Комплемент при захворюваннях нирок як потенційний фактор артеріальної гіпертензії

Контакти:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Ліза-Марен Фішер та ін

Анотація

Мета:Відкладення комплементу переважає в біоптатах нирок пацієнтів з артеріальною гіпертензією та гіпертонічною нефропатією, але зв’язок між гіпертензією та відкладенням комплементу або участь комплементу в патогенезі гіпертонічної нефропатії досі не доведено.

Методи:У цьому дослідженні ми проаналізували відкладення C1q і C3c комплементу в щурячій моделі перевантаження та гіпертензії шляхом субтотальної нефректомії (SNX) і в архівних біопсіях нирок людини 217 пацієнтів з відомою гіпертензією та 91 пацієнта контрольної групи без гіпертензії в анамнезі, використовуючи напівкількісну оцінку Імуногістохімія C1q і C3c і кореляція з параметрами функції нирок. Щоб визначити, чи комплемент тільки пасивно депонувався чи активно експресувався нирковими клітинами, додатково проаналізували експресію мРНК C1q і C3.

Результати:Відкладення комплементу C1q і C3c в клубочках було значно вищим у нирках щурів SNX з гіпертензією та пацієнтів з гіпертензією порівняно з пацієнтами без гіпертензії. Середній артеріальний тиск (АТ) у щурів SNX добре корелював із кількістю відкладень C1q і C3c у клубочках і з масою лівого шлуночка, як непрямого параметра високого АТ. Кількісний аналіз мРНК показав, що C3 не тільки депонувався, але й активно вироблявся клубочковими клітинами щурів SNX з гіпертонією та в біоптатах нирок людини. Слід зазначити, що у пацієнтів стадія ХХН суттєво корелювала з інтенсивністю забарвлення гломерулярного C3c, але не з інтенсивністю фарбування C1q.

Висновок: відкладення комплементу в нирках корелює з експериментальною гіпертензією, а також наявністю гіпертензії в різнихнирковийхвороби. Щоб відповісти на питання, чи і як саме нирковий комплемент є причиною патогенезу артеріальної гіпертензії у чоловіків, необхідні подальші дослідження.

Ключові слова:Нирки, відкладення комплементу, гіпертонія,нирковийзахворювання

Цистанхея може лікуватинирковийзахворювання

вступ

The complement system and its regulatory proteins are components of the innate immune system consisting of >20 розчинних факторів, які відіграють важливу роль у (i) опсонізації, (ii) стимуляції різних шляхів запалення та (iii) осмотичному лізисі патогенів і пошкоджених клітин при численних захворюваннях, особливо запальнихнирказахворювання[1]. Система комплементу складається з 3 шляхів: (i) класичний шлях, активований будь-якою структурою, яка розпізнається C1q [2], (ii) лектиновий шлях, активований, коли сахаридні патерни розпізнаються комплексами розпізнавання патернів [3], і (iii) альтернативний шлях, активований через спонтанний гідроліз С3 [4].

Останні 2 десятиліття поглибили наші знання про систему комплементу та її роль у патогенезі різних системних інирковийхворобитаких як постінфекційний гломерулонефрит (ГН), нефропатія IgA (IgAN), вовчаковий нефрит (ЛН), мембранопроліферативний ГН та гломерулопатії С3 [1, 5]. Відома також важлива роль системи комплементу та її дисфункції в патогенезі тромботичних мікроангіопатій, зокрема атипового гемолітико-уремічного синдрому [6], васкуліту IgA (колишня пурпура Геноха-Шенлейна) [7], злоякісної гіпертензії [8]. Хоча патомеханізми тромботичної мікроангіопатії вже відомі [6, 7], наші знання про значення системи комплементу у зв’язку з артеріальною гіпертензією все ще є досить розмитими. У більшості пацієнтів із ХХН спостерігається підвищення артеріального тиску (АТ) [9], але точний патогенез АГ невідомий. Існує декілька досліджень, які описують зв’язок між C3 у плазмі та гіпертензією [10, 11], тоді як інше дослідження не змогло підтвердити ці спостереження [12]. У моделі DOCA-сольової гіпертензії щурів відкладення C3 в клубочках було збільшено у DOCA-сольових щурів і зменшено під час антигіпертензивної терапії, тобто спіронолактону та потрійної терапії гідрохлортіазидом, резерпіном і гідралазином [13]. Нещодавні дослідження з використанням доклінічних моделей гіпертензії показали роль комплементу в патогенезі гіпертензії [14], опосередковану різними імунними клітинами, такими як макрофаги та регуляторні Т-клітини (Tregs) [15–17], і активацію ренін-ангіотензинової системи, що призводить до фенотипові зміни гладком’язових клітин судин [18]. Детальна роль відкладення комплементу в нирках у розвитку підвищення АТ досі не з’ясована. Таким чином, у цьому дослідженні ми досліджували C1q, як продукт розщеплення класичного, і C3c, як загальний маркер усіх 3 шляхів активації комплементу в ниркових біоптатах пацієнтів з гіпертензією та нормотензією, а також у встановленій щурячій моделі перевантаження та подальшого гіпертонія шляхом субтотальної нефректомії (SNX).

методи

Модель тварини

Для дослідження відкладення комплементу в нирках, пошкодження нирок і серцевих змін у тварин з гіпертензією ми використовували модель щурів, яка характеризується гіперфільтрацією клубочків і перевантаженням через зменшення нефронів, фокальним сегментарним і глобальним гломерулосклерозом, тубулоінтерстиціальним рубцюванням і прогресуючою ХХН зі значним виразом. підвищений АТ. Щурів утримували в спеціальному приміщенні, вільному від патогенів, у середовищі з контрольованою температурою та світлом і мали довільний доступ до стандартної їжі (нюхайте Spezialdiäten GmbH, Зост, Німеччина) та води. Щурів утримували на класичній підстилці з осикової деревини (Sniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Німеччина) у клітках з макролонами типу IV (Tecniplast Deutschland GmbH, Hohenpeißenberg, Німеччина) з максимальною популяцією 3 особини. Для індукції моделі використовували 12 самців Dark Agouti (DA/ HanRj, Janvier, Le Genest-Saint-Isle, France) щурам віком 12–14 тижнів проводили SNX у 2-етапному протоколі, починаючи з неінспірованої томії з наступною стандартизованою резекцією верхнього та нижнього полюсів нирки, що залишилася, через 1 тиждень. пізніше. Для цього тваринам перед операцією підшкірно вводили бупреновет (Bayer, Леверкузен, Німеччина) у дозі 0.05 мг/кг маси тіла підшкірно. Після анестезії ізофлураном правий бік поголили, продезінфікували настойкою KO-DAN forte (Schülke & Mayr GmbH, Нордерштедт, Німеччина), розкрили бік розрізом 1,5 см і обережно витягли нирку та зафіксували 2 стерильними мазки з наступним перев’язуванням ниркового кровотоку та сечоводу та видаленням нирки. Розріз живота закривали розсмоктуючим швом і безперервним швом, а також шкіру закривали одинарними швами. Через тиждень ліву нирку витягли точно так, як описано для правої нирки. Потім ниркову артерію перетискали атравматичним затискачем, верхній і нижній полюси нирки резецували скальпелем, а поверхню розрізу закривали колагеновою губкою (Resorba Medical GmbH, Нюрнберг, Німеччина). Нарешті нирку, що залишилася, повернули у вихідне положення, а розріз черевної порожнини закрили, як описано вище. Післяопераційну активність, споживання рідини, вагу, текстуру шерсті та поведінку тварин оцінювали, але ознак післяопераційного болю не виявлено. Проте аналгезія зберігалася щонайменше протягом 3 днів після операції. Контролі отримали фіктивну операцію (удавано, n=11). Наприкінці експерименту тварин помістили на 24 години в метаболічні клітини для збору сечі для вимірювання протеїнурії за допомогою аналізу білка Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories GmbH, Мюнхен, Німеччина). Адсорбцію вимірювали в зразках сечі, розведених PBS, при 595 нм у пристрої для зчитування мікропланшетів, а протеїнурію розраховували за допомогою стандартної кривої стандартів бичачого сироваткового альбуміну в діапазоні від 0,15 до 2 мг (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA). Через 12 тижнів щурів піддавали евтаназії після внутрішньоартеріального вимірювання АТ протягом 30 хвилин шляхом введення катетера в сонну артерію за допомогою лабораторної системи AD instruments (ADInstruments Ltd., Оксфорд, Великобританія). Нарешті, нирки та серця були зібрані та розділені на 2 частини, одна була швидко заморожена для аналізу РНК, а друга частина була оброблена для імуногістохімії. Кров збирали для виявлення сироваткового креатиніну за допомогою автоаналізатора (Beck Man Instruments, Brea, CA, США).

Цистанхея може лікуватинирковий захворювання

Кількісний аналіз мРНК

Загальну РНК із нирок щурів виділяли за допомогою колонок RNeasy Mini (Qiagen, Hilden, Німеччина). Реакції зворотної транскрипції та ПЛР у реальному часі проводили за допомогою Power SYBR Green на системі 7500 Fast Real-Time PCR (обидва Applied Biosystems, Weiterstadt, Німеччина) відповідно до інструкцій виробника. Дані ПЛР у реальному часі аналізували за допомогою програмного забезпечення SDS v1.3 (Applied Biosystems), а відносну експресію рівнів мРНК цільового гена розраховували за допомогою порівняльного методу дельта-Ct [19]. Нормалізацію проводили щодо ендогенних рівнів 18S рРНК, застосованих до результуючих змін відносної кратності. Були використані такі праймери: 18 s (fw 5′TTGATTAAGTCCCTGC-CCTTTGT3′; rev 5′CGATCCGAGGGCCTCACTA3′); C3 (fw 5′ TGCGGCTGGAGAGTGAAG3′; rev 5′ TTACTGGCTGGAATC-TTGATGG3′) [20]; і C1qB (fw 5′TCATAGAACACGAGGAT TCCATACA3′; ред. 5′GACCCAGTACAGCTGCTTTGG3′) [20].

Імуногістохімія

Для імуногістохімічної біопсії нирки або SNX і фіктивної нирки щура зразки фіксували у формаліні, заливали в парафін і нарізали на зрізи по 1 мкм і фарбували в фарбувальнику Ventana Benchmark (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Мангейм, Німеччина) за наступним протоколом. : виявлення антигену проводили за допомогою розщеплення проназою Е протягом 40 хвилин при 37 градусах. Після блокування Avidin-Biotin Block (Vector Laboratories, Берлінгейм, Каліфорнія, США) нормальну козячу сироватку та блотто (1:5) зрізи інкубували протягом 1 години при 37 градусах з використанням наступних антитіл, розведених 1% BSA у 50 мМ Tris pH 7.4: C1q, кроляче поліклональне антитіло проти C1q людини (A0126; DAKO Deutschland, Гамбург, Німеччина) і; C3c, кроляче поліклональне антитіло проти C3c людини (A0062; DAKO Deutschland). Після промивання 50 мМ Трис рН 7,4 зв’язані первинні антитіла були виявлені за допомогою «Universal DAB Detection Kit ultra view» (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Мангейм, Німеччина). Негативні контролі включали делецію або заміну первинного антитіла еквівалентними концентраціями невідповідного мишачого моноклонального антитіла або преімунного кролячого IgG.

Зразки ниркової тканини людини

На першому етапі невідібрану когорту з 308 послідовних фіксованих у формаліні залитих парафіном архівних біопсій нирки (кафедра нефропатології, Фрідріх-Александр-Університет Ерлангена-Нюрнберга [FAU]) проаналізували на відкладення комплементу в нирках за допомогою імуногістохімії та порівняння випадків із присутністю або відсутність артеріальної гіпертензії за клінічними даними, незалежно від первинноїнирковийзахворювання. Були включені лише біопсії пацієнтів з гіпертензією та без гіпертензії з клінічно добре задокументованим АТ. Крім того, 46 нульових біопсій алотрансплантатів нирок, отриманих від живих донорів без гіпертензії, служили контролем.

На другому кроці ми зосередилися на порівнянні вибраних загальних групнирковийхвороби, а саме контролі (нульова біопсія; n=46), IgAN (n=65), мембранозний ГН (MGN, n=18), ЛН (n=10), фокальний сегментарний гломерулосклероз (FSGS, n=17) і діабетична нефропатія (DN, n=28), що призвело до репрезентативної підгрупи з 184 біопсій. У цій підгрупі більш детально проаналізовано зв’язок артеріальної гіпертензії та відкладення комплементу в контексті різних поширених нефропатій. Основні характеристики пацієнтів наведені в табл. 1.

Гістопатологічна оцінка

Діагностику ниркової біопсії проводили 3 дуже досвідчені, спеціалізовані невропатологи під час планового обстеження з консенсусним обговоренням усіх неоднозначних випадків (включаючи MBH та KA). Оцінка детальної морфології біопсії нирок людини була проведена одним дуже досвідченим вченим (CD) з використанням добре встановленої напівкількісної оцінки гломерулосклерозу, оцінки пошкодження канальців і оцінки пошкодження судин (VSI) на забарвлених PAS парафінових зрізах, як описано раніше [21]. Інтерстиціальний фіброз/тубулярна атрофія (IF/TA) класифікувалася згідно з класифікацією BANFF для біопсії ниркового трансплантата [22]

Оцінка ретроспективи

Клінічні дані Були зібрані клінічні параметри, які були доступні на момент проведення біопсії нирки. Наступні параметри були включені для кореляційного аналізу з C1q- і C3c-балами, локалізацією комплементу та балами травми за допомогою програмного забезпечення SPSS: вік пацієнта, наявність або відсутність гіпертензії та діабету, протеїнурія, сироватковий креатинін, сироваткова сечовина, сироватковий холестерин, сироватковий білок , а також сироваткові фактори комплементу C3 і C4. На жаль, інформація про тривалістьнирковийзахворюванняand current medication was not consistently available and could therefore not be systematically analyzed. In renal patients, BP is measured regularly and particularly before performing a kidney biopsy. BP measurements and grading was done according to the KDIGO guidelines for renal patients [23]. Proteinuria was measured by analysis of a 24 h urine collection and significant proteinuria was defined as urinary protein excretion >300 мг/добу. У 2/3 всіх випадків протеїнурію давали в г/24 год сечі. Лише у деяких пацієнтів протеїнурія була задокументована точковими вимірюваннями сечі, і для дуже небагатьох пацієнтів не було доступних даних щодо протеїнурії. Оскільки значення 24-годинної та точкової протеїнурії навряд чи можна порівняти, ми включили лише пацієнтів із 24-годинним збором сечі для кореляції протеїнурії з відкладенням комплементу. Для подальшої стандартизації наших результатів ми також розділили пацієнтів відповідно до різних класів ХХН, використовуючи формулу ХХН-ЕПІ для розрахунку ШКФ [24] і класи ХХН відповідно до класифікації KDIGO 2012 [25].

Цистанхея може лікуватинирковий захворювання

Напівкількісна оцінка відкладення комплементу в біопсії нирок

Фарбування комплементу за допомогою імуногістохімічного дослідження в біоптатах нирок оцінювали окремо в клубочках і тубулоінтерстиціальному відділі. Напівкількісні оцінки {{0}}–4 описують інтенсивність спостережуваних C3c або C1q у біоптатах нирки при збільшенні ×200. Оцінка 0 означає відсутність відкладень, оцінка 1: слабке забарвлення, яке зачіпає до 25 відсотків досліджуваного компартменту. Оцінка 2: помірне фарбування до 50 відсотків або сильне фарбування<25% of="" the="" compartment.="" score="" 3:="" substantial="" staining="" affecting="" up="" to="" 75%="" of="" the="" investigated="" compartment.="" score="" 4:="" highest="" staining="" intensity="" affecting="">75 відсотків досліджуваного відсіку.

C1q і C3 мРНК в біопсії нирок людини

Дані для C1q і C3 у клубочках і тубулоінтерстиції біоптатів нирок людини з різними захворюваннями були оцінені з бази даних Nephroseq з використанням набору даних Ju CKD [26].

Статистичний аналіз

Після перевірки нормального розподілу значень за допомогою критерію Колмогорова-Смирнова дані аналізували за допомогою критерію Манна-Уїтні для порівняння 2 груп і тесту Крускала-Уолліса з тестом множинного порівняння Данна як пост-критерію для порівняння кількох груп. У всіх тестах p < 0.05="" вважалося="" статистично="" значущим.="" тест="" спірмена="" використовувався="" для="" перевірки="" кореляції="" відкладення="" комплементу="" з="" показниками="" ураження="" нирок="" і="" клінічними="" даними.="" статистичний="" аналіз="" проводили="" за="" допомогою="" програмного="" забезпечення="" spss="" для="" windows="" (версія="" 19.0="" spss,="" ibm,="" мюнхен,="" німеччина)="" або="" graphpad="" prism="" 8="" для="" програмного="" забезпечення="" windows="" (версія="" 8.3,="" graphpad="" software="" inc.,="" сан-дієго,="" каліфорнія,="">

Результати

Відкладення C3c і C1q комплементу в нирках присутнє в моделі стабільної ХХН у щурів з гіпертонією та корелює зі змінами нирок і серця

Відкладення комплементу досліджували на моделі ХХН у щурів із гіпертензією, тобто у щурів із субтотальною нефректомією (SNX) Dark Agouti, у яких середній артеріальний АТ через 12 тижнів після модельної індукції був достовірним (p < 0.0="" 01)="" підвищився="" (175,7="" ±="" 21,0="" мм="" рт.="" ст.)="" порівняно="" з="" контрольною="" групою,="" яка="" була="" прооперована="" (135,8="" ±="" 2,8="" мм="" рт.="" ст.)="" (рис.="" 1a).="" протеїнурія="" також="" була="" значно="" вищою="" в="" групі="" snx="" порівняно="" з="" контрольною="" групою,="" яка="" була="" прооперована="" (78,5="" ±="" 16,6="" проти="" 8,9="" ±="" 0,8="" мг/24="" години).="" ця="" щуряча="" перевантажена="" модель="" гіпертензії="" та="" прогресуючої="" ниркової="" недостатності="" здавалася="" придатною="" для="" вивчення="" пов’язаних="" з="" гіпертензією="" змін="" відкладення="" та="" експресії="" комплементу="" в="" нирках.="" відкладення="" c3c="" і="" c1q="" в="" клубочках="" були="" відсутні="" у="" контрольних="" щурів="" з="" нормальним="" тиском,="" удавано="" прооперованих="" (рис.="" 1b,="" c),="" і="" значно="" збільшилися="" у="" щурів="" snx="" з="" гіпертензією="" (рис.="" 1d,="" e,="" g,="" h).="" у="" щурів="" snx="" фактор="" комплементу="" c3c="" не="" тільки="" відкладався="" в="" нирковій="" тканині,="" але="" також="" значно="" підвищувався="" на="" рівні="" мрнк="" (рис.="" 1f).="" ниркова="" експресія="" мрнк="" c1q="" показала="" тенденцію="" до="" вищих="" рівнів="" у="" щурів="" snx,="" ніж="" у="" контрольних,="" але="" ця="" різниця="" не="" досягла="" значущості="" (рис.="" 1i).="" цікаво,="" що="" у="" щурів="" клубочкові="" відкладення="" c3c="" і="" c1q="" сильно="" корелювали="" із="" середнім="" артеріальним="" ат="" (рис.="" 2a,="" d)="" і="" серцевою="" гіпертрофією,="" як="" оцінювали="" за="" вагою="" лш="" (рис.="" 2b,="" e).="" крім="" того,="" у="" моделі="" snx="" відкладення="" комплементу="" в="" нирках="" корелює="" з="" ушкодженням="" нирок,="" а="" також="" з="" функцією="" нирок.="" гломерулярний="" c3c,="" а="" також="" відкладення="" c1q="" показали="" сильну="" кореляцію="" з="" сироватковим="" креатиніном="" (рис.="" 2c,="" f)="" і="" протеїнурією="" (рис.="" 2g,="" h).="" кореляція="" як="" сироваткового="" креатиніну,="" так="" і="" протеїнурії="" з="" комплементом="" не="" була="" дивною,="" оскільки="" обидва="" параметри="" також="" продемонстрували="" сильну="" кореляцію="" один="" з="" одним="" у="" цій="" моделі="" щурів="" (рис.="" 2i).="" таким="" чином,="" наші="" дані="" на="" щурячій="" моделі="" гіпертонічної="" ххн="" через="" зменшення="" маси="" нирок="" і="" перевантаження="" свідчать="" про="" зв’язок="" відкладення="" комплементу="" в="" нирках="" і="" гіпертензії.="" таким="" чином,="" ми="" мали="" на="" меті="" підтвердити="" ці="" висновки="" на="" когорті="" пацієнтів="" з="" гіпертензією="" та="" нормотензією,="" у="" яких="" з="" різних="" причин="" була="" виконана="" біопсія="">

Відкладення комплементу не залежить від основного захворювання нирок

Тут ми використали двоетапний підхід: спочатку ми включили всіх пацієнтів із заявленим значенням АТ незалежно від основногонирказахворювання(n=308, подробиці див. у таблиці 1). Слід зазначити, що 217 із 308 пацієнтів (70,5 відсотка) мали гіпертонію. По-друге, для подальшого аналізу ми зосередилися на підгрупах найбільш поширених форм ГН, тобто IgAN, MGN та LN, і 2 неімунних комплексно-опосередкованихнирковийхворобиа саме ДН та фокальний сегментарний гломерулосклероз (ФСГС). Контрольною групою служили 46 нульових біопсій трансплантованих ниркових алотрансплантатів від живих донорів з нормальним артеріальним тиском (див. таблицю 1).

Щоб дослідити потенційний зв’язок між артеріальною гіпертензією та нирковим комплементом, відкладення C1q і C3c у гломерулярному та тубулоінтерстиціальному відділі аналізували шляхом напівкількісного оцінювання імуногістологічного фарбування. Кількість та інтенсивність фарбування C1q і C3c сильно варіювали в досліджуваних біоптатах (докладніше див. рис. 3). У тубулоінтерстиціальному відділі C3c відкладався вздовж канальцевих базальних мембран і всередині інтерстиціального матриксу (рис. 3G), тоді як фарбування C1q зазвичай було слабким і обмежувалося інтерстицієм (рис. 3H).

У багатьох було збільшено відкладення C3c у клубочкахнирковийхвороби, включаючи IgAN, MGN, LN і FSGS, порівняно з нормотензивними нульовими біопсіями (рис. 4A). Загалом відкладення C1q у клубочках було слабшим, ніж C3c у клубочках. Він був значно підвищений у IgAN, MGN, LN та DN, але не в FSGS порівняно з контролем нульової біопсії (рис. 4B). Цікаво, що комплемент C3 і C1q не тільки відкладалися в хворих нирках, але також посилювалася локальна ниркова експресія мРНК. Дані Nephroseq показали, що експресія мРНК C3 і C1q значно посилювалася в IgAN, LN, DN і FSGS порівняно з контрольною групою, тобто здоровими живими донорами (рис. 4C, D). Експресія мРНК C1q була нижчою, ніж експресія C3. Тубулоінтерстиціальне відкладення C3c також було збільшене порівняно з нульовою біопсією у більшості випадківнирковийхвороби(Рис. 4E), тоді як C1q істотно не відрізнявся від контролю нульової біопсії (дані не показані). Підсумовуючи, виражене відкладення комплементу в нирках є поширеним явищем у різнихниркахвороби. Далі ми досліджували потенційне значення високого АТ для відкладення комплементу в нирках.

Рис. 3. Відкладення C3c і C1q в біоптатах нирок. Біопсії нирок людини були пофарбовані на C3c (A, C, E, G) і C1q (B, D, F, H) за допомогою імуногістохімічного методу (коричневе фарбування). Репрезентативні зображення клубочкового та тубулоінтерстиціального відкладення C3c і C1q показують приклади різних балів відкладення комплементу. Відсутність фарбування для C3c у нульових біопсіях (A) і C1q при гострому тубулярному некрозі (B). Приклади відкладення C3c у клубочках при гіпертонічній/ішемічній НП, оцінка 1 (C) і відкладення C1q у LN класу II, оцінка 2 (D). Більш помітне відкладення C3c в IgAN, оцінка 4 (E) та відкладення C1q, оцінка 4, в іншому випадку LN класу II (F). Відкладення в тубулоінтерстиціальному відділі C3c при інтерстиціальному нефриті, оцінка 4 (G) і відкладення C1q, оцінка 4 (H) у випадку постінфекційного ГН. Масштабні смужки представляють 100 мкм. ЛН, вовчаковий нефрит; ГН, гломерулонефрит.

Рис. 4. Депонування та експресія комплементу в нирках у різнихниркахвороби. Напівкількісний аналіз клубочкового фарбування C3c (A) і C1q (B) у вибранихнирковийхвороби. Контролем слугували IgAN, MGN, LN, DN, FSGS та біопсії трансплантованих ниркових алотрансплантатів, отриманих від донорів без гіпертензії (0-біопсія). Дані з бази даних Nephroseq показали експресію мРНК C3c (C) і C1q (D) у клубочках у різнихнирковийхворобиі відповідна контрольна група, тобто HLD. У тубулоінтерстиціальному відділі в основному C3c (E) був виявлений у біоптатах нирок пацієнтів з різними захворюваннями. Значні відмінності позначені зірочками: *p < 0.05;="" **p="">< 0.01="" і="" ***p="">< 0.001="" вказують="" на="" значні="" відмінності="" порівняно="" з="" нульовою="" біопсією.="" гн,="" гломерулонефрит;="" мгн,="" мембранний="" гн;="" лн,="" вовчаковий="" нефрит;="" фсгс,="" фокальний="" сегментарний="" гломерулосклероз;="" дн,="" діабетична="" нефропатія;="" hld,="" здоровий="" живий="" донор;="" igan,="" iga="">

Відкладення C3c і C1q у нирках значно збільшується у пацієнтів з гіпертензією порівняно з пацієнтами з нормальним тиском

Щоб дослідити, чи пов’язана наявність високого АТ у пацієнтів з відкладенням комплементу в нирках, ми проаналізували біопсію пацієнтів з нормотензією та гіпертензією з різними основними захворюваннями.ниркахворобиі порівняли їх із відкладенням комплементу в нульовій біопсії з алотрансплантатів нирки, отриманих від донорів без гіпертензії (нульова біопсія). У IgAN, найбільш поширеному ГН у нашому регіоні [27], лише біоптати пацієнтів з гіпертензією мали значно вищі гломерулярні (рис. 5A) та тубулоінтерстиціальні C3c (рис. 5C), а також клубочкові відкладення C1q (рис. 5E), порівняно з нульовою біопсією. Коли ми порівнювали відкладення C3c (рис. 5B, D) і C1q (рис. 5F) у ниркових біоптатах усієї когорти, як нормотензивні, так і гіпертензивні зразки показали значно підвищену реактивність порівняно з контролем. Крім того, у біоптатах клубочкових і тубулоінтерстиціальних пацієнтів з артеріальною гіпертензією C3c був значно вищим, ніж у пацієнтів з нормальним тиском (рис. 5B, D). Оскільки відкладення C1q в канальцях було низьким у всіх досліджених біоптатах, ми не спостерігали жодних відмінностей між групами ні в IgAN (рис. 5G), ні в аналізі всіх досліджених випадків (рис. 5H). Таким чином, наші дані свідчать про те, що, зокрема, відкладення C3c є актуальним для гіпертоніківнирковийхвороби.

Рис. 5. Відкладення комплементу в нирках у біоптатах нирок пацієнтів з гіпертонією та нормотензією. Відкладення C3c аналізували в біоптатах пацієнтів з IgAN (A, C) і всіх досліджених біоптатах знирковийхвороби(B, D) розділені у пацієнтів з нормальним АТ і високим АТ порівняно з біопсіями з трансплантованих ниркових алотрансплантатів, донорських від донорів без гіпертензії (нульова біопсія) як контроль у клубочковому (A, B) та тубулоінтерстиціальному (C, D) відділах. Подібним чином, відкладення C1q також аналізували в біоптатах пацієнтів з IgAN (E, G) і всіх досліджених біоптатах зниркахвороби(F, H) у гломерулярному (E, F) та тубулоінтерстиціальному (G, H) відділі. Значні відмінності позначені зірочками: *p < {{0}}.05;="" **p="">< 0,01="" і="" ***p="">< 0,001="" вказують="" на="" значні="" відмінності.="" ат,="" артеріальний="">

Відкладення комплементу в нирках пов’язане з ушкодженням і функцією нирок

Оцінка гістопатологічних змін за гломерулосклерозом (рис. 6A), балом тубулоінтерстиціального ушкодження (рис. 6B) і VSI (рис. 6C) показала суттєве ураження нирок у біоптатах пацієнтів із підтвердженою гіпертензією, ніж у пацієнтів з нормальним тиском. Ступінь клубочкового відкладення C3c позитивно корелює з гломерулосклерозом (рис. 6D) і тубулоінтерстиціального C3c з тубулоінтерстиціальним пошкодженням (рис. 6E) і VSI (рис. 6F), що вказує на те, що відкладення комплементу пов’язане з хронічним ураженням нирок. Крім того, інтерстиціальний фіброз/тубулярна атрофія (IF/TA) була значно вищою в біопсії нирок пацієнтів з гіпертензією (рис. 6G) і добре корелювала зі ступенем відкладення C3c в канальцях (рис. 6J). Функція нирок, оцінена за рівнем креатиніну в сироватці крові, також була значно нижчою у пацієнтів з гіпертензією (рис. 6H) і корелювала з відкладенням C3c у клубочках (рис. 6K). Не було виявлено істотної різниці між пацієнтами з нормотензією та гіпертензією щодо протеїнурії (рис. 6I). Проте спостерігалася слабка кореляція між протеїнурією та гломерулярним C3c (r=0.238; p=0.008; рис. 6L). Ці результати підтвердили зв’язок між пошкодженням нирок, функцією, відкладенням комплементу та гіпертензією.

Нарешті, ми дослідили, якою мірою відкладення комплементу залежало від стадії ХХН. Як і очікувалося, середній вік пацієнтів зростав із вищою стадією ХХН (рис. 7А). На відміну від цього, частка пацієнтів з гіпертензією не залежала від стадії ХХН (рис. 7B), що підтверджує наші наведені вище висновки. Гломерулярний (рис. 7C) і канальцевий C3c (рис. 7D) були значно нижчими на 1 і 2 стадіях ХХН, ніж на вищих стадіях ХХН, тоді як для C1q такого зв’язку не спостерігалося (рис. 7E, F).

Рис. 6. Відкладення комплементу в нирках у біоптатах людини корелює з пошкодженням і функцією нирок. Ураження нирок за оцінкою GSI (A), TSI (B) і VSI (C) було значно збільшене у пацієнтів з високим АТ і GSI, що корелювало з відкладенням C3c в клубочках (D), TSI, корелюваним з тубулоінтерстиціальним C3c (E), і VSI корелює з тубулоінтерстиціальним C3c (F). IF/TA (G) і сироватковий креатинін (H) були підвищені у пацієнтів з гіпертензією, тоді як протеїнурія була подібною в обох групах (I). Тубулярний C3c корелює з IF/TA (J), а клубочковий C3c — з сироватковим креатиніном (K), і меншою мірою клубочковий C3c — з протеїнурією (L). Значні відмінності позначені зірочками: **p < 0.01="" і="" ***p="">< 0,001="" вказують="" на="" значні="" відмінності="" між="" пацієнтами="" з="" нормальним="" і="" високим="" ат="" або="" значні="" кореляції.="" ат,="" артеріальний="" тиск;="" gsi,="" гломерулосклероз;="" tsi,="" тубулоінтерстиціальне="" пошкодження;="" vsi,="" пошкодження="" судин;="" if/ta,="" інтерстиціальний="" фіброз/тубулярна="">

Рис. 7. Відкладення C3 в нирках у біоптатах людини, але не гіпертензія, корелює зі стадією ХХН. Середній вік пацієнтів із ХХН зростав зі збільшенням стадії ХХН (А), тоді як відсоток хворих на АГ не був пов’язаний із стадією ХХН (Б). C3c (C, D), але не C1q (E, F), добре корелює з різними стадіями ХХН. Гломерулярний C3c (C), тубулярний C3c (D), клубочковий C1q (E) і тубулярний C1q (F). Значні відмінності позначені зірочками: *p < 0.{{10}}5;="" **p="">< 0,01;="" і="" ***p="">< 0,001="" вказують="" на="" значні="" відмінності="" між="" групами,="" з’єднаними="">

Обговорення

ПрогресуваннянирковийзахворюванняПоказано, що, особливо тубулоінтерстиціальне пошкодження, принаймні частково опосередковується активацією комплементу [28], але роль відкладення комплементу в гіпертензії та пошкодженні нирок досі не з’ясована. У нашому дослідженні ми виявили підвищене відкладення факторів комплементу в нирках, зокрема C3c, що тісно корелювало зі збільшенням ураження нирок і нижчою функцією нирок. Крім того, дуже частонирказахворюванняасоціюється з виникненням гіпертензії, яка сама по собі пов’язана з підвищеним ризиком серцево-судинних захворювань і прогресування ХХН [9]. Тут ми показали більш високе відкладення в нирках продуктів розщеплення комплементу C1q, як маркера класичного шляху активації, і C3c, компонента всіх 3 шляхів активації, у нирках пацієнтів з гіпертензією з різниминирковийхворобиніж пацієнти з нормальним тиском. Є деякі докази того, що комплемент відіграє важливу роль у розвитку та погіршенні гіпертензії, але роль відкладення комплементу в нирках у цьому процесі невідома. У біопсії нирок людини та нашій моделі гіпертензивного перевантаження щурів стало очевидним, що C3c виявляється частіше, ніж C1q, що свідчить про те, що класичний шлях не відповідає виключно за активацію комплементу внирковий захворювання. Тим не менш, було виявлено, що C1q бере участь у ремоделюванні артерій при гіпертензії через активацію передачі сигналу -катеніну [29]. Питання про те, чи індукує комплемент гіпертензію, чи гіпертензія активує комплемент, досі залишається неясним. У цьому дослідженні ми спостерігали сильну кореляцію відкладення комплементу в нирках, зокрема фактора C3c, зі ступенем ушкодження та функції нирок. Швидше за все, гіпертензія призводить до подальшої активації системи комплементу, але є деякі повідомлення, що підтверджують гіпотезу про те, що комплемент є не тільки вторинним, але й причинним фактором гіпертензії. У подовжньому дослідженні з подальшим спостереженням протягом 15 років частота гіпертензії була значно вищою у пацієнтів з підвищеним рівнем комплементу С3 у плазмі крові на початку дослідження, що свідчить про роль С3 у плазмі крові в патогенезі гіпертензії [10]. Крім того, пацієнти з резистентною до терапії артеріальною гіпертензією мали значно вищі рівні С3 у плазмі порівняно з пацієнтами з контрольованою гіпертензією [11]. Навпаки, у популяційному когортному дослідженні підвищення C3 у плазмі асоціювалося зі збільшенням частоти першої госпіталізації через ХХН, але незалежно від АТ [12]. Однак останнє дослідження було обмежено дослідженням рівнів C3 у плазмі, тоді як локальна експресія факторів комплементу та активація комплементу не досліджувалися. Продукти розщеплення C3, тобто C3c, не тільки пасивно відкладалися, але мРНК C3 також локально експресувалася в хворих нирках пацієнтів з гіпертонією та щурів SNX. Проте ми не визначили джерело ниркового С3, але є повідомлення, що крім печінки більшість мРНК С3 експресується в моноцитах і макрофагах [30]. Крім того, повідомляється, що фібробласти, епітеліальні та ендотеліальні клітини також є потенційними позапечінковими джерелами C3- [31]. Активацію комплементу також спостерігали на моделі гіпертензії, індукованої ангіотензином II, у мишей. У щурів зі спонтанною гіпертензією дефіцит C3 міг скасувати чутливу до солі гіпертензію [18], що вказує на те, що C3 критично залучений у шляхи індукції гіпертензії. Однак ці ефекти також можуть бути опосередковані нижче за течією в каскаді комплементу. Використовуючи рецептор C5a (C5aR) у мишей Zhang et al. [32] продемонстрували, що передача сигналів C5aR відіграє патологічну роль у запаленні та ремоделюванні серця. Хоча інгібування C5aR не впливало на підвищений АТ, викликаний ангіотензином II, ураження серця, оцінене за гіпертрофією серця, запаленням і периваскулярним фіброзом, могло бути зменшено [33]. У нашій моделі гіпертензії щурів SNX ми підтвердили, що відкладення комплементу в нирках добре корелює з пошкодженням нирок, а також із гіпертрофією серця та АТ. Індукована комплементом гіпертензія була опосередкована через рецептори комплементу для C3a і C5a. Регуляторні Tregs можуть пригнічувати активацію ефекторних Tregs і проявляти протизапальну дію. У моделі гіпертензії, спричиненої ангіотензином II, було показано, що Tregs є важливим модулятором АТ і запобігає пошкодженню кінцевих органів [15, 34]. Лікування ангіотензином II стимулювало експресію рецепторів C3a і C5a на Tregs, що призводило до зменшення кількості Tregs у мишей дикого типу, але не у мишей з подвійним нокаутом рецепторів C3a і C5a [35]. Крім того, у цих мишей з подвійним нокаутом розвинулась притуплена гіпертензія та менший фіброз нирок і ураження клубочків [35]. Зв’язок між активацією комплементу та пошкодженням клубочків і нирковим фіброзом, за оцінкою гломерулосклерозу та IF/TA, також був підтверджений у нашому дослідженні біопсії. Механічно підвищення АТ було викликано C3-опосередкованою активацією ренін-ангіотензинової системи в клітинах гладких м’язів судин з молекулами, розташованими нижче за течією, такими як TGF-ß/PDGF-A, а також зміною фенотипу мезенхімальних клітин та індукцією епітеліальних -мезенхімальний перехід [31]. Передача сигналів комплементу також була націлена на інші гіпертонічні захворювання. Під час нормальної вагітності активація комплементу присутня, але є надмірною при гіпертензивних розладах вагітності, і генетичний поліморфізм білків комплементу, здається, привертає до прееклампсії [36]. Інгібування передачі сигналів комплементу шляхом лікування розчинним рецептором комплементу 1 призвело до ослаблення гіпертензії на моделі плацентарної ішемії прееклампсії [37].

Обмеження дослідження

Хоча ми намагалися посилити наші висновки в біопсії нирок людини різнихнирковийхворобиз артеріальною гіпертензією та без неї шляхом включення відповідної тваринної моделі для підтвердження зв’язку між відкладенням комплементу в нирковій тканині та гіпертензією, ми повинні визнати деякі обмеження та упередження відбору. У дослідженні на людях ми стикаємося з обмеженням мінливої ​​когорти з численними різними спотворюючими факторами, які неможливо чітко визначити або виключити. Для вирішення цього аспекту та гармонізації дослідницької групи ми також проаналізували кореляцію комплементу з фіброзом нирок (IF/TA) як сурогатного маркера втрати нефрону та прогресування основного захворювання.нирковийзахворюванняа також зі стадіями ХХН, де ми могли б показати подібні результати. Крім того, дані про тривалість відповідних захворювань або поточне лікування не були систематично доступними, залишаючи ці аспекти ще одним потенційним фактором, який ми повинні згадати. Оскільки ми офіційно виключили тих кількох пацієнтів без клінічно добре задокументованого АТ, цілком імовірно, що ці пацієнти можуть або не мати гіпертензії, або мати контрольовану гіпертензію настільки, що вони можуть проходити регулярне спостереження, що потенційно може спричинити упередження у виборі. На відміну від експерименту на тваринах, у нашій когорті людей протеїнурія під час біопсії нирок не була постійно зареєстрована для всіх пацієнтів, тому ми могли включити лише 2/3 усіх пацієнтів для відповідних аналізів, що може вплинути на деякі результати. Слід зазначити, що протеїнурія не була значно вищою у хворих на нирки з високим АТ і без нього, що малоймовірно.

Висновок

У сукупності наше дослідження підкреслює сильний зв’язок відкладення комплементу з гіпертензією, а також з ушкодженням нирок у людини та експериментальнихнирковийзахворювання. Хоча ми не змогли відповісти на питання, чи є відкладення комплементу причиною розвитку гіпертензії, дані підтверджують участь активації комплементу в патогенезі або прогресуванні гіпертензії в різнихнирка хвороби, що передбачає потенційну роль стратегій інгібування комплементу для майбутнього лікування рефрактерних до терапії випадків гіпертензії танирковийзахворювання. Проте необхідні додаткові дослідження для визначення точної ролі комплементу в патогенезі гіпертонічних захворювань.

Цистанхея може лікуватизахворювання нирок

Від: 'Доповніть внирковийЗахворюванняяк потенційний фактор розвитку артеріальної гіпертензії».Ліза-Марен Фішер та ін

---Kidney Blood Press Res 2021; 46: 362–376

Список літератури

1 Коузер РГ. Основні та перекладні концепції імуноопосередкованих захворювань клубочків. J Am Soc Nephrol. 2012 Березень; 23 (3): 381–99.

2 Кожухарова М., Рейд К., Гаджева М. Нове розуміння молекулярних механізмів класичної активації комплементу. Mol Immunol. 2010, серпень;47(13):2154–60.

3 Добо Дж., Пал Г., Червенак Л., Гал П. Нові ролі серинових протеаз, асоційованих з лектином (MASP), що зв’язують маннозу, у лектиновому шляху комплементу та за його межами. Immunol Rev. 2016, листопад; 274 (1): 98–111.

4 Pangburn MK, Schreiber RD, Muller-Eber hard HJ. Утворення початкової C3 конвертази альтернативного шляху комплементу. Придбання C3b-подібної активності шляхом спонтанного гідролізу передбачуваного тіоефіру в нативному C3. J Exp Med. 1981, 1 вересня; 154 (3): 856–67.

5 Ріклін Д, Хаджішенгалліс Г, Ян К, Ламбріс Дж.Д. Комплемент: ключова система для імунного нагляду та гомеостазу. Nat Immunol. 2010, вересень; 11 (9): 785–97.

6 Nozal P, Lopez-Trascasa M. Аутоантитіла проти білків альтернативного шляху комплементу при патологіях нирок. Нефрологія. 2016, вересень-жовтень;36(5):489–95. 7 Лау К.К., Сузукі Х., Новак Дж., Вятт Р.Ж. Патогенез пурпурного фриту Геноха-Шенлейна. Дитячий Нефрол. Січ 2010;25(1):19–26.

8 Wenzel U, Turner JE, Krebs C, Kurts C, Har rison DG, Ehmke H. Імунні механізми при артеріальній гіпертензії. J Am Soc Nephrol. 2016 Березень;27(3):677–86.

9 Drawz PE, Beddhu S, Kramer HJ, Rakotz M, Rocco MV, Whelton PK. Вимірювання артеріального тиску: перспектива KDOQI. Am J Kidney Dis. Березень 2020 р.; 75 (3): 426–34.

10 Engstrom G, Hedblad B, Berglund G, Janzon L, Lindgarde F. Рівні комплементу C3 у плазмі пов’язані з розвитком гіпертензії: поздовжнє когортне дослідження. J Hum Hypertens. 2007, квітень; 21 (4): 276–82.

11 Маген Е., Мішал Дж., Паскін Дж., Глік З., Йосефі С., Кідон М. та ін. Резистентна артеріальна гіпертензія пов'язана з підвищенням рівня комплементу С3 і С-реактивного білка в крові. J Clin Hypertens. 2008 вересень; 10 (9): 677–83.

12 Bao X, Borne Y, Muhammad IF, Schulz CA, Persson M, Orho-Melander M та ін. Доповнюють C3 і госпіталізацію внаслідок хронічного захворюваннянирказахворювання: популяційне когортне дослідження. BMC Нефрол. 21 лютого 2019 р.; 20(1):61.

13 Кланке Б., Кордасік Н., Хартнер А., Шмідер Р.Е., Велькен Р., Хільгерс К.Ф. Артеріальний тиск проти прямого впливу мінералокортикоїдів на запалення та фіброз нирок при DOCA-сольовій гіпертензії. Трансплантація нефролу. 2008 Листопад;23(11):3456–63.

14 Чен Л, Фукуда Н, Шимізу С, Кобаясі Х, Танака С, Накамура Ю та ін. Роль комплементу 3 у виробленні реніну під час диференціювання мезенхімальних стовбурових клітин до гладком’язових клітин. Am J Physiol Cell Physiol. 1 травня 2020 р.; 318 (5): C981–C990.

15 Kvakan H, Kleinewietfeld M, Qadri F, Park JK, Fischer R, Schwarz I та ін. Регуляторні Т-клітини полегшують індуковане ангіотензином ІІ пошкодження серця. Тираж. 9 червня 2009 р.; 119 (22): 2904–12.

16 Ruan CC, Ge Q, Li Y, Li XD, Chen DR, Ji KD та ін. Опосередкована комплементом поляризація макрофагів у периваскулярній жировій тканині сприяє пошкодженню судин у дезоксикортикостерон ацетатно-сольових мишей. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2015 Березень;35(3):598–606.

17 Карні Е.Ф. Гіпертонія: роль C3aR і C5aR в клітинах Treg. Nat Rev Nephrol. квітень 2018 р.; 14(4):214.

18 Негісі Е, Фукуда Н, Оцукі Т, Катакава М, Комацу К, Чен Л та ін. Участь комплементу 3 у чутливій до солі гіпертензії шляхом активації ниркової ренін-ангіотензинової системи у щурів зі спонтанною гіпертензією. Am J Physiol Renal Physiol. 1 грудня 2018 р.; 315(6):F1747–F1758.

19 Dimmler A, Haas CS, Cho S, Hattler M, Forster C, Peters H та ін. Лазерна мікродисекція та ПЛР у реальному часі для аналізу експресії гена гломерулярного ендотеліну-1 при мезангіолізі щурячого анти-Thy 1.1 і гломерулонефриту Habu зміїної отрути. Діагноз Мол Патол. 2003, червень; 12 (2): 108–17.

20 Дієз М., Абдельмагід Н., Харнеск К., Стром М., Лідман О., Сванберг М. та ін. Ідентифікація генних ділянок, що регулюють запальну мікрогліальну відповідь у ЦНС щурів після пошкодження нерва. J Neuroimmunol. 2009 25 липня; 212 (1– 2): 82–92.

21 Hainz N, Thomas S, Neubert K, Meister S, Benz K, Rauh M та ін. Інгібітор протеасоми бортезоміб запобігає вовчаковому нефриту на моделі миші NZB/W F1 шляхом збереження клубочкової та тубулоінтерстиціальної архітектури. Нефрон Експ Нефрол. 2012 рік; 120(2):e47–58.

22 Solez K, Racusen LC. Переглянуто класифікацію Банфа. Kidney Int. Лютий 2013 р.; 83 (2): 201–6.

23 Клінічна практична настанова KDIGO щодо лікування артеріального тиску при хронічномунирказахворювання. Kidney Int Suppl. 2012 груд.; 2(5):343.

24 Леві А.С., Стівенс Л.А., Шмід Ч.Х., Чжан Ю.Л., Кастро А.Ф. 3-й, Фельдман Х.І. та ін. Нове рівняння для оцінки швидкості клубочкової фільтрації. Енн інтерн мед. 5 травня 2009 р.; 150 (9): 604–12.

25 Група KCW. Клінічні практичні рекомендації KDIGO 2012 щодо оцінки та лікування хронічних захворюваньнирказахворювання. Kidney Int Suppl. 2013;3:1-150.

26 Ju W, Greene CS, Eichinger F, Nair V, Hodgin JB, Bitzer M та ін. Визначення специфічності клітинного типу на транскрипційному рівні при захворюваннях людини. Genome Res. 2013 Листопад;23(11):1862–73.

27 Barratt J, Feehally J, Smith AC. Патогенез IgA-нефропатії. Семін Нефрол. 2004, травень; 24 (3): 197–217.

28 Hsu SI, Couser WG. Хронічне прогресування тубулоінтерстиціального ураження при протеїнуріїнирковийзахворюванняопосередковується активацією комплементу: терапевтична роль інгібіторів комплементу? J Am Soc Nephrol. 2003, липень; 14 (7 додаток 2): S186–91.

29 Sumida T, Naito AT, Nomura S, Nakagawa A, Higo T, Hashimoto A та ін. Індукована комплементом C1q активація передачі сигналів -катеніну викликає гіпертензивне артеріальне ремоделювання. Нац комун. 2015; 6: 6241.

30 de Bruijn MH, Fey GH. Компонент людського комплементу C3: кодуюча послідовність кДНК і похідна первинна структура. Proc Natl Acad Sci US A. 1985, лют.;82(3):708–12.

31 Chen L, Fukuda N, Matsumoto T, Abe M. Роль комплементу 3 у патогенезі гіпертензії. Hypertens Res. квітень 2020 р.; 43(4):255–62.

32 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Cui W, Miwa T та ін. Рецептор комплементу 5a опосередковує індуковане ангіотензином II серцеве запалення та ремоделювання. Arterioscler Thromb Vasc Biol. Червень 2014 р.;34(6):1240–8.

33 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Du J. Антагоніст C5aR запобігає ремоделюванню серця при гіпертензії, індукованій ангіотензином II. Am J Hypertens. 2014 Червень;27(6):857–64.

34 Barhoumi T, Kasal DA, Li MW, Shbat L, Lau rant P, Neves MF, et al. Т-регуляторні лімфоцити запобігають індукованій ангіотензином II гіпертензії та пошкодженню судин. Гіпертонія. 2011 Березень;57(3):469–76.

35 Chen XH, Ruan CC, Ge Q, Ma Y, Xu JZ, Zhang ZB та ін. Дефіцит рецепторів C3a і C5a комплементу запобігає індукованій ангіотензином II гіпертензії через регуляторні Т-клітини. Circ Res. 2018 30 березня; 122 (7): 970–83.

36 Regal JF, Burwick RM, Fleming SD. Система комплементу і прееклампсія. Curr Hypertens Rep. 2017, 18 жовтня; 19 (11): 87.

37 Regal JF, Lund JM, Wing CR, Root KM, Mc Cutcheon L, Bemis LT та ін. Взаємодія між системами комплементу та ендотеліну при нормальній вагітності та після ішемії плаценти. Mol Immunol. 2019 жовт.; 114: 10–8.