Вплив загальних глікозидів Cistanche Deserticola на пошкодження внаслідок окисного стресу та апоптоз клітин у щурів із церебральною ішемією-реперфузією Ⅰ
Mar 15, 2024
Абстракт
Мета: вивчити наслідки та можливі механізмиCistanche deserticola загальні глікозиди(GCs) на пошкодження окислювальним стресом і апоптоз нервових клітин у щурів з церебральнимішемічне реперфузійне пошкодження(CIRI).
Методи. Модель оклюзії середньої мозкової артерії (MCAO) була побудована на модельних щурах з використанням методу емболізації швом. Після того, як модель була успішно створена, щурам у групі препарату (ГК) давали ГК 50 мг/(кг·д) через зонд протягом 14 днів поспіль; щурам у групі фіктивної операції (Sham) і групі моделі (Model) давали однаковий об’єм нормального фізіологічного розчину. Пероральний прийом. Після введення для оцінки неврологічного дефіциту використовували метод Лонга; щурів потім умертвляли, і проводили фарбування TTC для розрахунку відсотка площі церебрального інфаркту; Для виявлення сироватки використовували метод ІФАмалоновий діальдегід(MDA) вміст,супероксиддисмутаза(SOD) іГлутатіонпероксидаза (GSH-Px)діяльність; Вестерн-блот для виявлення пов’язаного з ядерним фактором E2-фактора 2 (Nrf2), гемоксигенази-1 (HO-1) і B у тканині мозкуКлітинна лімфома/лейкемія-2 (Bcl-2), Bcl-2-асоційований білок X (Bax) і експресія каспази-3 (Caspase-3).
Результати: Порівняно з групою Шам, модельна група мала підвищений показник неврологічного дефіциту, збільшений відсоток площі інфаркту мозку,підвищений вміст MDA, зниження активності SOD і GSH-Px, а також зниження рівня експресії білка Nrf 2, HO -1 і Bc l-2 Рівні експресії білків Bax і Caspase-3 підвищилися; порівняно з модельною групою, показник неврологічного дефіциту щурів у групі GCs зменшився, відсоток зони церебрального інфаркту зменшився,Вміст МДА зменшився, підвищується активність SOD і GS H-Px, збільшуються рівні експресії білків Nrf 2, HO -1 і Bcl - 2, а рівні експресії білків Bax і Caspase - 3 знижуються. Висновок: ГК можуть ефективно зменшувати ішемічно-реперфузійне пошкодження головного мозку, і його механізм може бути пов’язаний з активацією шляху Nrf 2 / HO - 1, тим самим знижуючи рівні окисного стресу та пригнічуючи апоптоз нервових клітин.
[Ключові слова]Cistanche deserticola загальні глікозиди; ішемічно-реперфузійне ураження головного мозку; окислювальний стрес; апоптоз клітин
НАТУРАЛЬНИЙ ОРГАНІЧНИЙ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНШИ
Натисніть, щоб отримати докладнішу інформацію
Служба підтримки Wecistanche - найбільшого експортера cistanche в Китаї:
Електронна адреса:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Тел.:+86 15292862950
Зверніться в магазин, щоб дізнатися більше про технічні характеристики:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
Церебральна ішемія-реперфузія,
СНД - хвороба з надзвичайноювисока захворюваність, інвалідністьіпоказники смертності. Клітини головного мозку надзвичайно чутливі до ішемії та гіпоксії, тому якнайшвидша реканалізація судин головного мозку є найефективнішим способом боротьби з гострим ішемічним інсультом. Внутрішньовенний тромболізис і механічна тромбектомія в даний час є широко використовуваними методами, але через їх відносну
Тільки через вузьке часове вікно та інші неконтрольовані фактори<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Реперфузія церебральної ішеміїCIRI — це тип відновлення кровоносних судин головного мозку після накладеного патологічного пошкодження стенозу, що виникає під час кровотоку. В даний час вважається, що його патологічний механізм може бути пов’язаний з токсичністю збудливих амінокислот, перевантаженням кальцієм, вивільненням факторів запалення та накопиченням вільних радикалів кисню, викликаних пошкодженням мітохондрій [1], що в кінцевому підсумку призводить до руйнування гематоенцефалічного бар’єру, порушень мікроциркуляції. , апоптоз і некроз нервових клітин [1] 2] і низку реакцій, тим самим ще більше посилюючи неврологічний дефіцит.
Загальні глікозиди Cistanche deserticola (глікозиди cistanche, GCs) отримують із традиційної китайської медицини Herba Cistanche Основний діючий інгредієнт витягують із стебел і коренів дюймів). Попередні дослідження показали, що ГК можуть ефективно пригнічувати перекисне окислення ліпідів, покращувати функцію мітохондрій, поглинати надлишок вільних радикалів кисню, пригнічувати вивільнення запальних цитокінів, знижувати цитотоксичність, антиагрегацію тромбоцитів, пригнічувати проліферацію клітин, пригнічувати апоптоз нейронів і знижувати рівень гормонів, тим самим запобігаючи старінню, протипухлинним, протидепресивним, зміцнюючи імунітет, покращуючи ішемічні серцево-судинні та цереброваскулярні захворювання, покращуючи здатність до навчання та пам’яті та когнітивні функції, а також покращуючи репродукцію [3].
Дослідження показали, що ГК можуть зменшити окисне пошкодження клітин і підтримувати цілісність гематоенцефалічного бар’єру.
[4]; ГК можуть ефективно покращувати життєздатність клітин і блокувати запалення та апоптоз, індукований після ішемії-реперфузії [5]; Nrf 2 відіграє важливу роль у протизапальних та антиоксидантних процесах [6]. Базуючись на наведеному вище, ця стаття спрямована на подальше вивчення ефектів і можливих шляхів дії ГК на окислювальний стрес і апоптоз після CIRI шляхом копіювання моделі CIRI.
1 Матеріали та методи
1. 1 Препарати та реагенти ГХ (SN-5692, чистота 98%, західний
Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), 2% розчин барвника трифенілтетразолію хлориду (TTC) (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), набір ELISA (Beijing Boosen Co., Ltd.), набір для кількісного аналізу білка BCA (USA Cell Signaling). Technology Company), кролячі антимишачі антитіла Bcl-2, Bax, антитіла Caspas, такі як e-3, Nrf 2, HO-1, і козячі антикролячі вторинні антитіла були придбані в Компанія Proteintech США.
1. 2 інструменти
Центрифуга (модель: TDL-40B, Shanghai Anheng Scientific Instrument Factory), пристрій для зчитування мікропланшетів (модель: Max-M5, American Molecular Devices Company), прилад для електрофорезу SDS-PAGE (модель: DYY-7C, Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. Company), гелевий сканер (модель: 4466611, US BIO-RAD Company).
1. 3 тварини
Самці щурів Wistar [SCXK (Пекін) 2019-0010], чистий сорт, віком 8 тижнів, маса тіла 250-280 г.
1. 3 методи
1. 3. 1 Групування та моделювання
Щурів розділили на фіктивну групу (Sham), модельну групу (Model) і групу препаратів (GC) за допомогою простого методу рандомізації. У кожній групі було по 15 щурів. Їх адаптивно вирощували протягом 1 тижня, а потім моделювали. Строго голодуючи та голодуючи за 12 годин до операції, модельна група та група GCs використовували метод емболізації швів [7] для створення оклюзії середньої мозкової артерії (оклюзія середньої церебральної артерії). оклюзія, MCAO) модель щурів, видалення емболу проводили через 2 години ішемії для досягнення реперфузії. , записують час початку реперфузії. Рану зашивали, шкіру дезінфікували йодофором, тварин повертали в клітку і вирощували, а потім перфузували протягом 24 год. Операція для щурів у групі Sham була такою ж, як і для модельних щурів, але закупорювання не проводилося. Нарешті, 10 щурів у кожній групі залишили для подальших експериментів.
1. 3. 2. Спосіб введення
Візьміть порошок GCs і додайте чисту воду, щоб приготувати розчин 15 мг/мл. Попередні дослідження показали, що доза 50 мг/(кг·д) є кращою, ніж інші групи доз [8], тому доза, обрана для цього експерименту, така ж, як і раніше. Щурам у групі GCs через зонд вводили GCs через 24 години ішемії та реперфузії, а щурам у групі Sham та Model group давали рівний об’єм нормального фізіологічного розчину через зонд протягом 14 днів.
1. 3. 3 Бал неврологічного дефіциту
Метод Лонга [7] використовувався для оцінки через 24 години після операції, а модельні щури з балами від 1 до 3 були збережені для подальших експериментів. Оцінка після останньої дози. 0 балів: немає
Неврологічні симптоми; 1 бал: легкий неврологічний дефіцит, контралатеральна передня кінцівка згинається і піднімається при піднятті хвоста, а аддукти плеча; 2 бали: помірний неврологічний дефіцит, контралатеральна передня кінцівка згинається та піднімається, коли хвіст піднімається, аддукція плеча, обертання колами на протилежну сторону ураження під час ходьби; 3 бали: виражений неврологічний дефіцит, нахил при ходьбі на протилежну сторону ураження; 4 бали: несвідома та автономна діяльність.
1. 3. 4 Визначення відсотка площі інфаркту мозку
Після останнього введення 4 щури з кожної групи були випадковим чином відібрані, глибоко анестезовані, обезголовлені, і їхній мозок був швидко видалений.
Швидко заморозьте тканину мозку в холодильнику за -20 градусів на 20 хвилин. Після того, як мозкова тканина буде відносно зафіксована, вийміть її. Починаючи від перетину переднього полюса мозку до перехрестя зорового нерва та від чола до потилиці, розріжте мозок щура вздовж корональної площини. Розріжте на 5 зрізів головного мозку товщиною 2 мм, занурте їх у 2% розчин ТТС, помістіть у водяну баню 37 градусів для фарбування на 15 хвилин, переверніть і фарбуйте ще 15 хвилин. Нарешті, зрізи мозку занурювали в 4% розчин параформальдегіду і фіксували на 12 годин перед фотографуванням. Нормальна тканина мозку була показана червоним кольором, а тканина мозку з інфарктом – білим. Використовуйте програмне забезпечення для зображень, щоб проаналізувати та обчислити частоту інфарктів кожного зрізу мозку. Частота інфаркту=площа інфаркту/загальна площа зрізу мозку × 100%.
1. 3. 5 Виявлення показників, пов'язаних з окисним стресом
Зробіть щура наркоз, візьміть 4 мл крові з черевної аорти, аліквотуйте її в чисті ЕР-пробірки та помістіть у холодильник при 4 градусах на 0. Центрифугувати зі швидкістю 3 500 об/хв протягом 5 годин при 4 градусах протягом 15 хвилин, взяти супернатант і, нарешті, зберегти сироватку 3 щурів у кожній групі. Вміст малонового діальдегіду (МДА) та супероксиддисмутази (супероксиддисмутази) визначали за методикою роботи набору ELISA. е дисмутаза,
SOD), активність глутатіонпероксидази (glutathione peroxidase, GSH-Px).
1. 3. 6 Вестерн-блот детекція
Окислювальний стрес і білки, пов’язані з апоптозом, вимірювали для вимірювання експресії білків Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax і каспази -3 у тканині мозку. З кожної групи відбирали по три щури, брали відповідну кількість кори головного мозку з ураженої ділянки, додавали до нього лізисний розчин і після екстракції білка розраховували концентрацію білка. Після електрофорезу білкового гелю, перенесення на мембрану, блокування блокуючим розчином протягом 2 годин, промивання, а потім інкубування з первинним антитілом при 4 градусах протягом ночі, наступного дня TBST було видалено, промито та додано вторинне антитіло для інкубації протягом 2 ч. Помістіть цільову смугу на аналізатор зображення, щоб проаналізувати значення сірого. Обчисліть відносне значення сірого смуги, відносне значення сірого смуги=цільове значення сірого смуги / значення сірого внутрішньої еталонної смуги.
1. 4 Статистичні методи аналізу
Програма даних SPSS 25. 0 програмне забезпечення для аналізу даних, а статистичні графіки в цій статті намальовано за допомогою програмного забезпечення GraphPad Prism 8. Результати даних, що відповідають нормальному розподілу, виражаються як середнє ± стандартне відхилення. Однофакторний дисперсійний аналіз використовувався для порівнянь між кількома зразками, а LSD-t використовувався для порівнянь між двома незалежними зразками. Тест, з P < 0. 05 означає, що різниця є статистично значущою.
