Вплив глікозидів цистанхе на імунну функцію мишей моделі старіння, індукованого D-галактозою

Контакт: Одрі Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Електронна пошта:audrey.hu@wecistanche.com

〔Анотація〕 Мета:

Вивчення імунологічного механізму омолоджувального ефекту глікозидів Cistanche на старіння мишей, викликане D-галактозою.методи: Метод включення 3 H-TdR використовувався для визначення здатності лімфоцитів до трансформації, нейтральний червоний тест використовувався для визначення фагоцитарної функції перитонеальних макрофагів миші, метод імунофлуоресценції використовувався для виявлення субгруп лімфоцитів, а радіоімунологічний аналіз використовувався для визначення рівень ІЛ-2 у периферичній крові. , Метод вивільнення ферменту Trace NAG для вимірювання активності NK-клітин.Результати: Імунна функція індукованого D-галактозою старіння мишей була значно знижена, що проявлялося в здатності трансформації лімфоцитів, вмісті IL-2 у периферичній крові, вмісті CD4 плюс Т-клітин і CD8 плюс Т-клітин, фагоцитарного функція перитонеальних макрофагів і активність NK-клітин. Зменшити (П<>цистанка глікозидуможе покращити здатність лімфоцитів до трансформації, вміст IL-2 у периферичній крові, фагоцитарну функцію перитонеальних макрофагів, активність NK-клітин, вміст CD4 плюс Т і CD8 плюс Т-клітин (P<0.05). 0.="" 05).="">Висновок: цистанх глікозиду може значно посилити імунну функцію мишей, індукованих D-галактозою, старіння, відновити або наблизити стан молодих мишей, а також мати ефект затримки старіння.

[Ключові слова]: загальні глікозиди цистанхи; D-галактоза; модель старіння; імунітет

Цистанхе глікозид:проти старіння

Цистанхеє найбільш часто використовуваним препаратом у формулах проти старіння та довголіття. Загальні глікозиди цистанх (GCS) — це загальний термін для класу фенілетаноїдних глікозидів у цистанах і є основною біологічною активністю, видобутою з цистанх, що виробляють сіль у північному Сіньцзянському компоненті [1], GCS, як було доведено, має антиліпідну дію ефект перекисного окислення [2], але про це мало дослідженьімунний механізм проти старіння.

1. Матеріали та методи

1. 1 Угруповання тварин і медицина

60 мишей Куньмін, самці та самки, віком 3 місяці, вагою 18-21 г, надані Кімнатою тварин Інституту біологічних продуктів Міністерства охорони здоров’я. Мишей у кожній групі містили в одній кімнаті в окремих клітках, і вони могли вільно їсти та пити. Тварин випадковим чином розділили на три групи: контрольна група молодості, модельна група старіння та модельна група адміністрування, по 20 тварин у кожній групі. GCS був виділений та ідентифікований кафедрою фітохімії фармацевтичної школи університету Цзямусі згідно з літературою [1].

Підвищення імунітетуЦистанхе добавка

1.2 Спосіб

Молодій групі вводили фізіологічний розчин підшкірно в шию протягом 30 днів кожен день і отримували теплу воду протягом 15 днів з 15-го дня. Мишам у групі старіння моделі щодня вводили D-галактозу (автоклавовано) 100 мг/кг підшкірно на задню частину шиї. Маса тіла протягом 30 днів поспіль. У групі модельного введення D-галактозу 100 мг/кг маси тіла вводили підшкірно на задній поверхні шиї щодня, а ГКС 125 мг·кг-1·d-1 вводили одночасно час з 15-го дня, і введення безперервно вводили протягом 15 днів. Усіх тварин умертвляли одночасно на 30-й день і визначали різні показники спостереження.

1. 2. 1 Дослід трансформації лімфоцитів

Суспензію клітин селезінки миші доводили до концентрації клітин 2×106, і Con A використовували як стимул для культивування in vitro протягом 5 днів, і його здатність до трансформації перевіряли методом включення 3 H-Td R. Результати виражені як індекс стимулу SI (група стимуляції SI=ConA/контрольна група).

1. 2. 2 Фагоцитарна функція перитонеального макрофага миші (нейтральний червоний тест [3])

Зберіть перитонеальну рідину мишімакрофагсуспензію асептично. Після центрифугування осад флотують у культуральному середовищі клітин. Використовуйте гемоцитометр, щоб підрахувати та відрегулювати концентрацію клітин у розчині до 2×106. Помістіть його в інкубатор при 37 градусах на 2 години. , Викиньте супернатант і неприлиплі клітини. Візьміть стінки макрофагів і додайте 0,1 відсотка нейтрального червоного фізіологічного розчину до 37 градусів і продовжуйте культивувати протягом 30 хвилин, викиньте нейтральний червоний і кілька разів промийте макрофаги 37 градусами PBS, розведіть 50 відсотками оцтової кислоти та 50 відсотками етанолу, встановіть 722 Колориметричний спектрофотометр при довжині хвилі 540 нм, вимірюване значення абсорбції А.

1. 2. 3 Виявлення субпопуляцій лімфоцитів

Візьміть 0,1 мл 1×107/млсуспензія лімфоцитів, додайте 10 мкл мишачих антимишачих моноклональних антитіл CD3, CD4 та CD8 відповідно, добре перемішайте, інкубуйте при 4 градусах протягом 30 хвилин, 1% FC S у PBS (0,2 М, pH7,4) Промийте 3 рази, проточна цитометрія: лазерний проточний цитометр (FACScan, компанія BD США), аргоновий лазер, довжина хвилі збудження 488 нм, спектр виявлення FITC 480-630 нм, кількість 800/с клітин, 200,000 клітин загалом. Результати аналізували та записували за допомогою комп’ютера HP340 та професійного програмного забезпечення LYSI SⅡ.

1. 2. 4 Визначення ІЛ-2 у периферичній крові радіоімунним методом

Візьміть у пробірку 1 мл крові з очних яблук миші. Після коагуляції сироватку відокремлюють. Згідно з роботою комплекту, число CPM вимірюється на лічильнику.

1. 2. 5 Активність NK-клітин

Візьміть кров із ока миші в асептичних умовах і додайте гепарин для антикоагуляції. Зверніться до літератури [4] для деталей. 1.3 Статистична обробка Експериментальні дані виражаються як x±s, обробляються програмним забезпеченням S AS та аналізуються за допомогою дисперсійного аналізу, F-тесту та t-критерію.

переваги цистанчі: покращують імунітет

2. результати

2.1 Вплив GCS на трансформаційну здатність лімфоцитів і підмножин Т-клітин у кожній групі мишей показано в таблиці 1.

Таблиця 1. Вплив GCS на здатність до трансформації лімфоцитів і субпопуляцій Т-клітин у кожній групі мишей (n= 16,x±s)

Порівняно з Ⅰ: 1) П<0.05, 2)="" p.="" 05;="" compared="" with="" ⅱ:="" 2)="" p=""><0.05; the="" same="" as="" the="" table="">

2.2 Вплив ГК на фагоцитарну функцію, вміст IL-2 і активність NK-клітин перитонеальних макрофагів у кожній групі мишей показано в таблиці 2.

Таблиця 2. Вплив ГКС на фагоцитарну функцію, активність NK-клітин та вміст IL-2 перитонеальних макрофагів у кожній групі мишей (n= 16,x±s)

3. Обговорення

У цьому експерименті фагоцитарна функція перитонеальних макрофагів і активність NK-клітин мишей моделі старіння були знижені (P<0.05). gcs="" can="" increase="" the="" phagocytic="" function="" and="" nk="" cell="" activity="" of="" peritoneal="" macrophages="" in="" aging="" model="" mice=""><0.05), which="" is="" close="" to="" the="" youth="" model="" group.="" from="" this,="" it="" can="" be="" inferred="" that="" gcs="" can="">покращують функції неспецифічного клітинного імунітету та імунної регуляції організму, іпосилити протипухлинну та протиінфекційну діюстаріння організму є одним із способів уповільнення старіння [4]. IL-2 є незамінним цитокіном для проліферації та диференціації Т-лімфоцитів, і він може регулювати функції лімфоцитів, моноцитів-макрофагів і NK-клітин. IL-2 може сприяти проліферації та диференціюванню Т-лімфоцитів, регулюватиімунна відповідь, індукують активність Tc і сприяють виробленню антитіл та інтерферону.Він відіграє важливу роль в імунній системі. У цьому експерименті вміст IL-2 у модельних мишей старіння знизився (P<0.05). after="" gcs="" were="" given,="" the="" il-2="" content="" increased=""><0.05), which="" was="" close="" to="" the="" youth="" model="" group,="" indicating="" that="" gcs="" produced="" il="" by="" increasing="" t="" lymphocytes.="" -2,="" enhance="" the="" immune="" function="" of="" elderly="" mice="" and="" achieve="" the="" effect="" of="" delaying="" immune="" aging.="" the="" content="" of="" cd4+="" t="" cells="" and="" cd8+="" t="" cells="" decreased="" significantly="" with="" increasing="" age.="" the="" low="" t="" cell="" function="" was="" also="" manifested="" by="" the="" decline="" of="" specific="" antigen="" and="" mitogen="" con="" a,="" and="" the="" decline="" of="" the="" ability="" of="" t="" cells="" to="" divide="" repeatedly.="" in="" this="" experimental="" model,="" the="" lymphocyte="" transformation="" ability,="" cd4+="" t="" cell="" and="" cd8+="" t="" cell="" content="" of="" the="" mouse="" was="" reduced="" (p=""><0.05), and="" gcs="" increased="" the="" mouse="" lymphocyte="" transformation="" ability,="" cd4="" +="" t="" cell="" and="" cd8="" +="" t="" cell="" content="" (p=""><0.05). 05),="" close="" to="" the="" youth="" model="" group.="" it="" shows="" that="" gcs="" can="" make="" the="" body="" resist="" aging="" and="" tend="" to="" be="" younger="" by="" promoting="" the="" proliferation="" of="" lymphocytes="" and="">покращення специфічної клітинної імунної функції мишей.

Добавка для підвищення імунітету

4. Література

1. Ду Няньшен, Ван Хун. Виділення та ідентифікація глікозидів феноксіетанолу з Cistanche [J]. Дослідження та розробка натуральних продуктів, 1993; 5(4): 7-8.

2. Лі Ліньлін, Ван Сяовень, Ван Сюефей та ін. Антиліпідне перекисне окислення та антирадіаційні ефекти загальних глікозидів Cistanche 〔J〕. Китайський журнал китайської Materia Medica, 1997; 22(6): 364-367.

3. Сюй Шуюнь, Бянь Рулянь. Експериментальна методологія фармакології [М]. 2-е видання. Пекін: Видавництво народного здоров'я, 1994: 1221.

4. Лю Сюнбо, Лю Цайюй, Ян Сююнь та ін. Виявлення активності NK-клітин методом вивільнення мікро-NAG [J]. Journal of Clinical Laboratory Science, 1996; 14(2): 66-67.