Експериментальне дослідження щодо захисного впливу глікозидів загального циклозиду (КТГ) на ниркову ішемічну реперфузію
Mar 09, 2022
Контактна особа: Одрі Ху Ватсапп/к.с.: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com
ЧЖУ Цзюнь, ЧЖАО Сі
Абстрактний:Мета Встановити щурячу модель геморагічного шоку та реанімації таким чином, щоб спостерігати за захисною дієюcistanche загальні глікозиди( КТГ)на нирковій,ішемічно-реперфузійний травма. Щури Meth ods SD були рандомізовані в фіктивну - оперативну групу, ударну і реанімаційну групу (експериментальна група) і групу КТГ, з 10 щурами в кожному з них. Після моделювання щури з групи КТГ отримали інтраперитонеальну ін'єкцію КТГ 400 мг/кг. В експериментальну групу і фіктивно-експлуатаційну групу вводили фізичний фізрозчин по 3 мл. Рівні Cr, BUN і Cys - C були визначені для виявлення функції нирок в кожній групі. Проточна цитометрія використовувалася для виявлення швидкості апоптозу ниркових клітин. ІФА використовувався для виявлення експресії XIAP в тканинах нирок. Результати в порівнянні з експериментальною групою, Cr, BUN і Cys - C, рівні, очевидно, були знижені вКТГгрупа( P < 0,01),="" а="" апоптоз="" ниркових="" клітин="" був="" знижений(="" p="">< 0,01).="" ctg="" значно="" покращив="" експресію="" xiap(=""><0.05). conclusion="">КТГнадає захисну дію наішемічна реперфузіяпошкодження нирок у щурів, що, можливо, пов'язано з сприянням експресії XIAP.
【Ключові слова】 Нирки; ішемічна реперфузія травми; Cistanche Total Glycosides; ХІАП; Апоптоз клітин
Травма ішемії-реперфузії (I/R)є поширеним патофізіологічним явищем ураження нирок у процесі геморагічного шоку, важкої травми, трансплантації нирок, хірургії пухлини нирок. Дослідження показали, що апоптоз є важливою ланкою пошкодження функції нирок, викликаного травмою В/Р [1]. X-хромосомний пов'язаний інгібітор білка апоптозу (XIAP) є одним з найсильніших ендогенних інгібіторів апоптозу, виявлених до цих пір [2]. Досліджень щодо антиапоптотичної дії ХВІП у нирковій тканині після В/Р-травми мало.Cistanche загальні глікозиди(CTG) - зі списку глікозидні сполуки фенілетанолу, витягнуті зі списку сполук глікозиду Фенілетанолу, витягнутих зCistancheмають різноманітні біологічні функції. Є небагато досліджень щодо його ниркового захисту після травми вводу/Р. У цьому експерименті була встановлена щуряча модель геморагічної ударної реанімації, а також створена системна модель вводу/R травми для дослідження захисного впливу попередньої обробки КТГ на нирку від В/Р травми та дослідження її можливого механізму.
Наслідки цистанче: запобігтиТравма ішемії-реперфузії (I/R)
1 Матеріал і методи
1.1 Експериментальні матеріали
1.1.1 Лабораторні тварини 30 чистосортних здорових щурів чоловічої статі СД, наданих Експериментальним центром Шанхайського університету традиційної китайської медицини, номер сертифіката тварини: SYXK (Шанхай) 2009-0069, маса тіла (320 ± 30) г.
1.1.2 Експериментальний реактивКТГ(придбано у Чжецзян Ханчжоу Сіньхуй Тяньлі Фармасьютікал Ко., Лтд., номер партії: 20081516); пентобарбітал натрію (номер партії: Р3761), йодид пропідію (ПІ), Родамін123 (обидва придбані (з Сигми, США); Набір для визначення RAT XIAP ELISA Kit (придбаний у Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd., номер партії CSB-ELO26172MO).
1.1.3 Лабораторний прилад зчитувач мікропластин (American Thermo Company); Багатопараметричний фізіологічний детектор (придбаний у компанії NIHON KOHDEN, Японія); Проточний цитометр (придбаний у компанії Becton-Dickinson, США); 24 G trocar ( Компанія медичного обладнання Шаньдун Дзьєруї).
1.2 Експериментальні методи
1.2.1 Приготування щурів моделі тварин СД було голодування за 12 годин до експерименту та знеболення шляхом інтраперитонеальної ін'єкції пентобарбіталу натрію (50 мг/кг). Щури фіксувалися в лежачому положенні, а в лівій нижній частині живота робили надріз в 3 см і відокремлювали. У стегнову артерію вводять троакар 24 Г, з'єднують багатопараметричний фізіологічний тестер, гепаринізують шприц об'ємом 20 мл, а артеріальний тиск падає до 40 мм рт. Артеріальний тиск падає до 40 мм рт. Прийнято вважати, що шок почався, а артеріальний тиск зберігається протягом 90 хвилин. Це (13 ± 3) мл, а потім повільно повертається аутологічна кров в шприці. На відновлення артеріального тиску йде близько 30 хвилин більш ніж до 90% від основного значення. Прийнято вважати, що реанімація проходить успішно [3]. Витягніть голку троакара, злізуйте стегнову артерію і зашийте розріз. Після того як щури не спали, їх повернули в клітку для спостереження, і вони мали вільний доступ до їжі і води. Через 24 години після реанімації щурів знеболили пентобарбітальним натрієм (50 мг/кг) шляхом інтраперитонеальної ін'єкції, лапаротомії та забору 5 мл крові з нижньої порожнистої вени. Щурів вбили відразу, а ліву і праву нирки вивезли для використання.
1.2.2 Групування тварин та введення 30 щурів були випадковим чином розділені на фіктивну хірургічну групу, групу шокової реанімації (експериментальна група) та групу КТГ, з 10 щурами в кожній групі.
Експериментальній групі інтраперитонеально вводили 3 мл нормального фізіологічного розчину за 2 години до кровопускання. У розділіКТГгрупи, КТГ давали за 2 години до кровопускання щурів, а дозу вводили в черевну порожнину в дозі 400 мг/кг. Група фіктивної операції лише проходила анестезію, лапаротомію і відділення троакарного розміщення стегнової артерії і розрізи швів і т.д., кровопускання і реанімація не проводилися, а решта були такими ж, як і експериментальна група.
1.3 Тестування показників і методів
1.3.1 Визначення креатиніну крові (Cr), азоту сечовини (АМК), цистатину C Cr, сечовини та цистатину С визначаються лабораторією нашої лікарні. Цистатин С є ендогенним маркером зміни швидкості клубочкової фільтрації. При порушенні функції нирок знижується швидкість клубочкової фільтрації і концентрація цистатину С в крові може збільшуватися більш ніж в 10 разів. Точність діагностики цистатину С значно краще, ніж у креатиніну сироватки.
1.3.2 Визначення швидкості апоптозу клітин Застосовують проточну цитометрію для виявлення швидкості апоптозу клітин нирок. Візьміть нирку і подрібніть її лезом, додайте трохи ПБС і перенесіть в пробірку. Додайте 0,3% трипсину для травлення на водяній бані 37 °C і інкубуйте протягом 20 хв. Коли речовина в пробірці помутніє, додайте двічі ПБС, щоб зупинити травлення, процідіть нейлоновою сіткою 300 сітчастих, відкиньте домішки, і використовуйте низькотемпературну центрифугу Центрифугу при 1500 г / с протягом 5 хв, відкиньте супернатант, відрегулюйте концентрацію клітини до 1 × 106 ~ 1,5 × 106 / мл, візьміть 0,4 мл вищевказаної клітинної суспензії, і додати 10 мкл / мл Родамін123 0,4 мл, інкубувати на захищеній від світла водяній бані 37 °С, закупорити пробірку, заглушити пробірку, промити двічі ПБС через 30 хв, потім центрифугу при 1500 г/с протягом 5 хв, викинути супернатант і знову промити таким же чином. Додайте PI 0,4 мл, пляма протягом 15 хвилин, і перевірте відсоток нормальних, некротичних і апоптотичних клітин в нирках. За спорідненістю цих двох барвників в різних типах клітин відомо, що відмерлі клітини тільки ПІ-кольору, тільки кольорові клітини Родаміна123 є живими клітинами, і обидві кольорові клітини є апоптотичними клітинами.
1.3.3 Імуноферментний аналіз (ІФА) використовувався для виявлення експресії XI-AP в тканинах нирок щурів. Були взяті нирки кожної групи, а свіжі тканини нирок оброблені тканинним лізатом. Центрифуга при 1500 г/с в низькотемпературній центрифузі протягом 5 хв. Візьміть супернатант і експлуатуйте за інструкцією комплекту XI-AP ELISA. Шанхай Цзяода Фенхе Технолоджі Лтд відповідає за тестування.
1.4 Статистична обробка
Всі дані були статистично проаналізовані за допомогою програмного забезпечення SPSS17.0, а дані були виражені як середнє ± стандартного відхилення (x ± s) і P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
cistanche загальні глікозиди
2 результати
2.1 Показники функції нирок Cr, BUN, Cystatin C Порівняння Cr, BUN, Цистатину С в експериментальній групі були значно вищими, ніж у групі фіктивної операції (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">
У порівнянні з експериментальною групою, значення Cr, BUN і цистатину С вКТГгрупа була значно зменшена, а різниця була статистично значущою (Р<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Таблиця 1 Порівняння показників функції нирок Cr, BUN та цистатину С щурів у кожній групі (x ± s)
Примітка: У порівнянні з фіктивною операційною групою, a P<0.01; порівняно="" з="" експериментальною="" групою,=""><>
2.2 Швидкість апоптозу ниркових клітин і експресія XIAP в нирковій тканині. Лише кілька клітин ниркової тканини групи фіктивної операції піддаються апоптозу.
Кількість апоптозів в експериментальній групі було значно збільшено, а різниця була статистично значущою в порівнянні з фіктивною операційною групою (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>
Фіктивна операційна група мала лише слабку експресію XIAP, тоді як експериментальна група мала значне збільшення експресії XIAP (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Таблиця 2 Порівняння швидкості апоптозу та XIAP експресії клітин нирок щурів у кожній групі (x± s)
Примітка: У порівнянні з фіктивною операційною групою, aP<0. 01;="" у="" порівнянні="" з="" експериментальною="" групою,="" б=""><0. 05,=""><0.>
3 Дискусія
Механізм введення/Р ураження нирок дуже складний. Це патологічний процес, який відбувається через багато шляхів під дією різних факторів, таких як перевантаження іонами кальцію, пошкодження перекисного окислення ліпідів, апоптоз і некроз, серед яких ендогенні каспази каспазазалежний апоптоз є однією з основних форм пошкодження ниркових трубчастих епітеліальних клітин, індукованого В/Р пошкодження нирок [4]. Інгібітор сімейства білка апоптозу (ІАП) є єдиним інгібітором каспази, що міститься в клітинах ссавців до цих пір, що може ефективно запобігти виникненню апоптозу. XIAP є найсильнішим інгібіторним членом каспази сімейства ІАП, який може пригнічувати апоптоз клітин, викликаний різноманітними патологічними подразниками, і надавати захисну дію на пошкоджені органи [5].
В даний час метод встановлення ниркової В/Р-травми тваринних моделей полягає здебільшого у видаленні однієї сторони нирки та затисканні іншої сторони ниркової ніжки або ниркової артерії [6] для імітації стану трансплантації нирки. Автор використав у цьому дослідженні модель геморагічного шоку/реанімації, яка ближча до патофізіологічного процесу системної ішемії-реперфузії, що виникає при клінічному травматичному шоці. У цьому експерименті крові АМК, Кр і цистатин щурів СД Значно збільшується кількість С і сильно порушується функція нирок. Це ідеальна модель тварин для вивчення В/Р ниркової травми.
КТГ - важливий лікарський компонент традиційної китайської медициниCistanche.Cistanche, який має теплу природу, солодкий і солоний, відноситься до меридіана нирок і товстого кишечника і спочатку містився в Materia Medica Шеннонг. «Бен Цзин, - говорить: - Підтримує п'ять пологів і сім травм, живить середину, живить п'ять внутрішніх органів, зміцнює інь і живить сутність і ци». Також".Cistancheвикористовується в моїй країні вже дві тисячі років. У минулому він займає перше місце за формулами, що збільшують силу, і поступається лише женьшеню в живильних формулах.CistancheМожетепокращують статеву функцію, регулюють нейроендокрин, покращують імунну функцію організму. Антиоксиданти, сприяють метаболізму матеріалу, захищають ішемічний міокард та інші функції. В якості основного лікарського інгредієнтаCistanche, КТГ має багато функцій. Дослідження з головного мозкуішемія-реперфузіямодель
Дослідження показали, щоКТГможе знижувати збуджувальні амінокислоти в тканині мозку після ішемії-реперфузії і захищати мозкову тканину СД-щурів [7]. КТГ має антиоксидантну дію на тканини миші і надає певну захисну дію при гострій церебральній гіпоксії у мишей і ураженні серцевого м'яза у мишей [8]. КТГ дозволяє значно поліпшити нейробехавіор модельних мишей Паркінсона і пригнічувати зниження кількості дофамінових нейронів в субстанції нігра [9]. Посилюючи активність ферментів, що поглинають вільні радикали, запобігаючи перекисне окислення ліпідів, пригнічуючи відкладення β-амілоїдного пептиду в головному мозку, і пригнічуючи апоптоз клітин головного мозку, КТГ значно підвищила β-амілоїдний пептид-індукований хворобою Альцгеймера мишами Навчання і здатність пам'яті [10]. Це дослідження показало, що після застосування попередньої обробки КТГ вміст сечовини крові, Кр і цистатину С щурів СД значно зменшився, а пошкодження функції нирок було знижено. КТГ збільшила апоптоз-інгібуючий білок XIAP в ниркових тканинах при травмі В/Р і заблокувала клітини. Виникнення апоптозу грає захисну роль в пошкодженні нирки.
Посилання
[1] Кассіс П, Азцолліні Н, Соліні С та ін. Як дарбепоетин альфа, так і карбамільований еритропоетин запобігають дисфункції трансплантату нирок внаслідок ішемії/реперфузії у щурів [J]. Трансплантація, 2011, 92 (3): 271-279.
[2] Захід Т, Пень М, Лодигенський Г та ін. Відсутність Х-зчепленого інгібітора білка апоптозу призводить до посилення апоптозу і втрати тканин після травми головного мозку новонароджених [J]. ASN Neuro, 2009, 1 (1). ІДЕНТИФІКАЦІЙНІ ДАНІ: e00004. doi:10. 10421AN20090005.
[3] Фу X, Тянь Ч, Ван Д та ін. Множинні травми органів і збої, викликані шоком і реперфузією після вогнепальних поранень[J]. J Травма, 1996, 40 (3 Суппл): S135-139.
[4] Паданілам Б.Я. Загибель клітин, індукована гострим пошкодженням нирок: погляд на внесок апоптозу та некрозу[J]. Am J Physiol Renal Physiol Physiol, 2003, 284 (4): F608-F627.
[5] Galbán S, Hwang C, Rumble JM та ін. Цитопротекторні ефекти ІАП, виявлені антагоністом малої молекули[J]. Biochem J, 2009, 417 (3): 765-771.
[6] Ву Цзяньгуо, Чжан Дань, У Сіньшен та ін., Встановлення та досвід моделі гострої ішемії-реперфузійної травми нирок у мишей [J]. Медична інформація: Довідник з хірургії, 2007, 20 (12): 1103-1105.
[7] Чжу Чжен. Вплив глікозидів Cistanche на збуджувальні амінокислоти в тканинах мозку щурів після церебральної ішемії та реперфузії [J]. Медицина Аньхой, 2010, 14 (12): 1393 -1394.
[8] Джулія Y, Ван XW, Wubuli AS та ін. Захисний вплив загальних глікозидів дизертиколи cistanche на нестачу кисню [J]. Rep Chin Pharm, 2003, 20 (1): 73-76.
[9] Лі Веньвей, Ян Ру, Цай Дунфан та ін. Захисний вплив загальних глікозидів цістанчу на дофамінергічні нейрони в субстанції нігра моделі хвороби МТПП Паркінсона моделі мишей
[10] Лю Фенся, Ван Сяовен, Луо Лань та ін. Вплив і механізм загальних глікозидів цистанче на навчання і пам'ять про хворобу Альцгеймера мишача модель індукована β-амілоїдним пептидом [J]. Китайський фармакологічний бюлетень, 2006, 22 (5): 595-599.
