Відмінності в складі та медичній ефективності сирих продуктів і продуктів парової обробки вина з Cistanches Herba

Анотація:

МетаПорівняти зміни в хімічному складі та лікувальну ефективність Roucongrong (Cistanches Herba) до та після обробки, щоб уточнити принцип тушкування з вином.

Методи РХ-МС було застосовано для ідентифікації типів хімічного складу до та після варіння Cistanches Herba у поєднанні з багатофакторним статистичним аналізом для виявлення відмінностей у компонентах до та після тушкування з вином. Різниця в ефективності була доведена на щурячій моделі дефіциту нирок ян гідрогенізованого кортизону.

РезультатиВсього було ідентифіковано 45 хімічних компонентівЗразки Cistanches Herba; Сполуки сприяли відмінності міжЦистанки трави та тушковані у вині цистанки травиєехінакозид, вербаскозид, ізоактеозид і тубулозид B; Сумарний екстракт фенілетаноїдних глікозидів із трави цистансів має кращий ефект на покращення моделі щурів із дефіцитом нирок Ян, ніж тушкованих у вині цистансів трав. Висновок Склад цистанчі змінюється після тушкування з вином, і вплив на дефіцит нирок ян було посилено. Інгредієнти трансформації з Cistanches Herbato, тушкованої у вині Cistanches Herba, можуть бути активними інгредієнтами, які зміцнюють нирки та підтримують ян.

Ключові слова: Cistanches Herba; тушковані на вині цистанки Herba;дефіцит ян нирок;ехінакозид;вербаскозид; ізоактеозид; тубулозід В

ПРОДАЮ ТРАВИ ЦИСТАНКИ ВИСОКОЇ ЯКІСТЬ

Служба підтримки Wecistanche

Електронна адреса:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Тел.:+86 15292862950

Він відомий як «женьшень» і в основному поширений у Внутрішній Монголії, Нінся (Азуці), Ганьсу (Чанма), Сіньцзяні та інших регіонах [1]. Цистанка є теплою за своєю природою, солодкою та солоною на смак, і потрапляє в меридіани нирок і товстого кишечника. Він живить печінку та нирки, покращує есенцію та кров, зволожує кишечник та усуває запори. Його можна застосовувати при дефіциті нирок Ян, імпотенції та безплідді, хворобливості попереку та колін, слабкості м’язів і кісток, сухості кишечника та запорах [2]. Сучасні дослідження показують, що м’ясисті стебла з лускатим листям цистанчі в основному містять різноманітні хімічні компоненти, такі як глікозиди фенілетанолу, терпени циклопентанового ефіру та їх глікозиди, лігнани, цукри тощо [3], і мають численні фармакологічні ефекти, такі якпроти старіння,антиоксидантний,проти деменції,проти втоми, а також зволоження кишечника та полегшення запорів [4].

Після тушкування з вином цистанхея посилює тонізуючий і ян ефект. Принцип обробки не був чітко пояснений. Фан Янан та ін. [5-7] вивчали вплив цистанхе на дефекацію щурів, імунну функцію, ентеральні нейромедіатори та експресію пов’язаних генів до та після обробки. Da та ін. використав вплив глікозидів фенілетанолу до та після обробки, щоб пояснити принцип її обробки; Чжан Чао та ін. [8] використали зміни у вмісті фенілетанолглікозидів до та після обробки для пояснення принципу обробки; Чжан Шуюнь та ін. [9] використовували зміни у вмісті бетаїну до і після обробки, щоб пояснити вплив обробки на Cistanche. Існуюча література про обробку цистанхе в основному зосереджена на фармакології, а дослідження компонентів також зосереджені на змінах у вмісті конкретних компонентів, без систематичного вивчення відмінностей компонентів. У цьому експерименті використовувалася технологія рідинної хромато-мас-спектрометрії (РХ-МС) у поєднанні з багатофакторним статистичним аналізом для ідентифікації хімічних компонентів цистанш, щоб знайти відмінності між сирими цистаншами та продуктами, тушкованими на вині, а також для вивчення різниці в ефективності сирий цистанш і тушковані винні продукти через щурячу модель дефіциту нирок ян, індукованого гідрокортизоном, щоб пояснити матеріальну основуCistanche для тонізування нирок і сприяння яні принцип обробки цистанки тушкованої.

ПРОДАЮ ТРАВИ ЦИСТАНКИ ВИСОКОЇ ЯКІСТЬ

1 Матеріали

1.1 Інструменти

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL мас-спектрометр високої роздільної здатності з тандемною іонною пасткою з електростатичним полем (Thermo Fisher Scientific, США), робоча станція Theraio Xcaliber; електронні ваги BT125D 1/100000 (Sartorius Instrument System, Німеччина); ультразвуковий очисник з ЧПК KQ500DE (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); високошвидкісний диспергатор XHF-D (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Зчитувач мікропланшетів Multiskan FC (Thermo Scientific); високошвидкісна центрифуга HC-3518 (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B багатофункціональний реєстратор довільної активності щурів (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Наркотики

Мас-спектрометричний метанол (Fisher); мас-спектрометрична кислота (масова частка 99%, Sigma Aldrich); вода (дистильована вода Watsons); Jinkui Shenqi Pills (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd. Pharmaceutical Factory, номер партії 1701653); гідрокортизону сукцинат натрієва сіль (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., номер партії 011705067); набір для супероксиддисмутази (SOD) (номер партії 20170115) і набір для малонового діальдегіду (MDA) (номер партії 20170117) були придбані у Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; тестостерон (T) і естрадіол (E2) визначали в Центрі контролю якості Qingdao Kechuang, а креатинін (CREA) і азот сечовини крові (BUN) визначали в Центрі аналізу та тестування Медичного університету Внутрішньої Монголії.

1.3 Тварини

100 самців щурів SD вагою 180-200 г були придбані в Xinglong Experimental Animal Farm в районі Haidian, Пекін, номер ліцензії: SCXK (Beijing) 2016-0003. Цей експеримент на тваринах схвалено Комітетом з етики Пекінського університету китайської медицини, етичний номер: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Зразки

Професор Лі Сянгрі зі Школи китайської медицини Пекінського університету китайської медицини ідентифікував шість партій Cistanche deserticola як автентичні, і вони були отримані з висушених м’ясистих стебел із лускоподібним листям Cistanche deserticola YC Ma, рослини родини Orobanchaceae. Детальна інформація про зразки наведена в таблиці 1.

Таблиця 1 Інформаційний лист зразків Cistanches Herba

2 Методи

2.1 Пробопідготовка

2.1.1 Приготування сирих продуктів Візьміть чисту цистанку десертну, розм'якшіть, наріжте товстими скибками і обсушіть.

2.1.2 Приготування винно-варених виробів

Візьміть 100 г шматочків цистанки десертної, додайте 30 мл рисового вина, добре перемішайте і тушкуйте, поки вино не вбереться. Тушкуйте у воді 12 год, вийміть і дайте трохи охолонути, обсушіть. Див. малюнок 1 для сирих зразків Cistanche deserticola та тушкованого у вині Cistanche deserticola.

2.2 Дослідження різниці компонентів Cistanche deserticola до та після тушкування у вині

2.2.1 Приготування розчину

Візьміть близько {{0}}.2 г сухого зразка порошку (пропущеного через 65-сітчасте сито), точно зважте, помістіть у коричневу мірну колбу на 50 мл, додайте 25 мл 50% метанолу водний розчин, щільно закупорити, зважити масу, замочити 30 хвилин, обробити ультразвуком 40 хвилин (потужність 250 Вт, частота 35 кГц), охолодити, знову зважити, додати 50% водний розчин метанолу, щоб компенсувати втрату маси, струсити добре, дайте постояти, відфільтруйте надосадову рідину через мікропористу фільтрувальну мембрану 0,22 мкм і помістіть фільтрат у пляшку з коричневою рідкою фазою, щоб отримати розчин.

ПРОДАЮ ТРАВИ ЦИСТАНКИ ВИСОКОЇ ЯКІСТЬ

2.2.2 Умови хроматографії

Хроматографічна колонка Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 (100 мм × 2,1 мм, 1,7 мкм), температура колонки 35 градусів; температура камери зразка 10 градусів, об’єм введення зразка 3 мкл, метанол (A)-0.1% водний розчин мурашиної кислоти (B) як рухома фаза, градієнтне елюювання: 0-4 хв, 10%{ {13}}% метанолу; 4-18 хв, 26%-40% метанолу; 18-24 хв, 40%-100% метанолу; 24-28 хв, 100% метанол. Об'ємна швидкість потоку становила 0,3 мл/хв, а довжина хвилі детектування становила 330 нм.

2.2.3 Умови мас-спектрометрії

Використовувався джерело іонізації в електророзпилювачі (ESI), сканування в режимі негативних іонів, температура капіляра становила 350 градусів, об’ємна швидкість потоку оболонкового газу становила 30 арб, об’ємна швидкість потоку допоміжного газу становила 10 арб, напруга розпилення становила 3

KV, капілярна напруга становила -35 В, напруга трубки лінзи -110 В, діапазон сканування m/z 100-1 000, система збору даних Xcalibur 2.1.

2.2.4 Аналіз основних компонентів (PCA)

Після отримання двовимірної матриці точних пар даних про час утримування маси на панелі приладів відображатиметься вся автоматично імпортована точна інформація про час утримання, а для аналізу буде використовуватися метод PCA модуля розширеної статистики.

2.2.5 Ортогональний частковий дискримінантний аналіз методом найменших квадратів (OPLS-DA) LCMS поєднує високу роздільну здатність рідинної хроматографії з високою чутливістю мас-спектрометрії. Зібрані дані досить великі, і для обробки даних потрібен багатовимірний статистичний аналіз. OPLS-DA ділить дані на дві групи та використовує контрольовану статистичну модель для отримання великої кількості ортогоналізованих спектрів, які чітко показують відмінності між двома групами зразків. У форматі додаткової фігури S-Plot кожна точка представляє точну пару даних про час утримання маси, вісь X представляє змінну, чим далі точка даних від нульової точки, тим більший внесок точки в різницю вибірки ; вісь Y представляє кореляцію між зразками в одній групі зразків, чим далі точна пара даних про масу та час утримання від нульової точки, тим сильніша кореляція. Таким чином, пари даних про час утримування маси на обох кінцях S-подібної кривої представляють найбільш надійні характерні іони з кожної групи зразків.

ПРОДАЮ ТРАВИ ЦИСТАНКИ ВИСОКОЇ ЯКІСТЬ

2.2.6 Мас-спектрометричний структурний аналіз

Після отримання характерних іонів було виконано елементний склад і відповідність сполук шляхом розрахунку точної відносної молекулярної маси та об’єднання існуючої бази даних і відповідної літератури для ідентифікації диференціальних компонентів.

2.3 Дослідження різниці в ефективності до та після тушкування з вином

2.3.1 Приготування екстракту Cistanche deserticola

Cistanche deserticola (номер партії 160901) і відповідний порошок Cistanche deserticola, тушкований у вині, екстрагували відповідно до умов, зазначених у пункті «2.2.1», фільтрували після обробки ультразвуком, повторювали двічі, фільтрат об’єднували, концентрували шляхом вакуумної дистиляції та заморожували. сушені.

2.3.2 Групування експериментів на тваринах і введення препарату

Рис. 1 Цистанки Herba A та тушковані у вині Cistanches Herba B

(1) Групування: щури мали вільний доступ до води та дієти. Після 1 тижня адаптивного годування їх випадковим чином розділили на 5 груп (Таблиця 2), по 10 щурів у кожній групі, а саме звичайну групу, модельну групу, сиру групу Cistanche deserticola (PR), групу Cistanche deserticola, тушковану у вині (PW). , і позитивний контроль Jinkui Shenqi Pill group (JK). (2) Моделювання: за винятком нормальної групи, іншим чотирьом групам вводили внутрішньом’язову ін’єкцію гідрокортизону натрію сукцинату в дозі 20 мг/кг протягом 14 днів поспіль. Нормальній групі вводили таку саму дозу фізіологічного розчину. За загальним станом щурів у кожній групі спостерігали, щоб визначити, чи є у них такі симптоми, як страх холоду, перевага тепла, холодні кінцівки, прозора та довга сеча, згорнута та вигнута спина, тьмяне та брудне волосся та психічна депресія. Одночасно вимірювали масу тіла, кількість спонтанних активностей, споживання їжі, споживання води, виділення сечі та інші показники щурів у кожній групі.

(3) Введення: дозу для щурів розраховували на основі клінічної дози Jinkui Shenqi Pills і Cistanche deserticola. Дозування кожної групи Cistanche deserticola становило 1,80 г/кг у перерахунку на кількість сирого препарату. Конкретне дозування наведено в таблиці 2. Кожен екстракт Cistanche deserticola та Jinkui Shenqi Pills були приготовлені в розчини певної концентрації з деіонізованою водою. Розчин вводили внутрішньошлунково щодня з внутрішньошлунковим об’ємом 10 мл/кг протягом 30 днів поспіль. Нормальній групі та групі моделі щодня внутрішньошлунково вводили рівний об’єм деіонізованої води. Масу тіла вимірювали щотижня, і внутрішньошлунковий об'єм регулювали відповідно до маси тіла щурів. Після введення щурів голодували протягом 12 годин. Після анестезії пентобарбіталом з черевної аорти відбирали кров для визначення сироваткового індексу. Нирки, яєчка, придаток яєчка, насінні пухирці та передміхурову залозу видаляли для визначення відповідного індексу.