Cistanche tubulosa індукує опосередкований активним киснем апоптоз первинних і метастатичних клітин раку товстої кишки людини

АНОТАЦІЯ

Рак товстої кишки є третім за поширеністю раком у світі. Звичайні методи лікування показали помірну ефективність із серйозними побічними ефектами, тому існує нагальна потреба у безпечніших альтернативах. У цьому дослідженні Cistanche tubulosa, місцева назва Thanoon, розглядалася як потенційна фітотерапевтична стратегія через її відомий високий терапевтичний потенціал у традиційній медицині та широку поширеність у регіоні Близького Сходу. Біоактивні сполуки екстрагували з порошку Cistanche tubulosa та перевіряли їх протипухлинні властивості проти чотирьох ліній клітин раку товстої кишки, включаючи дві, отримані з первинної пухлини (CaCo2 і HCT116), і дві, отримані з метастатичного місця (LoVo і SW620).

Було також досліджено вплив Cistanche tubulosa на індукцію апоптозу та клітинний окисно-відновний гомеостаз. Cistanche tubulosa показало залежне від концентрації та часу інгібування проліферації всіх досліджених ліній ракових клітин більш ніж на 60 відсотків після 72 годин обробки 1 мг/мл сирого екстракту. Інгібування проліферації відзначалося індукцією апоптозу, внутрішньоклітинним утворенням активних форм кисню та мітохондріальних супероксидів. Ці дані свідчать про те, що Cistanche tubulosa є перспективним кандидатом для додаткової терапії проти раку товстої кишки. Це перше дослідження, яке демонструє протиракову біоактивність Cistanche tubulosa проти клітин раку товстої кишки.

Натисніть лікарську терапію продуктом екстракту рослини цистанчі

Скорочення:

7-AAD, 7-аміно-актиноміцин D; CTE, екстракт цистанхи трубчастої; EMEM, Eagle's Minimum Essential Medium; FBS, ембріональна бичача сироватка; DCF, 2,7-дихлорфлуоресцеїн; DCFH-DA, 2,7- дихлордигідрофлуоресцеїну діацетат; DMEM, модифіковане середовище Ігла Дульбекко; ДМСО, диметилсульфоксид; MTT, 3-[4,5-диметилтіазол-2-іл]-2,5-дифенілтетразолій; PE, Phycoerythrin; RFU, відносні одиниці флуоресценції; АФК, активні форми кисню

ВСТУП

Колоректальний рак є одним із найпоширеніших видів раку в усьому світі (Brenner et al., 2014), і його захворюваність постійно зростає з оцінками 2,4 мільйона випадків у 2035 році через сучасну дієту та спосіб життя, а також знижену фізичну активність. Поточні зусилля недостатні для боротьби з нинішньою епідемією колоректального раку, тому необхідні нові підходи для ефективної профілактики та лікування, включаючи зміни способу життя в поєднанні з більш безпечними альтернативними втручаннями, такими як фітотерапія (Weidner et al., 2015). Фітотерапія, використання лікарських рослин для лікування хвороб, була невід’ємною частиною давньої історії людства. Лікарські рослини вже давно використовуються як джерела альтернативного лікування раку, становлячи понад шістдесят відсотків протипухлинних засобів, які використовуються в традиційній медицині (Balunas і Kinghorn, 2005; Saibu et al., 2015). Деякі з найвідоміших прикладів включають екстракти Catharanthus roseus G. Don. (Apocynaceae), Taxus baccata L. (Taxaceae) і Camptotheca acuminate Decne (Nyssaceae) (Cragg and Newman, 2005; da Rocha et al., 2001). Було показано, що деякі рослинні екстракти та фітохімічні речовини мають протипухлинну дію при колоректальному раку, пов’язану з індукцією виробництва активних форм кисню (АФК) і пов’язаним з цим апоптозом ракових клітин, як у випадку з екстрактами меліси лікарської (Weidner et al., 2015).

Серед фітотерапевтичних кандидатів Cistanche tubulosa, Orobanchaceae, паразитична пустельна рослина (Jiang et al., 2009), яка широко поширена в посушливих і напівпосушливих регіонах Африки, Азії та Середземноморського регіону, має цінні лікувальні властивості. Cistanche tubulosa широко використовується в традиційній медицині, і вважається, що він має лікувальний ефект при нирковій недостатності, хворобливих лейкореях, метрорагіях, жіночому безплідді та старечому запорі (Jiang et al., 2009). Окрім традиційного використання в медицині, важливі лікувальні Властивості Cistanche Tubulosa інтенсивно вивчалися протягом останнього десятиліття, включаючи вазорелаксантну (Yoshikawa та ін., 2006), гепатопротекторну (Morikawa та ін, 2010), антигіперглікемічний та гіполіпідемічний ефекти (Xiong та ін., 2013). Було також запропоновано, що Cistanche Tubulosa є потужним підсилювачем імунної системи, стимулятором формування кісткової тканини та засобом проти старіння та втоми (Xu et al., 2014). Крім того, було показано, що екстракт Cistanche tubulosa блокує відкладення амілоїду на моделі хвороби Альцгеймера (Wu et al., 2015). Незважаючи на різноманітне терапевтичне застосування, ефект цистанхи тубулозної як потенційного протипухлинного засобу ще не вивчений.

У цій роботі ми досліджували протиракову дію Cistanche Tubulosa на дві первинні та дві метастатичні лінії клітин раку товстої кишки та потенційні механізми, що лежать в основі цього ефекту.

МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

Збір і приготування рослинного екстракту, зразки Cistanche tubulosa були зібрані в пустелі в Катарі в 2014 році, і автентичність рослини була підтверджена гербологом. Зразки ваучерів архівуються у відділенні токсикології та багатоцільового використання ADLQ. Висушені на сонці зразки рослин подрібнювали за допомогою ножового млина Retsch Grindomix GM300 до дрібного порошку. Двадцять грамів порошку екстрагували 200 мл надчистої води протягом ночі при 37 градусах на роторному шейкері при 200 об/хв. Неочищені екстракти Cistanche tubulosa (CTE) центрифугували протягом 30 хвилин при 8000 об/хв, щоб осадити нерозчинні сполуки, зібрали надосадову рідину та висушили заморожуванням за допомогою сублімаційної сушарки Labconco Freezone 6 plus. Висушений екстракт був відновлений у модифікованому середовищі Ігла Дульбекко (DMEM, SIGMA, Німеччина) до концентрації 20 мг/мл і стерильно відфільтрований через мембранний фільтр 0.2-мікрон.

Клітинні лінії та підтримка клітин

Клітинні лінії карциноми товстої кишки людини CaCo2, SW620 і LoVo були отримані від служби клітинних ліній (CLS, Еппельхайм, Німеччина), тоді як клітинна лінія HCT 116 була подарунком від відділу біологічних і екологічних наук Катарського університету. CaCo2 і HCT11 були отримані з первинного місця карциноми товстої кишки, тоді як SW620 і LoVo були отримані з метастатичного місця. Клітини SW620, HCT116 і LoVo культивували та підтримували в середовищі DME, тоді як клітини CaCo2 підтримували в мінімально необхідному середовищі Eagle (EMEM, SIGMA, Німеччина). Клітини вирощували у вигляді моношару, культивованого при 37 градусах у відповідному середовищі, доповненому 10 відсотками фетальної бичачої сироватки (FBS, SIGMA, Німеччина) та 1 відсотком пеніциліну/стрептоміцину (SIGMA, Німеччина) у зволоженій атмосфері, що містить 5 відсотків вуглекислого газу.

Дослідження життєздатності клітин

Аналіз {{0}}[4,5-диметилтіазол-2-іл]-2,5-дифенілтетразолію (МТТ) використовували для оцінки цитотоксичної активності CTE аналогічно описаному раніше (Jaganjac та ін., 2010). Щільність посіву клітин CaCo2, HCT116, SW620 і LoVo, культивованих у 96-лункових планшетах, становила 104 клітини на лунку. Клітини поміщали у відповідне середовище з додаванням 10 відсотків FBS за 24 години до обробки. Через 24 години середовище видаляли і клітини обробляли 0, 0,25, 0,5, 1 і 2 мг/мл CTE протягом 24, 48 і 72 годин при 37 градусах у зволоженій атмосфері, що містить 5 відсотків CO2. Після обробки CTE середовище видаляли та в кожну лунку додавали 40 мкл розчину МТТ (0,5 мг/мл).

Після 3 годин інкубації розчин МТТ видаляли, формазановий продукт розчиняли в диметилсульфоксиді (ДМСО, SIGMA, Німеччина) і вимірювали абсорбцію при 590 нм за допомогою рідера для мікропланшетів (Infinite 200 PRO NanoQuant, Tecan Trading AG, Швейцарія) .

Аналіз апоптозу

Апоптоз у клітинах CaCo2, HCT116, SW620 і LoVo було виявлено за допомогою PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I з 7-аміно-актиноміцином D (7-AAD) як життєво важливим барвником (Becton Dickinson International, Бельгія) згідно з інструкцією виробника. Коротко, клітини висівали в 24-лункові планшети з щільністю 5×104 клітини/лунку у відповідному середовищі, доповненому 10% FBS, протягом 24 годин перед додаванням CTE (0, 0,5 або 1 мг/мл). Після інкубації 24 CTE клітини збирали, двічі промивали холодним фосфатним буферним розчином і фарбували фікоеритрином (PE) Анексин V і 7-AAD протягом 15 хвилин при кімнатній температурі в темряві. Пофарбовані клітини аналізували протягом 1 години за допомогою проточної цитометрії з використанням FACS. Проточний цитометр Aria III і програмне забезпечення FACSDiva (Becton Dickinson) з низькою швидкістю потоку з мінімум 104 клітинами. Обробку клітин протягом 4 годин 6 мкМ камптотецином (SIGMA) використовували як позитивний контроль для аналізу.

Внутрішньоклітинна продукція АФК

Внутрішньоклітинну продукцію АФК досліджували за допомогою 2,7- дихлордигідрофлуоресцеїну діацетату (DCFH-DA, SIGMA, Німеччина). DCFH-DA є нефлуоресцентним зондом, який окислюється внутрішньоклітинними АФК до флуоресцентної сполуки 2, 7- дихлорофлуоресцеїну (DCF) (Poljak-Blazi et al., 2011). Аналіз DCFHDA проводили так само, як ми описували раніше (Cindric та ін., 2013; Poljak-Blazi та ін., 2011). Коротко кажучи, щільність посіву клітин CaCo2, HCT116, SW620 і LoVo, культивованих у 96-лункових чорних планшетах, становила 104 клітини на лунку. Клітини висівали у відповідне середовище з додаванням 10 відсотків FBS на 24 години.

Перед обробкою клітини інкубували з 10 мкМ DCFH-DA при 37 градусах протягом 30 хвилин у 5% CO2/95% повітря. Потім клітини промивали іоброблені {{0}}, 0,5 та 1 мг/мл КТР у середовищі без фенолового червоного. Утворення внутрішньоклітинних АФК безперервно контролювали протягом 25 годин при 37 градусах і 5 відсотках СО2 за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів із верхньою флуоресценцією та модулем контролю газу (Infinite 200 PRO, Tecan Trading AG, Швейцарія). Інтенсивність флуоресценції вимірювали з довжиною хвилі збудження 500 нм і детектуванням випромінювання при 529 нм. Довільні одиниці, відносні одиниці флуоресценції (RFU), базувалися безпосередньо на інтенсивності флуоресценції

Утворення мітохондріального супероксиду

Здатність CTE індукувати утворення супероксиду мітохондріями була оцінена за допомогою проникного для клітини, націленого на мітохондрії зонда MitoSOX Red (Life Technologies) і Hoechst 33342 для ядерного фарбування (Life Technologies). Клітини CaCo2, HCT116, SW620 і LoVo висівали в 96-лункові планшети з щільністю 104 клітини на лунку у відповідному середовищі, доповненому 10% FBS, протягом 24 годин . Потім клітини завантажували 4 мкМ MitoSOX і 2 мкМ Hoechst 33342 протягом 20 хвилин, надлишок барвника промивали, а лунки обробляли 0, 0,5 і 1 мг/мл CTE протягом 24 годин при 37 градусах і 5% CO2. Інтенсивність флуоресценції вимірювали з довжиною хвилі збудження 510 нм і виявленням випромінювання при 580 нм для MitoSOX і довжиною хвилі збудження 350 нм і виявленням випромінювання при 461 нм для Hoechst 33342 за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів із верхньою флуоресценцією (Infinite 200 PRO, Tecan Trading). AG, Швейцарія)

Статистичний аналіз

Описову статистику було показано як середнє плюс /- SD. Достовірність відмінностей між групами оцінювали за допомогою t-критерію Стьюдента та критерію хі-квадрат. Коли порівнювали більше ніж дві групи, ми використовували односторонній дисперсійний аналіз із відповідним ретроспективним тестуванням. Використовувався SPSS 11.01 для Mircosoft Windows. Відмінності з P менше 0,05 вважалися статистично значущими.

РЕЗУЛЬТАТИ

Вплив CTE на проліферацію клітинних ліній раку товстої кишки людини показано на малюнку 1. Усі перевірені концентрації CTE показали сильний інгібуючий ефект на лінію клітин CaCo2 залежно від концентрації та часу (рис. 1A). Сімдесят дві години обробки CTE пригнічували ріст клітин CaCo2 більш ніж на 60 відсотків порівняно з контролем (p <0.05 для всіх концентрацій). Значний вплив лікування CTE на ріст клітин HCT116 також було виявлено в точках за весь час у двох найвищих концентраціях (1 мг/мл та 2 мг/мл), досягнувши більш ніж 70-відсоткового зниження в останній концентрації (Малюнок 1B, p < 0,05).

Хоча дві нижчі концентрації CTE ({{0}}.25 і 0,5 мг/мл) значно зменшили ріст клітин HCT116 через 24 години (p<0.05), 72="" they="" had="" no="" significant="" effect="" following="" hours="" of="" treatment="" compared="" to="" the="" control="" p="">{{0}}.{{10}}5). Залежне від часу та концентрації інгібування проліферації за допомогою CTE було додатково підтверджено в клітинах LoVo більш ніж на 60 відсотків при найвищій концентрації (p < 0.05) (Малюнок 1C). , і всі чотири перевірені концентрації CTE зменшили ріст клітин SW620 через 48 годин (рис. 1D, p < 0.05 для всіх). Після 72 годин лікування такий же ефект спостерігався лише для двох найвищих концентрацій (p < 0,05), тоді як концентрації 0,25 і 0,5 мг/мл не показали значного ефекту порівняно з контролем (p > 0,05). Вплив лікування CTE 0,5 та 1 мг/мл на індукцію апоптозу було додатково перевірено на всіх чотирьох лініях клітин (рис. 2). Збільшену кількість клітин у ранньому апоптозі було виявлено в HCT116 та LoVo після 24 годин лікування 0,5 мг/мл (р<0.05, Figure 2B and 2C) and in all cell lines at 1 mg/mL (p<0.05). A significant increase in necrotic or late apoptotic cell number was further observed in CaCo2 and SW620 cell lines (p<0.05, Figure 2A and 2D).

Здатність CTE індукувати внутрішньоклітинну продукцію ROS продемонстрована на малюнку 3. Через три години після обробки CTE спостерігалося значне збільшення внутрішньоклітинної продукції ROS у всіх клітинних лініях (p<0.05). The intracellular ROS production increased progressively throughout the 25 hours of treatment in a time and concentration-dependent manner. Furthermore, the staining of cells with a mitochondria-targeted probe revealed a strong impact of CTE on mitochondrial superoxide production in a concentration-dependent manner (Figure 4). The highest increase in superoxide production by mitochondria was observed in HCT116 (69%, Figure 4B) and LoVo cells (82%, Figure 4C) following 24 hours of treatment with 1 mg/mL of CTE.

Рис. 1:

Вплив Cistanche tubulosa на життєздатність клітинних ліній раку товстої кишки. Життєздатність клітин, виміряна методом MTT (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo та (D) SW620, представлена ​​у відсотках від контрольної лінії клітин раку товстої кишки без лікування. Наведено середні значення (± SD) для 5 повторів репрезентативного експерименту: (*) значимість p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

Мал. 2:

Водний екстракт Cistanche tubulosa викликає апоптоз клітин раку товстої кишки людини. Аналіз проточної цитометрії Annexin-V-FITC клітин (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo та (D) SW620 представлено як відсоток контрольної лінії клітин раку товстої кишки без лікування. Наведено середні значення (±SD) для 3 повторень репрезентативного експерименту: (*) значимість p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

Мал. 3:

Водний екстракт Cistanche tubulosa індукує внутрішньоклітинне виробництво АФК залежно від часу та дози. Продукція АФК, виміряна аналізом DCFH-DA в клітинах (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo та (D) SW620, представлена ​​як середнє значення RFU (±SD) для відповідних 5-реплікатів репрезентативний експеримент. (*) Значення стор<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

Мал. 4:

Водний екстракт Cistanche tubulosa індукує вироблення мітохондріального супероксиду в клітинах раку товстої кишки людини. Інтенсивність флуоресценції націленого на мітохондрії зонда MitoSOX Red у клітинах A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo та (D) SW620 представлена ​​у відсотках контрольної необробленої лінії клітин раку товстої кишки. Наведено середні значення (± SD) для 5 повторів репрезентативного експерименту: (*) значимість p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

ДИСКУСІЯ

Хоча попередні дослідження повідомляли про численні лікувальні властивості Cistanche tubulosa, це перше повідомлення про його антипроліферативну дію на злоякісні клітини. Біологічно активні сполуки Cistanche tubulosa, екстраговані водою, високополярним розчинником, показали сильну протиракову біоактивність. Раніше ми порівнювали ефективність Cistanche tubulosa, розчиненого у воді, з іншими розчинниками, такими як метанол і етилацетат, але водні екстракти продемонстрували найбільш багатообіцяючу протиракову дію (дані не показані).

Ми продемонстрували здатність CTE при 1 мг/мл і 2 мг/мл пригнічувати 60 відсотків росту як первинних, так і метастатичних клітинних ліній раку товстої кишки, показуючи потенційно важливу роль Cistanche tubulosa в лікуванні раку товстої кишки. Порівняно з нормальними клітинами, ракові клітини зазвичай характеризуються порушенням окисно-відновного гомеостазу, і загальною стратегією поточної протипухлинної терапії є збільшення клітинного окисного стресу (Yang et al, 2013). Хоча фізіологічно низькі рівні ROS відіграють важливу роль як сигнальні молекули, надмірне виробництво ROS може сприяти нестабільності та злоякісності раку (Liou and Storz, 2010). Парадоксально, але цей дисбаланс у клітинному окисно-відновному гомеостазі робить ракові клітини більш вразливими до клітинної смерті, спричиненої АФК (Jaganjac та ін., 2008; Nogueira та Hay, 2013). Антипроліферативний ефект CTE, про який повідомляється в цьому дослідженні, може бути опосередкований різними позаклітинними та внутрішньоклітинними механізмами відомих і невідомих сполук в екстракті, спрямованих на численні шляхи, які відіграють важливу роль в апоптозі. Щоб відрізнити різні способи загибелі клітин, ми дослідили потенційний механізм, відповідальний за спостережувану цитотоксичність, спричинену CTE

Наші дані показують, що CTE збільшує внутрішньоклітинне виробництво АФК і, отже, індуковану АФК загибель клітин. Окислювально-відновний стан клітини також відіграє вирішальну роль у регулюванні апоптозу, а мітохондріальний транспортний ланцюг електронів є одним із основних місць клітинної генерації АФК (Trachootham et al., 2008). Крім того, внутрішньоклітинні АФК можуть викликати клітинний апоптоз через мітохондріально-залежні та незалежні шляхи (Sinha та ін., 2013). Дійсно, наші дані також вказують на те, що CTE-індукована екстерналізація фосфатидилсерину є поширеним ефектом при апоптозі як у первинних, так і в метастатичних ракових клітинних лініях, що свідчить про те, що механізм CTE-індукованої смерті опосередковується апоптозом, а не некрозом. Активація апоптозу в ракових клітинах є коригуючою стратегією, і багато протипухлинних препаратів можуть проявляти апоптотичні ефекти в ракових клітинах.

Таким чином, сполуки або екстракти з проапоптозною активністю в ракових клітинах є потенційно корисними для дослідження протипухлинних препаратів (Wong, 2011). Щоб визначити, чи індукований CTE проапоптотичний ефект опосередковується механізмом ROS, індукованим мітохондріями, ми виміряли виробництво супероксиду за допомогою флуоресцентного зонда, націленого на мітохондрії, у клітинах, оброблених CTE. Наші дані чітко показують, що CTE стимулює вироблення мітохондріального супероксиду, що свідчить про те, що протипухлинна активність Cistanche tubulosa принаймні частково опосередковується механізмом ROS, індукованим мітохондріями.

ВИСНОВКИ

На завершення наші дані свідчать про те, що водний екстракт пустельної рослини Cistanche tubulosa може бути перспективним кандидатом для протипухлинного підходу в поєднанні з іншими традиційними методами лікування для профілактики та лікування раку товстої кишки. Ми також демонструємо, що токсичність рослинного екстракту проти ракових клітин опосередкована збільшенням внутрішньоклітинного виробництва АФК і, принаймні частково, мітохондріально-залежним апоптозом. Тривають подальші дослідження для виділення та характеристики окремих біологічно активних компонентів, відповідальних за протипухлинну дію.

Необхідні додаткові дослідження, щоб оцінити потенційне використання цього екстракту як ефективного хіміопрофілактичного засобу та зрозуміти механізми дії на клітини раку товстої кишки на молекулярному рівні. Також необхідні подальші доклінічні та клінічні дослідження, щоб підтвердити спостережуваний сприятливий вплив Cistanche tubulosa на здоров’я для профілактики раку.

ПОДЯКА

Фінансова підтримка та спонсорство: це дослідження було підтримано Антидопінговою лабораторією Катару.

Конфлікт інтересів: автори заявляють про відсутність конфлікту інтересів.

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ

Balunas MJ, Kinghorn, AD. Відкриття ліків з лікарських рослин. Life Sci. 2005;78:431-41.

Brenner H, Kloor M, Pox CP. Колоректальний рак. Lancet 2014; 383, 1490-502.

Cindric M, Cipak A, Zapletal E, Jaganjac M, Milkovic L, Waeg G, Stolc S, Zarkovic N, Suzana Borovic S. Stobadine послаблює порушення моделі кишкового бар’єру, спричинене 4-гідроксиноненалом. Токсикол In Vitro. 2013;27:426-32.

Крегг Г.М., Ньюмен Діджей. Рослини як джерело протипухлинних засобів. Етнофармакол. 2005;100:72-9.

da Rocha AB, Lopes RM, Schwartsmann G. Натуральні продукти в протипухлинній терапії. CurrOpinPharmacol. 2001;1:364-9. Jaganjac M, Matijevic T, Cindric M, Cipak A, Mrakovcic L, Gubisch W, Zarkovic N. Індукція промотора CMV-1 номінальним 4-гідрокси-2- у клітинах нирки ембріона людини. Акта Біохім Пол. 2010;57:179-83.

Jaganjac M, Poljak-Blazi M, Zarkovic K, Schaur RJ, Zarkovic N. Участь гранулоцитів у спонтанній регресії карциноми Walker 256. Рак Lett. 2008;260:180-6

Jiang Y, Tu PF. Аналіз хімічних складових у видах Cistanche. J Chromatogr A. 2009; 1216: 1970-9.

Liou GY, Storz P. Активні форми кисню при раку. Free Radic Res. 2010;44:479-96.

Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Ацильовані фенілетаноїдні аміноглікозиди з гепатопротекторною активністю з рослини пустелі Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2010;18:1882-90.

Nogueira V, Hay N. Молекулярні шляхи: гомеостаз активних форм кисню в ракових клітинах і наслідки для терапії раку. Clin Cancer Res. 2013;19:4309-14.

Poljak-Blazi M, Jaganjac M, Sabol I, Mihaljevic B, Matovina M, Grce M. Вплив іонів заліза на утворення активних форм кисню, ріст клітинних ліній раку шийки матки та експресію онкогенів E6/E7. Токсикол Vitro. 2011;25:160-6.

Saibu GM, Katerere DR, Rees DJG, Meyer M. In vitro цитотоксичні та проапоптотичні ефекти водних екстрактів листя та цибулин Tulbaghia violacea. J Етнофармакол. 2015;164:203-9.

Сінха К., Дас Дж., Пал П.Б., Сил ПК. Окислювальний стрес: мітохондріально-залежні та мітохондріально-незалежні шляхи апоптозу. Arch Toxicol.2013; 87:1157-80. Trachootham D, Lu W, Ogasawara MA, Nilsa RD, Huang P. Redox регуляція виживання клітин. Антиоксидно-відновний сигнал. 2008;10:1343- 74.

Weidner C, Rousseau M, Plauth A, Wowro SJ, Fischer C, Abdel-Aziz H, Sauer S. Екстракт меліси лікарської індукує апоптоз і пригнічує проліферацію клітин раку товстої кишки через утворення активних форм кисню. Фітоліки. 2015;22:262-70.

Вонг Р.С. Апоптоз при раку: від патогенезу до лікування. J ExpClin Cancer Res. 2011;30:87.

Ву Ш., Чоу Ф.П., Чьяу Ч.І., Чень Дж.Х., Ту С.Ф., Лінь Х.Х. Протираковий ефект екстракту Wasabia japonica на клітини раку печінки Hep3B через накопичення АФК, пошкодження ДНК та p73-опосередкований апоптоз. J Funct Foods. 2015;14:445-55.

Xiong WT, Gu L, Wang C, Sun HX, Liu X. Антигіперглікемічні та гіполіпідемічні ефекти Cistanche tubulosa у мишей db/db з діабетом 2 типу. J Етнофармакол. 2013;150:935-45.

Xu R, Sun S, Zhu W, Xu C, Liu Y, Shen L, Shi Y, Chen J. Багатоступеневі інфрачервоні макро-відбитки пальців етанолових екстрактів з різних видів Cistanche в Китаї в поєднанні з HPLC відбитками пальців. J Mol Struct. 2014;1069:236-244.

Ян Й., Караханова С., Вернер Дж., Бажин А.В. Активні форми кисню в біології раку та протипухлинній терапії. Curr Med Chem. 2013;20:3677-92.

Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S, Muraoka O. Фенілетаноїдні аміноглікозиди та ацильовані олігоцукри з вазорелаксуючою активністю з Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2006;14:7468-75.

For more information:1950477648nn@gmail.com