Визначення вмісту п'яти сполук у спермі Rehmanniae та встановлення її відбитка HPLC

Таблиця 3 Результати тесту на відновлення (n=6)

2.4 Визначення проби

Шість партій Rehmannia, зібраних, були підготовлені відповідно до методу, описаного в пункті «2.2.2», і відібрані зразки та визначені відповідно до хроматографічних умов згідно з пунктом «2.1». Результати визначення вмісту наведені в таблиці 4. Результати показують, що серед п’яти компонентів вміст глікозиду реманії D є найвищим і коливається від 0.460% до {{1 0}}.730%; вміст глікозиду леонурі є другим, коливаючись від 0,100% до 0,270%, і вміст двох компонентів у зразках з різних виробничих районів істотно не відрізняється. У зразку SX1, крім ехінакозиду, вміст інших чотирьох компонентів значно вищий, ніж в інших партіях зразків; вміст ехінакозиду, цистанхезиду А та вербаскозиду в Rehmannia glutinosa з різних районів виробництва досить різний і нерегулярний.

ЦИСТАНКА ТРАВА СЯКІСНА КОНСИСТЕНЦІЯ

2.5 Встановлення та оцінка подібності ВЕРХ-відбитка Rehmannia glutinosa

Хроматограми та дані визначення вмісту багатокомпонентного вмісту в Rehmannia glutinosa були імпортовані в програмне забезпечення «Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity System (2012 Edition)», і було вибрано хроматограму тестового зразка SX1 як еталонний спектр. Ширину часового вікна було встановлено на 0.10 хв, а медіанний метод використовувався для створення накладених спектрів і еталонних спектрів. Всього було виявлено 23 загальних піки (див. Малюнок 3). Подібність між відбитками пальців зразка Rehmannia glutinosa та еталонним зразком становила 0,904~0,950, що вказує на те, що зразки Rehmannia glutinosa з різних виробничих зон, а також між сирим Rehmannia glutinosa та вареним Rehmannia glutinosa були подібними та мали консистенцію хорошої якості.

Таблиця 4 Результати визначення вмісту 5 компонентів у спермі Rehmanniae/%

13. реманіозид D; 17. леонурид; 19. ехінакозид; 20. кастанозид А; 21. актеозид

Рисунок 3 Накладення хроматограм ВЕРХ 6 партій сперми Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) і еталон (R)

3 Обговорення

3.1 Вибір хроматографічних умов

У цьому дослідженні було досліджено чотири системи рухомої фази: ацетонітрил-вода, ацетонітрил-0.1% розчин мурашиної кислоти, метанол-вода та метанол-0.1% розчин мурашиної кислоти. Результати показали, що п'ять компонентів мали хороший ефект розділення в системі ацетонітрилу; порівняно з системою рухомої фази ацетонітрил-вода, піки глікозидів реманії клейкої та пустирника в мобільній фазі ацетонітрилу-0.1% розчину мурашиної кислоти були вужчими та мали добру пікову симетрію. У той же час через різне ультрафіолетове поглинання п'яти компонентів вміст компонентів сильно змінюється. Щоб точніше визначити вміст кожного компонента та забезпечити рівномірний розподіл інтенсивності поглинання п’яти компонентів на одній хроматограмі, ультрафіолетове поглинанняреманний глікозид D, глікозид пустирника, ехінакозид, цистанхезид А та вербаскозид було проаналізовано, і було обрано визначення змінної довжини хвилі, тобто 0-24 хв, перший відокремлений глікозид реманію було визначено при 203 нм і 24-40 хв, виділені ехінакозид, цистанхезид А і вербаскозид визначали при 330 нм. Крім того, у цьому дослідженні також досліджувалися ефекти екстракції метанолу, 70% розчину метанолу, 50% розчину метанолу та 50% розчину ацетонітрилу як екстракційних розчинників. Результати показали, що 70% розчин метанолу як екстракційний розчинник може краще розчиняти компоненти, які підлягають тестуванню, а екстрагований зразок містить менше домішок. Тому в цьому дослідженні було обрано 70% метанол як розчинник для екстракції, ацетонітрил-0.1% розчин мурашиної кислоти як систему рухомої фази та використано змінну довжину хвилі для визначення вмісту п’яти компонентів у Rehmannia.

3.2 Аналіз результатів визначення проб

З результатів визначення видно, що після пропарювання, за винятком незначного збільшення вмісту ехінакозиду, вміст інших чотирьох компонентів значно зменшився, особливо вміст леонуризиду та цистанхезиду А; вміст глікозиду реманії D і цистанхезиду А в Rehmannia glutinosa з тієї самої виробничої території дещо відрізнявся, а вміст леонуризиду, ехінакозиду та вербаскозиду значно відрізнявся; вміст ехінакозиду в Rehmannia glutinosa з виробничої зони Хенань був значно вищим, ніж у зразках з виробничої зони Шаньсі, а вміст інших чотирьох компонентів дещо відрізнявся. У той же час, згідно з ВЕРХ-відбитком, встановленим у цьому дослідженні, подібність між 6 серіями зразків Rehmannia та контрольним відбитком склала 0.904~0.950, що вказує на те, що основна хімічна речовина Компоненти 6 партій зразків Rehmannia до і після обробки були дуже узгодженими.

Таким чином, метод визначення вмісту та відбиток ВЕРХ, встановлені в цьому дослідженні, є точними, надійними та мають добру специфічність. Вони можуть бути використані для характеристики змін компонентів і ступеня обробки Rehmannia glutinosa до і після обробки, а також для забезпечення технічної підтримки для контролю якості Rehmannia glutinosa. Однак це дослідження має недоліки, пов’язані з малими партіями зразків і неповним охопленням виробничих площ, що вимагає подальшого аналізу та верифікації.

Список літератури

[1] Комітет китайської фармакопеї. Фармакопея Китайської Народної Республіки: Том 1 [S]. Пекін: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Сюй Цзюнь, Фу Чжетун. Дослідження історичної еволюції назв обробленої Rehmannia glutinosa та вивчення її ефективності [J]. Китайська патентна медицина, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Чжу Цзюе, Чжу Сянмей, Ши Юхе та ін. Прогрес дослідження Rehmannia glutinosa та прогнозний аналіз її маркерів якості [J]. Китайська патентна медицина, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Чень Цзіньпен, Чжан Кеся, Лю І та ін. Прогрес дослідження хімічного складу та фармакологічних ефектів Rehmannia glutinosa [J]. Китайська фітотерапія, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Лі Хунвей, Мен Сянґле. Прогрес дослідження хімічних компонентів і фармакологічних ефектів Rehmannia glutinosa［J］.

Drug Evaluation Research, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei та ін. Аналіз хімічних компонентів свіжої Rehmannia glutinosa, сирої Rehmannia glutinosa та вареної Rehmannia glutinosa методом UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Китайська патентна медицина, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Чжан Лісянь, Вей Юе, Лі Фейфей та ін. Розпізнавання відбитків пальців і визначення багатокомпонентного вмісту різних оброблених продуктів Rehmannia glutinosa［J］. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi та ін. Прогрес дослідження хімічних компонентів і фармакологічних ефектів Rehmannia glutinosa［J］. Китайська фітотерапія, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Тао І, Цзян Яньхуей, Тан Кецзянь та ін. Порівняльне дослідження хімічних компонентів Rehmannia glutinosa до та після обробки UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Нові китайські ліки та клінічна фармакологія, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Сюй Чжо, Дай Сіньсінь, Су Шулан та ін. Динамічне накопичення нуклеозидних та амінокислотних компонентів у Rehmannia glutinosa на основі UPLC-TQ-MS［J］. Китайська фітотерапія, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Лі Юйцзяо. Дослідження технології обробки та механізму «дев’яти пропарювання та дев’яти витримок» Rehmannia glutinosa［D］. Цзінань: Шаньдунський університет, 2023.

［12］ Ван Юе, Чжоу Цяо, Чжан Сюелань та ін. ВЕРХ Одночасне визначення вмісту восьми компонентів у Rehmannia glutinosa та різних продуктах її обробки за допомогою аналізу відбитків пальців UPLC та визначення вмісту компонентів за кількома індексами [J]. Китайські лікарські матеріали, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Го Сяокай, Сюе Шуцзюань, Чень Суйцін. Оцінка якості Rehmannia glutinosa на основі відбитків пальців UPLC та визначення вмісту компонентів за мультиіндексом [J]. Китайські лікарські матеріали, 2021, 44 (4): 917-923.