Аномалії В-клітин і Т-клітин у пацієнтів із селективним дефіцитом IgA

Анотація

Фон

Селективний дефіцит IgA (SIgAD) є найбільш поширеним вродженим дефектом імунітету з майже невідомою етіологією. Це дослідження мало на меті дослідити клінічну діагностичну та прогностичну цінність підмножин лімфоцитів і їх функції у пацієнтів із симптомним SIgAD.

методи

У це дослідження було включено загалом 30 наявних пацієнтів із SIgAD з іранського реєстру та 30 здорових контрольних осіб відповідного віку та статі. Ми проаналізували периферичні підгрупи B- і T-клітин і аналіз проліферації T-клітин за допомогою проточної цитометрії у пацієнтів із SIgAD із легким і тяжким клінічним фенотипом.

Результати

Наші результати свідчать про значне збільшення наївних і перехідних В-клітин і значне зниження маргінальних зоноподібних і переключених В-клітин пам’яті у пацієнтів із SIgAD. Ми виявили, що підмножини CD4+ Т-клітин наївної та центральної пам’яті, а також Th1, Th2 і регуляторних Т-клітин значно зменшилися. З іншого боку, спостерігалося значне зменшення підмножин CD8+ Т-клітин центральної та ефекторної пам’яті, тоді як пропорції обох (CD4+ і CD8+) термінально диференційованих ефекторних Т-клітин пам’яті (TEMRA) були значно підвищені у наших пацієнтів. Хоча деякі субгрупи Т-клітин при тяжкому SIgAD були подібними, зменшення В-клітин маргінальної зони та переключеної пам’яті та збільшення кількості В-клітин CD21low у пацієнтів з тяжким SIgAD було дещо помітним. Крім того, активність проліферації CD4+ T-клітин була сильно порушена у пацієнтів із SIgAD із важким фенотипом.

Висновок

Пацієнти з SIgAD мають різні клітинні та гуморальні дефіцити. Таким чином, оцінка Т-клітин і В-клітин може допомогти краще зрозуміти гетерогенний патогенез і оцінку прогнозу захворювання.

Ключові слова

Вроджені порушення імунітету, первинний імунодефіцит, селективний дефіцит IgA, підмножини В-клітин, підгрупи Т-клітин, проточна цитометрія, проліфераціяаналіз

cistanche tubulosa - покращує імунну систему

екстракт цистанки

вступ

Селективний дефіцит IgA (SIgAD) є найпоширенішим первинним імунодефіцитним розладом (PID) або вродженими порушеннями імунітету (IEI), ідентифікованим за концентрацією IgA в сироватці крові нижче 7 мг/дл і нормальними концентраціями IgG та IgM у пацієнтів старше чотирьох років. . Більшість пацієнтів із SIgAD протікає безсимптомно, хоча деякі з них мають різні клінічні прояви, включаючи інфекції шлунково-кишкового тракту та дихальних шляхів, алергічні захворювання та аутоімунні розлади. Повідомлялося про прогресування захворювання до загального варіабельного імунодефіциту (CVID) у вибраній групі пацієнтів із SIgAD з дефіцитом підкласів IgG або аутоімунними захворюваннями [1]. Про конкретні причини патогенезу SIgAD поки що не повідомляється. Проте дефекти в процесі рекомбінації перемикання класу IgA (CSR), продукції та секреції IgA, а також довгострокового виживання IgA, переключених В-клітин пам’яті та плазматичних клітин пацієнтів із SIgAD були виявлені у нерозкритих випадках [2 ]. Дефекти цих імунологічних процесів пов’язані з порушеннями в лімфоцитах пацієнтів із SIgAD. Отже, оцінка лімфоцитів, особливо підмножин В-клітин і Т-клітин, може бути цінною та корисною. Кілька досліджень продемонстрували аномалії В-клітин і Т-клітин у деяких групах пацієнтів із SIgAD [3, 4]. Що стосується підгруп В-клітин, повідомлялося про зменшення кількості В-клітин пам’яті з перемиканням, плазматичних клітин IgA та перехідних регуляторних В-клітин IL-10+ у пацієнтів із SIgAD [5–8]. З іншого боку, повідомлялося про дефект у деяких субгрупах Т-клітин у випадках SIgAD, який пов’язаний з недостатньою кількістю В-клітин, що продукують IgA [5, 8, 9]. Проточне цитометричне імунофенотипування може відігравати важливу роль у діагностиці, прогнозі, класифікації та лікуванні пацієнтів із SIgAD. Таким чином, ми вперше мали на меті дослідити основні субпопуляції В- і Т-лімфоцитів разом з оцінкою функції Т-клітин, щоб з’ясувати кореляцію між імунологічними характеристиками та клінічними проявами у симптоматичних пацієнтів із SIgAD.

Матеріал і методи

Пацієнти

У це дослідження було включено загалом 30 наявних симптоматичних пацієнтів із SIgAD (з іранського реєстру IEI [10, 11]) і 30 здорових осіб контрольної групи відповідного віку та статі (HCs). Після клінічних і лабораторних досліджень було підтверджено відсутність імунодефіциту чи будь-якого основного захворювання. Пацієнти були направлені до дитячого медичного центру (педіатричний центр передового досвіду при Тегеранському університеті медичних наук, Тегеран, Іран). Усім пацієнтам було встановлено діагноз SIgAD за даними Європейського товариства імунодефіцитів [12]. Дослідження було схвалено Комітетом з етики Тегеранського медичного університету та отримано письмову інформовану згоду від усіх осіб (IR.TUMS.VCR.REC.1396.2018). Демографічні, клінічні та імунологічні дані пацієнтів були задокументовані у формі анкети.

Класифікація хворих

Для порівняння демографічних, клінічних та імунологічних даних пацієнти були розділені на дві групи: важкі та легкі (на основі клінічних проявів), а також кровноспоріднені та некровноспоріднені групи (на основі батьківської спорідненості). Мінімальними критеріями включення для того, щоб пацієнт міг вважатися симптоматичним, були десять попереджувальних знаків Фонду Джеффрі Моделла. Пацієнти були розділені на дві групи з легким і важким, оскільки пацієнти з важкими інфекціями (наприклад, кровотоку, центральної нервової системи та глибокими інфекціями, такими як остеомієліт і артрит), аутоімунітетом або злоякісними новоутвореннями були віднесені до важкої групи та іншими ускладненнями. вважалися м'якою групою. Оскільки пневмонія та інші респіраторні інфекції є поширеними у пацієнтів із SIgAD, і ми хотіли перевірити його як параметр між важкими та легкими групами, тому ми не класифікували їх у важку групу.

Переваги добавки цистанчі - як зміцнити імунну систему

Натисніть тут, щоб переглянути продукти Cistanche Enhance Imunity

【Запитуйте більше】 Електронна пошта:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Аналіз субпопуляцій лімфоцитів

Мононуклеарні клітини периферичної крові (PBMC) відокремлювали від 8 мл зразків крові, зібраних у пробірках з гепарином натрію, використовуючи центрифугування в градієнті щільності Ficoll-Hypaque при 600 g протягом 25 хвилин при 22 градусах. Для позаклітинного фарбування РВМС розділяли на фракції 5-панелі та фарбували протягом 20 хвилин при температурі 2–8 градусів у темному місці, причому кожен коктейль містив моноклональні антитіла в оптимальних концентраціях. Панель B1 була використана для визначення наївного (CD19+CD27−IgM+IgD+), лише пам’яті IgM (CD19+CD27+ IgM++IgD−), переключеного пам’яті (CD19+CD27+IgM−IgD−) та маргінальних зоноподібних В-клітин (CD19+CD27+IgM++IgD+). Панель B2 використовувалася для ідентифікації В-клітин CD21low (CD19+CD21−/lowCD38−/lowIgM+++), плазмобластів (CD19+CD21−/lowCD38++/{ {34}}IgM−) і перехідні B-клітини (CD19+CD21+CD38++IgM+). Панель T1 використовувалася для класифікації наївної (CD4+ або CD8+ та CD45RA+CCR7+), ефекторної пам’яті (CD4+ або CD8+ та CD45RA−CCR7−), Т-клітини центральної пам’яті (CD4+ або CD8+і CD45RA−CCR7+) і TEMRA (термінально диференційована ефекторна пам’ять) (CD4+ або CD8+ та CD45RA+CCR7−). Панель T2 використовувалася для класифікації регуляторних Т-клітин (TregsCD4+CD25+FOXP3+CD127−/low). Для внутрішньоклітинного фарбування, після фарбування поверхневих молекул, їх фіксували та пермеабілізували в буфері FOXP3/Permeabilization (eBioscience, США) згідно з інструкціями виробника для наступного: анти-людський FOXP3 (PE), анти-людський IL{{67} } (PE), анти-людський IL-4 (APC) та анти-людський IFN- (FITC). Усі антитіла та контролі ізотипу були придбані у американської корпорації eBioscience. Для оцінки Т-хелперних клітин (включаючи Т1, Т2 і Т17) 1 × 106 (клітина/мл) PBMC культивували в середовищі клітинної культури Меморіального інституту Розвелл-Парк (RPMI 1640) з подальшою стимуляцією форболміристат-ацетатом (PMA). , 50 нг/мл, Sigma-Aldrich, США)/іономіцин (1 мкг/мл, Sigma-Aldrich) і в присутності брефелдину (5 мкг/мл, eBioscience). Потім клітини інкубували при 37 градусах в інкубаторі з 5% CO2 і 95% вологістю протягом 5 годин. Стимульовані клітини промивали забуференим фосфатом фізіологічним розчином (PBS) і проводили фарбування поверхні анти-CD4 людини (PerCp)-Cy5.5. Внутрішньоклітинні антитіла для фарбування цитокінів (анти-IFN-FITC, анти-IL-17 PE та анти-IL-4 APC для оцінки підгруп T та анти-FoxP3 PE для оцінки Treg) додавали та інкубували при кімнатній температурі протягом 30 хв. Клітини промивали буфером для пермеабілізації та ресуспендували в холодному буфері для фарбування, а кількість визначали за допомогою проточного цитометра BD FACSCalibur (BD Biosciences) (додатковий файл 1: таблиця S1). Стратегія стробування подібна до нашого попереднього дослідження [13, 14].

Аналіз проліферації Т-клітин

Для оцінки проліферації Т-клітин PBMC культивували з флуоресцентним 5,6-карбоксифлуоресцеїн-сукцинімідиловим ефіром (CFSE, Biolegend, США). Базовий розчин CFSE готували розчиненням CFSE в диметилсульфоксиді (DMSO) у концентрації 5 мМ/л відповідно до інструкцій виробника. Цей запас заморожували невеликими порціями, щоб запобігти надмірним циклам заморожування та розморожування. CFSE додавали до поперечної пробірки Falcon, що містила 500 мкл суспензії PBMC (5×106 клітин/мл) у культуральному середовищі клітин RPMI 1640, що містило 10% FBS (фетальна бичача сироватка, Biosera, Франція) з кінцевою концентрацією 5 мкМ та 2 мМ L-глутамін, 100 ОД/мл пеніциліну та 100 мкг/мл стрептоміцину (Lymphosep; Biosera, Франція). Пробірка швидко оберталася та завихрилася, щоб забезпечити однорідне розсіювання. Після мічення клітинну суспензію інкубували протягом 5 хвилин при 37 градусах. Потім до клітинної суспензії додавали 9 мл RPMI1640, що містить 10% FBS, і центрифугували при 500 g протягом 5 хв. Клітини промивали три рази та додавали 1 мл RPMI1640 з 10% FBS. Що стосується специфічної стимуляції та проліферації Т-клітин, антитіло проти CD3 (1 мкг/мл) додавали до 500 мкл стерильного PBS, і планшет інкубували при 37°C протягом 2 годин. Покритий планшет двічі промивали стерильним PBS і безпосередньо додавали мічені клітини, і, нарешті, додавали антитіло проти CD28 (2 мкг/мл) як стимулятор для Т-клітин. Планшет інкубували при 37 ºC в інкубаторі з 5% CO2 і 95% вологістю протягом 96 годин [15–17]. Нестимульовану лунку вважали контролем для непроліферативних клітин. Через 96 годин клітини збирали і промивали. Після фарбування антилюдським CD4 (PerCPCy5.5) клітини зрештою проаналізували за допомогою проточного цитометра BD FACSCalibur™ і програмного забезпечення CellQuest Pro (BD, Biosciences, Сан-Хосе, Каліфорнія, США). Аналіз проліферації проводили шляхом порівняння трьох критеріїв, включаючи відсоток поділу клітин (% поділів), середню кількість поділів клітини, яким зазнає клітина (індекс поділу), і середню кількість поділів клітин, які відбуваються у всій первинній популяції клітин. (Індекс розповсюдження) програмним забезпеченням FlowJo 7.6.

Статистичний аналіз

Для статистичного аналізу було використано програмне забезпечення SPSS (версія Windows 16.0; SPSS Inc., Чикаго, Іллінойс, США). Ми використали тест Колмогорова–Смирнова, щоб оцінити, чи нормально розподілені дані. Результати були представлені як медіана (міжквартильний діапазон [IQR], представлений як діапазон із 25–75 процентилями) значень. Для порівнянь використовувався тест хі-квадрат або точний критерій Фішера. Для порівняння більш ніж двох груп, якщо розподіл даних був нормальним, використовувався ANOVA, а якщо розподіл даних був ненормальним, використовувався тест Крускала Уолліса. Відмінності вважалися статистично значущими для P-значень, які були<0.05.

Цистанче корисний для чоловіків - зміцнює імунну систему

Результати

Демографічні, імунологічні та клінічні дані

Серед усіх зареєстрованих пацієнтів із SIgAD в Ірані 30 доступних пацієнтів (23 чоловіки та 7 жінок) були залучені до цього дослідження. Середній (IQR) вік пацієнтів на момент дослідження становив 11 (7,3–16) років. Батьківська кровна спорідненість була у 16 ​​(53,3%) пацієнтів. Пневмонія (42,3%) була найчастішим клінічним проявом у досліджуваних пацієнтів, а злоякісні новоутворення в цій когорті не діагностувалися. Демографічні, клінічні та імунологічні характеристики пацієнтів узагальнені в таблиці 1. Після класифікації пацієнтів на основі тяжких і легких фенотипів порівняли демографічні, клінічні та імунологічні дані (таблиця 1, рис. 1). Пацієнти з тяжким фенотипом виявляли більше респіраторних ускладнень, ніж група легких. Інші параметри не продемонстрували істотної різниці. Такі ж порівняння проводили у пацієнтів з кровною спорідненістю та без неї, і жоден із них не мав істотної різниці. Навпаки, пацієнти з помірними фенотипами демонстрували дещо вищий рівень алергії та шлунково-кишкових проявів із підвищеним рівнем IgE у сироватці крові, що свідчить про посилене перемикання на виробництво IgE.

Таблиця 1 Порівняння демографічних, клінічних та імунологічних даних пацієнтів із SIgAD із тяжким та легким фенотипами

Рис. 1 Порівняння клінічних проявів важкого та легкого SIgAD

Підмножини B-клітин

Пацієнти з SIgAD показали значно підвищену частоту В-клітин CD{{0}} [11,2% (9,4–13.07%) проти 7,2% (6–8,6%), p < 0.001], зі збільшенням наївних В-клітин [71% (63,7–80%) проти 66,5% (56,2–71,1%), p=0.036] і перехідних В-клітин [ 8% (3,6–13,5%) проти 4,8% (2,6–9,5%), p=0.032] порівняно з ГК. Навпаки, відсоток маргінальних зоноподібних [2,3% (2–3,5%) проти 3,4% (2,3–4,8%), p=0.022) і переключених В-клітин пам’яті [3,5% (1,9) –5,5%) проти 6% (3,5–8,4%), p=0.006] були значно нижчими, ніж HCs. Однак зниження рівня пам’яті лише IgM і плазмобластів, а також підвищення рівня В-клітин CD21low у пацієнтів порівняно з пацієнтами з HCs не були значними (рис. 2). Цікаво, що деякі порівняння між клінічними групами пацієнтів були значними. Відсоток CD19+ B-клітин як у легкому, так і у важкому фенотипах був значно вищим, ніж у HC [11,6% (8,7–13) проти 7,2% (6–8,6), p < 0,0001, 10,8% (9,6–13,2) ) проти 7,2% (6–8,6), p < 0,0001] відповідно. Пацієнти з тяжким SIgAD продемонстрували значне збільшення відсотка CD21low B-клітин [1,5% (1–2,2) проти 2,7% (1,6–5,6), p=0.025] та значне зниження відсотка підгруп В-клітин маргінальної зони та переключеної пам’яті [3,4% (2,3–4,8) проти 2,2% [2, 3], p=0.040, 6% (3,5–8,4) проти 2,7% ( 1,7–4,7), p=0.003] відповідно. Відсоток перехідних B-клітин у пацієнтів з легким SIgAD був вищим, ніж HCs [10,7% (3,9–13,8) проти 4,8% (2,6–9,5), p=0.047] (рис. 3). Відсоток пам’яті лише з IgM був значно вищим у пацієнтів із спорідненням, ніж у пацієнтів без споріднення. Ми також класифікували частоту В-клітинних субпопуляцій пацієнтів із SIgAD на три категорії: нормальна, знижена та підвищена на основі нормального діапазону HC (табл. 2). Виходячи з цього аналізу, найбільше зменшення підмножин В-клітин пов’язане з В-клітинами пам’яті з перемиканням (23%), тоді як найбільше збільшення пов’язане з наївними В-клітинами (27%) у пацієнтів із SIgAD. За винятком підвищеного вмісту В-лімфоцитів CD21 у пацієнтів із важким SIgAD порівняно з пацієнтами з легким SIgAD.

Рис. 2. Кількісний аналіз субпопуляцій B-клітин і T-клітин у пацієнтів із SIgAD і здорових осіб контролю. Медіана представлена ​​горизонтальною лінією. Дані аналізували за допомогою U-тесту Манна-Уїтні. *стор<0.05, statistical significance between patients and HCs. HC Healthy control

Підмножини Т-клітин

Відокремлення підгрупи Т-клітин CD4+ виявило значне зниження загальної кількості Т-клітин CD4+ [36,5% (30,8–41,2%) проти 40,1% (37,3–47,2%), p{{14 }}.038)], клітини центральної пам’яті [11% (7,3–13,1%) проти 24,5% (16–29%), р<0.0001), T1 [7.7% (5.2–9.9%) vs. 12% (7.8–16%), p=0.002], T2 [0.3% (0.2–0.4%) vs. 0.6% (0.4–1.3%), p<0.0001] and Tregs [0.3% (0.03–0.7%) vs. 1.4% (1.1– 1.6%), p<0.0001] in patients compared with HCs. Oppositely, the percentage of TEMRA [9.5% (5.7–16.4%) vs. 2% (1.3–6.2%), p<0.0001] was meaningfully higher than HCs. Moreover, decreased effector memory and T17, and increased naïve helper T cells in patients in comparison with HCs were not significant (Fig.  2). Regarding the percentage of CD8+ T cell subsets, central memory [0.6% (0.3–0.8%) vs. 3% (2–6%), p<0.0001] and effector memory [12.3% (7.6–22.1%) vs. 23.9% (19.5– 27.2%), p<0.0001] were markedly diminished in patients compared with HCs. On the other hand, the percentage of cytotoxic TEMRA [44.1% (28.4–55.7%) vs. 24.4% (20– 31%), p<0.0001] was significantly higher than HCs. However, increased total CD8+ T cells and decreased naïve CD8+ T cells were not significant in patients compared to those in HCs (Fig. 2). Regarding the comparison of the percentage of CD8+ T cells subsets between severe SIgAD patients with HCs, naïve T cells, effector, and central memory cells demonstrated a significant reduction. Also, there was a significant decrease in the percentage of total CD4+ T-cells, central memory, T1, T2, and regulatory T cells, whereas TEMRA in both CD4+ and CD8+ T cells demonstrated an increase. On the other hand, the percentage of effector and central memory cells within CD8+ T cells, as well as central memory, TEMRA, T1, and regulatory T cells within CD4+ T cell subsets demonstrated a significant decrease in mild forms of SIgAD compared to HCs. In contrast, we found an increase in TEMRA CD8+ T cells and T2 CD4+ T cells in mild patients compared to controls (Fig.  3). Comparisons of the percentages of all T cell subsets between SIgAD patients with and without consanguinity have not indicated any significant difference. We also categorized the frequency of T cell subsets of SIgAD patients into three categories: normal, decreased, and increased based on a normal range of HCs (Table  2). Based on this analysis, the most decrease in T cell subsets is related to Tregs (67%), while the most increase is related to CD8+ TEMRA (37%) in SIgAD patients. Flow cytometry results of B cell and T cell subsets in 30 SIgAD patients have shown separately in Additional file 1: Tables S2 and S3. To evaluate the impact of the T cell subset on the switching process of B cells and the production of different Ig subtypes we performed a correlation analysis. Surprisingly only IgG but not IgM and IgE were significantly associated with specific T cell subsets (negative association with naïve CD4 and naïve CD8 T cells and positive association with CD4+ TEM and T17 cells, Additional file 1: Table S4) indicating the independent association of IgM to IgE from co-stimulation of T cell subsets in our patient cohorts. Moreover, correlation analysis of absolute counts and percentage of subsets should significant direct correlation in all measured parameters (Additional file 1: Table S5).

Рис. 3. Кількісний аналіз субпопуляцій В-клітин і Т-клітин у пацієнтів з важким і легким SIgAD. Медіана представлена ​​горизонтальною лінією. Дані аналізували за допомогою U-тесту Манна-Уїтні. *стор<0.05, statistical signifcance between severe and mild patien

Таблиця 2. Розподіл нормальних, підвищених і знижених пропорцій Т-клітин і В-клітин у всіх пацієнтів із SIgAD. N =30

Проліферація Т-клітин

Дані, отримані культурами, міченими CFSE, аналізували для кількісного визначення проліферації Т-клітин CD4+. Не було істотної різниці в індексі поділу (DI), індексі проліферації (PI) і відсотках поділу (PD) між пацієнтами з SIgAD і HCs (рис. 4). Цікаво, що коли ми порівнювали ці індекси між пацієнтами з SIgAD із важким і легким фенотипами, ми виявили, що медіана DI та PD у пацієнтів з тяжким SIgAD порівняно з легкими випадками була значно скасована [0.1 (0 .08–0.4) проти 0.5 (0.3–0.8), p=0.019 та 12,2 (8,4– 26,4) проти 42,5 (26,8–52,6), p=0.009 відповідно]. Однак суттєвої різниці в ІП між тяжкою та легкою групами не було (рис. 4). З іншого боку, порівняння DI, PI та PD між пацієнтами з SIgAD з кровною спорідненістю та без неї не були значущими.

Рис. 4 Порівняння індексів проліферації Т-лімфоцитів у пацієнтів з тяжким та легким SIgAD. Медіана представлена ​​горизонтальною лінією. *стор<0.05, statistical significance between severe and mild patients

Обговорення

SIgAD є найбільш поширеним ІЕІ з різними клінічними проявами. Ці хворі мають різний спектр клінічних проявів. Відповідно, корисними є імунологічні дослідження у пацієнтів з різним спектром клінічних проявів. Найпоширенішим клінічним проявом IEI, особливо SIgAD, є рецидивуючі респіраторні інфекції [18–20]. Найчастішим ускладненням у зареєстрованих пацієнтів із симптомами ми виявили пневмонію. Рецидивуючі респіраторні інфекції зазвичай проявляються у формі інфекцій верхніх дихальних шляхів і можуть залишатися недіагностованими протягом кількох років; однак у деяких пацієнтів із SIgAD виявляються більш серйозні фенотипи, такі як бронхоектази або облітеруючий бронхіоліт, що змушує цих пацієнтів провести імунологічне дослідження [21]. Враховуючи, що рецидивуючі респіраторні інфекції, як повідомляється, є найважливішою причиною захворюваності та смерті у дітей з ІЕІ, особливо первинний дефіцит антитіл [22, 23], рання діагностика та лікування респіраторних розладів, пов’язаних із SIgAD, є дуже важливими [24, 25] . Було зазначено, що аномалії субпопуляцій B-клітин спостерігаються у деяких пацієнтів із SIgAD [3, 4]. Наші результати вказують на значне збільшення наївних і перехідних В-клітин і значне зниження В-клітин пам'яті, подібних до маргінальних зон і переключених В-клітин. Цей аномальний паттерн В-клітин свідчить про дефекти на термінальних стадіях диференціювання В-клітин, подібно до пацієнтів із ХВН [26]. З огляду на те, що CVID і SIgAD мають майже схоже генетичне походження і можуть накопичуватися як кілька випадків у сім’ї, ця схожість передбачувана. Загалом, більше половини пацієнтів з IEI, зареєстрованих в іранському реєстрі, мають батьківську кровну спорідненість, але цей показник все ще менш поширений у пацієнтів із SIgAD. У іранських пацієнтів із SIgAD порівняно із західними пацієнтами кровна спорідненість є більш поширеною. Хоча моногенетичні причини можуть існувати, вони ще не виявлені, незважаючи на секвенування наступного покоління у кількох пацієнтів [27]. Ми виявили зменшення В-клітин пам’яті, подібних до маргінальної зони, і переключених В-клітин пам’яті, особливо у пацієнтів з важким SIgAD, як повідомлялося раніше [28]. Нещодавно ми повідомили про подібне зменшення В-клітин пам’яті, подібних до маргінальних зон і переключених В-клітин пам’яті у пацієнтів з ХВН [14].

Переваги доповнення cistanche - підвищення імунітету

З іншого боку, хоча ми спостерігали значне зниження переключеної пам’яті у пацієнтів з атаксією-телеангіектазією (АТ), проте спостерігалося різке збільшення В-клітин, подібних до маргінальної зони [29]. Пацієнти з SIgAD, особливо група пацієнтів із тяжкими клінічними проявами (рецидивна та інтенсивна інфекція, аутоімунітет), мають нижчий рівень переключених В-клітин пам’яті [28, 30, 31]. Було висловлено припущення, що зменшення субпопуляції В-клітин пам’яті з перемиканням пов’язане з дефектами рівня процесу рекомбінації з перемиканням класів антитіл (CSR), спричиненими ферментативною недостатністю або аномаліями в мережах цитокінів та їх рецепторах [28]. Деякі пацієнти з SIgAD із важким фенотипом прогресують до CVID, що відображає цю підгрупу SIgAD, яка може мати загальний імунний патогенез із CVID, зокрема у розвитку етапу CSR. Відповідно, переключені В-клітини пам’яті вважаються діагностичним біомаркером у пацієнтів [28]. Однак частота переключених В-клітин пам’яті є нормальною серед дітей у нашій досліджуваній популяції, і зниження спостерігалося більше у дорослих пацієнтів; припускаючи, що старіння, ймовірно, призводить до прогресування SIgAD до CVID, особливо у пацієнтів із тяжкими клінічними проявами (дані не показані). З іншого боку, В-клітини маргінальної зони є спеціалізованою популяцією В-клітин, які виробляють IgM для захисту від інфекцій, особливо інкапсульованих бактерій [32]. Хоча попередні дослідження показали, що кількість В-клітин, подібних до крайової зони, у пацієнтів із SIgAD не відрізнялася від нормальної контрольної групи [33], тим не менш, ми отримали значне зниження В-клітин, подібних до крайової зони, у наших випадках, подібно до попередній звіт у пацієнтів з ХВН [34]. Зменшення маргінальних субпопуляцій B-клітин в інших пацієнтів з дефектами вироблення антитіл може бути пов’язане з підвищеним ризиком інфекцій, таких як пневмонія, і зниженням рівня IgM у сироватці крові, подібно до пацієнтів із CVID [35]. Ми виявили збільшення кількості B-лімфоцитів CD21low порівняно з контролем, головним чином у пацієнтів з важким SIgAD. Попередні дослідження повідомляли про збільшення CD21low В-клітин як у пацієнтів із SIgAD [3], так і у пацієнтів із CVID [36] та інших аутоімунних захворювань [37]. Нещодавно також повідомлялося про підвищення рівня CD21low у пацієнтів з АТ [29]. Збільшення кількості клітин CD21low безпосередньо пов’язане не лише з аутоімунітетом, а й з інфекцією [36]. З іншого боку, хронічний вплив вірусної інфекції може призвести до перетворення антиген-реактивних В-клітин у нечутливі CD21low B-клітини [38]. Щоб з'ясувати причину збільшення кількості В-клітин CD21low; необхідно провести подальші дослідження цієї субпопуляції В-клітин. Враховуючи високу субпопуляцію В-клітин CD21low у пацієнтів із CVID та прогресування деяких пацієнтів із SIgAD до CVID, важка група пацієнтів із SIgAD із підвищеним вмістом B-лімфоцитів CD21low більш імовірно розвине CVID. Тому вони потребують більш регулярного спостереження для оцінки перебігу захворювання. Перехідні В-клітини знаходяться на проміжній стадії розвитку між незрілими клітинами кісткового мозку та зрілими В-клітинами селезінки [39]. У цьому дослідженні ми спостерігали значне збільшення перехідних В-клітин у наших пацієнтів із SIgAD, особливо у пацієнтів з важким SIgAD, хоча кількість перехідних B-клітин у дітей із SIgAD була нормальною (дані не показані). Нещодавно ми спостерігали значне зниження АТ перехідних В-клітин [29]. На відміну від попередніх досліджень, які показали зниження перехідних В-лімфоцитів [8, 28, 40], дорослі пацієнти вказували на незначне збільшення перехідних В-клітин. Крім того, Lemarquis et al. показали зниження функціональної активності перехідних В-клітин на основі продукції IL-10 та стимуляції CpG [40]. Враховуючи дефект термінальних стадій В-клітин при SIgAD, здається, що збільшення перехідних В-клітин і наївних В-клітин у наших пацієнтів пов’язане з компенсаторним механізмом, який посилює ранній розвиток В-клітин. Щодо відмінностей між нашим дослідженням та іншими дослідженнями, здається, що ця різниця пов’язана з різними процесами відбору, оскільки всі наші пацієнти мали симптоматику, тоді як інші досліджували гетерогенно безсимптомних і симптоматичних пацієнтів із SIgAD. Що стосується підмножин Т-клітин, ми спостерігали зниження загальної кількості CD4+ Т-клітин, T1, T2 і Treg-клітин, а також збільшення TEMRA як у CD4+, так і в CD8+ клітинах. Згідно з нашими результатами, попередні дослідження показали збільшення та зменшення популяції CD8+ та CD4+ Т-лімфоцитів відповідно [4]. Крім того, ми виявили, що центральна пам’ять як у CD4+, так і в CD8+ Т-клітинах і ефекторна пам’ять у CD8+ Т-лімфоцитах були знижені у пацієнтів із SIgAD порівняно з HCs. Ми спостерігали значне збільшення підмножини клітин TEMRA як у популяції лімфоцитів CD4+, так і CD8+, особливо у пацієнтів із важким SIgAD. TEMRA є третьою підгрупою Т-клітин пам’яті в периферичних запальних тканинах, які експресують CD45RA, але не мають експресії CCR7 або CD27. У людей на накопичення клітин TEMRA впливають хронічні інфекції, такі як ЦМВ [41, 42]. Збільшення цих підмножин Т-клітин, що закінчилися, може бути наслідком хронічної відповіді клітин на інфекції у цих пацієнтів; однак необхідно провести подальші дослідження щодо цього явища. Згідно з нашими результатами, Нечваталова та ін. продемонстрували розширені клітини CD4+ і CD8+ TEMRA у пацієнтів із SIgAD, які були пов’язані з CMV-інфекцією [43]. Ми не досліджували ЦМВ-інфекцію у пацієнтів із SIgAD, але збільшення кількості клітин TEMRA у наших пацієнтів могло бути пов’язане з хронічними інфекціями. Нещодавно ми оцінили відповіді специфічних антитіл на PPSV-23 у пацієнтів із SIgAD і AT і виявили, що 18,6% пацієнтів із SIgAD і 81,3% пацієнтів з AT мали неадекватну відповідь. Кількість плазмобластів, В-клітин маргінальної зони, перехідних В-клітин, наївних CD8+ Т-клітин і відсоток CD8+ Т-клітин, IgM В-клітин пам’яті та переключених В-клітин пам’яті у пацієнтів із SIgAD були значно нижчий у групі тих, хто не відповів, ніж у групі тих, хто відповів. Хоча дефіцит специфічних антитіл частіше зустрічається у пацієнтів з AT, ніж у пацієнтів із SIgAD [44]. Регуляторні Т-клітини відіграють важливу роль у виробленні антитіл IgA шляхом трансформації секреції бета-фактора росту (TGF-) [45–47]. Ми виявили значне зниження Tregs у наших пацієнтів, що відповідає попереднім опублікованим дослідженням [48], хоча в одному дослідженні повідомлялося про збільшення Tregs у пацієнтів із SIgAD [43]. Також повідомлялося про кореляцію між зниженою кількістю Treg-клітин і тяжкістю захворювання SIgAD, особливо в осіб з аутоімунітетом, і дефіцитом IgA CSR у пацієнтів із тяжкими клінічними проявами [30, 48]. Низька частота Treg-клітин та інших підмножин Т-клітин, включаючи Т1 і Т2 у наших пацієнтів, може бути наслідком низьких тимусних емігрантів, спричинених дефектом тимопоезу та/або підвищеним апоптозом цих клітин [49]. Функціональний аналіз Т-клітин шляхом мітогенної або антигенної стимуляції є важливою ознакою в діагностиці різних імунних розладів та імунодефіцитів [50]. Традиційно існує один протокол для оцінки функції Т-клітин, заснований на поглинанні [3H]тимідину після стимуляції PHA з використанням радіоактивних компонентів, для якого потрібні спеціальні лабораторні умови, а також він не є специфічним для Т-клітин, оскільки він може стимулювати кілька інших імунних клітин, як Ну. З іншого боку, найважливіша слабкість полягає в тому, що неможливо отримати інформацію про конкретні підмножини клітинок. Аналіз проліферації CFSE є практичним вибором для оцінки відповідей Т-клітин на антиген або мітоген у пацієнтів з IEI, особливо SIgAD для подальшого аналізу потенційних дефектів Т-клітин у цих пацієнтів [51]. Поки що є кілька повідомлень про дефекти Т-клітинної відповіді у пацієнтів із SIgAD. Як і очікувалося, наше дослідження не виявило істотної різниці у відповіді Т-клітин між пацієнтами та контрольною групою. Однак, коли ми класифікували пацієнтів на дві групи на основі тяжкого та легкого фенотипів, тяжкі пацієнти вказали на зниження проліферації Т-клітин порівняно з легкими пацієнтами. Цей результат може бути важливим відкриттям для класифікації пацієнтів із SIgAD для визначення прогнозу пацієнта. Нещодавно ми повідомили, що проліферація Т-клітин була помітно порушена порівняно зі здоровими контрольними пацієнтами у пацієнтів з CVID і AT [29, 52]. Більше того, це вказує на те, що пацієнти з SIgAD з дефектною проліферацією Т-клітин повинні спостерігатися далі для точного медичного лікування. Ми рекомендуємо подальші дослідження для оцінки дії Т-клітинної функції для пацієнтів із SIgAD на основі тяжких і легких фенотипів в інших дослідженнях. Обмеження експерименту включали малу кількість симптоматичних пацієнтів, недоступність багатьох з них і навіть покращення деяких пацієнтів.

Висновки

Наші результати вказують на значні відхилення в моделях В-клітин, подібних до пацієнтів із ХВН. Враховуючи, що CVID і важкі форми SIgAD мають майже схожі клінічні та імунологічні фенотипи та, швидше за все, генетичне походження, це поняття є передбачуваним. Ґрунтуючись на аналізі фенотипу, ми спостерігали ще деякі аномалії у пацієнтів із SIgAD із важкими фенотипами, такими як висока субпопуляція CD21low В-клітин і дефект проліферації Т-клітин. Відповідно, у важких пацієнтів спостерігається більша кількість респіраторних інфекцій порівняно з легким SIgAD, з великою кількістю тих, хто страждає на синусит, отит, пневмонію та b, бронхоектази, що передбачає подальше спостереження та більш точне лікування цих пацієнтів. Батьки цього дослідження припускають, що дослідження підгруп B- і T-клітин може бути корисним для кращого розуміння патогенезу та прогнозу захворювання.

Список літератури

1. Aghamohammadi A, Mohammadi J, Parvaneh N, Rezaei N, Moin M, Espanol T, et al. Прогресування селективного дефіциту IgA до загального варіабельного імунодефіциту. Int Arch Allergy Immunol. 2008;147(2):87–92.

2. Багері Ю., Санаї Р., Яздані Р., Шекарабі М., Фалак Р., Мохаммаді Дж. та ін. Гетерогенний патогенез селективної імуноглобулінової недостатності. Int Arch Allergy Immunol. 2019; 179 (3): 232–46.

3. Нечваталова Дж., Пікулова З., Стікаровська Д., Песак С., Влкова М., Ліцман Дж. Субпопуляції B-лімфоцитів у пацієнтів із селективним дефіцитом IgA. J Clin Immunol. 2012;32(3):441–8.

4. Litzman J, Vlková M, Pikulová Z, Štikarovská D, Lokaj J. Субпопуляції Т- і В-лімфоцитів і маркери активації/диференціації у пацієнтів із селективним дефіцитом IgA. Clin Exp Immunol. 2007;147(2):249–54.

5. Лемаркіс А.Л., Ейнарсдоттір Х.К., Крістіансдоттір Р.Н., Йонсдоттір І., Людвікссон Б.Р. Перехідні В-клітини та відповіді TLR9 є дефектними при селективному дефіциті IgA. Передній імунол. 2018; 9: 909.

6. Celiksoy M, Yildiran A. Порівняння підгруп В-клітин при первинних імунних дефіцитах прогресує у здорових дітей, відповідних дефіциту антитіл. Алергол Імунопатол. 2016;44(4):331–40.

7. Marasco E, Farroni C, Cascioli S, Marcellini V, Scarsella M, Giorda E, et al. Активація В-клітин за допомогою CD40L або CpG вимірює функцію субгруп В-клітин і визначає специфічні дефекти у пацієнтів з імунодефіцитом. Eur J Immunol. 2017;47(1):131–43.

8. Lemarquis AL, Theodors F, Einarsdottir HK, Ludviksson BR. Картування сигнальних шляхів, пов’язаних із sIgAD, виявляє порушення активації B-клітин STAT3, керованої IL-21-. Передній імунол. 2019; 10: 403.

9. Борте С., Пан-Хаммарстром К., Лю К., Сак У., Борте М., Вагнер У. та ін. Інтерлейкін -21 відновлює вироблення імуноглобуліну ex vivo у пацієнтів із загальним варіабельним імунодефіцитом і селективним дефіцитом IgA. Кров. 2009;114(19):4089–98.

10. Abolhassani H, Kiaee F, Tavakol M, Chavoshzadeh Z, Mahdaviani SA, Momen T, et al. Четверте оновлення Іранського національного реєстру первинних імунодефіцитів: інтеграція молекулярної діагностики. J Clin Immunol. 2018;38(7):816–32.

11. Aghamohammadi A, Rezaei N, Yazdani R, Delavari S, Kutukculer N, Topyildiz E, et al. Консенсусний реєстр Близького Сходу та Північної Африки щодо вроджених дефектів імунітету. J Clin Immunol. 2021;41(6):1339–51.

12. Зайдель М.Г., Кіндл Г., Гатманн Б., Квінті І., Бакленд М., ван Монтфранс Дж. та ін. Європейське товариство імунодефіцитів (ESID) реєструє робочі визначення для клінічної діагностики вроджених порушень імунітету. J Allergy Clin Immunol Pract. 2019; 7 (6): 1763–70.

13. Шад Т.М., Юсеф Б., Аміріфар П., Делаварі С., Рей В., Кохаї П. та ін. Варіабельні аномалії підмножин Т- і В-клітин при атаксії-телеангіектазії. J Clin Immunol. 2020:1–13.

14. TofghiZavareh F, Mirshafey A, Yazdani R, Keshtkar AA, Abolhassani H, Bagheri Y, et al. Субмножини лімфоцитів у кореляції з клінічним профілем у хворих на ХВН без моногенних дефектів. Expert Rev Clin Immunol. 2021;17(9):1041–51.

15. Moeini Shad T, Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P, et al. Варіабельні аномалії підмножин Т- і В-клітин при атаксії-телеангіектазії. J Clin Immunol. 2021;41(1):76–88.

16. Azizi G, Mirshafey A, Abolhassani H, Yazdani R, Ghanavatinejad A, Noorbakhsh F, et al. Дисбаланс циркулюючих підмножин Т-хелперів і регуляторних Т-клітин у пацієнтів з дефіцитом LRBA: кореляція з тяжкістю захворювання. J Cell Physiol. 2018; 233 (11): 8767–77.

17. Azizi G, Mirshafey A, Abolhassani H, Yazdani R, Jafarnezhad-Ansariha F, Shaghaghi M, et al. Підмножини циркулюючих хелперних Т-клітин і регуляторних Т-клітин у пацієнтів із загальним варіабельним імунодефіцитом без відомого моногенного захворювання. J Investig Allergol Clin Immunol. 2018; 28 (3): 172–81.

18. Reisi M, Azizi G, Kiaee F, Masiha F, Shirzadi R, Momen T, et al. Оцінка легеневих ускладнень у хворих на первинні імунодефіцитні стани. Eur Ann Allergy Clin Immunol. 2017; 49 (3): 122.

19. Cerutti A, Chen K, Chorny A. Імуноглобулінові відповіді на межі слизової оболонки. Annu Rev Immunol. 2011;29:273–93.

20. Bagheri Y, Babaha F, Falak R, Yazdani R, Azizi G, Sadri M та ін. IL-10 індукує секрецію TGF, посилення регуляції рецептора TGF II і секрецію IgA у В-клітинах. Eur Cytokine Netw. 2019;30(3):107–13.

21. Ozkan H, Atlihan F, Genel F, Targan S, Gunvar T. Дефіцит підкласу IgA та/або IgG у дітей з рецидивуючими респіраторними інфекціями та його зв’язок із хронічним ураженням легенів. J Investig Allergol Clin Immunol. 2005;15(1):69–74.

22. Tavakol M, Jamee M, Azizi G, Sadri H, Bagheri Y, Zaki-Dizaji M та ін. Діагностичний підхід до пацієнтів з підозрою на первинний імунодефіцит. Endocr Metab Immune Disorde Drug Targets. 2020; 20 (2): 157–71.

23. Resnick ES, Moshier EL, Godbold JH, Cunningham-Rundles C. Захворюваність і смертність при загальному варіабельному імунному дефіциті протягом 4 десятиліть. Кров. 2012; 119 (7): 1650–7.

24. Yazdani R, Abolhassani H, Asgardoon M, Shaghaghi M, Modaresi M, Azizi G та ін. Інфекційні та неінфекційні легеневі ускладнення у хворих на первинні імунодефіцитні стани. J Investig Allergol Clin Immunol. 2017;27(4):213–24.

25. Ахмаді М, Нурі М, Бабалу З, Фарзаді Л, Гасемзаде А, Хамді К та ін. Лікування внутрішньовенним імуноглобуліном (IVIG) модулює Th17 периферичної крові та регуляторні Т-клітини у пацієнток із повторним викиднем: нерандомізоване відкрите клінічне дослідження. Immunol Lett. 2017;192:12–9.

26. Yazdani R, Seify R, Ganjalikhani-Hakemi M, Abolhassani H, Eskandari N, Golsaz-Shirazi F, et al. Порівняння різних класифікацій для пацієнтів із загальним варіабельним імунодефіцитом (CVID) з використанням вимірювання підмножин B-клітин. Алергол Імунопатол (Мадр). 2017;45(2):183–92.

27. Aghamohammadi A, Abolhassani H, Rezaei N. Первинні імунодефіцитні захворювання в Ірані: минуле, теперішнє та майбутнє. Arch Iran Med. 2021. https://doi. org/10.34172/aim.2021.18.

28. Aghamohammadi A, Abolhassani H, Biglari M, Abolmaali S, Moazzami K, Tabatabaeiyan M, et al. Аналіз переключених В-клітин пам'яті у пацієнтів з дефіцитом IgA. Int Arch Allergy Immunol. 2011; 156 (4): 462–8.

29. Юсеф Б., Аміріфар П., Делаварі С., Рей В., Кохаї П., Аболхассані Х. та ін. Варіабельні аномалії підмножин Т- і В-клітин при атаксії-телеангіектазії. J Clin Immunol. 2020. https://doi.org/10.1007/s10875-020-00881-9.

30. Abolhassani H, Gharib B, Shahinpour S, Masoom SN, Havaei A, Mirminachi B та ін. Аутоімунітет у пацієнтів із селективним дефіцитом IgA. J Investig Allergol Clin Immunol. 2015; 25 (2): 112–9.

31. Arkwright PD, Abinun M, Cant AJ. Аутоімунітет при первинних імунодефіцитних захворюваннях людини. Кров. 2002;99(8):2694–702.

32. Черутті А, Колс М, Пуга І. В-клітини маргінальної зони: переваги вроджених лімфоцитів, що виробляють антитіла. Nat Rev Immunol. 2013;13(2):118–32.

33. Bukowska-Straková K, Kowalczyk D, Baran J, Siedlar M, Kobylarz K, Zembala M. Компартмент В-клітин у периферичній крові дітей з різними типами первинного гуморального імунодефіциту. Pediatr Res. 2009;66(1):28–34.

34. Karaman SBES, Gülez N, Genel F. Значення субмножин B-клітин у пацієнтів з некласифікованою гіпогамаглобулінемією та зв'язок із потребою в заміні внутрішньовенного імуноглобуліну. Іран J Immunol. 2018;15(1):1–13.

35. Patuzzo G, Mazzi F, Vella A, Ortolani R, Barbieri A, Tinazzi E та ін. Імунофенотиповий аналіз В-лімфоцитів у пацієнтів із загальним варіабельним імунодефіцитом: ідентифікація CD23 як корисного маркера у визначенні захворювання. ISRN Імунол. 2013. https://doi.org/10. 1155/2013/512527.

36. Patuzzo G, Barbieri A, Tinazzi E, Veneri D, Argentino G, Moretta F та ін. Аутоімунність та інфекція при загальному варіабельному імунодефіциті (CVID). Autoimmun Rev. 2016; 15 (9): 877–82.

37. Рахманов М., Келлер Б., Гутенбергер С., Фьорстер С., Хьоніг М., Дріссен Г. та ін. Циркулюючі В-клітини CD21low при звичайному варіабельному імунодефіциті нагадують тканинні В-клітини, подібні до вроджених. Proc Natl Acad Sci. 2009;106(32):13451–6.

38. Isnardi I, Ng YS, Menard L, Meyers G, Saadoun D, ​​Srdanovic I та ін. Рецептор комплементу 2/CD21 - наивні В-клітини людини містять переважно аутореактивні нечутливі клони. Кров. 2010; 115 (24): 5026–36.

39. Sims GP, Ettinger R, Shirota Y, Yarboro CH, Illei GG, Lipsky PE. Ідентифікація та характеристика циркулюючих перехідних В-клітин людини. Кров. 2005;105(11):4390–8.

40. Лемаркіс А.Л., Ейнарсдоттір Х.К., Крістіансдоттір Р.Н., Йонсдоттір І., Людвікссон Б.Р. Перехідні B-клітини та відповіді TLR9 є дефектними при селективному дефіциті IgA. Передній імунол. 2018. https://doi.org/10.3389/fmmu.2018. 00909.

41. Віллінгер Т., Фріман Т., Хасегава Х., МакМайкл А. Дж., Каллан М.Ф. Молекулярні сигнатури відрізняють центральну пам'ять людини від підгруп Т-клітин CD8 ефекторної пам'яті. J Immunol. 2005; 175 (9): 5895–903.

42. Мартін М.Д., Бадовінац В.П. Визначення пам'яті CD8 Т-клітин. Передній імунол. 2018; 9: 2692.

43. Нечваталова Дж., Павлік Т., Ліцман Дж., Влкова М. Термінально диференційовані Т-клітини пам’яті збільшені у пацієнтів із загальним варіабельним імунодефіцитом і селективним дефіцитом IgA. Cent Eur J Immunol. 2017;42(3):244–51.

44. Khanmohammadi S, Shad TM, Delavari S, Shirmast P, Bagheri Y, Azizi G, et al. Оцінка відповіді специфічних антитіл у пацієнтів із селективним дефіцитом IgA та атаксією-телеангіоектазією. Endocr Metab Immune Disorde Drug Targets. 2022; 22 (6): 640–9.

45. Cazac BB, Roes J. TGF-рецептор контролює реакцію В-клітин та індукцію IgA in vivo. Імунітет. 2000;13(4):443–51.

46. ​​Van Vlasselaer P, Punnonen J, De Vries J. Трансформуючий фактор росту бета керує перемиканням IgA у В-клітинах людини. J Immunol. 1992;148(7):2062–7.

47. Cerutti A, Rescigno M. Біологія відповідей кишкового імуноглобуліну А. Імунітет. 2008; 28 (6): 740–50.

48. Soheili H, Abolhassani H, Arandi N, Khazaei HA, Shahinpour S, Hirbod Mobarakeh A та ін. Оцінка природних регуляторних Т-клітин у суб’єктів із селективним дефіцитом IgA: від старшої ідеї до нових можливостей. Int Arch Allergy Immunol. 2013; 160 (2): 208–14.

49. Yazdani R, Fatholahi M, Ganjalikhani-Hakemi M, Abolhassani H, Azizi G, Hamid KM, et al. Роль апоптозу при загальному варіабельному імунодефіциті та селективному дефіциті імуноглобуліну А. Mol Immunol. 2016;71:1–9.

50 МакКаскер С, Воррінгтон Р. Первинний імунодефіцит. Всі Asth Clin Immun. 2011; 7 (Додаток 1): S11.

51. Marits P, Wikström AC, Popadic D, Winqvist O, Thunberg S. Оцінка функції Т- і В-лімфоцитів у клінічній практиці за допомогою аналізу проліферації на основі проточної цитометрії. Клін Імунол. 2014;153(2):332–42.

52. TofghiZavareh F, Mirshafey A, Yazdani R, Keshtkar AA, Abolhassani H, Mahdaviani SA та ін. Імунофенотиповий та функціональний аналіз субпопуляцій лімфоцитів у пацієнтів із загальним варіабельним імунодефіцитом без моногенних дефектів. Scand J Immunol. 2022;96(1):e13164.