виміряйте відповідно до хроматографічних умов під «2.1» через 0 год, 2 год, 4 год, 6 год, 8 год, 1{{ 15}} год, 12 год, 18 год і 24 год відповідно. RSD площі піків rehmannia glutinosa D, глікозиду пустирника, ехінакозиду, глікозиду цистанхи А та вербаскозиду становили 0.94%, 1.04%, 0.73% 0,83% і 0,71% відповідно, що вказує на те, що досліджуваний розчин має добру стабільність протягом 24 годин.

2.3.6 Швидкість відновлення вибірки

{{0}}.5 г зразка кореня Rehmannia (SX1) з відомим вмістом 5 компонентів точно зважили в закупорену конічну колбу, додали 6 паралельних порцій і додали 5 розчинів порівняння певних концентрацій відповідно. Зразки готували відповідно до методу, описаного в пункті «2.2.2», і зразки вводили та вимірювали відповідно до хроматографічних умов згідно з пунктом «2.1». Було розраховано коефіцієнт відновлення, і результати наведено в таблиці 3. Середній коефіцієнт відновлення зразка для кожного компонента становив 96,5%~98,6%, а RSD становив 0,73%~1,52%, що вказує на хорошу точність методу.